SIV'e Özgü CD8⁺ Bellek T Hücrelerini Analiz Etmek için Bir Peptit-MHC-I Tetramer Boyama Tekniği

Simian immün yetmezlik virüsüne veya SIV'e karşı CD8 ⁺ bellek T hücreleri içeren insan olmayan primat periferik kan mononükleer hücrelerini veya PBMC'leri alın.

T hücresi reseptörünün içselleştirilmesini veya sonraki stimülasyon üzerine TCR'yi önlemek için bir protein kinaz inhibitörü ekleyin.

Peptit-majör histouyumluluk kompleksi sınıf I'i veya pMHC-I tetramerleri, SIV'e özgü peptitlere bağlı dört MHC-I molekülü içeren florofor-konjuge kompleksleri tanıtın. Bu peptitler, T hücrelerinin yüzeyindeki TCR'lere bağlanır.

CD8, CD28 ve CCR7'ye bağlanan florofor konjuge antikorlar içeren bir karışım ekleyin - bellek T hücresi alt kümelerini tanımlayan belirteçler - ve CD8 ⁺ olmayan hücreleri etiketleyen antikorlar.

Bir floresan canlılık boyası ölü hücreleri etiketler.

Hücreleri düzeltin. Hücre içi hedeflere erişmek için onları geçirgen hale getirin.

Bir T hücresi markörü olan CD3'ü ve aktive edilmiş bir CD8 ⁺ T hücresi markörü olan hücre içi granzim B'yi bağlayan florofor konjuge antikorları ekleyin.

Akış sitometrisi kullanarak, CD8 ⁺ olmayan T hücrelerini ve ölü hücreleri dışlayın.

Granzim B, CD28 ve CCR7 seviyelerine dayalı olarak farklı bellek CD8⁺ T hücresi alt kümelerini karakterize