JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:31 dk. • July 8th, 2025
Apikal mikrovillus ve makara şeklinde soma ile tutam hücreleri içeren formalinle sabitlenmiş, jelatin dolgulu fare jejunum kriyoseksiyonları içeren bir kültür kabı ile başlayın.
Hücre zarlarına nüfuz etmek için deterjan içeren bir tamponla yıkayın.
Bir alkalin antijen alma çözeltisi ekleyin. Fiksasyonun neden olduğu protein çapraz bağlarını kırmak için inkübe edin ve boyama için proteinleri ortaya çıkarın.
Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici solüsyon uygulayın.
Tutam hücrelerinde spesifik olarak fosforile edilmiş bir aktin bağlayıcı proteini hedefleyen birincil antikorlarla kaplama.
Bağlanmamış antikorları çıkarın. Florofor konjuge ikincil antikorlar, DNA bağlayıcı boya ve falloidin-floresan boya konjugatının bir karışımını tanıtın.
İkincil antikorlar birincil antikorlara bağlanır, falloidin-floresan boya eşlenik etiketleri aktin ve DNA bağlayıcı boya hücre çekirdeklerini işaretler.
Bağlanmamış bileşenleri çıkarın ve deterjan içermeyen bir tampon ekleyin.
Bölümü, ortamla monte ederek yapışkan kaplı bir cam kızağa aktarın.
Konfokal bir mikroskop altında, luminal uçta yoğunlaştırılmış floresan ve genişletilmiş bir kırmızı kök kütlesi olan yeşil makara ş
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin