İmmün kompleksler kullanılarak dendritik hücre aktivasyonunun akış sitometrisi tabanlı analizi

Kimyasal olarak sabitlenmiş bir tümör hücresi süspansiyonu ile başlayın.

Tümör hücresi yüzey antijenlerine bağlanan, bağışıklık kompleksleri veya IC'ler oluşturan optimum bir tümör bağlayıcı immünoglobulin G konsantrasyonu ekleyin.

IC'leri, yapışmış dendritik hücreler içeren bir kültür plakasına aktarın. Kuluçkaya yatmak.

Dendritik hücre IC'yi tanır, içselleştirir ve onu peptit parçalarına dönüştürür.

Fragmanlar, majör histokompatibilite kompleksi sınıf II veya MHC-II moleküllerine yüklenir ve kostimülatör molekül CD86 ile birlikte hücre yüzeyinde sunulur.

Medyayı çıkarın. Bir hücre ayrışma tamponu ekleyin ve hücreleri ayırmak için kuvvetlice pipetleyin.

Hücreleri bir tüpe aktarın.

Spesifik olmayan etkileşimleri engellemek için hücreleri bir bloke edici solüsyonda santrifüjleyin ve yeniden askıya alın.

MHC-II ve CD86'yı hedefleyen florofor etiketli bir antikor kokteyli ile kaplayın.

DNA bağlayıcı bir boya ekleyin ve ölü hücre çekirdeklerini boyamak için kısa bir süre inkübe edin.

Akış sitometrisini kullanarak, IC aracılı dendritik hücre aktivasyonunu doğrulayarak MHC-II ve CD86'yı birlikte eksprese eden canlı hücreleri tanımlayın.

İlk olarak, hücreleri oda sıcaklığında 10 dakika bo