Fare Hipokampal Nöronlarını Kültürlemek İçin Bir Teknik
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:48 dk. • July 8th, 2025
Bir tamponda hasat edilmiş bir fare yavrusu hipokampusu alın.
Hipokampusu daha küçük parçalara ayırın ve bunları konik bir tüpe aktarın.
Dokuyu tampon ile yıkayın. Parçalar yerleştikten sonra tamponu çıkarın. Şimdi, taze tampon ve tripsin ekleyin.
Kuluçka sırasında, proteolitik bir enzim olan tripsin, dokunun hücre dışı matrisini sindirerek hipokampal nöronları gevşetir.
Sindirilmiş dokuyu tampon ile yıkayın.
Parçalar yerleştikten sonra tamponu çıkarın. Taze tampon ekleyin ve dokuyu mekanik olarak ayırmak için tekrar tekrar pipetleyin ve tek hücreli bir süspansiyon elde edin.
Sindirilmemiş doku çöktüğünde, hücre süspansiyonunu, ortam içeren bir kültür plakası içinde balmumu destekleri olan poli-L-lizin kaplı lamellere aktarın.
Hücreler, elektrostatik etkileşimler yoluyla poli-L-lizin kaplı yüzeylere bağlanır.
Şimdi, nöron yapışık lamelleri aşağı bakacak şekilde serumsuz ortamda kortikal glial veya nöronal olmayan hücreler içeren bir tabağa yerleştirin.
Kültürde, balmumu destekleri, nöronlar ve glial hücreler arasındaki doğrudan teması önleyerek, glial hücre tarafından salgılanan faktörlerin nöronal sağkalımı ve olgunlaşmayı teşvik ettiği bir mikro ortam yaratır.
Başlamak için, bir
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin