Genetiği Değiştirilmiş Drosophila Beyinlerinde Protein Agregatlarının Görüntülenmesi ve Miktarının Belirlenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:47 dk. • July 8th, 2025
Genetiği değiştirilmiş Drosophila beyinleri ile başlayın. Bu beyinler, nöronda kırmızı floresan etiketli bir mutant proteini ifade eder ve çevredeki glial hücreye yayılabilir ve sarı floresan etiketli normal proteini ifade ederek agregasyonlarına neden olur.
Hücresel bütünlüğü koruyan fiksatif bir çözelti ekleyin.
Sabitleyiciyi çıkarın ve bir tamponla yıkayın.
Bir antifade reaktifi ekleyin ve floresan sinyallerin solmasını önlemek için inkübe edin.
Beyinleri bir slayta aktarın ve fazla sıvıyı çıkarın.
Beyinlerin slayta yapışmasına izin verin.
Bir lamel parçalarını ara parça olarak kullanarak, üzerlerine bir lamel yerleştirin. Antifade reaktifi ekleyin ve kapatın.
Konfokal mikroskop altında, kırmızı ve sarı floresan için farklı uyarma dalga boylarını kullanarak görüntüler yakalayın.
Görüntü analiz yazılımını kullanarak protein agregatlarını ölçün.
Kırmızı ve sarı floresanın birlikte lokalizasyonu, mutant proteinlerin yayılmasını gösterir.
Tüm beyinler diseke edildikten sonra, toplama tüpünü oda sıcaklığında bir nutatora aktarın ve yaklaşık 5 dakika sallayın. Fiksasyon süresinden sonra, fiksatif solüsyonun çoğunu bir P1000 pipeti kullanarak çıkarın ve beyinleri tüplerde bırakmaya çok
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin