Fare Kortikal Nöronlarında Aksonal Dallanmanın Gerçek Zamanlı İn Vitro Görüntülenmesi

Fare embriyonik kortikal nöronlarını içeren cam tabanlı bir görüntüleme kabı alın.

Görüntüleme sırasında hücre canlılığını korumak için çanağı bir diferansiyel girişim kontrastı veya DIC mikroskobunun çevre odasının içine yerleştirin.

DIC mikroskobu, polarize ışığı numuneyi geçen iki ışına böler.

Numune boyunca kırılma indisindeki değişiklikler, bu ışınlar arasında faz kaymalarına neden olur.

Işınlar yeniden birleştiğinde, girişimleri yüksek kontrastlı bir görüntü oluşturarak daha ince hücresel yapıları görünür hale getirir.

Dallanmamış aksonları olan nöronları tanımlayın ve aksonal dallanmayı görselleştirmek için hızlandırılmış görüntülemeyi kullanın.

Aksonal reseptörlere bağlanan ve lokalize ekzositozu tetikleyen hücre dışı bir rehberlik işareti olan netrin-1 ile tedavi edin.

Ekzositik veziküller, zar genişlemesini desteklemek için hücre iskeleti yeniden düzenlenirken, bölgelere zar bileşenleri sağlar.

Mikroskop altında, bu değişiklikler aksonal dallanmanın başlangıcını işaret eden küçük çıkıntılar olarak görünür.

Zamanla, bu çıkıntılar olgun aksonal dallara dönüşür ve bu da nöronal gelişimin dinamik sürecini gösterir.

İki gün in vitro olarak, transfekte edilmemiş nöronları içeren cam tab