Hidrojel Bazlı Bir Mikro Sütun Kullanarak Mikro Doku Mühendisliğine Sahip Bir Sinir Ağı Geliştirme

Mikro sütun içeren bir tabakla başlayın. Mikro kolon, bir hidrojel dış kabuğa ve bir hücre dışı matrise veya ECM çekirdeğine sahiptir.

Aynı tabağa kültür ortamı damlaları ekleyin.

Nöronal hücre agregalarını tabağa aktarın, ardından bunları orta damlacıklardan birine yerleştirin.

Stereomikroskop altında gözlemleyin ve mikro sütunun her iki ucuna hücre agregalarını yerleştirin.

Ardından, hücresel canlılık için tohumlanmış mikro sütunu ortama aktarın.

Hücrenin ECM'ye bağlanmasına izin vermek için inkübe edin.

Stereomikroskobu kullanarak hücre ekini onaylayın. Ardından, tabağı kaplamak için kültür ortamı ekleyin ve inkübe edin.

Bağlı nöronlar aksonlarını ECM boyunca uzatmaya başlar.

Besin seviyelerini korumak için yarım ortamı düzenli olarak taze bir ortamla değiştirin.

Zamanla, aksonlar büyür ve mikro sütunun tüm uzunluğu boyunca yayılır ve sinir ağları oluşturur.

Geliştirilen mikro doku mühendisliği yapılmış sinir ağı, hasarlı sinir devresini yeniden yapılandırmaya hazır.

İnkübasyondan hemen sonra hücre tohumlamaya devam edin. Yaklaşık 10 ila 20 mikrolitre kültür ortamını, mikro sütunları tutan Petri kaplarındaki iki boş alana aktarın. Nöronal agregatları ayrı ayrı toplamak için bir mikropipet kullanın ve bunları yapıları içeren Petri kabına aktarın. Hücre sağlığını korumak için agregaları forseps ile küçük kültür ortamı havuzlarından birine taşıyın.

Stereomikroskop altında gözlem yaparken, tek yönlü mikro TENN'ler için mikro sütunların bir ucuna veya çift yönlü mimari için her iki ucuna bir agrega yerleştirmek için forseps kullanın. Ardından, dehidrasyonu önlemek ve agrega sağlığını korumak için tohumlanmış mikro sütunu diğer küçük kültür ortamı havuzuna taşıyın. Tüm mikro kolonlar yüklendiğinde, agregaların ECM'ye yapışmasını sağlamak için 37 santigrat derece ve %5 karbondioksitte 45 dakika inkübe edin.

İnkübasyondan sonra, stereomikroskop kullanarak agregaların mikro sütunların uçlarında kaldığını doğrulayın. Son olarak, mikro-TENN'leri içeren Petri kaplarını bir pipet kullanarak kültür ortamı ile dikkatlice doldurun. Bulaşıkları uzun süreli kültür için 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte bir inkübatöre yerleştirin.