Name: FSL oluşturur: immunoseparasyon bir Aralığı Hücre / virion Yüzeyleri değiştirmek için Basit Bir Yöntem, Canlılık Etkileyen olmadan (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: Öğrenin, canlı hücre ve virüs yüzeylerini zarar vermeden hızlıca etiketlemek için FSL yapıları kullanmayı. Bu yöntem akış sitometrisi ve mikroskopi ile görüntülemeyi mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, video sunmak için Sigma-Aldrich Dan Bess teşekkür ederiz. Biz de Don Şubesi, Evgenii Cherny Scott Chesla Elizabeth Hadac Amanda Harrison, Damien Heathcote, Annika Hult, Chuan-Ching Lan, Susannah McIntosh, Sarvani Komarraju Elena Korchagina Caroline Oliver Martin Olsson, Stephen Parker, İgor Rodinov teşekkür bunların sonuçları ve FSL yapıları tasarımı, sentezi ve biyolojik aktivitesinin belirlenmesinde katkı Alexander Tuzikov ve Eleanor Williams.

Aşağıdaki protokol biyolojik membranlar içine FSL yapıları ekleme (Şekil 1) genel prosedürü anlatılmaktadır. Basitlik için protokolü sadece% 100 konsantrasyonda hücreleri (kodecytes) sevk edecektir. Ancak, vadeli hücreler virionlar (kodevirions) veya organizma veya hücresel yapılar ve seyreltici kendi konsantrasyonu ile değiştirilebilir önemli değil, test, kontrol ve deneyler arasında her zaman tutarlı olması koşuluyla. Tipik olarak kırmızı kan hücreleri ile hematokrit% 80, ama virionlar, embriyo ve diğer hücreleri genellikle% 1'den daha az. Bu yöntem çok sağlam ve herhangi bir varyasyon tarafından kullanılan modifiye membranlar üretecek, ancak arıtma, özel uygulamalar için gerekli değişiklik derecesi optimize etmek ve standartlaştırmak için gerekli olacaktır. 1. FSL, hazırlanması oluşturur <ol><li> Seyreltici 1.0mL (ya da ürün eklemek belirtildiği gibi) eklenmesi ile ürün flakon FSL inşa stok solüsyonu ilk sulandırmak kuru FSL ürün (Tablo 1) hazırlamak için. Kısaca sonikasyon (30 saniye). Bu 100 mcL steril kaplar içine aliquoted ve 2-8 ° C ile bir hafta kadar, ya da 3 aya kadar donmuş muhafaza edilebilir bir 1mg/ml çözüm hazırlayacaktır. </li><li> Çalışma hazırlamak için FSL miseller homojenize (30 saniye) stok solüsyonu kısaca sonikasyon kullanmak hemen önce, ekleme için çözümler oluşturmak. FSL inşa tampon (tercihen yüksek hidrofobik lipidler veya malzeme içermeyen), istenirse bir menzil içinde veya gerekli konsantrasyonu sulandırınız. </li></ol> Notlar: <ol><li> FSL yapıları genellikle, lipit içeren medya hücrelerin içine gireceğiz ama genellikle PBS veya diğer lipid ücretsiz medya daha çok 50X yüksek FSL çalışma konsantrasyonları gerekecektir. </li><li> Çalışma aralığı dilüsyonları uygulama tespit yöntemi duyarlılığı, FSL yapının türüne ve gerekli modifikasyon derecesine bağlıdır. Genelde seyreltme aralığı 10-500 karbonhidrat FSL yapıları için seyreltici mL başına FSL mikrogram ve fluorophores ve biyotin gibi diğer FSL yapıları için 1-100 mg / ml arasında olacak. </li><li> Birden fazla FSL inşa içeren ekleme seyrelticiler hazırlanıyor, sadece normal çalışma konsantrasyonda aynı seyreltici yapıları birbirine eklemek. Bir yapı diğerinden daha çok daha yüksek konsantrasyonda ise, konsantrasyon bazı ayarı (artış) daha az bir yapı için gerekli olabilir. Alternatif yapıları daha az izlenen, en yüksek konsantrasyon ilk inşa, tercihen sırayla eklendi olabilir. </li><li> FSL inşa konsantrasyonu 1000 mcg / ml üzerinde bir hücre zarı içine önemli miktarda lipid tanıtmak ve hücrenin şeklini değiştirmek veya lizis için daha duyarlı hale getirebilir. </li><li> FSL inşa çalışan çözümler 2-8 ° C'de saklanır ve bir kaç gün içinde kullanılmalıdır. </li><li> FSL yapıları su içinde seyreltilmesi olabilir ama istikrar düşer ve birkaç saat içinde kullanılması gerekir. Prospektüste sulandırıldıktan seyreltici olarak su belirtirse flakonda ürün aynı zamanda tuzları (as prospektüste belirtilen) içerecektir. </li></ol> 2. Membranlar içine FSL Construct (ler) yerleştirilmesi <ol><li> İlk hücreler santrifüj yoluyla bağlanmamış lipidler FSL değişiklik ücretsiz yıkama ve yıkama çözüm olarak PBS veya lipid ücretsiz cep medya kullanarak. </li><li> Paketi hücreler veya seyreltici 100 mcL askıya. </li><li> Aynı zamanda, ideal olarak iyi huylu, ancak ilgili FSL yapısı değiştirilmiş hem de değiştirilmemiş hücreleri (FSL çözüm yerine PBS ile inkübe) ve / veya hücreleri olmalıdır kontrolleri hazırlar. </li><li> Hücreleri için uygun bir seyreltme FSL çözümü (1 veya daha fazla FSL yapıları içeren) 100 mcL ekleyin ve 37 1-2 saat inkübe ° C Benzer bir sonuç 25 6 saat inkübasyon elde edilebilir 4 ° C veya gece (18 saat) ° C - ağır hücre süspansiyonları kullanılır karıştırma birkaç saatte tavsiye edilir. </li><li> Herhangi bir ücretsiz FSL yapıları kaldırmak ve uygun bir süspansiyon hazırlamak için (isteğe bağlı) PBS veya medya ile iki kez yıkayın. </li></ol> Notlar: <ol><li> Seyreltici hücreleri askıya almak için kullanılan hücre kültür ortamı, PBS, hücre depolama çözümleri, vb olabilir, ama tercihen lipit (örneğin fetal buzağı serumu) veya deterjan (örneğin TWEEN) olmadan. </li><li> Farklı birimler (100 mcL daha) oranları (01:01 hücre / FSL çözüm daha) veya inkübasyon süresi ve sıcaklığı koşulları tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için kullanılan aynı oran, konsantrasyon ve hacim olarak kullanılıyor olabilir. </li></ol> 3. Kullanma ve Görselleştirme <ol><li> Kodecytes lipid ücretsiz medya FSL değişikliği süreci tamamlandıktan sonra 4-8 ° C'de saklanır veya kullanılmış olabilir. </li><li> Kodecytes ve kodevirions genellikle değiştirilmemiş hücre / virionlar olarak aynı şekilde davranır ve Handl olabilired ve normal test sistemleri (mikroskopi, seroloji, flow sitometri, vb.) altında incelendi. Genellikle çözücü / deterjan / membranlarda lipit yapıları Zehir lipidler kaçınma dışında hiçbir özel gereksinimleri var. </li></ol> Notlar: <ol><li> Hücrenin yaşam için lipid ücretsiz medya saklandığı takdirde, yapıları, kırmızı hücreler gibi inaktif hücreleri, membran kalır. Aktif membranlara hücrelerinde hücre zarı faaliyet oranda bağımlı bir yapıları, içselleştirilmiş ve metabolize olacaktır. </li><li> Ölü hücreler genellikle FSL yapıları yüksek düzeyde içeren, bu canlı hücreler cansız hücreleri ayırmak için kullanılabilir. </li><li> Kodecytes lipid (veya in vivo olarak kullanılan) saklanır içeren medya / serum / plazma yapı gibi ortamlarda, yavaş yavaş, saat ya da gün bir süre boyunca sıcaklık ve lipid konsantrasyonları / kompozisyonlar bağlı olarak, membran Zehir olacaktır. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: <ol><li> Aşağıdaki temsilcisi sonuçları bağlıdır inşa kullanılmıştır (Tablo 1), takılı konsantrasyon ve algılama sistemi (ler) bağıl duyarlılık ve özgünlük. FSL yapıları, genel olarak 1 saat sonra hücrelerin içine gireceğiz ama her durum için en uygun koşulların oluşturulması gerekmektedir. </li><li> FSL yapıları, canlı hücreleri çeşitli 3-9,11,14 dışında etiketlemek için kullanılabilir . Şekil gösterilen örnekler farklı aşamalarında az 2 embriyolar (kırılgan bir hücre gibi) kullanılmıştır, ancak diğer hücrelere (Şekil 3) veya zarflı virionlar (Şekil 4) de etiketli olabilir. FSL-biotin ve diğer FSL yapıları (Şekil 5) kendi varlığını göstermek için ikincil bir algılama sistemi (genellikle avidin / antikorlar / lektinler) kullanımı gerekebilir FSL-Floresein, doğrudan etiketleme yüzeyler (Şekil 2-4) sağlar . </li><li> Kırmızı hücrelerin 4-9 (Şekil 6) da dahil olmak üzere hücreleri, insan veya hayvan özgüllüğü Kan grubu işaretleri eklenebilir. FSL miktarı bir kodecyte yapı olarak kontrol edilebilir ve tekrarlanabilir 4-6, antikor kantitatif için kodecytes yapılabilir (Tablo 2 ve Şekil 6). Gerçek hücre kaynağı önemli değildir, onlar herhangi bir türün, hatta antikor kaynağı olarak aynı kökenli, böylece sadece uyumsuz bir antijen sağlamak FSL 7,8 (Şekil 6) tarafından tanıtılan . </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3289/3289table2.jpg" alt="Tablo 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Tablo 2"> Tablo 2, üç farklı FSL-A (üç) kırmızı hücre kodecytes Temsilcisi serolojik reaksiyonlar monoklonal anti-A dilüsyonları karşı test . FSL-A (üç) grup O kırmızı hücreler eşit hacmi ile inkübe 50 mcM çözüm 1:512 dilüsyon monoklonal anti-A tarafından tespit olabilir güçlü bir antijen pozitif hücreler, üretti. 5 - 10 kat daha düşük FSL-A (üç) çözümleri, daha az kan grubu A antijeni ifade kodecytes üretti. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig1.jpg" alt="FSL yapı genel görünümü" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL yapı genel görünümü"> Şekil 1 FSL inşa genel bakış . Bir çiçek FSL yapıları gibi üç ana bileşenden oluşur. FSL inşa halinde fonksiyonel kafası farklı biyolojik olarak fonksiyonel gruplar, çeşitli membran uzak F boşluk neden su dispersiyon geliştirmek ve serum ile non-reaktif olarak tasarlanmış bir boşluk (S), (F) diacyl lipit sağlar yapı kendiliğinden yüzeyler dahil. (I), kan grubu, 3 GB (veya P k) FSL-GB3 epitop Galα4Galβ4Glcβ trisaccharide. (II) FSL-A (üç) kan grubu A trisaccharide epitopu GalNAcα3 (Fucα2) Galβ. (III) FSL-Floresein. (IV) tek bir biotin F benzer parçaları ile FSL-biotin. Yapı IV ayırıcı carboxymethylglycine-adipat dayalı iken, I-III yapıların fonksiyonel grup dioleoylphosphatidylethanolamine aktive adipat türev (DOPE) konjuge. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig2.jpg" alt="FSL-Fluorescein etiketli fare embriyoları" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-Fluorescein etiketli fare embriyoları"> Şekil 2 FSL-Floresein fare embriyoları etiketli. Tüm görüntüler canlı embriyo zona pellusida (ZP) (yani FSL inşa içinde embriyo etiket ZP geçirilir) sağlam olduğu zaman etiketli. Görüntüler I-IV FSL-Floresein asit tyrodes yazılan etiketleme ile ZP serbest ZP-embriyoların. Özdeş boyama embriyolar ZP sağlam veya ZP ücretsiz FSL ile değiştirilmiş olup olmadığını ne olursa olsun meydana gelir. Embriyolar, 2 saat 37 ° C yöntem serum serbest hücre kültürü medya tarafından doğrudan, FSL-Floresein etiketli yıkanır ve floresan mikroskobu altında incelendi. (I) ZP ücretsiz iki hücreli fare embriyo, aynı zamanda klasik yoğun kutup vücut boyama gösteren. (II-III) ZP ücretsiz dört hücreli, sekiz hücreli fare embriyoları, çıkışları olan hücreleri gösteren hem de gölgeli boyamaide mikroskop odak düzlemi. (IV) ZP ücretsiz 16 hücreli fare embriyo. (V) hem de embriyo ve zona etiketli ZP sağlam fare blastosist embriyolar (d4-d5). <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig3.jpg" alt="FSL-Fluorescein ve zebrafish" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-Fluorescein ve zebrafish"> Şekil 3 FSL-Floresein ve zebrafish 14. (I) Microangiography 52 hpf (saat sonra döllenme) Zebra balığı larvaları FSL-Floresein dolaşımını doğrudan enjekte. Zebrafish damarsal lekeli. (II) FSL-Floresein heterojen Zebra balığı böbrek doku hücrelerinin (ZK kodecytes), ex vivo oluşturulan mikro-52 hpf alıcı Zebra balığı dolaşımı içine enjekte edilir. ZK kodecytes in vivo gözlemler görüntüleme 2 saat sonrası enjeksiyon yapıldı time-lapse mikroskobu ile floresan altında damarsal. Gösterilen büyük yavaş hareketli veya hareketsiz hücreler (portakal oklarla gösterilen) ve hızlı hareket eden hücreler (yeşil oklarla belirtilen hareketi nedeniyle bulanık görüntüleri) ile tek bir video karesi. Etiketleme, davranış ve ZK kodecytes biodistribution in vivo gözlem gerçek zamanlı sağlar . (III) FSL-Floresein Oral alımı çeker tarafından 5 gün medya içeren FSL-Floresein zebrafish embriyolar elde etti. Yıkama hiçbir FSL yapıları (en az 6 saat gereklidir, ancak birkaç gün için olabilir) içeren ortama embriyoların transferi ile elde edilmiştir. (IIIa) Aydınlık alan mikroskobu bitişik floresan görüntü (IIIb) karşılık gelen FSL-Floresein tedavi zebrafish. Fluoresence tercihen bağırsak yer oldu. Boyama, tedavi edilmeyen kontrol embriyolar (IVa ve IVb) gözlenmiştir. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig4.jpg" alt="Viryonların FSL-Fluorescein etiketlenmesi" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Viryonların FSL-Fluorescein etiketlenmesi"> Şekil 4 virionlar 10 VSV ve H1N1 FSL-Floresein etiketleme. (I) veziküler stomatit virüsü (VSV), doğrudan 37 10 mcg / ml 2 saat FSL-Floresein etiketli ° C,% 4 paraformaldehid ve ardından flow sitometri ile tespit izledi. VSV kodevirion Mesaj FSL etiketleme hiçbir arıtma gerekli oldu. (II), insan, A / Puerto Rico/8/1934 (H1N1) ile enfekte domuz testis hücrelerinin Flow sitometri FSL-Floresein kullanarak etiketli kodevirions. Enfekte olmamış hücrelerdeki siyah bir çizgi olarak görülür, floresan hücre (kırmızı çizgi) ST hücreleri sonuçları ile H1N1 kodevirion füzyonu. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig5.jpg" alt="FSL-biotin etiketli hücreler" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-biotin etiketli hücreler"> Şekil 5 etiketli avidin 7,8 ile FSL-biotin etiketli hücreleri ve sonraki görselleştirme. Tüm hücreler ilk 1 saat 37 ° ° C FSL-biotin ile etiketlenmiş sonra avidin etiketli florofor floresan mikroskopi için monte yıkanmış ve ıslak ile reaksiyona yıkanmış edildi. (I) bir fare embriyo blastosist konfokal görüntü Derlenmiş. (II) önceki görüntü embriyo Orta konfokal dilim. (III) Canlı hareketli insan sperm bulanıklık kendi hareketinin bir sonucu olarak ortaya çıkar. (IV) Sabit (% 4 paraformaldehid mesaj ekleme) İnsan sperm. (V) İnsan eritrosit. (VI) Sabit (% 4 paraformaldehid ekleme öncesi) RL95 insan endometrial karsinom. (VII) Sabitlenmemiş RL95 endometrial insan karsinom hücre hattı. (VIII) Biotin RBC (VIIIb) alanında mevcut iki kodecytes belirlenmesi, floresan altında görüntülenen aynı alanda ise 2 saat (VIIIa), ışık mikroskobu altında incelendi bir alanı temsil eden kodecytes intravenöz infüzyon yazılan alınan bir kan örneği gözlenen kodecytes görüntüsü. Etiketsiz hücreleri kodecytes oranının hesaplanması hayatta kalma bir göstergesi olarak kullanmak olabilir. (IX) Canlı insan endometrial biotin kodecytes avidinylated boncuk bağlanarak tarafından görüntülendi. <img src="/files/ftp_upload/3289/3289fig6.jpg" alt="FSL-Karbohidrat, serolojik profilleme için kan grubu belirteçleri eklemek için" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="FSL-Karbohidrat, serolojik profilleme için kan grubu belirteçleri eklemek için"> Şekil 6 serolojik profil için kan grubu belirteçleri eklemek için FSL-Karbonhidrat. (I) İnsan kırmızı hücre Galili kodecytes FSL-Galili bir konsantrasyon (500 mg / ml) ile oluşturulan ve insan serum dilüsyonları karşı test edilmiştir. İnsan kırmızı kan hücrelerinin doğal xenoantigen Galili antijen ile meydana gelmez. Böyle kodecytes kantitatif serum antikor düzeylerine kullanılabilir. Bu örnekte donör 01:32 bir anti-Galili titresi tespit edildi. (II) antikor tespit etmek için FSL azalan seviyeleri ("antijen titreleri"), optimal bir antijen düzeyi kodecytes oluşturarak (bu örnekte Le bir) tespit edilebilir. Hücreler antikor düzeyi belirli bir titresi aştığında olumlu bir sonuç vermek için oluşturulabilir. Pozitif sonuç vermesi için gerekli FSL antijen antikor kalite ve seviye tespit edilmelerini bağlıdır. Karbonhidrat antijenleri için 100 mcg / mL FSL çözüm genellikle güçlü bir pozitif reaksiyon neden olur. (III) İnsan grubu O kırmızı hücreleri belirli bir düzeyde bir karınca için modifiye edilmiştirigen (A kodecytes standardize), doğru ve tekrarlanabilir insan serumunda anti-A ölçmek için kullanılır. Bu örnekte anti-A grubu O serum test titresi 1:32 ve kodecytes donör kendi kırmızı kan hücrelerinin hazırlanmıştır. (IV) Kan grubu A ve B antijenleri, aynı anda tek bir grup O kırmızı hücre örneği takılı zayıf bir B zayıf kodecytes oluşturmak için kullanılır. Bu kodecytes ABO kalite kontrol amaçlı kullanılabilir. Bu sonuç, özel olarak formüle edilmiş anti-A ve anti-B reaktifler karşı test edilmiş ve zayıf reaksiyonlar beklenen verir zayıf bir B zayıf kodecyte analizi gösterir .

<ol><li>Waehler, R., Russell, S. J., Curiel, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+targeted+viral+vectors+for+gene+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Engineering targeted viral vectors for gene therapy.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 573-587 (2007).</li>
<li>Strable, E., Finn, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modification+of+viruses+and+virus-like+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Top.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chemical modification of viruses and virus-like particles.</a> Curr. Top. Microbiol. Immunol. 327, 1-21 (2009).</li>
<li>Henry, S., Bovin, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+synthetic+peptidolipids%2C+glycolipids+and+other+lipid-linked+structures+to+create+designer+red+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">The development of synthetic peptidolipids, glycolipids and other lipid-linked structures to create designer red cells.</a> Transfusion. 48, Suppl 2S. 194A-194A (2008).</li>
<li>Frame, T., Carroll, T., Korchagina, E., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthetic+glycolipid+modification+of+red+blood+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Synthetic glycolipid modification of red blood cell membranes.</a> Transfusion. 47, 876-882 (2007).</li>
<li>Hult, A. K., Frame, T., Henry, S., Olsson, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+evaluation+of+red+blood+cells+transformed+with+variable+amounts+of+synthetic+A+and+B+glycolipids%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sang%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry evaluation of red blood cells transformed with variable amounts of synthetic A and B glycolipids.</a> Vox Sang. 95, Suppl 1. 180-180 (2008).</li>
<li>Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+red+blood+cells+for+laboratory+quality+control+use%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Hematol%22%5BJournal%5D)">Modification of red blood cells for laboratory quality control use.</a> Curr. Opin. Hematol. 16, 467-472 (2009).</li>
<li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+neutralization+of+anti-A+and+successful+transfusion+of+A+antigen+incompatible+red+cells+in+an+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">In vivo neutralization of anti-A and successful transfusion of A antigen incompatible red cells in an animal model.</a> Transfusion. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Oliver, C., Blake, D., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+transfusion+reactions+and+predicting+in+vivo+cell+survival+with+kodecytes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Modeling transfusion reactions and predicting in vivo cell survival with kodecytes.</a> Transfusion. , Forthcoming (2011).</li>
<li>Heathcote, D., Carroll, T., Wang, J. J., Flower, R., Rodionov, I., Tuzikov, A., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+antibody+screening+cells%2C+MUT%2BMur+kodecytes%2C+created+by+attaching+peptides+onto+erythrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Novel antibody screening cells, MUT+Mur kodecytes, created by attaching peptides onto erythrocytes.</a> Transfusion. 50, 635-641 (2010).</li>
<li>Hadac, E. M., Federspiel, M. J., Chernyy, E., Tuzikovb, A., Korchagina, E., Bovin, N. V., Russell, S. J., Henry, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescein+and+radiolabeled+Function-Spacer-Lipid+constructs+allow+for+simple+in+vitro+and+in+vivo+bioimaging+of+enveloped+virions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Meth%22%5BJournal%5D)">Fluorescein and radiolabeled Function-Spacer-Lipid constructs allow for simple in vitro and in vivo bioimaging of enveloped virions.</a> J Virol Meth. 10, Forthcoming (2011).</li>
<li>Blake, D., Lan, A., Love, D., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorophore-kodecytes+-+fluorescent+function-spacer-lipid+%28FSL%29+modified+cells+for+in+vitro+and+in+vivo+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J.%22%5BJournal%5D)">Fluorophore-kodecytes - fluorescent function-spacer-lipid (FSL) modified cells for in vitro and in vivo analyses.</a> FEBS J.. 277, Suppl 1. 199-199 (2010).</li>
<li>Harrison, A. L., Olsson, M. L., Brad Jones, R., Ramkumar, S., Sakac, D., Binnington, B., Henry, S., Lingwood, C. A., Branch, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+synthetic+globotriaosylceramide+analogue+inhibits+HIV-1+infection+in+vitro+by+two+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Glycobiology%22%5BJournal%5D)">A synthetic globotriaosylceramide analogue inhibits HIV-1 infection in vitro by two mechanisms.</a> Glycobiology. 27, 515-524 (2010).</li>
<li>Barr, K., Diegel, O., Parker, S., Bovin, N., Henry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function-Spacer-Lipid+%28FSL%29+constructs+enable+inkjet+printing+of+blood+group+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Function-Spacer-Lipid (FSL) constructs enable inkjet printing of blood group antigens.</a> FEBS J. 277, Suppl 1. 235-235 (2010).</li>
<li>Lan, C. -C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Modeling+inflammatory+bowel+disease+%5B%5D%22">Modeling inflammatory bowel disease [dissertation]</a>. , University of Auckland. Auckland. (1988).</li>
</ol>

Deborah A. Boş ve Stephen M. Henry code Biotech çalışanları ve hissedarları code teknolojisinin patent sahibi Limited. Dan Bess bu video-makale üretimi sponsor oldu Sigma-Aldrich, bir çalışanın.

FSL yapıları ile değiştirmek hücreleri ve virionlar çok basit ve sağlam bir tekniğin 3-11 . Tanımlamak ve FSL değiştirilmemiş hücrelerden değiştirilmiş hücreler ve virionlar inşa ayırmak için sırasıyla kodecytes ve kodevirions 6-10 denir, ama tanıtıldı fonksiyonel grup, membran üzerinde mevcut olması gösterilebilir sadece. Kodecytes FSL yapıları farklı konsantrasyonları ile yapıldığında, örneğin 15 mg / ml kodecytes ya da birden fazla FSL sonra ise kombine bir dönem, onları oluşturmak için kullanılan FSL inşa çözüm konsantrasyonu anılacaktır. A + biotin kodecytes 7,8 gibi. Farklı hücreler açıklama hücre tipi de dahil olmak üzere, karşılaştırılabilir zaman tavsiye edilir, örneğin kırmızı hücre biotin kodecytes veya endometrium biotin kodecytes 7,8. Yerleştirme işlemi, (farklı oranlarda olsa da) çok sağlam ve ekleme olmakla birlikte 4 ila geniş bir sıcaklık aralığında meydana gelir - 37 ° C ve saat dakika içinde, temas süresi, sıcaklık, FSL konsantrasyonu (tekrarlanabilir ekleme sıkı kontrol elde etmek için ) seyreltici formülasyonu dahil olmak üzere, daha az oranda hücre konsantrasyonu gereklidir. Bugüne kadar, tüm FSL yapıları aynı tekniğin 4-11 hücreleri değiştirmek için kullanılır olabilir, ancak belirli koşullar hücre / modifiye edilmesi virionlar iş akışı ve / veya optimal işleme gereksinimleri için daha elverişli olması beklenmektedir. . Istenen etkiyi elde etmek için tam FSL konsantrasyonu 4 kullanıcı tarafından tespit edilmesi gerekmektedir. Çıkan FSL değiştirilmiş hücreler inşa / virionlar genellikle biyolojik ya da analitik sistemler 4-11 değiştirilmemiş bir hücre / virion aynı şekilde kullanılabilir. FSL yapıları lipid çözümler 7,8 ile temas ettiğinde yavaş yavaş değiştirilmiş yüzeylerden Zehir, ya da aktif hücreler 11 tarafından tüketilmesi olarak, bu konularda zaman dönemler boyunca elde edilen sinyal ya da aktivite düzeyi açısından dikkate alınmalıdır. Ekleme fiksatif lipid salınımlı solventler içermez ve fonksiyonel grup fiksatif ile uyumlu sonra Kodecytes (örneğin glutaraldehid / formalin) sabit olabilir. Alternatif olarak sabit hücreler FSL yapıları değiştirilebilir. FSL yapıları değişiklik hücre ve virion yüzeylerin yanı sıra aynı zamanda dolaşımdaki hücrelerin in vivo Modifikasyon 7 neden laboratuvar hayvanları dolaşıma doğrudan infüze edilebilir ve virüsler 12, toksinler, 12 ve antikorlar 7 inhibe . FLS yapıları da süslemek için lipozomlar kullanılır ve onlar hareketsiz kağıt yüzeyler 13, üzerine basılabilir ve daha sonra tanı testleri kullanılabilir . FSL yapıları giderek artan sayıda canlı hücreleri kolayca değiştirmek için yetenek, hücre yüzeyinde biyoloji çalışma için yararlı bir araştırma ve geliştirme aracı olarak kanıtlamak gerekir.

<img src="/files/ftp_upload/3289/3289table1.jpg" alt="Tablo 1"> 1. Ticari olarak kullanılabilir FSL yapıları bu yazıda açıklanan Tablo.

fsl oluşturur: immunoseparasyon bir aralığı hücre / virion yüzeyleri değiştirmek için basit bir yöntem, canlılık etkileyen olmadan

FSL Constructs: A Simple Method for Modifying Cell/Virion Surfaces with a Range of Biological Markers Without Affecting their Viability

Değiştirmek / biyolojik yüzeyler görselleştirmek ve ardından bir dizi in vitro ve in vivo ortamlarda değiştirilmiş hücre / virion çalışma yeteneği belirli molekülleri ya da tüm varlık işlevi içine daha fazla anlayış kazanıyor esastır. Biyolojik yüzey modifikasyonu çalışmalar genellikle organizmanın genetik mühendisliği ya da hücre yüzeyinde 1,2 kimyasal moieties kovalent eki sınırlıdır. Ancak bu geleneksel teknikleri, kimyasal reaktanları hücre maruz kalmaktadır, ya da, istenilen sonucu elde etmek için önemli bir manipülasyon, bunları hantal hale gerektirir ve onlar da yanlışlıkla değiştirilmiş hücre canlılığı / işlevselliği etkileyebilir. Zararsız hücre yüzeyi değiştirmek için basit bir yöntem gereklidir. Son zamanlarda yeni bir teknoloji, code Teknoloji yeni yapıları üç bileşenden oluşan bir dizi tanıttı: fonksiyonel bir kafa grubu (F), bir ayırıcı (S) ve lipid kuyruk (L) ve Fonksiyon-Spacer-Lipid veya FSL olarak bilinir constructs3. Boşluk (S), suda dağılabilir bir yapı sağlamak üzere seçilen, ancak kendiliğinden ve istikrarlı bir şekilde bir zar içine dahil edecektir. FSL (F), bugüne kadar kan grubu ile ilgili belirleyiciler, sialik asitler, Hyaluronan&#39;ın polisakkaritler, fluorophores, biotin, radiolabels ve peptidler bir dizi 3-12 dahil olmak üzere sakkaritlerin, bir dizi fonksiyonel moieties yapı. FSL yapıları, embriyoları değiştirerek, sperm, zebrafish, epitel / endometrium hücreleri, kırmızı kan hücreleri ve virionlar hücre adezyon / etkileşim / ayırma / immobilizasyon değiştirmek için, kalite kontrol sistemleri ve teşhis paneller, oluşturmak için kullanılır, ve in vitro ve in edilmiştir hücre / virionlar 3-12 in vivo görüntüleme. Hücre / virionlar değiştirme süreci, genel ve son derece basit. En yaygın bir yöntemdir, FSL 37, 1-2 saat boyunca inşa ° 4-10 C için bir çözüm ile hücre inkübasyon (lipid ücretsiz medya ). İnkübasyon sırasında FSL membran dahil kendiliğinden oluşturur ve bu süreç tamamlandıktan. Yıkama isteğe bağlı. Virionlar kodevirions 10 iken, FSL yapıları değiştirilmiş hücreler, kodecytes 6-9 olarak bilinmektedir . Olduğu gibi doğrudan haşlama ve kodecytes / kodevirions deneysel hayvan modelleri 7,8,10 FSL oluşturur. Tüm kodecytes / kodevirions F benzer parçaları 7,8,10,11 yeni bir işlev kazanıyor süre normal canlılık ve fonksiyonelliği korumak için görünür. Biyouyumlu medya, hücre zarları içerisinde kendiliğinden birleşme ve belirgin düşük toksisite dispersiyon kombinasyonu, FSL hücreleri ve virionlar çalışma için değerli bir araştırma araçları inşa yapar.

Fonksiyon-Spacer-Lipid (FSL) yapıları canlılık kaybı olmadan, canlı hücreler ve virionlar yüzey özelliklerinin değiştirilmesine izin verir. Bu yöntem, sadece basit bir hücre / virion ve spontan ve kararlı bir yüzey dahil oluşur FSL inşa çözüm temas gerektirir.

FSL oluşturur: immunoseparasyon bir Aralığı Hücre / virion Yüzeyleri değiştirmek için Basit Bir Yöntem, Canlılık Etkileyen olmadan

Biyolojik yüzeyleri modifiye etme/görselleştirme ve ardından modifiye edilmiş hücreyi/viryonu bir dizi in vitro ve in vivo ortamda inceleme yeteneği temel teşkil etmektedir...

Bu prosedürün genel amacı, canlı hücrelerin veya S yüzeylerini biyoaktif konstrüktlerle zararsız ve hızlı bir şekilde işaretlemektir. Bu işlem, öncelikle fonksiyonel bir ara boşluk, lipid veya FSL konstrükt çözeltisi hazırlanarak gerçekleştirilir. Ardından, konstrükt çözeltisinin eşit bir kısmı, hücrelerin veya VIR'lerin çözeltisinin eşit bir kısmıyla karıştırılır.Üçüncü adım olarak, karışım 37 °C'de 60 dakika boyunca inkübe edilir. Son adım, modifiye edilmiş hücrelerin veya sitlerin ya da modifiye edilmiş VIR'lerin veya VIR'lerin yıkanması ve her zamanki gibi deneysel olarak kullanılmasıdır. Sonuç olarak, yüzeyi modifiye edilmiş canlı hücreler veya S; akış sitometrisi, mikroskopi ve aglütinasyon dahil tüm rutin deneysel analiz teknikleri aracılığıyla görselleştirilebilir.Bu tekniğin kovalent etiketleme gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı; hızlı, dayanıklı, esnek olması ve modifiye edilen hücrenin veya varyanın canlılığını etkilememesidir. FSL konstrükt stok çözeltisini hazırlamak için öncelikle, kuru FSL ürününü yeniden çözmek amacıyla ürün şişesine bir mililitre seyreltici ekleyerek mililitre başına bir miligramlık bir stok çözelti hazırlayın. Şişeyi 30 saniye boyunca sonikleyin, stoğu 100 mikrolitrelik steril kaplara paylaştırın ve kapları iki ila sekiz santigrat derece arasında bir hafta kadar saklayın.Kullanımdan hemen önce ekleme işlemi için çalışmaya hazır FSL konstrükt çözeltilerini hazırlamak amacıyla, topaklanmış hücreleri homojenize etmek için çözeltiyi tekrar 30 saniye boyunca sonikasyon işlemine tabi tutun ve ardından FSL konstrüktünü ve tamponu gerekli konsantrasyona seyreltin. Çalışma çözeltisini iki ila sekiz santigrat derece sıcaklıkta bir haftaya kadar saklayın. Lipid içermeyen besiyerinde veya PBS içinde yeniden süspansiyon sonrası, bağlanmamış lipidlerden arındırılmış FSL modifikasyonu için hücreleri santrifüjleyin. Ardından hücreleri 100 mikrolitre dilüen içinde paketleyin; kontroller için hücreleri aynı koşullar altında 100 mikrolitre modifiye edilmemiş hücreye kadar yıkayın.İstenirse, uygun bir dilüsyonda 100 µL FSL çözeltisi ekleyin. Buna paralel olarak, ilgisiz FSL çözeltileri ve/veya PBS ile negatif kontroller de oluşturun. Ardından, inkübasyonun ardından tüm hücre alt kümelerini 37 °C'de bir saat boyunca inkübe edin.Serbest FSL konstrüktlarını uzaklaştırmak için tüm hücreleri lipid içermeyen besiyeri veya PBS ile iki kez yıkayın ve lipid içermeyen besiyeri içinde uygun bir süspansiyon hazırlayın. FSL modifikasyon işlemi tamamlandıktan sonra, hücreler dört ila sekiz derece santigrat sıcaklıkta saklanabilir. FSL konstrüktları; çeşitli biyolojik fonksiyonel gruplar olabilen fonksiyonel başlık veya F dahil olmak üzere üç ana bileşenden oluşur.Fonksiyonel baş kısmının membrandan uzaklaşarak boşluk oluşturmasını sağlamak, su dağılımını iyileştirmek, insan serumu ve DAL lipidi ile reaksiyona girmemek için tasarlanan ara parçalı RS, konstrüktun yüzeylere kendiliğinden dahil olmasını sağlar. Temsili FSL grupları sonraki beş görüntüde gösterilmiştir. Canlı fare embriyoları, serumsuz hücre kültürü ortamında 37 °C'de 2 saatlik yöntemle FSL fluorescein ile doğrudan işaretlenmiş, yıkanmış ve ardından floresan mikroskobu altında incelenmiştir.Bu ilk görüntüde, zop palita içermeyen, iki hücreli bir aynalı embriyo görülmektedir. Embriyonun ortasındaki yoğun boyama, klasik bir polar cisim boyamasını temsil etmektedir. Sonraki iki görüntüde, mikroskop odak düzleminin dışında kalan hücrelerin gölgeli boyanmalarını sergileyen, zop palita içermeyen dört hücreli ve sekiz hücreli aynalı embriyolar gösterilmektedir.Bu son görüntüde, zop palita içermeyen 16 hücreli bir aynalama embriyosu gösterilmektedir. FSL floresein ile işaretlenmiş canlı aynalama embriyolarının; hem embriyo hem de zop LUCITA ile işaretlenmiş dört ila beş günlük bütün aynalama blast embriyolarının gösterildiği sonraki görüntü serisi yer almaktadır. Zebrafish'lerin FSL floresein ile işaretlenmesi gösterilmektedir. Bu ilk görüntü, dolaşımına doğrudan FSL floresein enjekte edilmiş, döllenmeden sonra 52 saatlik bir zebrafish larvasının mikro anjiyografisidir.Zebrafish damar sisteminin boyanması burada gözlemlenebilir. FSL floresein, heterojen zebrafish böbrek dokusu hücreleri veya ZK sitleri exvivo olarak oluşturulmuş ve ardından döllenmeden 52 saat sonraki bir alıcı zebrafish'in dolaşımına mikroenjeksiyonla verilmiştir; ZK sitlerinin in vivo gözlemleri, enjeksiyondan iki saat sonra damar sisteminin floresan altında time-lapse mikroskopi ile görüntülenmesiyle yapılmıştır. Görüntüde, turuncu oklarla belirtilen büyük, yavaş hareket eden veya hareketsiz hücreler ile hareketleri nedeniyle bulanık görünen ve yeşil oklarla belirtilen hızlı hareket eden hücrelerin yer aldığı tek bir video karesi gösterilmektedir. Bu görüntüde, zebrafish embriyolarının beş güne kadar FSL floresein içeren medyuma daldırılmasıyla gerçekleştirilen konstrüktün oral alımıyla sağlanan FSL floresein etiketlemesi gösterilmektedir.Soldaki FSL floresein ile işlem görmüş zebra balığının aydınlık alan mikroskopisi, sağdaki bitişik floresan görüntüye karşılık gelmektedir. Floresans tercihen bağırsak kanalında yerleşmiştir. Burada gösterilen işlem görmemiş kontrol embriyolarında herhangi bir boyama gözlemlenmemiştir.Burada, veziküler stomatit virüsü veya VSV'nin, 37 °C'de iki saat boyunca 10 µg/mL FSL floresein ile doğrudan etiketlenmesi, ardından %4 paraformaldehit ile fiksasyonu ve sonrasında konfokal tarama ile analizi gösterilmiştir; VSV virionlarının saflaştırılmasına gerek duyulmamıştır. FSL etiketlemesi sonrası işlem gerekli olmuştur. Bu histogram, FSL floresein ile etiketlenmiş insan A Puerto Rico 8 19 34 veya H1N1 virüsleri ile enfekte edilmiş domuz testis hücrelerini göstermektedir.Floresan yaymayan enfekte olmamış hücreler siyah çizgiyle temsil edilirken, domuz hücreleri ile H1N1 koronavirüsün füzyonu sonucu oluşan floresans kırmızı çizgiyle belirtilmiştir. Sonraki görüntü serisinde hücreler önce 37 °C'de bir saat boyunca FSL biotin ile işaretlenmiş, ardından yıkanmış ve Flor4 işaretli avadon ile reaksiyona sokulmuş, sonrasında ise yıkanarak floresans mikroskopisi için ıslak montaj yöntemiyle hazırlanmıştır. İlk görüntü, bir fare embriyosu blastosistinin birleştirilmiş konfokal görüntüsünü göstermekte olup, bu şekil önceki görüntüdeki embriyonun merkezi bir konfokal kesitini sunmaktadır.Buradakiler canlı ve hareketli insan sperm zoalarıdır. Bulanıklık, hareketlerinin bir sonucudur. %4 Paraform aldehit ile fikse edilmiş insan spermatozoalarının daha net bir temsilci görüntüsü buradaki bu şekilde görülebilir.FSL biotin ile işaretlenmiş insan eritrositlerinin %4 paraformaldehit ile fiksasyonunun, aşağıdaki iki şekilde gösterildiği üzere FSL işaretlemesini etkilemediği görülmektedir; burada, %4 paraformaldehit ile fikse edilmiş RL 95 endometrial insan karsinoma hücreleri gözlemlenebilir. Diğer görselde ise RL 95 endometrial insan karsinoma hücreleri fikse edilmemiştir. Fiksasyon yapılan ve yapılmayan iki görüntü arasında işaretleme açısından neredeyse hiç fark gözlemlenmemektedir.İntravenöz infüzyondan iki saat sonra alınan bir kan örneğinde gözlemlenen FSL biotin işaretli RBC sitleri burada solda gösterilmiştir; hücreler sağda ışık mikroskobu altında incelenmiş, aynı hücre alanı floresan altında görüntülenmiş ve mevcut iki sit yeşil renkte tanımlanabilmiştir. Sitlerin işaretlenmemiş hücrelere oranının hesaplanması, sağkalım göstergesi olarak kullanılabilir. Bu son FSL biotin işaretli hücre görüntüsü, avidin boncuklara bağlanarak görselleştirilen canlı insan endometrial biotin sitlerini göstermektedir.Bu son görüntü serisi, FSL konstrüktlerinin kan grubu belirteçleri ile etkileşimlerini göstermektedir. İlk görüntü, insan serum dilüsyonlarına karşı test edilen ve 500 microgram per milliliter konsantrasyonda FSLG ile kaplanmış insan eritrosit GLI sitlerini içermektedir. İnsan eritrositleri doğal olarak Xena antijeni GALI antijeni ile reaksiyona girmezler.Bu sayede, serumdaki antikor seviyelerini miktarlandırmak için cytes kullanılabilir. Bu örnekte, azalan FSL seviyelerine sahip cytes oluşturularak hastanın antijen titresinin 1:32 olduğu belirlenmiştir. Bir antijen titresi oluşturmaya benzer şekilde, antikoru saptamak için optimal antijen seviyesi belirlenebilir ve hücreler, yalnızca antikor seviyesi belirli bir titre değerini aştığında pozitif sonuç verecek şekilde oluşturulabilir.Pozitif sonuç almak için gereken FSL antijen seviyesi, saptanan antikorun kalitesine ve seviyesine bağlıdır. Karbonhidrat antijenleri için tipik olarak, 100 micrograms per milliliter konsantrasyonundaki bir FSL çözeltisi güçlü bir pozitif reaksiyonla sonuçlanır. Belirli bir antijen seviyesine sahip olacak şekilde modifiye edilmiş veya standartlaştırılmış olarak adlandırılan insan grup O eritrositleri.A hücreleri, insan serumundaki antia miktarını doğru ve tekrarlanabilir şekilde belirlemek için kullanılır. Bu örnekte, hücreler donörün kendi kırmızı hücrelerinden hazırlanmış ve test edilen O grubu serumundaki antia seviyesinin 1/32 olduğu bulunmuştur. Burada altıncı tüpte, tek bir O grubu kırmızı hücre örneğine eş zamanlı olarak eklenen kan grubu A ve B antijenleri ile zayıf A, zayıf B hücreleri oluşturulmuştur.Bu sitler, VO kalite kontrol amaçları için kullanılabilir. Özel olarak formüle edilmiş A haftası ve B haftası sitlerinin anti-A ve anti-B reaktiflerine karşı yapılan analizleri, tüplerin orta alt bölgesinde meydana gelen reaksiyonlarla bu şekilde kanıtlandığı üzere, beklenen zayıf reaksiyonları vermektedir. Bu basit teknik, doğru şekilde uygulandığında iki saat içinde tamamlanabilir.

fsl-constructs-simple-method-for-modifying-cellvirion-surfaces-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Tek Parçacık Düzeyinde Viral Fusion Kinetik Ölçüm yöntemi

Adenovirüs parçacıklar doğal olmayan bir amino asit analog azidohomoalanine veya azido şeker içermesi için...

Bioorthogonal tıklayın Kimya ile Viral Yüzeylerin Kemoselektif Modifikasyonu

Geçici baskın seçim yöntemini kullanarak floresan etiketli proteinleri aynı anda ifade eden rekombinant vaksinia virüslerinin üretimi için hızlı ve modüler bir protokol burada açıklanmıştır.

Floresan Etiketli Vaksinia Virüs Proteinlerinin Verimli Üretimi için Metodoloji

Virionların yüzeye bağlanması, Süper çözünürlüklü floresan görüntüleme veya atomik kuvvet mikroskopisi (AFM) ile tek virion görüntüleme için bir gerekliliktir. Burada, VIRIONların AFM ve süper çözünürlüklü floresan görüntülemede kullanıma uygun cam yüzeylere kontrollü yapışıklık için örnek bir hazırlama yöntemi gösteriyoruz.

Tek Virion Atomik Kuvvet Mikroskopisi ve Süper Çözünürlüklü Floresan Görüntüleme için Numune Hazırlama

Bulaşıcı Ebola virüsleri ile çalışmak biyogüvenlik düzeyi 4 laboratuarlar ile sınırlıdır. Tetracistronic Minigenom içeren parçacıklar gibi çoğaltma ve kopyalama-yetkin virüsü (trVLPs) bize güvenle Ebola virüsü bileşenleri üzerinde sadece güvenerek, biyogüvenlik düzeyi altında 2 koşullarını birden fazla bulaşıcı döngüleri modellemek için olanak sağlayan bir yaşam döngüsü modelleme sistemi temsil eder.

Tetracistronic minigenomlar İçeren virüs benzeri partiküller ile Biyogüvenlik Seviyesi 2 Koşullarında Ebola virüsü Ömrü Modelleme

Burada, virüs bulaşmış HeLa hücre tek katmanlarına yapışma için Krallıklar arası ilişki ve rekabetin (bakteri ve mantar) belirlenmesi için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, prokaryotlar, ökaryotlar ve virüslerin çoklu kombinasyonlarına genişletilebilir.

Bakteri ve mantar virüsle enfekte olmuş hücreler üzerinde Biyofilm Başlatma Belirlenmesi

Vaccinia virüsü (W), yaygın olarak biyomedikal araştırmalar ve insan sağlığının iyileştirilmesi kullanılmıştır. Bu makalede, bir CRISPR-Cas9 sistemini kullanarak VV genom düzenlemek için basit, yüksek verimli bir yöntem açıklanır.

Basit ve Etkin Yaklaşım Mutant Vaccinia Virüs Vektörler Construct

Bu protokol, ilgilenilen belirli hücre tiplerini izole etmek için desthiobiotin, streptavidin ve APTES sisteminin özelleştirilebilir yüzey işlevselleştirmesini tanımlar. Ek olarak, bu makale bu sürecin uygulamalarını, optimizasyonunu ve doğrulanmasını kapsar.

Cam Yüzey fonksiyonlandırmalar aracılığıyla Hedefli Hücre İzolasyonu Bir Yöntem

Açıklanan 96 genlerin ifade quantitate için bir metodoloji olduğunu ve 18 yüzey proteinler tarafından tek hücreleri ex vivodifferentially tanımlanması için izin, genler ve proteinler kandan hücrelere göre virüs enfeksiyonlu hücrelerdeki dile getirdi. Yaklaşım+ T çalışma SIV-enfekte CD4 için uyguladığımız rhesus makak izole hücreler.

Tek hücreli Nefelometri mRNA ve yüzey Protein Simian virüs, immün yetmezlik enfekte CD4 ifadede+ T hücreleri izole Rhesus makak üzerinden

Burada, Abdovirüs çoğaltma ve Abdovirüs çoğaltma kısıtlamak 2) ökaryotik ana faktörler teşvik 1) virüs kodlanmış immunomodulators tanımlamak için protokolleri mevcut. Floresan ve ışıldama dayalı yöntemlerin araştırmacılar hızla düşük sinyal noise oranları ile basit deneyleri Abdovirüs çoğaltma nicel veriler elde etmek için izin verir.

Araçlar Viral Immunomodulators ve ana bilgisayar Antiviral faktörler tanımlanması için eleme olarak Abdovirüs enfeksiyonlar

Burada, anjiyotensin dönüştürücü enzim-2'ye bağlı manyetik mikroküreler tarafından yakalanan sağlam şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs 2 (SARS-CoV-2) viral partikülleri üzerinde iki benzersiz spike protein epitopunu aynı anda tespit etmek için çift raportörlü bir akış sitometrik sistemi kullanan yeni geliştirilmiş bir multipleks floresan immünolojik testi açıklıyoruz.

Viral Partiküller Üzerindeki Yüzey Protein Epitoplarının Multipleks Çift Raportör Stratejisi ile Profillenmesi

Öğrenin, canlı hücre ve virüs yüzeylerini zarar vermeden hızlıca etiketlemek için FSL yapıları kullanmayı. Bu yöntem akış sitometrisi ve mikroskopi ile görüntülemeyi mümkün kılar.

FSL oluşturur: immunoseparasyon bir Aralığı Hücre / virion Yüzeyleri değiştirmek için Basit Bir Yöntem, Canlılık Etkileyen olmadan (Video) | JoVE Journal

FSL oluşturur: immunoseparasyon bir Aralığı Hücre / virion Yüzeyleri değiştirmek için Basit Bir Yöntem, Canlılık Etkileyen olmadan

Daha fazla video keşfet