Chromosomics: Sayısal ve Yapısal Değişmeler Algılama Tüm 24 İnsan Kromozomlar Aynı zamanda Roman OctoChrome BALIK Test kullanma

Octa Chrome Fish testi, 24 insan kromozomunun tümünü tek bir slaytta tek bir hibridizasyonda aynı anda inceler. İlk olarak, belirli sekiz kare slayt üzerinde metafaz spreadleri hazırlayın. Ardından, tüm meta fazların konumunu ve tüm hücre görüntülerinin gelecekte yeniden değerlendirilmesini kolaylaştırmak için örnek slaytın otomatik bir taramasını gerçekleştirin.

Bir sonraki konumda, sekiz kare Octa krom cihazın üzerinde kayar ve probları hibritleştirir. Elde edilen sonuçlar, RO cihazındaki kromozom kombinasyonlarının düzenlenmesine bağlı olarak her karede üç farklı boyalı tam kromozom gösterebilir. Bu RO FISH yöntemi fikri ilk olarak 1990'ların başında insan popülasyonu çalışmalarında balık uygulamaya başladığımda aklıma geldi.

Sonra 1994'teki yıllık A A CR konferansında hücreyi ayarlamak için üç renkli boyama fikrimi, sekiz kare slaytı tanıttım. Bu tekniğin klasik kromozom bükme ve modern spektral prototipleme gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, daha fazla sayıda hücrede 24 insan kromozomunun tümünü kolayca analiz edebilmesidir. Bir kontrol pipeti olarak süspansiyona sabitlenmiş metafaz hücrelerinin hazırlanmasıyla başlayın, hücrelerin bir slayt üzerine damlatılması ve uygun yoğunluğun doğrulanması.

Şimdi sekiz kare OC kroma batırın, iki dakika boyunca saf etanolün içine kaydırın. Alternatif kareler dizisinde, hücre yayılımlarının birbiriyle çakışmasını önlemek için şablon slaydına beş mikrolitre hücre süspansiyonu dağıtın. Bitişik çiftleri tespit etmeden önce numuneleri havayla kurutun.

Slaytın her bir yarısının ortasına mililitre DAPI lekesi başına 20 mikrolitre 0.2 mikrogram uygulayın ve bir kapak fişi yerleştirin. Şimdi, metafaz hücrelerini lokalize etmek için numune slaytının otomatik bir taramasını gerçekleştirin. Tüm meta aşamaların konumunu ve tüm hücre görüntülerinin gelecekte yeniden değerlendirilmesini kolaylaştırmak için metaverse yazılımını kullanın.

Tarama sonuçlarını manuel olarak görüntüleyin ve metafaz olmayan artefaktları silin. İlk olarak, DPI lekesini iki XSSC tamponunda çıkarın, ardından numuneleri bir dizi etanol yıkama yoluyla kurutun. Slaytı havayla kurutun ve ardından beş dakika boyunca 37 santigrat derecelik bir atlama plakasına yerleştirin.

Şimdi kroma probunu, çok problu hibridizasyon odasını ve hibridizasyon tamponunu 37 santigrat derece su banyosunda etiket tarafı aşağı bakacak şekilde dengeleyin. OC krom cihazını 37 santigrat derecelik bir sıcak plakaya koyun. Sekiz alanın her birine iki mikrolitre ön ısıtma hibridizasyon çözeltisi ekleyin.

Şablonu dikkatlice ters çevirin ve yönlendirin. OC chrome cihazının üzerine kaydırın. Şablon slaytının Octa Chrome cihazıyla hizalandığını doğrulayın.

Ardından, sürgüyü dikkatlice hibridizasyon çözeltisi damlalarının üzerine indirin ve hibridizasyon çözeltisini OC krom cihazındaki yükseltilmiş alanların her birinin kenarlarına yaymak için hafif eşit bir basınç uygulayın. Cam sürgünün buzlu ucunu kaldırın ve sürgü OC krom cihazın altında olacak şekilde ters çevirin. 10 dakika boyunca 37 santigrat derecelik bir sıcak plakaya yerleştirin.

Ardından beş dakika boyunca 75 santigrat derecelik bir sıcak plakaya aktarın. Hibridizasyon adımı için numuneleri denatüre etmek için, bir kroma probuna, çok problu hibridizasyon odasına aktarın. Kapağı değiştirin ve hazneyi gece boyunca 37 santigrat derece su banyosunda yüzdürün.

Sürgüyü cihazdan dikkatlice çıkarın ve 0,4 fazla SC'de 72 santigrat derecede iki dakika yıkayın. İkinci yıkamayı oda sıcaklığında 30 saniye boyunca gerçekleştirin. Slaytın her iki yarısının ortasına 20 mikrolitre DPI eklemeye devam edin ve bir kapak fişi yerleştirin.

Floresan mikroskobu ile görüntülemeden önce numuneleri karanlıkta oda sıcaklığında 10 dakika inkübe edin. Octa krom balık testi, tek bir slayt üzerinde tek bir hibridizasyon kullanarak 24 insan kromozomunun tümünün aynı anda incelenmesini kolaylaştırır. Her kare, doğrudan farklı renkli floro ile etiketlenmiş üç farklı tam kromozom boyama probu taşır.

Octa CHRO sisteminin ikinci karesindeki normal bir metafaz hücresinin dörtlü incelemesi, kromozom 8, 21 ve 12'nin kırmızı, yeşil ve maviye boyandığını gösterir. İlgili filtreler kullanılarak ayrı ayrı görselleştirilebilir veya bir DAPI Fitzy, Texas Red üçlü filtre aracılığıyla aynı anda görselleştirilebilirler. Bu kromozom yaklaşımı, lösemiye özgü kromozomal, translokasyon ve anöploidi olan anormal hücrelerin saptanmasında faydalıdır.

Örneğin, T 8 21, akut miyeloid lösemide yaygın bir kromozomal translokasyondur. Trizomi 21 3 kopya kromozom 21 lösemide sık görülen bir anöploidi gelişimi sonra. Bu teknik, moleküler sitogenetik ve moleküler epidemiyoloji alanındaki bilim adamlarının lösemi ve lenfomada tespit edilen en yaygın kromozomal yeniden düzenlemeleri keşfetmelerinin ve klinik hastalarda veya toksik kimyasallara maruz kalan popülasyonlarda tüm insan kromozomları arasında seçici ploidi incelemelerinin yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, Octo Chrome Fish testi ile tek bir slaytta tek bir hibridizasyonda 24 insan kromozomunun tümünü aynı anda nasıl inceleyeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Ve biz bunu kromozomlar olarak tanımlıyoruz.