Name: Chromosomics: Sayısal ve Yapısal Değişmeler Algılama Tüm 24 İnsan Kromozomlar Aynı zamanda Roman OctoChrome BALIK Test kullanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Öğrenin Octa Chrome FISH yöntemiyle tüm 24 insan kromozomunu tek bir hibridizasyonda eş zamanlı incelemeyi. Bu teknik lösemi ve lenfoma ile ilişkili sayısal ve yapısal kromozomal değişiklikleri tespit eder.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarların eleştirel okuma ve el yazması düzenleme için Dr. Cliona M. McHale teşekkür etmek istiyoruz. Bu çalışma, Ulusal Çevre Sağlığı Bilimleri, L Zhang Sağlığı Hibe R01ES017452 bölgesinin Enstitüsü Ulusal Enstitüsü tarafından finanse edildi.

1. Örnek slayt hazırlama <ul><li> OctoChrome FISH,,,, de dahil olmak üzere,, insan hücreleri, of metafaz spreadler in chromosomal değişiklikleri incelemek etmek olarak tasarlanmış, ancak,, kültürlü periferik kan hücreleri,, stem / progenitor hücreleri, ve hücre hatları etmek sınırlıdır değil edilir. Örnekleri hazırlanan metafaz 3,11-13 hasat için standart bir prosedür takip edilmelidir: hücreleri şişmeye metafaz, hipotonik tedavi hücreleri tutuklamak için colcemid tedavi istihdam ederek ve yaklaşık 0.5-1 x 10 6 hücre süspansiyon hücreleri gidermek için Carnoy Kullanıcı sabitleştirici ml başına. </li><li> 2 dakika süreyle saf etanol içine daldırma: 8-kare slayt (PMP 803, Cytocell Ltd, Cambridge, İngiltere, Şekil 2 OctoChrome Takımı, Katalog # sağlanan) temizleyin. </li><li> ,, Numune slaydın yaptıktan etmeden önce,,, hücre yoğunluğu, ogrenmek etmek en az,,, bir slayt üzerine hücreleri of, bir küçük bir bir miktarını düşürmeyin. ,, Hücre yoğunluğu,,, yüksek çok (çok olarak pek çok üst üste binen hücreleri) konumundadır varsa,, taze fixative,, ile birlikte süspansiyon seyreltmeyin. Hücre dansiteli, çok (çok az sayıda hücre çok, düşük konumundadır ayarlanmıştır ederse,,Slaytta ler), hücreleri aşağı spin ve taze fixative daha küçük bir hacim yeniden askıya. ,,,: Şablon slaydın:,, - 2/8 - 3/5 - 4/6 küçük kareler 1/7 alternan of, bir sekansı in of 8 alanlarda of her biri üzerine hücre süspansiyon of Pipette 5-10 mikrolitre. ,, Olanlar önce iki adet küçük kareler air-kurutulmuş sahiptir Once,,,, İçerikler aynı bir tarzda in geriye kalan küçük kareler belirleyilme. Bu, işlem,,,, engellemesini ile birlikte her biri, diğer, from hücre spreadler önlemek edecektir. </li><li> Kurutulmuş bir slaydın,, göre daha daha büyük bir hybridization daha önce 5 yaşından için,,,, nitrojen gaz atmosferinde in -20 ° C at depolanan uygulanmaz edebilirsiniz. </li></ul> 2. Bir otomasyon sistemi kullanılarak metafaz lokalizasyonu <ul><li> ,,, The slide of her biri yarım of center etmek olarak, 4 of 20, mikrolitre &#39;,6-diokso-diamidino-2-fenilindol (0,2 ug / ml&#39; &#39;), Apply (Uygula) ve sonra da, bir coverslip ile birlikte kapsamaz. </li><li> Metafaz hücreleri Metafer yazılım, (MetaSystems, Altlussheim, Almanya) kullanılarak yerelleştirilmesine örnek slayt otomatik bir tarama gerçekleştirin. Bu, tüm metafaz ve gelecekteki tüm cep görüntülerin yeniden değerlendirme yerini kolaylaştırır. </li><li> Elle tarama sonuçları ve non-metafaz eserler silin. </li></ul> 3. Melezleme <ol><li> Hazırlanması, örnek slayt ve OctoChrome cihaz </li><ul><li> , DAPI kadar uzak: yıkamak etmek 30, min, için: numune slaydın:,, oda sıcaklığında at internetin türü 2x SSC buffer ile in daldırınız. </li><li> Etanol yıkar (2% 70 dakika, her biri% 85 ve% 100 etanol) bir dizi örnek slayt kurutmak, kuru ve 5 dakika 37 ° C ocak yerleştirmek için izin verir. </li><li> ,,,, Bir (37) ° C su bath: in Chromoprobe Multiprobe: Hibridizasyon kullanılan kullanılan Chamber (OctoChrome bir Kit in sağlanan.) Yerleştirin ve Bir olmak üzere 37 dengelenmeye etmek bu izin vermek.. ° C (, + / - 1 ° C). </li><li> 37 ° C pipetleme ve Tekrarlayan OctoChrome cihaz başına ön-sıcak 25 ul tablet bir hibridizasyon çözüm (OctoChrome Kit) karıştırın. </li><li> Ön sıcak her OctoChrome bir cihaz 37 ° C cihaz etiket tarafı aşağı bir ocak koyarak (OctoChrome Kit sağlanan bkz. Şekil 2). T dokunmayın VERMEYİNkabartma yüzeyler o OctoChrome cihazın probları içerdiği gibi. </li></ul><li> OctoChrome cihaz üzerinden örnek slayt Konumlandırma (Şekil 2) </li><ul><li> It, 37 adresindeki - retmekte iken,,,, pre-ılındırılmış bir bir OctoChrome aygıt on sekiz adet alanlarda of her biri etmek,,, pre-ılındırılmış bir hybridization bir çözüm of 2 mikrolitre ekle ° C.. </li><li> Şimdi baş aşağı 1 numara, OctoChrome cihazın sağ üst el alan üzerinde bulunan böyle OctoChrome cihaz üzerinden şablon slayt dikkatlice ters çevirin. Kare 1 bulmalarına yardımcı olmak için, cihazın konumunu Orange işaretlendi. </li><li> Şablon slayt dikkatlice OctoChrome cihaz eşleşen alanları ile uyumlu olduğundan emin olun. , Hibridizasyon çözüm damla slayt temas yapmak o kadar dikkatle OctoChrome cihaz üzerinden slayt indirin. Nazik bir Uygula&#39;yı,, hatta,,,, hybridization bir çözüm,,,,, OctoChrome bir aygıt on raised alanlarda of her biri of kenarlarını etmek yayıldı edilir olduğunu, yürütülmesini sağlamak etmek zorlamak. </li><li> Asansörslayt / OctoChrome, cam slayt dikkatlice buzlu ucunu tutarak ve slayt OctoChrome cihazın altında olduğunu bu nedenle ters. Bu, problar çapraz kontaminasyona neden olabilir cihaz şablon slaytta smear değil emin olun. </li><li> , Bir (37) on Yer. ° C (+ / - 1. ° C),, 10 dakikada bir için ocak gözünün. </li></ul><li> Denatürasyon </li><ul><li> Özellikle dikkat çekici bir seviyede tutmanıza ocak için örnek slayt / OctoChrome cihaza aktarın. Örnek slayt eşit ocak gözü rehber olun. </li><li> ,, 75 at ocak gözünün on denatüre. ° C (, + / - 1 ° C.),, 5 dakika öncesinden için. </li></ul><li> Melezleme </li><ul><li> Chromoprobe Multiprobe Hibridizasyon Odası Yeri örnek slayt / OctoChrome cihaz. </li><li> Kapağını değiştirin ve 37 odası float ° C (+ / - 1 ° C) su banyosunda (karıştırma) gece. Lütfen dikkat: hibridizasyon odasında kapak mühür YAPMAYIN; kapağı su banyosu mühür YAPMAYIN; bir melezleşme VERMEYİNinkübatör. Bu adımlar, nem kontrolü için kritik öneme sahiptir. </li></ul><li> Post-hibridizasyon yıkar </li><ul><li> , Wash çözümleri of Hazırlanışı Çözüm 1:, 0.4x SSC içeren bir Coplin / Hellendahl kavanoz hazırlayın. Ile 72 dengelenmeye. ° C (+ / - 1 ° C ile),, bir su bath in ve, 7.0 &#39;ye pH değeri ayarlamak görüntüle. Çözüm 2: 2x SSC ve% 0.05 Tween 20 içeren bir Coplin / Hellendahl kavanoz hazırlayın. Oda sıcaklığında bekletin. </li><li> , Slayt dikkatle OctoChrome bir cihaz çıkarın ve 2 dakika Çözüm 1 slayt yerleştirin. </li><li> Çözüm 2 30 saniye boyunca slayt yerleştirin. </li></ul></ol> 4. Montaj ve sonuçların görselleştirme <ul><li> ,, The slide of her biri yarım of center etmek,, 20, mikrolitre of DAPI, Apply (Uygula) ve, bir coverslip uyguladıktan tıklayın. </li><li> ,,, Floresans mikroskopi kullanıcısı tarafından inceleyen ziyaretçilerin etmeden önce,, (azından 10) room sıcaklık dakika için koyu renk in inkübe edin. </li></ul> 5. Temsilcisi Sonuçlar Figure 3A için,,,, Meydanı&#39;na 2 in, bir tarafindan: Normal bir bir bir metafaz hücre gösterir. (1) - (3):, Kromozomlar 8, 21 ve 12 kırmızı, yeşil ve mavi boyalı, ve sırasıyla Texas Kırmızı, FITC ve Deac filtre ile görüntülenir; (4): / DAPI / FITC ile Görselleştirme Texas Red üçlü filtre. Genellikle, mavi ile boyanmış kromozom üçlü filtre ile net değil ve özel Deac altında filtre izlenmesi gerekir. Şekil 3B, lösemi-spesifik kromozomal translokasyon ve anöploidi temsili anormal hücreler gösterir. (1): t (8; 21), akut myeloid lösemi sık görülen bir kromozom translokasyonu; (2): Trizomi 21, 21 kromozom, lösemi ortak bir anöploidi üç nüsha. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/3619/3619fig1.jpg" /> Şekil 1. kromozom kombinasyonları OctoChrome cihaz ve beklenen kromozomal boyama sonuçları Düzenlenmesi. <img alt="Şekil 2," src= &quot;/ Files/ftp_upload/3619/3619fig2.jpg&quot; /&gt; Şekil 2 OctoChrome cihaz üzerinden örnek slayt Konumlandırma. Figure 3.: Temsilcisi sonuçlarOctoChrome BALIK (Kare 2) elde edilmiştir. <img alt="Şekil 3A" src="/files/ftp_upload/3619/3619fig3A.jpg" /> Bir Figure 3A için bu alanı kullanabilirsiniz. Meydanı&#39;na 2 &#39;in boyalı 12,, 21 chromosomes 8, ile ile birlikte A tarafindan: Normal bir bir bir hücre. <img alt="Şekil 3B," src="/files/ftp_upload/3619/3619fig3B.jpg" /> Şekil 3B Meydanı 2 lösemi-spesifik kromozomal translokasyon ve anöploidi Temsilcisi anormal hücreler.

<ol><li>Levsky, J. M., Singer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+in+situ+hybridization%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Sci%22%5BJournal%5D)">Fluorescence in situ hybridization: past, present and future.</a> J. Cell. Sci. 116, 2833-2838 (2003).</li>
<li>Zhang, L., Eastmond, D. A., Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature+of+chromosomal+aberrations+detected+in+humans+exposed+to+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The nature of chromosomal aberrations detected in humans exposed to benzene.</a> Crit. Rev. Toxicol. 32, 1-42 (2002).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aberrations+in+chromosomes+associated+with+lymphoma+and+therapy-related+leukemia+in+benzene-exposed+workers%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Mol.+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Aberrations in chromosomes associated with lymphoma and therapy-related leukemia in benzene-exposed workers.</a> Environ. Mol. Mutagen. 48, 467-474 (2007).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Benzene+increases+aneuploidy+in+the+lymphocytes+of+exposed+workers%3A+a+comparison+of+data+obtained+by+fluorescence+in+situ+hybridization+in+interphase+and+metaphase%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Mol.+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Benzene increases aneuploidy in the lymphocytes of exposed workers: a comparison of data obtained by fluorescence in situ hybridization in interphase and metaphase.</a> Environ. Mol. Mutagen. 34, 260-268 (1999).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+aneusomy+and+long+arm+deletion+of+chromosomes+5+and+7+in+the+lymphocytes+of+Chinese+workers+exposed+to+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Increased aneusomy and long arm deletion of chromosomes 5 and 7 in the lymphocytes of Chinese workers exposed to benzene.</a> Carcinogenesis. 19, 1955-1961 (1998).</li>
<li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+translocations+and+aneusomy+in+chromosomes+8+and+21+among+workers+exposed+to+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer.+Res%22%5BJournal%5D)">Increased translocations and aneusomy in chromosomes 8 and 21 among workers exposed to benzene.</a> Cancer. Res. 58, 2176-2181 (1998).</li>
<li>Bayani, J., Squire, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+detection+of+chromosomal+aberrations+using+spectral+karyotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Genet%22%5BJournal%5D)">Advances in the detection of chromosomal aberrations using spectral karyotyping.</a> Clin. Genet. 59, 65-73 (2001).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosome-wide+aneuploidy+study+%28CWAS%29+in+workers+exposed+to+an+established+leukemogen%2C+benzene%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Chromosome-wide aneuploidy study (CWAS) in workers exposed to an established leukemogen, benzene.</a> Carcinogenesis. 32, 605-612 (2011).</li>
<li>Rowley, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+chromosome+translocations+in+leukemogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Hematol%22%5BJournal%5D)">The role of chromosome translocations in leukemogenesis.</a> Semin. Hematol. 36, 59-72 (1999).</li>
<li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+OctoChrome+fluorescence+in+situ+hybridization+to+detect+specific+aneuploidy+among+all+24+chromosomes+in+benzene-exposed+workers%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Biol.+Interact%22%5BJournal%5D)">Use of OctoChrome fluorescence in situ hybridization to detect specific aneuploidy among all 24 chromosomes in benzene-exposed workers.</a> Chem. Biol. Interact. , 153-154 (2005).</li>
<li>Barch, M. J., Lawce, H. J., Arsham, M. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarch%2C+MJ+%22In+The+ACT+cytogenetics+laboratory%22">In The ACT cytogenetics laboratory</a>. Barch, M. J. , Raven Press. 17-30 (1991).</li>
<li>Zhang, L., Yang, W., Hubbard, A. E., Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonrandom+aneuploidy+of+chromosomes+1%2C+5%2C+6%2C+7%2C+8%2C+9%2C+11%2C+12%2C+and+21+induced+by+the+benzene+metabolites+hydroquinone+and+benzenetriol%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Mol.+Mutagen%22%5BJournal%5D)">Nonrandom aneuploidy of chromosomes 1, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, and 21 induced by the benzene metabolites hydroquinone and benzenetriol.</a> Environ. Mol. Mutagen. 45, 388-396 (2005).</li>
<li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydroquinone%2C+a+benzene+metabolite%2C+increases+the+level+of+aneusomy+of+chromosomes+7+and+8+in+human+CD34-positive+blood+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Hydroquinone, a benzene metabolite, increases the level of aneusomy of chromosomes 7 and 8 in human CD34-positive blood progenitor cells.</a> Carcinogenesis. 21, 1485-1490 (2000).</li>
<li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+understanding+benzene+health+effects+and+susceptibility%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Public.+Health%22%5BJournal%5D)">Advances in understanding benzene health effects and susceptibility.</a> Annu. Rev. Public. Health. 31, 133-148 (2010).</li>
</ol>

Biz ifşa şey var.

Bu roman OctoChrome-FISH testi, aynı anda tek bir slayt tek bir hibridizasyon Tüm 24 insan kromozomlarını incelemek için olanak sağlar. ,, 8 küçük kareler on chromosome kombinasyonları of aranjman,,,,,,, en çok,, ortak bir lösemilerin ve lenfomalarin in non bir-rasgele bir bir bir chromosome Çevrilmeler of tanımlama kolaylaştırmak etmek olarak tasarlanmış&gt; edilmiştir&gt; gelmiştir. Böylece, deney aynı zamanda sayısal (anöploidi) yanı sıra yapısal (translokasyonlar) kromozom değişiklikleri algılayabilir. <p class=...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td><tr><tr><td> OctoChrome Seti </td><td> Cytocell Ltd, Cambridge, İngiltere </td><td> PMP 803 </td><td></td></tr><tr><td> fitohemaglutininlerin (PHA) </td><td> Invitrogen Corporation&#39;ın </td><td> 10576-015 </td><td></td></tr><tr><td> Colcemid </td><td> Invitrogen Corporation&#39;ın </td><td> 15212-012 </td><td></td></tr><tr><td> Carnoy Kullanıcı sabitleştirici </td><td></td><td></td><td> Methanol: glasiye asetik asit, = 3: 1 </td></tr><tr><td> Floresans microscope </td><td></td><td></td><td> Farklı renkler aynı anda görüntülemek için, DAPI, Texas Kırmızı, FITC, ve KUMARİN spektrumları bireysel ve DAPI / FITC / Texas Red üçlü filtre filtreler ile donatılmış </td></tr><tr><td> Metafer yazılım </td><td> :, MetaSystems, Altlussheim, Almanya </td><td></td><td> Tüm metafaz bulmak için kolaylaştırılması ve için anormallikler yeniden değerlendirmek </td></tr></tbody></table>

chromosomics: sayısal ve yapısal değişmeler algılama tüm 24 İnsan kromozomlar aynı zamanda roman octochrome balik test kullanma

Chromosomics: Detection of Numerical and Structural Alterations in All 24 Human Chromosomes Simultaneously Using a Novel OctoChrome FISH Assay

Floresan in situ hibridizasyon (FISH), spesifik DNA dizilerinin hücre çekirdekleri 1 metafaz veya interfaz kromozomlar üzerinde tespit edilmesini sağlayan bir tekniktir. Tekniği, tüm kromozom ya da belirli kromozomal bölgeler melezler eşsiz dizileri ile DNA probları kullanır ve klasik sitogenetik güçlü bir yardımcı olarak hizmet vermektedir. Örneğin, çok daha önceki çalışmalarda, klasik sitogenetik analiz 2 kullanılarak, benzen maruz kalma, benzen zehirlenmesi hasta ve benzen maruz sağlıklı işçi ile ilgili lösemi hastalarında artmış kromozom anormallikleri sık algılama bildirdi. BALIK kullanarak, lösemi-spesifik kromozomal değişiklikler, benzen kaynaklı lökomogenezisin cytogentic değişikliklerin kritik rolleri belirten, benzen 3-6 maruz görünüşte sağlıklı işçiler yükselmiş olduğu gözlenmiştir. Genellikle olarak,,, bir tek bir bir FISH assay inceliyor,, yalnızca birini ya da, bir birkaç bir tamamını chromosomes ileveya slayt başına belirli lokusları, birden çok hibridizasyonları birden çok slayt insan kromozomlarının tümünü kapsayacak şekilde yürütülmesi gerekir. Spektral karyotip (SKY), aynı anda tüm genom görselleştirme, ancak özel bir yazılım ve donanım limitlerini uygulama 7 için gereksinimi sağlar. Burada, bir roman FISH testi, kromozom çapında anöploidi çalışma olarak insan çalışmaları, bir slayt tüm 24 insan kromozomlarının eşzamanlı analizi (CWAS) olarak tanımlayan Chromosomics için, uygulanabilir OctoChrome-BALIK, tarif 8. ,,,,, Chromoprobe Multiprobe System olarak Cytocell kullanıcısı tarafından pazarlanan yöntemini,, of temelinde,,,,,,,, üç farklı bir bir tamamını chromosome painting probları (Figure sık kullanılan 1) taşır her biri hangi 8 küçük kareler, içine bölünmüş edilir, bir OctoChrome bir aygıt konumundadır. Her üç probları doğrudan farklı bir renkli florofor yeşil (FITC), kırmızı (Texas Kırmızı) ve mavi (KUMARİN) ile etiketlenmiştir. Kromozom kombinasyonlarının OctoChrom düzenleme,,, t (15,; 17), t (8; 21 e-aygıt;,, örneğine t (22 9,) için,,,, en çok,, ortak bir lösemilerin ve lenfomalarin in bulundu non-rasgele bir bir bir,,, yapısal chromosome değişikler (translakosyon belirlenmiş) of olduğunda kimlik tespitinin kolaylaştırılması için olarak tasarlanmış olmuştur ), t (14; 18) 9 izlediği görülmüştür. Ayrıca, kromozomlardaki sayısal değişiklikleri (anöploidi) aynı anda tespit edilebilir. The karşılık gelen bir şablon slaydın,, aynı zamanda, 8 küçük kareler içine metafaz spreadler bağlıdırlar (Figure 2), ve,, OctoChrome bir aygıt üzerinden konumlandırılmış edilir hangi üzerine: bölünmüş edilir. Prob ve hedef DNA yüksek sıcaklık ve nemli bir odasında melezleşmiştir denatüre olup, daha sonra 24 insan kromozomlarının aynı anda görüntülenebilmekte. OctoChrome BALIK lösemi ve lenfoma klinik teşhis ve bütün kromozomlarda anöploidiler tespit için gelecek vaat eden bir tekniktir. Biz, benzen maruz kalan Çinli işçilerin 8,10 CWAS çalışmada bu yeni kromozomal yaklaşım uyguladık.

Bir roman floresans<em&gt; In-situ</em&gt; Hibridizasyon (FISH) yöntemi, aynı anda, özellikle sayısal ve yapısal kromozom değişiklikleri, lösemi ve lenfoma ile ilişkili bir hibridizasyon tek bir cihaz tüm 24 insan kromozomlarının belirli kromozomal translokasyonlar, inceler açıklanmıştır.

Chromosomics: Sayısal ve Yapısal Değişmeler Algılama Tüm 24 İnsan Kromozomlar Aynı zamanda Roman OctoChrome BALIK Test kullanma

Floresan yerinde hibritleme (FISH), hücredeki metafaz veya interfaz kromozomları üzerinde spesifik DNA dizilerinin tespit edilmesine olanak tanıyan bir tekniktir...

Octa Chrome Fish analizi, tek bir lam üzerinde gerçekleştirilen tek bir hibridizasyonla 24 insan kromozomunun tamamını eş zamanlı olarak inceler. İlk olarak, özel sekiz kareli lam üzerinde metafaz yaymaları hazırlayın. Ardından, tüm metafazların konumunun belirlenmesini ve tüm hücre görüntülerinin gelecekte yeniden değerlendirilmesini kolaylaştırmak için numune lamının otomatik taramasını gerçekleştirin.Bir sonraki aşamada, sekiz kareli lam Octa chrome cihazının üzerine yerleştirilir ve probların hibridizasyonu gerçekleştirilir. Elde edilen sonuçlar, RO cihazındaki kromozom kombinasyonlarının düzenlemesine bağlı olarak, her karede üç farklı boyanmış tüm kromozomu gösterebilir. Bu RO FISH yöntemine dair ilk fikrim, 1990'ların başında insan popülasyon çalışmalarında FISH uygulamaya başladığımda ortaya çıktı.Ardından, 1994 yılındaki yıllık A A CR konferansında, hücreleri yerleştirmek için sekiz kare lam kullanılan üç renkli boyama fikrimi sundum. Bu tekniğin, klasik kromozom bükme ve modern spektral prototipleme gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, daha fazla sayıda hücrede tüm 24 insan kromozomunu kolayca analiz edebilmesidir. Kontrol olarak, süspansiyonda fikse edilmiş metafaz hücre hazırlığıyla başlayın; lam üzerine bir pipet damlası hücre bırakın ve uygun yoğunluğu doğrulayın.Şimdi sekiz kare OC kromuna batırın ve iki dakika boyunca saf etanol içine kaydırın. Hücre yayılımlarının birbirine karışmasını önlemek için şablon lam üzerine, dönüşümlü kareler şeklinde beş µL hücre süspansiyonu dağıtın. Yan yana olan çiftleri damlatmadan önce numuneleri havada kurutun.Slaytın her yarısının merkezine 0.2 µg/mL DAPI boyasından 20 µL uygulayın ve bir lamel kapatın. Ardından, metafaz hücrelerini belirlemek için örnek slaytın otomatik taramasını gerçekleştirin. Tüm metafazların konumlandırılmasını ve tüm hücre görüntülerinin gelecekte yeniden değerlendirilmesini kolaylaştırmak için metaverse yazılımını kullanın.Tarama sonuçlarını manuel olarak inceleyin ve metafaz dışı artefaktları silin. İlk olarak, DPI boyasını iki XSSC tamponu ile uzaklaştırın, ardından örnekleri bir dizi etanol yıkamasıylayarakyutun. Lamı havada kurutun ve ardından beş dakika boyunca 37 derece Celsius sıcaklığındaki bir ısıtıcı plaka üzerine yerleştirin.Şimdi chroma probunu, çoklu prob hibridizasyon odasını ve hibridizasyon tamponunu, etiket tarafı aşağı gelecek şekilde 37 °C'lik bir su banyosunda dengeleyin. OC chrome cihazını 37 °C'lik bir ısıtıcı plakaya yerleştirin. Sekiz alanın her birine iki µL önceden ısıtılmış hibridizasyon çözeltisi ekleyin.Şablonu dikkatlice ters çevirin ve yönlendirin. OC krom cihazının üzerine kaydırın. Şablon slaytının Octa Chrome cihazı ile hizalı olduğunu doğrulayın.Ardından, lamı hibritleme çözeltisi damlalarının üzerine dikkatlice indirin ve hibritleme çözeltisini OC krom cihazındaki yükseltilmiş alanların her birinin kenarlarına yaymak için hafif ve eşit bir basınç uygulayın. Cam lamın buzlu ucundan kaldırın ve lam OC krom cihazının altına gelecek şekilde ters çevirin. 10 dakika boyunca 37 degree Celsius sıcaklığındaki bir ısıtıcı tabla üzerine yerleştirin.Ardından örneği beş dakika boyunca 75 °C sıcaklıktaki bir ısıtıcı plakaya aktarın. Hibritleşme adımı için örnekleri denatüre etmek amacıyla, bir chroma probu çoklu prob hibritleşme odasına aktarın. Kapağı kapatın ve odayı gece boyunca 37 °C su banyosunda yüzdürün.Slaytı cihazdan dikkatlice çıkarın ve 72 °C'de 0,4 excess SC ile iki dakika boyunca yıkayın. İkinci yıkama işlemini oda sıcaklığında 30 saniye boyunca gerçekleştirin. Ardından, slaytın her iki yarısının merkezine 20 µL DPI ekleyin ve bir lam kapatıcı yerleştirin.Floresan mikroskobuyla incelemeden önce numuneleri oda sıcaklığında, karanlıkta 10 dakika boyunca inkübe edin. Octa krom fish testi, tek bir lam üzerinde tek bir hibridizasyon kullanarak tüm 24 insan kromozomunun aynı anda incelenmesini kolaylaştırır. Her kare, farklı renkli floroforlarla doğrudan işaretlenmiş üç farklı tüm kromozom boyama probu taşır.Octa CHRO sisteminin ikinci karesindeki normal bir metafaz hücresinin incelenmesi; 8, 21 ve 12 numaralı kromozomların sırasıyla kırmızı, yeşil ve maviye boyandığını göstermektedir. Bu kromozomlar, ilgili filtreler kullanılarak tek tek veya bir DAPI Fitzy, Texas Red üçlü filtresi aracılığıyla eş zamanlı olarak görselleştirilebilir. Bu kromozom yaklaşımı; lösemiye özgü kromozomal translokasyon ve anöploidi içeren anormal hücrelerin tespitinde faydalıdır.Örneğin, T 8 21, akut myeloid lökemide yaygın görülen bir kromozom translokasyonudur. Kromozom 21'in 3 kopyasının bulunduğu Trizomi 21, lösemi gelişiminden sonra görülen yaygın bir aneuploididir. Bu teknik, moleküler sitogenetik ve moleküler epidemiyoloji alanındaki bilim insanlarının, lösemi ve lenfomada saptanan en yaygın kromozomal yeniden düzenlemeleri araştırmalarına ve klinik hastalar veya toksik kimyasallara maruz kalmış popülasyonlarda tüm insan kromozomları arasındaki seçici ploidiyi incelemelerine zemin hazırlamıştır.Bu videoyu izledikten sonra, Octo Chrome Fish testi ile tek bir lam üzerindeki tek bir hibridizasyonda tüm 24 insan kromozomunun aynı anda nasıl inceleneceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Ve bunu kromozomlar olarak tanımlıyoruz.

chromosomics-detection-numerical-structural-alterations-all-24-human

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu makale, tek hücreli FISH, blastomer çekirdeklerinin yayılmasını teknikleri, in situ hibridizasyon ve klinik bir ortamda pre-implantasyon genetik tanı (PGD) uygulanan sinyal puanlama için uygun probların seçim açıklamaktadır.

Pre-implantasyon Genetik Tanı için FISH

Spektral Karyotipik (SKY), genomik ve kromozomal sapmaları belirlemek için gelişmiş bir sitogenetik bir yöntemdir. Bu teknik, bütün kromozomlar sınıflamasına izin verir, kromozom boyayan problar yararlanır. SKY da polikistik böbrek hastalığı dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar, farelerde ve insanlarda kompleks kromozom anomalileri ve ayrımcılığın kusurları tespit edebilir.

Polikistik Böbrek Hastalığı Olan İnsanlar ve Fareler kromozom anomalileri Eğitim Spektral Karyotipik

Biz doğrudan etiketli floresan problar kullanarak 3D DNA FISH ile nükleer mimarisi analiz için sağlam ve çok yönlü protokol açıklar.

Doğrudan Etiketli Problar kullanarak Sağlam 3D DNA BALIK

Kromozom boyama, hücre çekirdeğinin organizasyonunu ve karyotipin evrimini incelemek için yararlı bir yöntemdir. Burada, daha sonra iki ve üç boyutlu floresan in situ hibridizasyon (FISH) için kullanılan tek politen kromozomlarından belirli ilgi alanlarını izole etmek ve güçlendirmek için bir yaklaşım sergiliyoruz.

Sıtma Sivrisineklerinde 2D ve 3D Kromozom Boyama

Tek ve yüksek kopyalı DNA problarının FISH tespiti için uygun olan hızlı hava-kuru damlatma yöntemi ile yüksek kaliteli mitotik bitki kromozom yayılımlarının hazırlanması için bir protokol tanımlanmıştır.

Bitkilerde FISH için uygun bir Hızlı Hava kuru Damlama Kromozom Hazırlama Yöntemi

Mevcut protokol, toplam vücut ışınlamasına maruz kaldıktan sonra farelerin kemik iliği hücrelerindeki kromozomal stabil anormallikleri tanımlamada çoklu floresan in situ hibridizasyon (mFISH) ve spektral karyotiplemenin (SKY) yararlılığını açıklamaktadır.

Çoklu Floresan Inter-kromozomal Kararlı sapmaları Algılama<em&gt; In Situ</em&gt; Hibridizasyon (mFISH) ve ışınlanmış Farelerde Spektral Karyotipik (SKY)

Bu el yazması Xoluşturmak için ayrıntılı bir yöntem sunuyor-kromozom kol sonda ve kız kardeşi durumunu incelemek için performans gösteren Floresans in situ hibridizasyon (balık) Kromatit uyum içinde prometafaz ve metafaz tutuklandı Drosophila yumurta. Bu iletişim kuralı segregasyonun kol uyum bozulmamış veya kesintiye farklı genotip içinde olup olmadığını belirlemek için uygundur.

Kol uyum içinde prometafaz ve metafaz durumunu izlemek için Floresans In Situ hibridizasyon (balık) kullanarak ben Drosophila yumurta

3D çok renkli DNA FISH, 3B korunmuş çekirdekler içinde birden fazla genomik loci görselleştirmek için bir araç temsil eder, kesin olarak tek bir hücre düzeyinde nükleer alan içinde karşılıklı etkileşimleri ve lokalizasyon tanımlayan. Burada, adım protokol bir adım insan birincil hücrelerin geniş bir yelpazede için açıklanmıştır.

3D Çok Renkli DNA FISH Aracı İnsan Birincil Hücrelerde Nükleer Mimari Çalışma

Sinapslardaki mayotik hatalar ve rekombinasyon, memeli oositlerinde yaygındır. Bu süreçlerde yer alan proteinlerin titiz analizi, oogenezin nasıl ve neden sıklıkla yanlış gittiğini anlamak için çok önemlidir. Burada sunulan teknikler, farelerde oosit kalitesini değerlendirmek için rekombinasyon ve sinapsların kapsamlı bir şekilde izlenmesine izin verir.

Sinapsis ve Rekombinasyonun Değerlendirilmesi için Fare Oositlerinden Mayotik Kromozom Yayılımlarının Hazırlanması

Bu video-makale, semen örneği nasıl işleneceğini, iyi kalite floresan elde etmek için adım adım...

Floresan In situ İnsan Sperm hibridizasyon (FISH) Protokolü

Öğrenin Octa Chrome FISH yöntemiyle tüm 24 insan kromozomunu tek bir hibridizasyonda eş zamanlı incelemeyi. Bu teknik lösemi ve lenfoma ile ilişkili sayısal ve yapısal kromozomal değişiklikleri tespit eder.

Chromosomics: Sayısal ve Yapısal Değişmeler Algılama Tüm 24 İnsan Kromozomlar Aynı zamanda Roman OctoChrome BALIK Test kullanma

Daha fazla video keşfet