Name: İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 52 s
Description: Öğrenin, kalıcı dişlerden insan diş pulpası kök hücrelerinin enzimatik sindirim ve doku ekplantlarından doğrudan çıkış yöntemleriyle izolasyonunu, karakterizasyonunu ve odontoblastlara farklılaşmasını.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz minnetle onun teknik destekler için onların eleştirel discus ve Sayın Mohammad Reza Khadem Şerif için Dr Leila Shakeri &amp; Dr Aref Dournaei kabul ediyorsunuz.

1. Enzim Çözüm ve Çoğalma Orta (PM) hazırlayın <ol><li> Kollajenaz Tip I olun Çözüm: kollajenaz tip I (12 mg / ml) tartılır ve bir 0.2 mikron şırınga filtresi kullanarak 1 ml PBS ve filtre içinde çözülür. Sonra 15 ml tüp yerleştirin ve gerektiği kadar -20 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Çözelti dispase edin: dispase tartılır (16 mg / ml) ve 1 ml PBS ve filtre bir 0.2 um şırınga filtresi kullanılarak çözülür. Sonra 15 ml tüp yerleştirmek ve gerektiğinde ° C ye kadar 4 başında tutmak. </li><li> Enzim çözeltisi edin: 2 ml steril PBS 100 mg / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin içeren içine 1 ml kollajenaz tip bir eriyik (12 mg / ml) ve 1 ml dispase çözeltileri (16 mg / ml) ilave edilir. Nihai hacim içinde dispase ve kollajenaz bir toplam konsantrasyon receptively 4 mg / ml ve 3 mg / ml olmalıdır. Sonra, dört 15 ml tüp, her birinde 1 ml enzim çözeltisi için kısım bu hacim. Her bir tüp, bir kağıt hamuru sindirim için kullanılabilecek. </li><li> Yıkama çözeltisi edin: 100 mg / ml penisilin, PBS içinde 100 mg / ml streptomisin ekleyin. </li><li> Temel ortam edin: Eagle ortamı alfa modifikasyonu (α-MEM)% 10 FBS ve 100 birim / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin ile desteklenmiş. </li><li> % 10 FBS, 100 uM L-askorbik asit 2-fosfat, 2 mM L-glutamin, 100 birim / ml penisilin, 100 mg / ml ile desteklenmiş Eagle ortamı (α-MEM) &#39;in alfa modifikasyonu: Proliferasyon Ortam (PM) yapmak streptomisin ve 0.25 mg / ml amfoterisin B </li><li> Odontojenik medya edin: Eagle ortamı alfa modifikasyonu (α-MEM)% 10 FBS, 100 uM L-askorbik asit 2-fosfat, 2 mM L-glutamin, 100 birim / ml penisilin, 100 mg / ml streptomisin, 0.01 uM ile desteklenmiş Deksametazon, 5 mM β-gliserol fosfat, 1.8 mM Monopotasyum fosfat. </li></ol> 2. Diş Pulp Kök Hücre Isolatio İnsan Dental Pulpa Dokusu hazırlayınn <ol><li> Normal insan üçüncü molar diş onaylı Kurumsal İnceleme Kurulu (KİK) kapsamında İmam Ali&#39;nin Diş Kliniği&#39;nde yetişkin (yaş 21-29 yıl) toplanmıştır. </li><li> Dişler temel ortam (MEM α-% 10 FBS ile takviye edilmiş) içine yerleştirildi ve 4 ° C de laboratuvar aktarıldı </li><li> Steril şartlarda, bir biyolojik tehlike laminer akış kaputu içinde çalışan, set-up işlenecek her diş için bir 100 mm Petri kapları yapıldı. Diş yüzeyleri% 70 etanol ile temizlendi. </li><li> Petri-yemekleri birinde çalışırken, diş diş forseps ile tutuldu ve Bistüri enkaz ve kökleri üzerinde periodontal ligament kapalı temizlemek için kullanılmıştır. </li><li> Mine-sement yavaş hamuru oda ortaya çıkarmak için sterilize diş disk kullanılarak kesildi. Bu kesme prosesi diş dokusu aşırı yavaş yavaş azaltmak için yapılması gereken olduğu göz önünde bulundurulmalıdır. </li><li> Pulp doku hafifçe taç ve kök ayrıldı. </li&gt; <li> Pulp doku bir neşter bıçak yardımı ile küçük parçalar halinde kesilmiş. </li></ol> 3. İnsan Diş Selüloz İzolasyon <ol><li> Pulp dokuların hDPSCs izolasyonu için pulpa dokusu eksplantlarından pulpa dokusu veya doğrudan hücre akıbet birini enzimatik ayrışma uygulandı. </li><li> Pulpa dokusunun Enzimatik ayrışma: <ol><li> Kağıt hamuru dokuların küçük parçaları 37 ° C sıcaklıkta 1 saat için enzim solüsyonu içine aktarıldı Doku kesiliyor yardım Vorteks her 30 dk. </li><li> Daha sonra, bir 70 uM hücre süzgecinden hücreleri geçirilerek büyük hücre agregatları çıkarıldı ve tek hücre süspansiyonları elde edildi. </li><li> Tek hücre süspansiyonları oda sıcaklığında 5 dakika için 1200 rpm&#39;de santrifüjlenmiştir. </li><li> Süpernatantlar dikkatle kapalı pipetle alındı ​​ve pelet 1 ml çoğalması orta (PM) yeniden askıya alınmıştı. (Not: yayılması orta FBS sonlandırmak dis enzimatiksociation.) </li><li> Diş hamuru Tek hücre süspansiyonları PM ile 25 cm 2 kültürü şişesi içine ekilmiş ve daha sonra% 5 CO2 içinde 37 ° C de inkübe edildi. </li><li> Hücre konfluense elde edilene kadar kültür ortamı her üç günde bir değiştirildi. </li></ol></li><li> Pulpa dokusu eksplantlarından Doğrudan hücre akıbet: <ol><li> Selüloz doku 1-2 mm&#39;lik parçalara kıyılmış edildi ve her bir parça PM ile 25 cm 2 kültür kaplarına yerleştirilir ve daha sonra 37 ° C&#39;de inkübe% 5 CO2 içinde. Bu hücre akıbet için PM toplam hacmi daha fazla hücre akıbet için hamuru parçaları (şişesi başına 2-3 ml) eki desteklemesi gerektiğini dikkate alınmalıdır. </li><li> Filiz gözlenmiştir sonra ortam değiştirilmiştir. </li><li> Izdiham geçmek hücreleri 1:4 oranı (geçit 1) alt-kültür vardı. </li></ol></li></ol> 4. Immünofeotipleme <ol><li> / 250,000 hücrelerpasaj 3&#39;de hücrelerinin her iki türdeki boru 4 ° C karanlık bir yerde, 30 dakika için PE ya da izotipleri ile FITC-konjüge anti-insan antikor ile enkübe edildi. (Not:. Antikorların konsantrasyonu üretimi protokolüne uygun olarak uygulanmıştır) </li><li> İnkübasyon süresinden sonra, 100 ul PBS ya da FACS seyreltme çözeltisi her bir tüpe eklendi ve karanlık bir yerde, 5 dakika için 1200 rpm&#39;de santrifüjlenmiştir. </li><li> Süpernatantlar çıkarıldı ve granül 100 ul PBS veya karanlık bir yerde FACS seyreltme yeniden askıya alındı. </li><li> Hedefli yüzey belirteçleri (CD marker) BD FACSCalibur tarafından değerlendirildi. </li></ol> 5. Mineralize Hücre içine DPSCs Farklılaşma İndüksiyon &amp; Alizarin Red S Assay Sayısallaştırılmış <ol><li> Pulpa dokusu eksplantları (DPSC-OG) gelen pulpa dokusunun enzimatik ayrışma (DPSC-ED olarak da bilinir) veya doğrudan hücre akıbet biri tarafından alındı ​​DPSCs 3 geçişleri için alt-kültür vardı. </li><li> At Passage 3, hücre 5.000 hücre / kuyu başında 6 plaka içine tohum edildi. </li><li> % 60 izdiham, odontojenik orta konvansiyonel PM değiştirilmiştir. Üç kuyu büyüme ortamı ilave edilerek bir negatif kontrol olarak kaldı. </li><li> Orta günde 21 kadar 3 gün boyunca her değiştirin. </li><li> 21. günde, hücreler PBS ile yıkandı ve 1 ml / kuyucuk oda sıcaklığında 15 dakika için% 10 paraformaldehit ile fikse edildi. </li><li> Daha sonra paraformaldehid dikkatli bir şekilde, kapalı pipetlendi ve hücreler damıtık H 2 O ile 3 kez (her zaman için 5-10 dk) yıkandı (Not: tek tabaka rahatsız kaçının.) </li><li> Yıkandıktan sonra, 1 ml / Alizarin kırmızı S oda sıcaklığında 20 dakika boyunca ilave edildi. </li><li> Hücreler herhangi bir ek Alizarin kırmızı uzaklaştırmak için deiyonize H2O dört kez (nazik sallama ile, her seferinde 5 dakika) ile yıkandı. </li><li> 1 ml / H2O kurumasını engellemek için hücrelerin ilave edildi. </li><li> Plakaları görsel ins kabul edildipection ve / veya görüntü alma. </li><li> Alizarin Kırmızı S miktar tayini için, H2O sallama ile oda sıcaklığında 30 dakika için 6 plaka ve inkübe her bir kuyucuğa 1 ml% 10 asetik asit ile değiştirilmiştir. </li><li> Sonra, iyi hücre monolayer / kazıma ve asetik asit ve hücreler iki ayrı 1.5 ml mikro-santrifüj tüplerine aktarıldı vardı. (Not:. Her iyi her ED ve RG grupları için ayrı bir tüp yani üç test kuyuları ve üç kontrol kuyulara transferi olmalıdır) </li><li> Tüpler 30 saniye boyunca kuvvetli bir şekilde vortekslenmiş edildi. </li><li> 85 ° C ısı 10 dakika için. (Not: buharlaşma önlemek için, tüpleri parafilm ile imzalandı.) </li><li> Isıtmadan sonra, tüp 5 dakika için buz içine transfer edildi. (Not: soğutmalı hale gelene kadar Tüpler açılmamalıdır.) </li><li> Bulamaçları 15 dakika için 20,000 x g&#39;de santrifüjlenmiştir. Santrifüj iken, Alizarin Kırmızı standartları yapılmıştırkadar. </li></ol> Alizarin Kırmızı S standart ilk seyreltme tamponu seyreltilmesi ve tablosuna göre 2-kat seri seyreltiler yapmak için kullanılan ile hazırlanmıştır. <table border="1"><tbody><tr><td colspan="7"> Boya Yüksek Oranda konsantrasyonu </td><td colspan="7"> Boya Düşük Aralığı konsantrasyonu </td></tr><tr><td> 2 mM </td><td> 1 mM </td><td> 500 uM </td><td> 250 uM </td><td> 125 mcM </td><td> 62.5 uM </td><td> 31.3 uM </td><td> 15.6 uM </td><td> 7.8 uM </td><td> 3.9 uM </td><td> 1.9 uM </td><td> 0.9 uM </td><td> 0.4 uM </td><td> Boş </td></tr></tbody></table><ol start="16"><li> Santrifüj sonra süpernatant / tüp 1 ml yeni ayrı 1.5 ml mikro-santrifüj tüplerine aktarıldı. </li><li> PH ~ 375 ul 10 ile nötralize edildi;Tüp başına% amonyum hidroksit. (Not: öfke pH 4.1-4.5 olmalıdır.) </li><li> Standart ve numune (ayrı testler ve kontroller dahil) 150 ul 96-plaka opak-duvarlı, şeffaf alt içine ilave edildi. </li><li> Absorbansı 405 nm&#39;de okunmuştur ve örnekleri OD değerleri, daha fazla analiz için standart arsa ile karşılaştırılmıştır. </li></ol>

<ol><li>Volponi, A. A., Pang, Y., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell-based+biological+tooth+repair+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Stem cell-based biological tooth repair and regeneration.</a> Trends Cell Biol. 20, 715-722 (2010).</li>
<li>Nosrat, I. V., Widenfalk, J., Olson, L., Nosrat, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+cells+produce+neurotrophic+factors%2C+interact+with+trigeminal+neurons+in+vitro%2C+and+rescue+motoneurons+after+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Dental pulp cells produce neurotrophic factors, interact with trigeminal neurons in vitro, and rescue motoneurons after spinal cord injury.</a> Dev. Biol. 238, 120-132 (2001).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26, 638-645 (2008).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A.%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.. 97, 13625-13630 (2000).</li>
<li>Graziano, A., d'Aquino, R., Laino, G., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+a+promising+tool+for+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: a promising tool for bone regeneration.</a> Stem Cell Rev. 4, 21-26 (2008).</li>
<li>Kerkis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+transplantation+of+human+immature+dental+pulp+stem+cells+from+baby+teeth+to+golden+retriever+muscular+dystrophy+%28GRMD%29+dogs%3A+Local+or+systemic%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Transl.+Med%22%5BJournal%5D)">Early transplantation of human immature dental pulp stem cells from baby teeth to golden retriever muscular dystrophy (GRMD) dogs: Local or systemic.</a> J. Transl. Med. 6, 35(2008).</li>
<li>Onyekwelu, O., Seppala, M., Zoupa, M., Cobourne, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tooth+development%3A+2.+Regenerating+teeth+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Dent.+Update%22%5BJournal%5D)">Tooth development: 2. Regenerating teeth in the laboratory.</a> Dent. Update. 34, 20-29 (2007).</li>
<li>Cordeiro, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+tissue+engineering+with+stem+cells+from+exfoliated+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endod%22%5BJournal%5D)">Dental pulp tissue engineering with stem cells from exfoliated deciduous teeth.</a> J. Endod. 34 (08), 962-969 (2008).</li>
<li>Pierdomenico, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+mesenchymal+stem+cells+with+immunosuppressive+activity+can+be+easily+isolated+from+dental+pulp%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Multipotent mesenchymal stem cells with immunosuppressive activity can be easily isolated from dental pulp.</a> Transplantation. 80, 836-842 (2005).</li>
<li>de Mendonca Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstruction+of+large+cranial+defects+in+nonimmunosuppressed+experimental+design+with+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Craniofac.+Surg%22%5BJournal%5D)">Reconstruction of large cranial defects in nonimmunosuppressed experimental design with human dental pulp stem cells.</a> J. Craniofac. Surg. 19, 204-210 (2008).</li>
<li>Tirino, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+identification%2C+characterization+and+banking+of+human+DPSCs%3A+current+strategies+and+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rev%22%5BJournal%5D)">Methods for the identification, characterization and banking of human DPSCs: current strategies and perspectives.</a> Stem Cell Rev. 7, 608-615 (2011).</li>
<li>Tirino, V., Paino, F., De Rosa, A., Papaccio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification%2C+isolation%2C+characterization%2C+and+banking+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification, isolation, characterization, and banking of human dental pulp stem cells.</a> Methods Mol. Biol. 879, 443-463 (2012).</li>
<li>Eslaminejad, M. B., Vahabi, S., Shariati, M., Nazarian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+Growth+and+Characterization+of+Stem+Cells+from+Human+Dental+Pulp+of+Deciduous+Versus+Permanent+Teeth%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dent.+%28Tehran%29%22%5BJournal%5D)">In vitro Growth and Characterization of Stem Cells from Human Dental Pulp of Deciduous Versus Permanent Teeth.</a> J. Dent. (Tehran). 7, 185-195 (2010).</li>
<li>Wei, X., Ling, J., Wu, L., Liu, L., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+mineralization+markers+in+dental+pulp+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endod%22%5BJournal%5D)">Expression of mineralization markers in dental pulp cells.</a> J. Endod. 33, 703-708 (2007).</li>
<li>Nombela-Arrieta, C., Ritz, J., Silberstein, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+elusive+nature+and+function+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The elusive nature and function of mesenchymal stem cells.</a> Nat. Rev. Mol Cell Biol. 12, 126-131 (2011).</li>
<li>Huang, G. T., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Dent.+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> J. Dent. Res. 88, 792-806 (2009).</li>
<li>Graziano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffold%27s+surface+geometry+significantly+affects+human+stem+cell+bone+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Scaffold's surface geometry significantly affects human stem cell bone tissue engineering.</a> J. Cell Physiol. 214, 166-172 (2008).</li>
<li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells%3A+from+biology+to+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Zool.+B.+Mol.+Dev.+Evol%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications.</a> J. Exp. Zool. B. Mol. Dev. Evol. 312, 408-415 (2009).</li>
<li>Mitsiadis, T. A., Feki, A., Papaccio, G., Caton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%2C+niches%2C+and+notch+signaling+in+tooth+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Dent.+Res%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in tooth injury.</a> Adv. Dent. Res. 23, 275-279 (2011).</li>
<li>Shi, S., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perivascular+niche+of+postnatal+mesenchymal+stem+cells+in+human+bone+marrow+and+dental+pulp%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bone+Miner.+Res%22%5BJournal%5D)">Perivascular niche of postnatal mesenchymal stem cells in human bone marrow and dental pulp.</a> J. Bone Miner. Res. 18, 696-704 (2003).</li>
<li>Tomic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+properties+of+mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+pulp+and+dental+follicle+are+susceptible+to+activation+by+toll-like+receptor+agonists%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory properties of mesenchymal stem cells derived from dental pulp and dental follicle are susceptible to activation by toll-like receptor agonists.</a> Stem Cells Dev. 20, 695-708 (2011).</li>
<li>Tsukamoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mineralized+nodule+formation+by+cultures+of+human+dental+pulp-derived+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Mineralized nodule formation by cultures of human dental pulp-derived fibroblasts.</a> Arch. Oral Biol. 37, 1045-1055 (1992).</li>
<li>About, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dentin+production+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Human dentin production in vitro.</a> Exp. Cell Res. 258, 33-41 (2000).</li>
<li>Couble, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odontoblast+differentiation+of+human+dental+pulp+cells+in+explant+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif.+Tissue+Int%22%5BJournal%5D)">Odontoblast differentiation of human dental pulp cells in explant cultures.</a> Calcif. Tissue Int. 66, 129-138 (2000).</li>
<li>Onishi, T., Kinoshita, S., Shintani, S., Sobue, S., Ooshima, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+proliferation+and+differentiation+of+dog+dental+pulp+cells+in+serum-free+culture+medium+by+insulin-like+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Stimulation of proliferation and differentiation of dog dental pulp cells in serum-free culture medium by insulin-like growth factor.</a> Arch. Oral Biol. 44 (99), 361-371 (1999).</li>
<li>Huang, G. T., Sonoyama, W., Chen, J., Park, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+characterization+of+human+dental+pulp+cells%3A+various+isolation+methods+and+culturing+environments%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">In vitro characterization of human dental pulp cells: various isolation methods and culturing environments.</a> Cell Tissue Res. 324, 225-236 (2006).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif.+Tissue+Int%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcif. Tissue Int. 88, 130-141 (2011).</li>
<li>Curtis, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EF1alpha+and+RPL13a+represent+normalization+genes+suitable+for+RT-qPCR+analysis+of+bone+marrow+derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">EF1alpha and RPL13a represent normalization genes suitable for RT-qPCR analysis of bone marrow derived mesenchymal stem cells.</a> BMC Mol. Biol. 11, 61(2010).</li>
<li>Suchanek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells+and+their+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pap.+Med.+Fac.+Univ.+Palacky+Olomouc+Czech+Repub%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells and their characterization.</a> Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky Olomouc Czech Repub. 153, 31-35 (2009).</li>
<li>d'Aquino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+postnatal+dental+pulp+cells+co-differentiate+into+osteoblasts+and+endotheliocytes%3A+a+pivotal+synergy+leading+to+adult+bone+tissue+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Human postnatal dental pulp cells co-differentiate into osteoblasts and endotheliocytes: a pivotal synergy leading to adult bone tissue formation.</a> Cell Death Differ. 14, 1162-1171 (2007).</li>
<li>Atari, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+pluripotent+stem+cells+from+human+third+molar+dental+pulp%5BTitle%5D)+AND+%22Histol.+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Isolation of pluripotent stem cells from human third molar dental pulp.</a> Histol. Histopathol. 26, 1057-1070 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu protokol iki yöntem, enzimatik ayrışma ve pulpa dokusu eksplantlar alınan kök hücrelerin direkt sonucudur kullanarak diş hamurundan hDPSCs izolasyonu ve karakterizasyonu süreci anlatılmaktadır. Buna ek olarak, odontoblastlar bu hücrelerin in vitro olarak farklılaşma, kantitatif Alizarin Kırmızı S tahlil ve QPCR ile değerlendirildi. İnsan dişinden pulpa dokusu izole etmek için mevcut protokoller pense (kemik forseps) 9, imha iğne 29, Gracey küret 30, diş fiss...

Kök hücreler, çok kudret ve kendini yenileme 15 olarak bilinen iki önemli özellik, sahip clonogenic hücrelerdir. Farklı replikatif potenslerine Tüm kök hücreler arasında, postnatal kök hücreler olarak diş kök hücreleri nedeniyle erişilebilirlik, esneklik, ve diğer yetişkin kök hücreleri 16 ile karşılaştırıldığında yüksek proliferatif yeteneği son yıllarda dikkat çekmektedir. Karakteristik olarak, mezenkimal kök hücreler ile benzer şekilde, diş özü kök hücrelerinin farklılaşmasını çoklu mezenşim içine kapasitesi ve / veya in vitro ve in vivo hem de non-mezenşim soy sahip yapışık clonogenic hücrelerdir. 1-8,17,18 DPSCs ile tanımlanır olumsuz hematopoetik antijenlerin ekspresyonu (örneğin, CD45, CD34, CD14) ve CD90 pozitif ifadesi, CD29, CD73, CD105, CD44 ve STRO-1. 19,20 Minimum ağrı ve morbidite ile kolay elde potansiyeli valu olarak insan DPSCs yapmakMKH yapabiliyor kaynağı kemik iliği mezenkimal kök hücre 21 olarak sıradan kaynaklarına kıyasla. Genel olarak, DPSCs ya akıbet yöntemi, yani, pulpa dokusu eksplantlar (DPSC-OG) 22-24, ve / veya enzimatik sindirim (DPSC-ED) 4,6,25 kök hücrelerin göç ile izole edilmiştir. Önceki çalışmalar izolasyon yöntemi ve kültür koşullarında in vitro pasajlar 26,27 bölgesindeki altında farklı popülasyonlarda veya soy neden olduğunu göstermiştir. Kalıcı dişlerin (pDPSCs) söz konusu olduğunda, Huang ve ark enzimatik sindirimi pDPSCs geçmek DPSCs kıyasla daha yüksek çoğalma potansiyeli olduğunu ortaya koymuştur. Ayrıca 26, dişlerin (dDPSCs) söz konusu olduğunda, bu gösterilmiştir ki STRO-1 ve CD34 belirteçleri dDPSC-OG ile karşılaştırıldığında dDPSC-ED daha dile getirdi. Buna ek olarak, dDPSC-ED tanımlanan osteo / odonto ortam içinde daha yüksek bir mineralizasyon hızı görüntülenir. Bu nedenle 27 sebebiyle r DPSCs olağanüstü potansiyeliegenerative tıp, daha fazla çalışmaları farklı izolasyon yöntemleri türetilmiştir olası çeşitli popülasyonlarda daha iyi anlaşılması için gerekli olacaktır. İşte, bu hamuru çıkarma sürecini kolaylaştırmak için bir adım diş elmas disketini kullanarak, hamuru ekstraksiyon kolay bir şekilde tanıtmak için bir girişimdi. Ayrıca ED veya OG yöntemleri uygulayarak insan pulpa kaynaklı kök hücrelerin izolasyonu sonra, iki grup arasında genel özellikleri ve farklılaşma kapasitesi de incelenmiştir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog veya Lot. numara </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> GIBCO </td><td> 11900-073 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz tip I </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C0130-100mg </td><td></td></tr><tr><td> Dispase </td><td> GIBCO </td><td> 17105-041 </td><td></td></tr><tr><td> Penisilin / streptomisin </td><td> GIBCO </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Amfoterisin B </td><td> GIBCO </td><td> 15290-018 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Bovine Serum tanımlı (FBS) </td><td> HyClone </td><td> SH30070.03 </td><td></td></tr><tr><td> 2-fosfat L-askorbik asit </td><td> Sigma </td><td> A8960-5G </td><td></td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> GIBCO </td><td> 25030-024 </td><td></td></tr><tr><td> Deksametazon </td><td> Sigma </td><td> D4902 </td><td></td></tr><tr><td> β-gliserol fosfat disodyum tuzu hidrat, BioUltra </td><td> Sigma </td><td> G9422-100G </td><td></td></tr><tr><td> Potasyum fosfat tekbazlı </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P5655 </td><td></td></tr><tr><td> Osteogenezis Assay Kit </td><td> Millipore </td><td> PS01802031 </td><td></td></tr><tr><td> Fare IgG2b-PE izotip kontrol </td><td> BD Pharmingen </td><td> 50808088029 </td><td></td></tr><tr><td> FITC fare IgG2b izotip kontrol </td><td> BD Pharmingen </td><td> 559532 </td><td></td></tr><tr><td> FITC fare IgG1 κ izotip </td><td> BD Pharmingen </td><td> 11471471 </td><td></td></tr><tr><td> FITC / PE fare anti-insan CD34/CD45 </td><td> BD Pharmingen </td><td>341071 </td><td></td></tr><tr><td> PE anti-insan CD146 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550315 </td><td></td></tr><tr><td> Monoklonal fare anti-insan CD90/FITC </td><td> Daka </td><td> 00034418 </td><td></td></tr><tr><td> PE fare anti-insan CD73 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550257 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-h CD105/Endoglin PE </td><td> BD Pharmingen </td><td> FAB10971P </td><td></td></tr><tr><td> PE fare anti-insan CD11b/Mac1 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 5553888 </td><td></td></tr><tr><td> CD44 PE fare anti insan </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555479 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat tampon çözeltisi (PBS) </td><td> GIBCO </td><td> 003000 </td><td></td></tr><tr><td> 70 mikron hücre süzgecinden </td><td> Şahin </td><td> 352360 </td><td></td></tr><tr><td&gt; 0.2 um şırınga filtresinden </td><td> Millex-GV </td><td> SLGV033RB </td><td></td></tr><tr><td> 25 cm 2 kültürü şişesi </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Z707481 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> EKİPMAN </td></tr><tr><td> BD FACSCalibur </td><td> BD </td><td> 342975 </td><td></td></tr><tr><td> Multiskan mikroplak spektrofotometre </td><td> Termo bilimsel </td><td> 51119200 </td><td></td></tr><tr><td> Fleurcense Mikroskop </td><td> Olimpos </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Yazılım sürümü 2.3.1 Flowing </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan diş pulp kök hücre İzolasyonu, karakterizasyonu ve karşılaştırmalı farklılaşma İki farklı yöntemler kullanılarak daimi dişler türetilen

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

<p class="jove_content"&gt; Gelişmekte yirmilik dişler rutin ortodontik tedaviler ile elde edilebilir yetişkinlik döneminde kök hücrelerin kolay erişilebilir bir kaynak vardır. İnsan hamuru kökenli kök hücreleri (hDPSCs) erişkin kök hücrelerin olağan kaynağı karşılaştırmak çok soy farklılaşma kapasitesine sahip yüksek proliferasyon potansiyeline sahip<sup&gt; 1-8</sup&gt;, Bu nedenle hDPSCs doku mühendisliği ve rejeneratif tıp otolog transplantasyon için iyi bir aday olabilir. Bu avantajları ile birlikte, bu tür immunolodulatory etki olarak mezenkimal kök hücreleri (MSC) özellikleri haiz, hatta allograft nakli durumunda, hDPSCs daha değerli yapmak<sup&gt; 6,9,10</sup&gt;. Bu nedenle, kök hücre kaynağı kullanmak için birincil adım pulpa dokusu hDPSCs yalıtmak için en iyi protokolü seçmektir. Bu amaca ulaşmak için, bu tür ortak yüzey belirteçleri ve ayrıca farklılaşma kapasitesi gibi farklı hücresel davranışlar, çeşitli izolasyon koşullarının etkisini incelemek için çok önemlidir.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; Böylece, burada gömülü üçüncü molar dişler insan pulpa dokusu ayırmak ve sonra tecrit hDPSCs için literatüre dayalı mevcut protokoller, hem de kullanılan<sup&gt; 11-13</sup&gt;<em&gt; Yani</emDoku eksplantlarından&gt; enzimatik pulpa dokusunun dissosiasyon (DPSC-ED) veya akıbet (DPSC-OG). Bu bağlamda, biz diş elmas disketi kullanarak izolasyon yöntemleri kolaylaştırmak için çalıştı. Sonra, bu hücreler CD146 ve ayrıca STRO-1 gibi stromal ilişkili Markers (CD73, CD90, CD105 ve CD44), hematopoetik / endotel Markers (CD34, CD45 ve CD11b), perivasküler marker açısından karakterize. Daha sonra, bu iki protokol kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (QPCR) ve alizarin kırmızısı boyama her iki tarafından odontoblastlar içine farklılaşma etki göre karşılaştırılmıştır. QPCR mineralizasyon ilişkili genlerin ekspresyonu (; ALP, matris ekstraselüler phosphoglycoprotein; MEPE ve dentin sialophosphoprotein; DSPP alkalen fosfataz) değerlendirilmesi için kullanılmıştır.<sup&gt; 14</sup</p

<ol><li> Enzimatik ayrışma (DPSC-ED) ile elde edildi DPSCs günde 10, 15,18 (Şekil 1) burada gösterilir. Dışlanmasının ardından yaklaşık 3 ila 5 gün oluşmaya başlayan koloniler. </li><li> Geçmek DPSCs (DPSC-OG) günlük 5, 10, 13 ve 18, Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. Hücreleri paralel tohumlama sonra yaklaşık 5 gün tarafından sipariş ederek hamuru doku balonun içine göç etmeye başladılar Fibroblast benzeri. </li><li> Her iki yöntem kullanılarak pasaj 3&#39;de DPSCs Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. ...

Yöntemi kullanarak insan dental pulpa kök hücrelerinin (hDPSCs) izolasyonu ve karakterizasyonu tarif<strongKağıt hamuru&gt; enzimatik ayrışma (DPSC-ED)</strong&gt; Veya<strongPulpa dokusu eksplantları alınan kök hücrelerin&gt; direkt sonucudur (DPSC-OG). Sonra takip</strong&gt;<em&gt; In vitro</emOdontoblastlar içine hDPSCs Her iki tip&gt; karşılaştırmalı farklılaşma.

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Gelişmekte olan gömülü dişler, yetişkinlik döneminde rutin ortodontik tedavilerle elde edilebilen, kolay erişilebilir kök hücre kaynaklarıdır. İnsan ...

Bu prosedürün genel amacı, iki farklı yöntem kullanarak kalıcı dişlerden insan genital pulpa kök hücrelerini izole etmek, karakterize etmek ve farklılaştırmaktır. Bu işlem, sağlıklı gömülü yirmi yaş dişlerinin toplanması ve başlangıçta sement-emaye birleşim yerinden kesilmesiyle gerçekleştirilir. Dental pulpa kök hücreleri (D PSCs) iki farklı yöntemle izole edilir.İlk yöntemde, polip dokuları kollajenaz tip 1 ve disk boşluğu solüsyonu içerisinde inkübe edilerek enzimatik olarak sindirilir. Burada bunları ed olarak adlandırıyoruz. İkinci yöntemde kullanılan izolasyon yöntemi göz önüne alındığında, palp dokuları herhangi bir sindirim işlemi uygulanmadan doğrudan flask içerisine yerleştirilir.Bu şekilde, dpss dokudan flaska göç etmeye başlar. OG olarak adlandırılan bu hücreler, outgrowth (dışa büyüme) izolasyon yöntemine atıfta bulunur. Prosedürün ikinci adımı, akış sitometrisi kullanılarak kök hücrelerin tanımlanmasıdır.Prosedürün üçüncü adımı odontoblast farklılaşmasının indüksiyonudur ve prosedürün son adımı, iki grup arasındaki odontoblast farklılaşmasının Alizarin Red boyama ve qPCR ile karşılaştırmalı değerlendirmesidir. Ben Rian Enstitüsü Kök Hücre ve Gelişim Biyolojisi Bölümü'

isolation-characterization-comparative-differentiation-human-dental

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu iletişim kuralı insan diş kökü çıkarılan diş kök hücrelerin geçici genetik mühendisliği açıklar. Uygulanan non-viral değişiklik strateji tedavi kök hücre ürünlerin geliştirilmesi için bir temel olabilir.

Yalıtım, karakterizasyonu ve insan diş kökü kök hücrelerin genetik değişiklik mikroRNA tabanlı

Burada insan diş Pulp kök hücre izolasyon ve yayılması için bir protokol Nöronal Farklılaşma süreci sırasında prion protein ifade değerlendirmek için mevcut.

Yalıtım, yayma ve insan diş Pulp kök hücrelerin Nöronal Farklılaşma sırasında Prion Protein ifade

Bu protokol, insan diş pulpası kök hücrelerini (hDC'ler) pankreas soylarına in vitroolarak ayırt etmek için iki farklı indüksiyon protokolü arasında bir karşılaştırma sunar: bütünleştirici protokol ve bütünleştirici olmayan protokol. Bütünleştirici protokol daha fazla insülin üreten hücre (IPC) üretir.

Tüp bebek pankreas soylarına doğru İnsan Diş Pulpası Kök Hücrelerinin İndüksiyonu

Mevcut protokol, sürekli büyüyen bir fare kesici dişinden, fare azı dişinden ve insan dişlerinden tek hücreli RNA-seq analizine uygun tek hücreleri izole etmek için hızlı, verimli ve nazik bir yöntem sunar.

Fare ve İnsan Dişlerinden Tek Hücrelerin Hızlı İzolasyonu

Bu makale, eksplant kültür yöntemini kullanarak dental pulpa kök hücrelerinin birincil kültürünü oluşturmak ve bu hücrelerin ICSCRT yönergelerine dayalı olarak karakterizasyonunu yapmak için adım adım bir kılavuz sağlar. Bu protokol ile izole edilen hücreler, daha sonraki uygulamalar için mezenkimal kök hücreler olarak kabul edilebilir.

Dental pulpa kök hücrelerinin birincil kültürü

Bu protokol, multipotent kök hücrelerin enzimatik sindirim yoluyla diş pulpasından ekstraksiyonunu, kültürünü ve korunmasını vurgular. Ek olarak, osteoblastlara, adipositlere ve kondrositlere farklılaşma potansiyellerini göstererek süreçte hassasiyet ve tutarlılığın önemini vurgular.

İnsan Süt ve Daimi Dişlerinden Dental Pulpa Kök Hücrelerinin İzolasyonu, Kültürü ve Karakterizasyonu

Bu makale, birincil hücre kültürleri ve nasıl tümör hücrelerinden eritrositler ve fibroblastların kirlilikler çıkarmak için taze olarak elde edilen melanom doku hazırlanmasını tarif etmektedir. Son olarak, biz nasıl tarif...

Hasta Türetilen Hücre Kültürü ve CD133 İzolasyonu<sup&gt; +</supMelanom dan&gt; sağlayan olası Kanser Kök Hücreleri

Kalp hastalıklarının hücre temelinde Mevcut bilgi çok hayvan modelleri üzerinde yapılan çalışmalara dayanmaktadır. Burada açıklamak ve insan ventrikülün küçük cerrahi örneklerinden tek bir canlı kardiyomiyositlerin elde etmek için yeni bir yöntem doğrulamak. İnsan ventriküler miyositler elektrofizyolojik çalışmalar ve uyuşturucu testi için kullanılabilir.

Taze Cerrahi Örneklerden İzolasyon ve İnsan Ventriküler kardiyomiyositlerin Fonksiyonel Karakterizasyonu

Doğrudan insan dokularından kanser kök hücreler (rulmanları) izolasyonu biyolojik karakterizasyonu için bir koşuldur. Ayrıca zor sorun giderme adımları konusunda ipuçları sağlarken Bu makale, insan dokularından prostat CSCS izolasyonu için bir yöntem anlatılmaktadır.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

Histerektomi örneklerden primer endometrial stromal hücre kültürü sistemlerinin kurulması, önceki araştırma amaçlayan geniş bir dizi takip için değerli bir biyolojik teknik ve çok önemli bir adımdır. Burada, insan hasta cerrahi olarak kesilmiş dokuları endometriyal stromal kültürleri oluşturmak için kullanılan iki yöntem tarif eder.

Histerektomi Örneklerden İlköğretim İnsan endometrial stroma hücrelerinde Kurulması İçin İki Yöntem

Öğrenin, kalıcı dişlerden insan diş pulpası kök hücrelerinin enzimatik sindirim ve doku ekplantlarından doğrudan çıkış yöntemleriyle izolasyonunu, karakterizasyonunu ve odontoblastlara farklılaşmasını.

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen (Video) | JoVE Journal

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Daha fazla video keşfet