Name: Prostat Hücrelerinin Yönlü Göç Eğitim için özel tasarlanmış galvanotaksis Chambers kullanılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 45 s
Description: Öğrenin prostat hücrelerinin yönlü göçünü galvanotaksis odası kullanarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik, elektrik alanına yanıt veren hücre davranışlarını kanser araştırmalarında incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

prostat hücre hatları nazik Kanser Merkezi, UC Davis Dr. Ling-Yu Wang ve Dr. Hsing-Jien Kung tarafından sağlanmaktadır. Bu proje NIH galvanotaksis hibe 4R33AI080604 tarafından desteklenmektedir.

1. Kültürleme Prostat Hücreleri <ol><li> Kültür prns-1-1% 5 CO2 ile 37 ° C'de% 10 FBS ve antibiyotik antimikotik ile takviye edilmiş RPMI 1640 ortamı içinde, 100 mm kültür çanakları üzerinde ve PNT2 prostat hücreleri. Hücreler galvanotaksis deneyler için% 80 confluency ulaşana kadar her gün kültür ortamı yenileyin. </li></ol> 2. Montaj galvanotaksis Odaları <ol><li> Alt odalarını Montaj <ol><li> 2-propanol ile plastik galvanotaksis odası silin. Bir şırınga ile bir bölmenin alt tarafındaki dairesel açıklıklar etrafında deniz grade silikon astarı uygulayınız ve büyük bir coverglass (Şekil 1) takın. Coverglass bastırın ve pamuklu aşırı tutkal silmek için bir pamuk aplikatör arka tarafını kullanın. Yarı dairesel açıklıklar orta ve elektrik akımı, iki iç, orta rezervuar arasında yer alan hücreler üzerinde akmasına izin verir. </li><li> 6 mm x 2 yapmak için küçük bir coverglass kesinBir elmas noktası işareti ile 5 mm tutucular. </li><li> Odasına çevirin. Bir şırınga ve / veya alt camına 2 dairesel açıklıklar arasındaki hücre bağlanması için bir 10 mm x 25 mm kanal yüzey oluşturmak için metal bir spatula ile silikon tutkal şeritleri 2 uygulanır. 2 dairesel açıklıklar arasındaki cam aralama 2 adet Tutkal. Aralayıcıları aşağı doğru itin ve pamuklu ve / veya kürdan ile aşırı tutkal silmek için pamuk aplikatör arka tarafını kullanın. </li><li> Silikon yapıştırıcı kürünü kadar 24 saat odasına kurutun. Tutkal, asetik asit kalıntılarını çıkarmak için damıtılmış su gece boyunca odası bekletin. Acil kullanım için odasına kurutun, veya temiz bir kap içinde daha sonra kullanılmak üzere odasına saklayın. <img alt="Cam ara parçaları, alt kapak camı ile montajı detaylandıran galvanotoksis odası kurulum şeması." fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51973/51973fig1highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 1,"> Şekil 1: bottom galvanotaksis odasının Meclisi. A) büyük coverglass) T, temiz odanın. B tabanına yerleştirilmiştirCam ayırıcılar adet 2 dairesel açıklıklar arasında yapıştırılmış wo hücreler eklemek için bir 10 mm x 25 mm kanal oluşturmak için. </li></ol></li><li> Galvanotaksis odalarına hücreleri Tohumlama <ol><li> Deney için gerekli galvanotaksis bölmelerin gerekli sayıda hazırlayın. Her bir hücre hattı veya tedavi tek galvanotaksis odası gerektirir. 2-propanol ile galvanotaksis odaları silin. Steril PBS ile 3 kez yıkayın odaları ve odalarına 2 dairesel açıklıklar arasındaki sıvı akışını kontrol edin. </li><li> Steril hücre kültür tabaklarında odacıkları içine alın ve bunları, 15 dakika boyunca 37 ° C'de dengelenmeye gelmeye bırakın. 5 dakika için 37 ° C de, 5 ml% 0.25 tripsin-EDTA kullanılarak kültür kabı prostat hücreleri ayırmak. PBS içinde 5 ml% 10 FBS ile tripsin-EDTA nötralize. </li><li> 15 ml tüpler hücreleri aktarın ve 200 x g, 37 ° C'de 5 dakika boyunca hücreler santrifüj. Süpernatan aspire ve kültür ortamı, 1 ml hücre yeniden askıya. </li><li> 20 μ alHücre eriyiği bir sayım odasına yüklemek ve hücre sayısını hesaplayın. Kültür ortamında 8 x 10 4 hücre / ml hücre konsantrasyonunu ayarlayın. </li><li> 37 ° C inkübatör dışına galvanotaksis odaları atın. Her bölmenin üzerine hücre süspansiyonu 350 ul Tohum. </li><li> Islak Kimwipe ya da% 5 CO2 ile 37 ° C de kuluçka makinesi içinde bir nem odasında kültür çanağı içinde gece boyunca odalarında hücreleri inkübe edin. </li></ol></li></ol><img alt="37°C, %5 CO2'de deneysel analiz için inkübatör kurulumlu prostat hücresi göç diyagramı." fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51973/51973fig2highres.jpg" width="500" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 2,"> Şekil 2:. Bölmeye tohum hücreleri alt bölme kurutuldu ve temizlenir A) Prostat hücreleri tripsinize sayılır ve bölmeye aktarılır ve bir gece boyunca inkübe edilir B) üst coverglass filme önce bölmeyi kapatmak için takılır... <ol start="3"><li> BirEn iyi odaları ssembling <ol><li> Çekimlerden önce üst odasını birleştirin. Mikroskop sadece bir seferde tek bir galvanotaksis odasını görüntüleme ağırlayacak. Her galvanotaksis bölmesi için 37 ° C'de kültür ortamında 10 ml kadar ısıtın. 37 ° C ısıtma plakasına kuluçka bir galvanotaksis odası aktarın. </li><li> Birleşmeyen hücrelerin çıkarılması için kültür ortamı ile hücrelerin durulayın. Bölme ortamın 400 ul bırakın. Her iki cam aralama üstünde yüksek vakum yağı uygulamak için bir şırınga kullanın. </li><li> Odasına mühür küçük bir coverglass ekleyin. Yavaşça bir pamuk aplikatör arka tarafı ile coverglass bastırın. Pamuklu aşırı orta siliniz. </li><li> Cam yüzeyini kurulayın ve coverglass ve odanın arasındaki boşluğu kapatmak için yüksek vakum gres sürün. Yağ yaymak için bir metal spatula kullanın. İç rezervuarlar için kültür ortamı 4 ml ekleyin ve rezervuar arasındaki sıvı akışını kontrol edin. </li></ol></li><li> Agar olunköprüler <ol><li> 2 inç uzunluğunda bir PVC boru donanımının bir çift kesme (503/16 çapa x 5/16 dış çaplı x 1/16 duvar), çevirme ve 100 ml'lik bir beher içine yerleştirin. </li><li> 200 mg Bacto-Agar ölçün ve% 2 agar jel için 10 ml kültür ortamı ile bir 50 ml'lik bir şişe içinde ilave edin. 30 saniye boyunca mikrodalga. Bir transfer pipet ile plastik boru agar jel yükleyin. Ağarı katılaştırmak için bir 10 dakika boyunca, oda sıcaklığında, agar köprüler bırakın. </li><li> Galvanotaksis odasının dış rezervuar 2 ml kültür ortamı ekleyin. Akımını yapmak için iç ve dış ortam rezervuar agar köprüler yerleştirin. </li></ol></li></ol><img alt="Hücre göçü için agar köprüleri ve DC gücü ile oda kurulumunu gösteren galvanotoksis deney diyagramı." fo:content-width="3.5in" src="/files/ftp_upload/51973/51973fig3highres.jpg" width="350" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 3,"> Şekil 3:. Odasının üzerine hücreleri filme bir diyagram galvanotaksis odasının son montajını göstermek için. odası tamamen yüksek vakum gres ile mühürlenir. Orta t ilave edilirO rezervuarları doldurun ve iki agar köprü odasına yerleştirilir. Daha sonra galvanotaksis odası mikroskop kademesine aktarılmaktadır ve elektrotların elektrik alanı uygulamak için eklenir. Monte galvanotaksis odasının yan görünüşüdür elektrik akımı agar köprü ve cam kapak arasındaki boşluk boyunca hücrelerin üzerine akar göstermek için gösterilmiştir. 3. Time-lapse Görüntüleme <ol><li> Önce görüntüleme dolaşan hava, 2 saat içinde% 5 CO2 ile 37 ° C çevre odasında açın. </li><li> Mikroskop açın ve görüntü elde yazılımı başlatmak. Mikroskop sahne kalibre ve 10X objektif seçin. </li><li> , Mikroskop sahneye galvanotaksis odaları transfer bant ile sabitleyin odasına ve hücrelerin odaklanın. Sağ taraftaki katot ile dış rezervuar için galvanotaksis elektrotlar yerleştirin. Tel ve bant ile elektrotlar sabitleyin. </li><li> Güç bo açınX odasına bir elektrik alanı uygulamak için. 25 mm uzunluğunda odasının (100 mV / mm) için 2.5 volt ulaşmak için odasına genelinde voltmetre ile çıkış gerilimini ölçün. Çıkış akımını ayarlayarak deney sırasında saha gücünü korumak. </li><li> On Time-lapse filmleri oluşturmak için yazılım film odasının karşısında 10 puan seçin. 2 saat 10 dakika aralıklarla satın alma koşulları kurun. </li><li> Filme başlatın ve gerektiği gibi çıkış akımını ayarlayın. </li><li> Deneyin sonunda, sahneden odasına çıkarın ve% 95 alkol ile hücreleri tamir. Temizlemek için bir jilet ile açık odasını kırın ve tekrar kullanın. </li></ol> Galvanotaksis 4. miktarının belirlenmesi <ol><li> Time-lapse film ve yeniden orient görüntülerin üstüne katot döndürün. Hücre izleme yazılımı filmleri verin. </li><li> El ile her bir film (Şekil 4A, B), her bir zaman noktasında 10-20 hücrelerinin (x, y) konumu etiket.kuzey-güney doğrultusunda göre göç mesafeleri ve açıları, elektrik alanının aynı yönelimi, hücre izleme yazılımı (Şekil 4C) olarak hesaplanacaktır. NOT: Ortalama göç hızı, toplam göç mesafesi ve toplam filme zaman dönüştürülür. yön kosinüs değeri açılardan dönüştürülür. Hücreler rastgele yönlülük ile geçirirseniz, net kosinüs ortalaması sıfıra yakın olacaktır. Hücreler katot doğru doğrudan geçirirseniz, kosinüs değeri +1 olacaktır. Hücreler anot doğru doğrudan geçirirseniz, kosinüs değeri -1 olur. </li></ol><img alt="Hücre göçü karşılaştırması, rastgele göç ve galvanotaksis, yön için kosinüs denklemi ile diyagram." fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51973/51973fig4highres.jpg" width="400" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Şekil 4,"> Şekil 4: Hücre izleme yönünü ölçmek için hücre görüntüleri ile izleme hatlarının A) Kaplama.. Hücrelerin (x, y) konumu manua olanLly zaman atlamalı filmleri izlenir. . Hücreler rastgele göç varsa, ortalama kosinüs sıfıra yakın B) Ancak, hücreler katot veya anot doğru göç halinde, ortalama kosinüs değeri + (katot) ya da yakın -. (Anot) 1.0 ° C ) yön göç açıları (θ) dönüştürülür kosinüs değeri, tarafından sunulmaktadır. kosinüs (θ) mesafe b (elektrik alanının yönüne öngörülen mesafe) uzaklığa bir (göç mesafe) oranına eşittir. <ol start="3"><li> Ölçümleri kaydedin. Kombine sonuçları hesaplamak için bir veritabanı uygulaması veri almak. </li><li> Çubuk grafikler (Şekil 5) çizmek için bir tablo ortalama göç hızı ve ortalama kosinüs değerinin kombine İhracat verileri. </li></ol>

<ol><li>Reid, B., Nuccitelli, R., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+measurement+of+bioelectric+currents+with+a+vibrating+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Non-invasive measurement of bioelectric currents with a vibrating probe.</a> Nat Protoc. 2 (3), 661-669 (2007).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+electric+currents+might+guide+rostral+migration+of+neuroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">Endogenous electric currents might guide rostral migration of neuroblasts.</a> EMBO Rep. 14 (2), 184-190 (2013).</li>
<li>Hotary, K. B., Robinson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+electrical+currents+and+voltage+gradients+in+Xenopus+embryos+and+the+consequences+of+their+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Endogenous electrical currents and voltage gradients in Xenopus embryos and the consequences of their disruption.</a> Dev Biol. 166 (2), 789-800 (1994).</li>
<li>Hotary, K. B., Robinson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+of+a+role+for+endogenous+electrical+fields+in+chick+embryo+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Evidence of a role for endogenous electrical fields in chick embryo development.</a> Development. 114 (4), 985-996 (1992).</li>
<li>Yamashita, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electric+axon+guidance+in+embryonic+retina%3A+galvanotropism+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Electric axon guidance in embryonic retina: galvanotropism revisited.</a> Biochem Biophys Res Commun. 431 (2), 280-283 (2013).</li>
<li>Wood, M. D., Willits, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applied+electric+field+enhances+DRG+neurite+growth%3A+influence+of+stimulation+media%2C+surface+coating+and+growth+supplements%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neural+Eng%22%5BJournal%5D)">Applied electric field enhances DRG neurite growth: influence of stimulation media, surface coating and growth supplements.</a> J Neural Eng. 6 (4), 046003(2009).</li>
<li>Kucerova, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+electrical+signals+in+murine+corneal+wound+re-epithelialization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">The role of electrical signals in murine corneal wound re-epithelialization.</a> J Cell Physiol. 226 (6), 1544-1553 (2011).</li>
<li>Sillman, A. L., Quang, D. M., Farboud, B., Fang, K. S., Nuccitelli, R., Isseroff, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Dermal+fibroblasts+do+not+exhibit+directional+migration+on+collagen+I+in+direct-current+electric+fields+of+physiological+strength%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human Dermal fibroblasts do not exhibit directional migration on collagen I in direct-current electric fields of physiological strength.</a> Exp Dermatol. 12 (4), 396-402 (2003).</li>
<li>Allen, G. M., Mogilner, A., Theriot, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoresis+of+cellular+membrane+components+creates+the+directional+cue+guiding+keratocyte+galvanotaxis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Electrophoresis of cellular membrane components creates the directional cue guiding keratocyte galvanotaxis.</a> Curr Biol. 23 (7), 560-568 (2013).</li>
<li>Nishimura, K. Y., Isseroff, R. R., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+keratinocytes+migrate+to+the+negative+pole+in+direct+current+electric+fields+comparable+to+those+measured+in+mammalian+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Human keratinocytes migrate to the negative pole in direct current electric fields comparable to those measured in mammalian wounds.</a> J Cell Sci. 109 (1), 199-207 (1996).</li>
<li>Farboud, B., Nuccitelli, R., Schwab, I. R., Isseroff, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DC+electric+fields+induce+rapid+directional+migration+in+cultured+human+corneal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">DC electric fields induce rapid directional migration in cultured human corneal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 70 (5), 667-673 (2000).</li>
<li>Fang, K. S., Ionides, E., Oster, G., Nuccitelli, R., Isseroff, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+growth+factor+receptor+relocalization+and+kinase+activity+are+necessary+for+directional+migration+of+keratinocytes+in+DC+electric+fields%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Epidermal growth factor receptor relocalization and kinase activity are necessary for directional migration of keratinocytes in DC electric fields.</a> J Cell Sci. 112 (12), 1967-1978 (1999).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+T+lymphocytes+migrate+toward+the+cathode+of+DC+electric+fields+in+microfluidic+devices%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Activated T lymphocytes migrate toward the cathode of DC electric fields in microfluidic devices.</a> Lab Chip. 11 (7), 1298-1304 (2011).</li>
<li>Meng, X., Arocena, M., Penninger, J., Gage, F. H., Zhao, M., Song, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI3K+mediated+electrotaxis+of+embryonic+and+adult+neural+progenitor+cells+in+the+presence+of+growth+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">PI3K mediated electrotaxis of embryonic and adult neural progenitor cells in the presence of growth factors.</a> Exp Neurol. 227 (1), 210-217 (2011).</li>
<li>Wu, D., Ma, X., Lin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DC+Electric+Fields+Direct+Breast+Cancer+Cell+Migration%2C+Induce+EGFR+Polarization%2C+and+Increase+the+Intracellular+Level+of+Calcium+Ions.+%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">DC Electric Fields Direct Breast Cancer Cell Migration, Induce EGFR Polarization, and Increase the Intracellular Level of Calcium Ions. </a> Cell Biochem Biophys. 67 (3), 1115-1125 (2013).</li>
<li>Martin-Granados, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+PP1%2FNIPP1+in+steering+migration+of+human+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A role for PP1/NIPP1 in steering migration of human cancer cells.</a> PLoS One. 7 (7), 40769(2012).</li>
<li>Yang, H. Y., Charles, R. P., Hummler, E., Baines, D. L., Isseroff, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+epithelial+sodium+channel+mediates+the+directionality+of+galvanotaxis+in+human+keratinocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The epithelial sodium channel mediates the directionality of galvanotaxis in human keratinocytes.</a> J Cell Sci. 126 (9), 1942-1951 (2013).</li>
<li>Zhao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+signals+control+wound+healing+through+phosphatidylinositol-3-OH+kinase-gamma+and+PTEN%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Electrical signals control wound healing through phosphatidylinositol-3-OH kinase-gamma and PTEN.</a> Nature. 442 (7101), 457-460 (2006).</li>
<li>Shanley, L. J., Walczysko, P., Bain, M., MacEwan, D. J., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influx+of+extracellular+Ca2%2B+is+necessary+for+electrotaxis+in+Dictyostelium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Influx of extracellular Ca2+ is necessary for electrotaxis in Dictyostelium.</a> J Cell Sci. 119 (22), 4741-4748 (2006).</li>
<li>Zhao, M., Agius-Fernandez, A., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+migration+of+corneal+epithelial+sheets+in+physiological+electric+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Directed migration of corneal epithelial sheets in physiological electric fields.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 37 (13), 2548-2558 (1996).</li>
<li>Peng, H. B., Jaffe, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization+of+fucoid+eggs+by+steady+electrical+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Polarization of fucoid eggs by steady electrical fields.</a> Dev Biol. 53 (2), 277-284 (1976).</li>
<li>Lee, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+adult+human+prostatic+epithelial-cells+immortalized+by+polybrene-induced+DNA+transfection+with+a+plasmid+containing+an+origin-defective+sv40-genome%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Characterization of adult human prostatic epithelial-cells immortalized by polybrene-induced DNA transfection with a plasmid containing an origin-defective sv40-genome.</a> Int J Oncol. 4 (4), 821-830 (1994).</li>
<li>Berthon, P., Cussenot, O., Hopwood, L., Leduc, A., Maitland, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+expression+of+sv40+in+normal+human+prostatic+epithelial+and+fibroblastic+cells+-+differentiation+pattern+of+non-tumorigenic+cell-lines%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Oncol%22%5BJournal%5D)">Functional expression of sv40 in normal human prostatic epithelial and fibroblastic cells - differentiation pattern of non-tumorigenic cell-lines.</a> Int J Oncol. 6 (2), 333-343 (1995).</li>
<li>Aurich-Costa, J., Vannier, A., Grégoire, E., Nowak, F., Cherif, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IPM-FISH%2C+a+new+M-FISH+approach+using+IRS-PCR+painting+probes%3A+application+to+the+analysis+of+seven+human+prostate+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Chromosomes+Cancer%22%5BJournal%5D)">IPM-FISH, a new M-FISH approach using IRS-PCR painting probes: application to the analysis of seven human prostate cell lines.</a> Genes Chromosomes Cancer. 30 (2), 143-160 (2001).</li>
<li>Tyson, D. R., Inokuchi, J., Tsunoda, T., Lau, A., Ornstein, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+requirements+of+prostatic+epithelial+cell+lines+for+acinar+morphogenesis+and+lumen+formation+in+vitro%3A+role+of+extracellular+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Culture requirements of prostatic epithelial cell lines for acinar morphogenesis and lumen formation in vitro: role of extracellular calcium.</a> Prostate. 67 (15), 1601-1613 (2007).</li>
<li>Lang, S. H., Sharrard, R. M., Stark, M., Villette, J. M., Maitland, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+epithelial+cell+lines+form+spheroids+with+evidence+of+glandular+differentiation+in+three-dimensional+Matrigel+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Prostate epithelial cell lines form spheroids with evidence of glandular differentiation in three-dimensional Matrigel cultures.</a> Br J Cancer. 85 (4), 590-599 (2001).</li>
<li>Babona-Pilipos, R., Popovic, M. R., Morshead, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+galvanotaxis+assay+for+analysis+of+neural+precursor+cell+migration+kinetics+in+an+externally+applied+direct+current+electric+field%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A galvanotaxis assay for analysis of neural precursor cell migration kinetics in an externally applied direct current electric field.</a> J Vis Exp. (68), (2012).</li>
<li>Meng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electric+field-controlled+directed+migration+of+neural+progenitor+cells+in+2D+and+3D+environments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Electric field-controlled directed migration of neural progenitor cells in 2D and 3D environments.</a> J Vis Exp. (60), (2012).</li>
<li>Pullar, C. E., Isseroff, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+AMP+mediates+keratinocyte+directional+migration+in+an+electric+field%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Cyclic AMP mediates keratinocyte directional migration in an electric field.</a> J Cell Sci. 118 (9), 2023-2034 (2005).</li>
<li>Sheridan, D. M., Isseroff, R. R., Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imposition+of+a+physiologic+DC+electric+field+alters+the+migratory+response+of+human+keratinocytes+on+extracellular+matrix+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Imposition of a physiologic DC electric field alters the migratory response of human keratinocytes on extracellular matrix molecules.</a> J Invest Dermatol. 106 (4), 642-646 (1996).</li>
<li>Feng, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guided+migration+of+neural+stem+cells+derived+from+human+embryonic+stem+cells+by+an+electric+field%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Guided migration of neural stem cells derived from human embryonic stem cells by an electric field.</a> Stem Cells. 30 (2), 349-355 (2012).</li>
<li>Mukerjee, E. V., Isseroff, R. R., Nuccitelli, R., Collins, S. D., Smith, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microneedle+array+for+measuring+wound+generated+electric+fields%5BTitle%5D)+AND+%22Conf+Proc+IEEE+Eng+Med+Biol+Soc%22%5BJournal%5D)">Microneedle array for measuring wound generated electric fields.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 1, 4326-4328 (2006).</li>
<li>Nuccitelli, R., Nuccitelli, P., Li, C., Narsing, S., Pariser, D. M., Lui, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+electric+field+near+human+skin+wounds+declines+with+age+and+provides+a+noninvasive+indicator+of+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Rep.+and+Reg%22%5BJournal%5D)">The electric field near human skin wounds declines with age and provides a noninvasive indicator of wound healing.</a> Wound Rep. and Reg. 19, 645-655 (2011).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bir hücrenin galvanotaksis tepki analizi pek çok hücresel göçmen veya büyüme için önemli bir fonksiyonel gösterge 27, 28 süreçleri olmuştur. Burada iki prostat hücre hatları film cam yüzeyi ile bir ısmarlama odasına kullanın. Bu hücre hatları galvanotaksis farklı derecelerde gösterdi, ve hücre içi lokalizasyonu veya galvanotaksis-sağlayan proteinlerin aktivasyonu galvanotaksis karşılık olarak gözlenen farkın neden ölümsüz hücre sıraları oluşturma işlemi sırasında müdahale olabilir düşünmekteyiz. <p class=...

Endojen elektrik alanlar, cilt 1, 32, 33 ve beyin 2 gibi çeşitli dokularda, tespit edilir. fizyolojik elektrik alanı nöron 5, 6 büyümesinin yol ve epitelyal kornea yara kapanması 1, 7 teşvik yönlendiren embriyo gelişimi 3, 4 de dahil olmak üzere, belirli bir biyolojik fonksiyonları yerine getirir,. in vitro kültürlenmiş hücrelere doğru akım elektrik alanı uygulanması taklit fizyolojik elektrik alanı ve yön hücre göçü, ya da galvanotaksis uyarmaktadır. Galvanotaksis, neuroblasts 2, ve nöronal progenitör hücreleri 14, fibroblastlar 8, balık keratinositler 9, insan epitel ve kornea keratinositler 10-12 okudu 13 lenfosit olmuştur. (-) Kutbuna uygulamalı alana maruz kaldığında, incelenen hücrelerin çoğunluğu katot doğru yönde göç. Bununla birlikte, yüksek düzeyde metastatik dahil olmak üzere çeşitli kanser hücreleri,insan göğüs kanseri hücreleri ve insan prostat kanseri hücre kuşağı PC-3M, anodal (+) kutup 15, 16 hareket eder. Çeşitli mekanizmalar galvanotaksis aracılık aktivasyonu da dahil olmak üzere elektrik alanını duymak üzere hücrelerin yeteneği, açıklamak için öne sürülen EGF 12 reseptörleri olan, epitel sodyum kanalı 17, PI3K ve PTEN 18, ve kalsiyum serbest mekanizması henüz tam olarak anlaşılamamıştır. 15, 19 iyonların ve birden çok sinyal yollarının galvanotaksis katılan mümkündür. Burada ortaya 2 boyutlu galvanotaksis yöntemi yapışık, hareketli hücrelerin belli bir yönde geçişini tanımlamak için, ya da 18, 20. Bu teknik, değiştirilmiş olan birleşik hücre tabakasının bireysel hücre göçü 10, 12, 17 ya da göç izlemek için yararlıdır Peng ve Jaffe 21, ve Nishimura ve ark. ısmarlama, açık PVC odaları ile 10, çıkarılabilir coversl ileIPS gibi bağışıklık floresan görüntüleme gibi ikincil analizi için galvanotaksis, sonra kolayca hücre alımı için izin. galvanotaksis odaları cam yüzeyi yüksek büyütmede ve floresan etiketli hücreleri ile filme sağlayan, optik-uyumludur. Aynı zamanda, bu tür bir yüzey kaplaması veya masraf değiştirilmesi gibi, cam yüzeyin modifikasyonu ile deney tasarımı sağlar. No: 1 coverglass yapılmış Aralayıcılar hücreleri üzerinde mevcut akışını en aza indirmek için odalar içinde kullanılır; Bu nedenle akım karesiyle orantılıdır joule ısıtma, deney sırasında hücreler aşırı ısınmasına olmaz. bağlayan köprüler Agar hücreleri ile elektrotların direkt temasını önlemek ve galvanotaksis sırasında ortam pH veya iyon konsantrasyonunun değişimi önlemek. İki olmayan insan prostat kanser oluşturucu hücre çizgileri bu çalışmada kullanılan galvanotaksis yanıtı için incelenmiştir. prns-1-1 22 ve PNT2 23 hem SV4 olanBüyüme faktörüne bağlı hücre çizgileri, prostat spesifik antijeni (PSA) düşük ya da hiç bir ifade ile 5, 8, 18 ve 19 sitokeratin epitel işaretlerini ifade 0-ölümsüzleştirilmiş. Her iki hücre dizisi normal epitel hücreleri çokgen morfolojisini muhafaza ama kromozom anormalliği karar verildi.İşlemi 22, 24 gözlendi. Prns-1-1 ve PNT2 çoğu deneyde içindeki davranışları paylaşmalarına rağmen bunlar asinar yapısının oluşumu ve farklılıkları gösteriyor galvanotaksis. 3-boyutlu matrisi üzerinde Matrigel, prns-1-1 hücreleri, normal prostat bezi dokusu 25 benzeyen lümen içi boş asinar yapılar oluştururlar. Bununla birlikte, PNT2 hücreleri lümen veya polarize epitel 26 olmadan katı küreler oluşturma. prns-1-1 hücreler de bu çalışmada PNT2 daha yüksek bir galvanotactic tepki göstermektedir. Listesi asinar yapısının oluşumu ve galvanotaksis arasındaki korelasyon prns-1-1 galvanotactic sinyalleri pr organize edilmesinde rol oynayabileceğini öneriyorostate bezi dokusu endojen elektrik alanlarına tepki olarak hareket ve bu 2 hücre hatları arasında ayrım yapmak için daha fazla özelliklerini içerir.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Cells</strong</td></tr><tr><td>>pRNS-1-1 prostat hücreleri</td><td></td><td></td><td>Lee, et al. (1994)</td></tr><tr><td>PNT2 prostat hücreleri</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>95012613-1VL</td><td>Berthon, et al. (1995)</td></tr><tr><td colspan="4">Medium and solutions</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>11875-093</td><td>37 °C'ye kadar ısınma; Fetal</td></tr><tr><td>Sığır Serumu</td> kullanmadan önce C - Premium <td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td>PBS'de %10, 37 ° C'ye kadar ısıtın; C kullanmadan önce</td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik (100x)</td><td>Life Technologies</td><td>15240</td>, <td>500 ml ortama 5 ml</td></tr><tr><td>ekleyin 2-propanol</td><td>VWR</td><td>BDH1133-5GL</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td> <td>-</td><td></td> <td>137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 4.3 mM Na2HPO4 ve 1.000 ml H içinde KH2PO 4 1.000 ml H 2 O, pH 7.4'e kadar ve otoklavlanmış, 37 °C'ye kadar ısıtın; C kullanmadan önce</td></tr><tr><td>% 0.25 Tripsin-EDTA&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>25200-056</td><td>37 °C'ye kadar ısınma; C kullanmadan önce, hücreleri 37 ° C'de 3-5 dakika tedavi edin; C</td></tr><tr><td colspan="4"><güçlü>Galvanotoksi cihazı</güçlü></td></tr><tr><td>Galvanotoksi odaları</td><td>Precision Plastics Inc, CA</td><td></td><td>Özel tasarım (1/4" x 2" x 3.5"), toksik olmayan, şeffaf PVC odalar. Tasarım özellikleri için lütfen yazarlarla iletişime geçin.</td></tr><tr><td>Galvanotaksis elektrotları</td><td>UCD elektrik dükkanı</td><td></td><td>esnek kordonlu platin sarmal elektrotlar</td></tr><tr><td>Galvanotaxis güç kutusu</td><td>Yüzey Mühendisliği, CA</td><td></td><td>voltmetre ile özel tasarlanmış DC güç çıkışı</td></tr><tr><td>Mikroskop Kapak Camı, Büyük, 45 x 50 mm, No. 1.5</td><td>Fisher</td><td>12-544-F</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Kapak Camı, küçük, 25 x 25 mm, No. 1</td><td>ThermoScientific</td><td>3307</td><td></td></tr><tr><td>Elmas nokta işaretleyici</td><td>ThermoScientific</td><td>750</td><td></td></tr><tr><td>Denizcilik sınıfı silikon sızdırmazlık maddesi, şeffaf</td><td>3M</td><td>051135-08019</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek vakumlu gres</td><td>Dow Corning</td><td>2021846-0807</td><td></td></tr><tr><td>6 ml şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-561-64</td><td></td></tr><tr><td>Nichiryo Şırınga, 1.5 ml</td><td>Nichiryo</td><td>SG-M</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk aplikatörleri</td><td>Purtian Medikal Ürünler</td><td>806-WC</td><td></td></tr><tr><td>Qtips</td><td>Johnson & Johnson</td><td>729389</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene 180 PVC boru&nbsp;</td><td>Nalgene</td><td>8000-9030</td><td>503/16 Kimlik x 5/16 OD x 1/16 Duvar</td></tr><tr><td>Bacto-Agar</td><td>Difco</td><td>0140-01</td>% <td>2 agar çözeltisi yapın</td></tr><tr><td>Tıraş Bıçağı</td><td>Personna</td><td>74-0001</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Ekipmanlar ve Yazılım</td></tr><tr><td>Tezgah Üstü Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5810R</td>, <td>A-4-62 rotorlu</td></tr><tr><td>Cellometer Auto T4</td><td>Nexcelom ile çalıştırılır</td><td>Otomatik T4</td><td></td></tr><tr><td>Hücreölçer sayma odaları</td><td>Nexcelom</td><td>CHT4-SD100-002</td><td>yük 20 & # 956; </td></tr><tr>Galvanotoksis odalarını 37 °C'de tutmak için<td>Kültür Sıcaklığı Isıtma plakası</td><td>Bel-Art Scienceware</td><td>370150000'i</td> saymak için l hücre çözümleri<td>; C&nbsp;</td></tr><tr><td>Eclipse TE-2000 mikroskobu, motorlu tabla ve çevre haznesi ile</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plan Fluor 10X/0.30 objektif len</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Retiga EX CCD fotoğraf makinesi&nbsp;</td><td>Qimaging</td><td></td><td>Soğutmalı CCD camara, tek renkli, 12-bit</td></tr><tr><td>Basınçlı hava, %5 CO2</td><td>Airgas</td><td></td><td>özel sipariş</td></tr><tr><td>Volocity 6.3</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Image edinme yazılımı</td></tr><tr><td>Improvision OpenLab 5.5.2</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td>Cell izleme yazılımı ve migrasyon açılarını ölçmek için özelleştirilmiş</td></tr><tr><td>FileMaker Pro Advanced, 8.0</td><td>FileMaker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsoft Excel 2008 Mac için</td><td>Microsoft Microsoft</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

prostat hücrelerinin yönlü göç eğitim için özel tasarlanmış galvanotaksis chambers kullanılması

Utilizing Custom-designed Galvanotaxis Chambers to Study Directional Migration of Prostate Cells

fizyolojik elektrik alan gibi embriyo gelişimi, nöronal akıbet ve epitel yara iyileşmesinde hücre göçü yönetmenlik gibi belirli biyolojik fonksiyonları, hizmet vermektedir. In vitro olarak kültürlenen hücrelere doğru akım elektrik alanı uygulanması yönlü hücre göçü veya galvanotaksis neden olur. Burada ortaya 2 boyutlu galvanotaksis yöntemi ölçüye poli (vinil klorür) (PVC) odaları, cam yüzeyi, platin elektrot ve hücreler, görüntülü edildiği, bir motorlu kaide kullanımı ile modifiye edilir. PVC odaları ve platin elektrotları düşük sitotoksisite gösterirler ve uygun fiyatlı ve yeniden kullanılabilir vardır. Cam yüzeyi ve motorlu mikroskop sahne görüntülerin kalitesini artırmak ve hücrelere cam yüzeyi ve tedavileri mümkün değişikliklere izin. Biz olmayan iki tümörijenik, SV40-ölümsüzleştirdi prostat hücre hatları, prns-1-1 ve PNT2 ve galvanotaksis filme. Bu iki hücre hatları benzer göç hızları göstermek ve hem de doğru göçkatot, ancak galvanotaksis yönelmişlik farklı bir derecede gösteriyor. Bu protokol ile elde edilen sonuçlar prns-1-1 ve PNT2 hücre hatları kendi yönlü göç yanıtları yöneten farklı içsel özelliklere sahip olabileceğini düşündürmektedir.

Prostat hücreleri (prns-1-1 ve PNT2) iki satır, bu yöntemle araştırılmıştır. Her iki hatta hücreler 2 saate (Şekil 5A) boyunca 1.0 +/- 0.3 mikron / dakika arasında benzer hızlarda göç ederler. Bununla birlikte, elektrik alanına yön prns-1-1 hattı için 0.7 +/- 0.3 ve PNT2 hattı (Şekil 5B) 0.2 +/- 0.8. Sonuçlar, pozisyonel ipuçları farklı yön yanıtlarına neden farklı hücresel sinyal mekanizmalarına sahip olduğunu düşündüren, (100 hücre izlendi p &lt;0.01), bu iki hücre hatları galvanotaks...

Özel yapım bir galvanotoksis odasında göç eden, ölümsüzleştirilmiş prostat hücrelerine fizyolojik bir elektrik alanı uygulamak için bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntemi kullanarak, 2 sıra tümörjenik olmayan prostat hücresinin sahada farklı derecelerde göç yönlülüğü gösterdiğini gösteriyoruz.

Prostat Hücrelerinin Yönlü Göç Eğitim için özel tasarlanmış galvanotaksis Chambers kullanılması

The physiological electric field serves specific biological functions, such as directing cell migration in embryo development, neuronal outgrowth and ...

Bu prosedürün genel amacı, uygulanan bir elektrik alanındaki hücrelerin yönlü göçünü değerlendirmek için bir tahlil olan Galvan Axxis'i gerçekleştirmektir. Bu, önce bir Galvan axxis odasının birleştirilmesi ve ardından ilgilenilen hücrelerle tohumlanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, hazne kapatılır ve hızlandırılmış görüntüleme için bir elektrik alanı uygulanır.Son adımda, tek tek hücrelerin göç hızı ve elektrik alanına göre açı izlenir. Sonuçta istifa etmek. Hücrelerin elektrik alanına nasıl tepki verdiğini ve katoda yönlü olarak göç edip etmediklerini göstermek için kullanılabilir.Bu tekniğin ana avantajı, ikincil analiz için Texas verildikten sonra kolay hücre alımı ve göçün yüksek büyütmede ve floresan etiketli hücrelerle filme alınabilme kolaylığıdır. Bu yöntemin görselleştirilmesi kritik öneme sahiptir, çünkü bir oda montaj adımlarının gösteri olmadan öğrenilmesi zordur: Alt odaları monte etmek için. Plastik bir galvan axxis haznesini iki propanol ile silerek başlayın.Ardından, haznenin alt tarafındaki dairesel açıklıkların etrafına deniz sınıfı silikon sızdırmazlık maddesi uygulamak için bir şırınga kullanın. Sızdırmazlık maddesinin üzerine büyük bir kapak camı yerleştirin ve bir pamuk aplikatörünün ucuyla yerine bastırın, fazla yapıştırıcıyı pamuklu çubukla silin. Ardından, altı x 25 milimetre boşluk bırakmak için küçük bir kapak camını kesmek için bir elmas nokta işaretleyici kullanın ve hazneyi ters çevirin.Daha sonra, iki şerit silikon uygulamak için bir şırınga kullanın ve alt camdaki iki dairesel açıklık arasında hücre bağlantısı için 10 x 25 milimetrelik bir kanal yüzeyi oluşturun. Daha sonra dairesel açıklıklar arasına iki cam boşluk yapıştırın, boşlukları yeni bir pamuklu aplikatör ile aşağı doğru itin ve az önce gösterildiği gibi fazla yapıştırıcıyı silin. Silikon yapıştırıcı sertleşene kadar hazneyi 24 saat deneyin.Ertesi gün, hücreleri hazneye ekmeden önce asetik asit kalıntısını yapıştırıcıdan çıkarmak için hazneyi gece boyunca damıtılmış suya batırın. Odaları az önce gösterildiği gibi iki propanol ile kurulayın ve silin. Bunları steril PB S3 ile defalarca yıkayın ve ardından haznelerdeki iki dairesel açıklık arasındaki sıvı akışını kontrol edin.Odaların iyi çalışır durumda olduğunu onayladıktan sonra, steril kültür kaplarına koyun ve odaları 15 dakika boyunca 37 santigrat dereceye yerleştirin. Odalar dengelenirken, prostat hücrelerini 37 santigrat derecede beş mililitre tripsin EDTA ile kültür kabından ayırın. Beş dakika sonra, reaksiyonu beş mililitre% 10 FBS ile nötralize edin.PBS'de, ayrılan hücreleri 15 mililitrelik tüplere aktarın ve ardından beş dakika boyunca santrifüjleyin. 200 kez, G, ortamı aspire edin ve ardından peleti bir mililitre ortamda yeniden süspanse edin. Daha sonra hücreleri saydıktan sonra, hücre konsantrasyonunu kültür ortamı ve tohum ile mililitrede sekiz ila 10 ila dört hücreye ayarlayın.Her odaya 350 mikrolitre hücre süspansiyonu. Odadaki hücreleri, 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte ıslak bir Kim mendili ile bir kültür kabında gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, önce her bir galvaniz AXS odası için orta ila 37 santigrat derece olan 10 mililitre kültürü ısıtarak üst odaların montajına başlayın.Ortam ısınırken, bir Galvan axxis odasını inkübatörden 37 santigrat derecelik bir ısıtma plakasına aktarın ve odayı kültür ortamı ile durulayın. Bağlanmamış hücreleri çıkarmak için, haznede 400 mikrolitre ortam bırakın ve ardından her iki cam boşluğun üzerine yüksek vakumlu gres uygulamak için bir şırınga kullanın. Hazneyi bir kapak camı ve pamuklu bir aplikatör ile kapatın ve ardından cam yüzeyi kurutun.Ardından, kapak camı ile hazne arasındaki boşluğu kapatmak için yüksek vakumlu gresi bir şırınga ile uygulayın. Ve sonra kültür ortamını iç rezervuarlara ekleyin. Kabarcıkları çıkarın ve rezervuarlar arasındaki sıvı akışını kontrol edin.Agar köprülerinin bir çift iki inçlik PVC tüpleri kesmesini sağlamak için, çevirin ve ardından parçaları 100 mililitrelik bir behere yerleştirin. Daha sonra,% 2 agar jeli yapmak için 10 mililitre kültür ortamı ile 50 mililitrelik bir şişeye 200 miligram bact toe agar ekleyin. 30 saniye mikrodalgada pişirdikten sonra, agar jelini plastik boruya yüklemek için bir transfer pipeti kullanın ve agar köprülerini katılaşmak için 10 dakika oda sıcaklığında bırakın.Daha sonra, gal odasının dış rezervuarlarına iki mililitre kültür ortamı ekleyin ve göçün hızlandırılmış görüntülemesini gerçekleştirmek için akımı iletmek için agar köprülerini iç ve dış ortam rezervuarlarına yerleştirin. Galvan odasını mikroskop sahnesinde 37 santigrat derecelik bir çevre odasına aktararak, odayı bantla sabitleyerek ve 10 x objektif altındaki hücrelere odaklanarak başlayın. Ardından, Galvan Axxis elektrotlarını katot sağ tarafta olacak şekilde dış rezervuarlara yerleştirin, teli ve elektrotları bantla sabitleyin.Ardından, odaya bir elektrik alanı uygulamak için güç kutusunu açın ve 25 milimetre uzunluğundaki oda için 2,5 volta ulaşmak için odadaki çıkış voltajını ölçmek için bir voltaj ölçer kullanın. Şimdi 10 zaman atlamalı film oluşturmak için hazne boyunca 10 nokta seçin ve çekim koşullarını iki saat boyunca 10 dakikalık aralıklarla ayarlayın. Ardından çekime başlayın ve deney sırasında alan gücünü korumak için çıkış akımını gerektiği gibi ayarlayın.Deneyin sonunda, odayı sahneden çıkarın ve hücreleri% 95 alkolle sabitleyin. Sonra odayı kırarak açın. Kapak fişi daha sonra kullanılmak üzere kaydedilebilir.Boyama ve görüntüleme. Gelecek yıllar için hazneyi temizleyin. Galvan Axxis'i ölçmek için, katodu görüntülerin en üstüne yönlendirmek için zaman atlamalı filmleri döndürün.Filmleri hücre izleme yazılımına aktarın ve her filmden her zaman noktasında 10 ila 20 hücrenin XY konumunu, göç mesafelerini ve kuzey güney yönüne göre açıları manuel olarak izleyin, elektrik alanının aynı yönü hücre izleme yazılımında hesaplanacaktır. Son olarak, ölçümleri kaydedin ve birleştirilmiş sonuçları hesaplamak için verileri bir veritabanı uygulamasına aktarın. Bu temsili Galvan Axxis deneyinde, prostat hücrelerinin dizilerinin iki saat boyunca benzer hızlarda göç ettiği belirlendi.Bununla birlikte, elektrik alanına yönlülük, PRNS bir hat için 0.7 artı eksi 0.3 ve PNT iki hat için 0.2 artı eksi 0.8 idi, bu da bu iki hücre hattının Galvan ekseninde önemli bir fark olduğunu gösteriyor, hücresel sinyalizasyon mekanizmalarının Govan Texas yönteminin geliştirilmesinden sonra elektrik alanına doğrudan diferansiyel göç tepkilerini gösteriyor. Bu teknik, araştırmacıların elektro alandaki yönlü hücre göçünün mekanizmalarını keşfetmelerine yardımcı olur.

utilizing-custom-designed-galvanotaxis-chambers-to-study-directional

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

3D doku kültürü Zaman atlamalı görüntüleme, serebral korteks fraksiyone protein ayıklamak için tepki olarak ganglion eminens kaynaklanan bireysel hücrelerinin göç davranışı eğitim sağlar.

Gangliyonik Eminence Kültürler oluşturuldu Hücre Göçmen Davranış

Eksplante hücreleri (gövde nöral krest hücreleri) göçü analiz etmek bir yaklaşım tarif edilmiştir. Bu yöntem, pahalı yumuşak, ve bu gibi ana gövde tepe nöral hücre kültürü içinde hücre-hücre etkileşimleri türetilmiş olanlar gibi, göç polarite hem chemokinesis ve diğer etkilerden kemotaksisi ayrım yapabilmektedir.

Bir Modifiye Zigmond Odası Testi kullanılarak Trunk Sinir Crest Hücre Göç Analizi

ECIS / Taksiler sistemi hücresel kemotaksis ölçer otomatik, gerçek zamanlı bir testtir. Bu deneyde, bir hedef hücreler elektrot varmak için agaroz bir katmanı altındaki hareket eder. Hücresel hareketi AC akım 0 direnç başlangıcı ile ölçülür.

ECIS / Taksiler ile Hücresel Kemotaksis Ölçümü

Bu protokolü biz galvanotaksis sırasında nöral prekürsör hücre translokasyon edilen erişkin beyninin time-lapse görüntüleme sağlamak için bir doğru akım elektrik alanın uygulanmasına izin özel odaları oluşturmak nasıl gösterilmektedir.

Dıştan Uygulanan Doğru Akım Elektrik Alanında Nöral Prekürsör Hücre Göç Kinetik Analizi için galvanotaksis Assay

Tek boyutlu bir kapalı mikro hücrelerin spontan göç incelemek için nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu yöntem, mikrofabrike kanalları yararlanır ve tek bir deneyde, farklı koşullar altında hücrelerin büyük sayıda göçünü incelemek için kullanılabilir.

Microfabricated Kanallar Hücre Göç Çalışması

Hücre göçü, insan gelişiminin ve yaşamının önemli bir parçasıdır. Hücre göçünü değiştirebilecek mekanizmaları anlamak için, mevcut tahlillerin modern difüzyon odası sınırlamalarının üstesinden gelmeye izin veren bir 3D kollajen matrisinde kemotaksisi araştırmak için düzlemsel bir gradyan difüzyon sistemi sunuyoruz.

Planar Gradient Difüzyon Sistemi 3D Kollajen Matrix Kemotaksis Araştırma

Elektrotaksi çalışmasında kullanılmak üzere birçok mikroakışkan cihaz geliştirilmiştir. Yine de, bu çiplerin hiçbiri, hücreler üzerindeki eşzamanlı kimyasal ve elektrik alan (EF) etkilerinin verimli bir şekilde incelenmesine izin vermez. Elektrotaksi araştırmalarında kullanılmak üzere daha iyi kontrol edilen bir arada bulunan EF ve kimyasal stimülasyon sunan polimetilmetakrilat bazlı bir cihaz geliştirdik.

Bir Çok Kanallı Çift elektrik alan mikroakışkan Chip kullanarak Akciğer Kanseri Hücreleri Electrotaxis Çalışmaları

Görsel kemotaksis deneyleri kemoatraktan aracılı yönlü hücre göçü nasıl kontrol ökaryotik hücreler daha iyi anlaşılması için gereklidir. 1) Gerçek zamanlı, çoklu kemotaksis deneyleri yüksek çözünürlüklü izleme ve 2) aynı anda kemoatraktan degrade görselleştirmek ve nötrofil gibi HL60 hücrelerinde sinyal olaylarının zamanmekansal dinamiği: Burada ayrıntılı yöntemler açıklanmaktadır.

Görüntüleme G Nötrofil gibi HL60 Hücreleri Kemotaksis ve Sinyal Olaylar Reseptör aracılı Protein-çiftli

Bu protokol, aynı zamanda, bir polimer matrisi üzerinden bir ilacın difüzyon hızını belirlemek için kullanılabilir chemoattractants yanıt olarak hücre göçü ölçmek için özelleştirilebilir yöntemi göstermektedir.

Ölçme Hücre Göç Bir Özelleştirilebilir Odası

Burada, kantitatif geçiş ve zamanla ve birden fazla tedavi koşullar altında işgal glioblastoma Beyin tümör kök hücrelerin ölçmek için canlı hücre görüntüleme teknikleri açıklar.

Canlı hücre görüntüleme deneyleri için çalışma Glioblastoma Beyin tümör kök hücre göç ve işgali

Öğrenin prostat hücrelerinin yönlü göçünü galvanotaksis odası kullanarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik, elektrik alanına yanıt veren hücre davranışlarını kanser araştırmalarında incelemek için kullanılır.

Prostat Hücrelerinin Yönlü Göç Eğitim için özel tasarlanmış galvanotaksis Chambers kullanılması

Daha fazla video keşfet