Name: Görüntü tabanlı Sitometrisi Tekniği Granülosit Fonksiyonu Değişiklikleri değerlendirin İn Vitro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 13 s
Description: Öğrenin görüntü tabanlı akış sitometrisi ile granülosit fonksiyonunu iki parametreli yaklaşımla değerlendirmeyi. Bu yöntem, fagositoz ve oksidatif patlama ölçümüyle aktive granülosit alt kümelerini tanımlamanıza olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen Kuzey Teksas Üniversitesi'nden Dr. McFarlin'e verilen bir Araştırma Başlatma Hibesi (RIG) tarafından finanse edilmiştir. Yazarlar bu çalışmanın tamamlanması için doğrudan fon almamış ve herhangi bir çıkar çatışması bildirmemişlerdir.

NOT: Bu yöntemde açıklanan tüm kan toplama işlemleri Helsinki Bildirgesi çerçevesinde yapılan ve insan denekler için UNT kurumsal inceleme kurulu (KİK) tarafından onaylanmıştır. Tüm denekler, kan normal vücut ağırlığının, görünüşte sağlıklı olmasını sağlamak için, mevcut yöntemde kullanılan toplama, ve hastalık ücretsiz yazılı izin verdi. 1. Reaktif Kaynak &amp; Hazırlık <ol><li> Kullanım CD66b APC (klon # G10F5, DF = 1: 50) ve CD45-APCeFluor780 (klon # 2D1 = 1 DF: 50) Bu deney için. NOT: Bu çalışma öncesinde, CD45 ve CD66b antikorları optimum seyreltme belirlemek için titre edildi diğer lökositler açıkça çözülmesi granülositler (CD45 + / 66b +) (CD45 + / 66b-) 11. Boyama için seyreltilmiş antikorun ilave edilmesi üzerine tüpündeki son seyreltme 875 idi. </li><li> Satınalma ve stok S. çözülme aureus pHrodo kırmızı bir boya ile etiketlenmiştir bioparticles. 1 m'lik bir konsantrasyonda askıya almasteril PBS içerisinde ml başına bioparticles g. Deneyde kullanılıncaya kadar kısım seyreltilmiş bioparticles ve mağaza -20 ° C'de donduruldu. </li><li> Ug / ml, 10 nihai konsantrasyona kadar DMSO içinde, oksijen serbest radikal (örneğin, oksidatif patlama) mevcudiyetinde floresan etidyum bromite dönüştürülür dihydroethidium (DHE'nin) içinde çözülür. </li><li> 200 mg / ml / ml 17.5 mg 2 adımlı sulandırma içinde steril PBS ile (belirli bir deney kuluçkalama süresi, aşağıdaki ek fagositoz önlemek için kullanılır), N-etilmaleimit karıştırın. Tahlilinde, 15 mM'lik bir son konsantrasyon kullanılır. N-etilmaleimid çözülme sırasında N-etilmaleimid çözeltisi içinde kalmaz gibi, bir 37 ° C ısı bloğu kullanın. </li><li> Son tespit aşamasından sonra, nükleer DNA leke 7AAD kullanın. Önce eklenmesine, steril PBS ile stok 7AAD 01:10 sulandırmak. </li></ol> 2. Kan Numune Toplama <ol><li> Bir O / N hızlı (&gt; 8 saat) ve abstenti aşağıdaki laboratuvarda gelmesi konuları sorfiziksel aktivite (&gt; 12 saat) üzerinde. </li><li> Bir alkol hazırlık pad ile cilt temizlendikten sonra, bir periferik kol damarına bir steril kan toplama iğne takın. </li><li> Ticari sodyum heparin ile doldurulur boşaltılmış tüpler içine kan toplayın. </li><li> Toplandıktan sonra, deneğin koluna bir yapışkan bandaj uygulanır. </li><li> 10 kez karıştırın ve daha sonra analize kadar bir rocker yerleştirmek için kan tüpleri ters çevirin. </li></ol> 3. fagositoz Analiz tekniği <ol><li> Çözülme S. aureus bioparticles (RT) DHE'nin (RT) ve N-etilmaleimit (37 ° C). </li><li> Steril kaput çalışırken 4 ayrı 1.2 ml tüplere S.aureus bioparticles 20 L ekleyin. </li><li> Bioparticles ihtiva eden her tüpe DHE 40 L ekleyin. </li><li> Yavaşça tüpün dibinde reaktifler toplamak için tezgah yüzeyinde tüpleri dokunun. </li><li> Bioparticles ve DHE dolu olan her bir tüpe karıştırılmış tam kan 100 ilave edin. </li><li>Herhangi bir kirletici kan çıkarmak için pamuklu bir uçlu bir aplikatör ile tüplerin iç kenarını silin. </li><li> Kan ilave edildikten sonra üç çevrim boyunca kan ve reaktifleri karıştırmak için ayarlanmış bir elektronik pipetiyle kan ve reaktifler karıştırılır. </li><li> Bir buz kovası tahlil tüplerini yerleştirin ve ışıktan korumak için kapak. </li><li> 10, 20 ve 40 dakika için deney tüpleri inkübe edin. Tüm deney tüpleri aynı anda bitirmek sağlamak için 40 dk tüp ile başlayın. </li><li> Çözülme N-etilmaleimid 37 ° C boncuk banyosunda. </li><li> Pipet her tahlil tüpüne (1.4 olarak yukarıda tarif edilmiştir), N-etilmaleimit 15 uL, 30 dakika inkübe edilir. </li><li> Pipet CD66b-APC 10 L ve CD45-APCeFluor780 (1,1 yukarıda tarif edilen) ile seyreltildi antikorlar, 10 uL, 60 dakika inkübe edilir. </li><li> Pipet, her tahlil tüpü içine lökosit düzeltme / eritrosit lize çözeltisi 750 uL, 60 dakika inkübe edilir. </li><li> Santrifüj tahlil tüpleri (400 xg de 10 dakika) hücre pelet toplamak için. </li><li> Vakum bir kalıntı fl bırakarak, WBC lize / RBC düzeltme çözümü aspirehücre peleti üzerinde kimliği hacmi (100 uL). </li><li> Seyreltilmiş 7AAD (1,5 yukarıda tarif edilmiştir) çözeltisi, her deney tüpüne PBS içinde 50 L pipetleyin 10 L'dir. </li><li> Buzdolabında bir folyo deney tüpleri, sarma borular kalibrasyon boncuk (~ 25 L) içinde her tahlil tüpüne yer kapaklar damla ve yer ekleyin. </li><li> Sitometrede görüntü tabanlı akışına örnek tüp yükleyin ve önceden tanımlanmış parametreler kullanılarak 3.000 granülosit olayların en az toplamak: Otonumuneleyici, mavi (488 nm; 60 mW), kırmızı (640 nm; 100 nW), SSC (785 nm; 8.5 mW) lazerler (Şekil 1). </li></ol><img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/52201/52201fig1highres.jpg"> Şekil 1. Toplama Yöntemi ve Şablon. Örnekler (A) sitometrede bir görüntü tabanlı akış elde edildi. Iktisap sırasında, CD66b-APC vs Parlak Alan Aspect Ratio dot araziler istimal çivili kalibrasyon boncuk ayrılmış granülositlere üretildig INSPIRE v. 100.2.292.0 yazılım (B). Kırmızı, (640 nm; 100 nW), SSC (785 nm; 8.5 mW) lazerler; 5.000 granülosit az mavi bir otomatikörnekleyici'den (60 mW 488 nm) kullanarak her numuneler için elde edildi. Histogramlar bir dizi lazer ayarları ve diğer veri toplamak yönlerini izlemek için satın alma sırasında mevcut olduğunu unutmayınız. Bu histogram tüm isteğe bağlı ve laboratuar standart işletim prosedürleri kalite kontrolü gibi onları gerektiriyorsa, sadece ihtiyaç vardır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52201/52201fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> 4. Numune Toplama ve Analiz <ol><li> Görüntülü dosyaları telafi (CIF) ham görüntü dosyaları (RIF) bir tazminat matris uygulamak ve oluşturmak için FİKİRLER yazılım otomatik yazılım tazminat sihirbazını kullanın. </li><li> FİKİRLER yazılım bireysel CIF dosyaları yükleyin ve granülosit alt kümeleri tanımlamak için aşağıdaki araziler oluşturmak: </li> Parlak bir alan degrade RMS (Şekil 2A) için bir histogram kullanarak odak olarak kabul edildi hücreleri belirlemek için ilk kapıları oluşturulması. Bir referans standart olarak uyarılmamış kontrol kullanılarak Her bir hasta örneği için, bu tayini yapmak. <li> Vs parlak bir alan bölgede (Şekil 2B) parlak bir alan boy oranı (genişlik vs hücre yüksekliği oranı) bir nokta arsa kullanarak enkaz ve ikili ayrı gömleğin hücrelere ikincil araziler kullanın. Bir referans standart olarak uyarılmamış kontrol kullanılarak Her bir hasta örneği için, bu tayini yapmak. </li><li> Hücrelerin temiz bir nüfus tespit edildiğini bir kez, olumlu (CD45 + / 66b +) granülositleri tanımlamak için CD66b vs CD45 (Şekil 2C) bir nokta arsa kurmak. S. parlak detay yoğunluğu bir kızı arsa (Şekil 3) oluştur aureus vs oksidatif patlama (DHE'nin, y-ekseni) için parlak detay yoğunluğu (x ekseni) devreye granülosit alt kümelerini belirlemek için. Br toplayınKanal 1 ve 9 ight alan görüntüleri, Kanal 2 bioparticles, DHE Channel 4, 7AAD Kanal 5, CD66b Kanal 11, ve CD45 yılında Kanal 12. </li></ol><img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52201/52201fig2highres.jpg"> Şekil 2. Analiz Şablon. Bu rakam, odaklama (A) 'da olduğu hücreleri tanımlamak için oluşturulan parsellerin dizi, tek hücreler (B), granülositler (° C). Ek araziler aktive granülositler vs inaktif granülosit üç alt kümelerini belirlemek için kullanılmıştır. Elde edilen görüntü dosyalarının tüm analiz FİKİRLER v.6 yazılımı kullanılarak tamamlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52201/52201fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

<ol><li>Kong, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+alpha-fetoprotein+on+the+activation+and+phagocytosis+of+granulocytes+and+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatogastroenterology%22%5BJournal%5D)">The effect of alpha-fetoprotein on the activation and phagocytosis of granulocytes and monocytes.</a> Hepatogastroenterology. 59, 2385-2388 (2012).</li>
<li>Prakash, P. S., Caldwell, C. C., Lentsch, A. B., Pritts, T. A., Robinson, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microparticles+generated+during+sepsis+in+patients+with+critical+illness+are+neutrophil-derived+and+modulate+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Trauma+Acute+Care+Surg%22%5BJournal%5D)">Human microparticles generated during sepsis in patients with critical illness are neutrophil-derived and modulate the immune response.</a> J. Trauma Acute Care Surg. 73, 401-406 (2012).</li>
<li>Salih, H. R., Husfeld, L., Adam, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+cytofluorometric+measurement+of+phagocytosis%2C+burst+production+and+killing+of+human+phagocytes+using+Candida+albicans+and+Staphylococcus+aureus+as+target+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Infect%22%5BJournal%5D)">Simultaneous cytofluorometric measurement of phagocytosis, burst production and killing of human phagocytes using Candida albicans and Staphylococcus aureus as target organisms.</a> Clin. Microbiol. Infect. 6, 251-258 (2000).</li>
<li>Tsuji, S., Iharada, A., Taniuchi, S., Hasui, M., Kaneko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+production+of+nitric+oxide+by+phagocytic+stimulated+neutrophils+in+patients+with+chronic+granulomatous+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Hematol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Increased production of nitric oxide by phagocytic stimulated neutrophils in patients with chronic granulomatous disease.</a> J. Pediatr. Hematol. Oncol. 34, 500-502 (2012).</li>
<li>Ortyn, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitivity+measurement+and+compensation+in+spectral+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Sensitivity measurement and compensation in spectral imaging.</a> Cytometry A. 69, 852-862 (2006).</li>
<li>McFarlin, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one-year+school-based+diet%2Fexercise+intervention+improves+non-traditional+disease+biomarkers+in+Mexican-American+children%5BTitle%5D)+AND+%22Matern.+Child+Nutr%22%5BJournal%5D)">A one-year school-based diet/exercise intervention improves non-traditional disease biomarkers in Mexican-American children.</a> Matern. Child Nutr. 9, 524-532 (2013).</li>
<li>McFarlin, B. K., Johnson, C. A., Moreno, J. P., Foreyt, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mexican-American+Children+have+differential+elevation+of+Metabolic+Biomarkers+that+is+proportional+to+Obesity+Status%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Gastroenterol.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Mexican-American Children have differential elevation of Metabolic Biomarkers that is proportional to Obesity Status.</a> J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. , (2013).</li>
<li>Strohacker, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moderate-intensity%2C+premeal+cycling+blunts+postprandial+increases+in+monocyte+cell+surface+CD18+and+CD11a+and+endothelial+microparticles+following+a+high-fat+meal+in+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Physiol.+Nutr.+Metab%22%5BJournal%5D)">Moderate-intensity, premeal cycling blunts postprandial increases in monocyte cell surface CD18 and CD11a and endothelial microparticles following a high-fat meal in young adults.</a> Appl. Physiol. Nutr. Metab. 37, 530-539 (2012).</li>
<li>Carpenter, K. C., Breslin, W. L., Davidson, T., Adams, A., McFarlin, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baker%27s+yeast+beta-glucan+supplementation+increases+monocytes+and+cytokines+post-exercise%3A+implications+for+infection+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Baker's yeast beta-glucan supplementation increases monocytes and cytokines post-exercise: implications for infection risk.</a> Br. J. Nutr. , 1-9 (2012).</li>
<li>McFarlin, B. K., Williams, R. R., Venable, A. S., Dwyer, K. C., Haviland, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+cytometry+reveals+three+distinct+subsets+of+activated+granulocytes+based+on+phagocytosis+and+oxidative+burst%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Image-based cytometry reveals three distinct subsets of activated granulocytes based on phagocytosis and oxidative burst.</a> Cytometry A. 83, 745-751 (1002).</li>
<li>McFarlin, B. K., Williams, R. R., Venable, A. S., Dwyer, K. C., Haviland, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+cytometry+reveals+three+distinct+subsets+of+activated+granulocytes+based+on+phagocytosis+and+oxidative+burst%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Image-based cytometry reveals three distinct subsets of activated granulocytes based on phagocytosis and oxidative burst.</a> Cytometry A. 83, 745-751 (2013).</li>
<li>Ichii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+sucrose+impairs+phagocytic+function+and+promotes+apoptosis+in+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Iron sucrose impairs phagocytic function and promotes apoptosis in polymorphonuclear leukocytes.</a> Am J Nephrol. 36, 50-57 (2012).</li>
<li>Ploppa, A., George, T. C., Unertl, K. E., Nohe, B., Durieux, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ImageStream+cytometry+extends+the+analysis+of+phagocytosis+and+oxidative%5BTitle%5D)+AND+%22Scand.+J.+Clin.+Lab.+Invest%22%5BJournal%5D)">ImageStream cytometry extends the analysis of phagocytosis and oxidative.</a> Scand. J. Clin. Lab. Invest. 71, 362-369 (2011).</li>
<li>Van Amersfoort, E. S., Van Strijp, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+flow+cytometric+fluorescence+quenching+assay+of+phagocytosis+of+sensitized+sheep+erythrocytes+by+polymorphonuclear+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a flow cytometric fluorescence quenching assay of phagocytosis of sensitized sheep erythrocytes by polymorphonuclear leukocytes.</a> Cytometry. 17, 294-301 (1994).</li>
<li>Gullstrand, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+of+autoantibodies+against+different+histone+proteins+influences+complement-dependent+phagocytosis+of+necrotic+cell+material+by+polymorphonuclear+leukocytes+in+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Combination of autoantibodies against different histone proteins influences complement-dependent phagocytosis of necrotic cell material by polymorphonuclear leukocytes in systemic lupus erythematosus.</a> J. Rheumatol. 39, 1619-1627 (2012).</li>
<li>Fierro, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+phenotypical+impairment+of+polymorphonuclear+cells+in+atopic+dermatitis%3A+an+additional+cause+for+the+known+susceptibility+to+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Dermatology%22%5BJournal%5D)">Functional and phenotypical impairment of polymorphonuclear cells in atopic dermatitis: an additional cause for the known susceptibility to infections.</a> Dermatology. 224, 323-330 (2012).</li>
<li>Gruger, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+impact+of+linezolid+on+human+neutrophil+functions+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Negative impact of linezolid on human neutrophil functions in vitro.</a> Chemotherapy. 58, 206-211 (2012).</li>
<li>McFarlin, B. K., Venable, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+Low+Concentration+Human+Serum+Cytokines+using+a+Millipore+High-Sensitivity+Milliplex+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Measurement of Low Concentration Human Serum Cytokines using a Millipore High-Sensitivity Milliplex Assay.</a> J. Vis. Exp. , (2014).</li>
<li>McFarlin, B. K., Carpenter, K. C., Davidson, T., McFarlin, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Baker%27s+Yeast+Beta+Glucan+Supplementation+Increases+Salivary+IgA+and+Decreases+Cold%2FFlu+Symptomatic+Days+After+Intense+Exercise%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Diet.+Suppl%22%5BJournal%5D)">Baker's Yeast Beta Glucan Supplementation Increases Salivary IgA and Decreases Cold/Flu Symptomatic Days After Intense Exercise.</a> J. Diet. Suppl. 10, 171-183 (2013).</li>
<li>McFarlin, B. K., Carpenter, K. C., Strohacker, K., Breslin, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+blood+monocytes+and+adipose+tissue+macrophages+in+a+mouse+model+diet-induced+weight+gain%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Med%22%5BJournal%5D)">Comparison of blood monocytes and adipose tissue macrophages in a mouse model diet-induced weight gain.</a> Comp. Med. 62, 462-465 (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu yöntem 1,3,4,12-14 flow sitometri kullanılarak granülosit fonksiyonunun değerlendirilmesi için mevcut yöntemler arıtma temsil eder. Bu deneyde kritik adım bioparticles ve DHE kan numunesinin uygun karıştırma ile ilişkili olma eğilimindedir. Eksik karıştırma doğru sonuçlara neden olur. Tam karıştırma kritik olsa da, karıştırma yöntemi doğada yumuşak olmalıdır. Bir karıştırma fonksiyonu yerine, bir girdaplı karıştırıcı ile bir elektronik pipet kullanılarak gerçekleştirilebilir karıştırma önerilmektedir. Tahlilde bir başka kritik adım her zaman tahlil borusunun üst yarısını kirlenmesine neden kan yoktur sağlamaktır. Bu kalıntı kan steril pamuk uçlu bir aplikatör kullanılarak temizlenebilir. Başarısızlık un-lize kırmızı kan hücreleri ile son tahlil hazırlık kirletebilir bunu çünkü tamamen çıkarılması önemlidir. Bu yöntemi, uygun dengeleme kontrol kullanmadan önce sp kontrol etmek için ilave edilmelidirgranülosit fonksiyonu çeşitli yönlerini tanımlamak için kullanılan reaktifler arasında ectral örtüşme. Bu yöntem için, dengeleme kontrol 40 dakika deney inkübasyon önerilen ve daha sonra tek bir işaretleyici ile etiketleme gibi kan örnekleri toplamak içerir (yani, E. coli, DHE&#39;nin, vs.). Etiketlemeden sonra, tek pozitif vaka toplanmış ve bir telafi matris Fikirler analiz yazılımı içinde otomatik bir sihirbaz kullanarak oluşturulur. Bu deney kullanılırsa, uygun tazminat kontrolleri Uygun test performansının sağlanması için tamamlanmış olması önemlidir. Analiz parlak detay yoğunluğu popülasyonları ayırmak için en iyi değişken olduğunu belirlemek ve aynı zamanda çok örtüşme oksidatif patlama ve fagositoz sinyalleri arasında mevcut nasıl tanımlamak için özellik bulucu ve ortak yerelleştirme sihirbazları kullanılarak gerçekleştirilir. Özellikle, görüntü tabanlı sitometri kullanımı üç alt kümeleri içine aktif granülositleri ayırmak yeteneği sağladı. TOnun alt kümesi arıza oksidatif patlama vs fagositoz parlak detay yoğunluğu kullanılarak belirlenmiştir. Tekil hücre fonksiyonlarını incelemek ek olarak, aynı anatomik konum (eş-lokalizasyonu) &#39;de, aynı zamanda her iki olayı sergilenen hücreler tespit edilmiştir. &quot;Yüksek-aktif&quot; alt kümesi içine düştü granülositler fagositoz ve oksidatif patlama arasında tutarlı ortak yerelleştirme gösterdi tek fenotip vardı. Aktive granülosit alt gruplarının Bu tanımlama giderme gerekli büyük alandır. Yeni bir kullanıcı FİKİRLER örnek süreç iş akışı anlamak için zaman ayırın ve görüntüleme bileşenini kullanarak hücre popülasyonlarının yolluk mekaniğini anlamak için çok önemlidir. Bir kullanıcı yapmak isteyebilir Diğer değişiklikler alternatif veya ek tahlil inkübasyon sürelerinde seçimini içerir. Mevcut yöntem 10-40 dakika süreleri kullanımını önerir; Bununla birlikte, deney modeline bağlı olarak, bu yöntem, buradakullanılmak üzere, daha uzun deney süreleri belirlemek için gerekli olabilir. Böyle bir değişiklik bireysel olarak değerlendirilmesi gerekir. Ayrıca bu tahlil inkübasyon süresi üç aktive alt kümelerinin görünümü üzerinde önemli bir etkiye sahip olduğu tespit edilmiştir. Bu raporda açıklanan yaklaşım daha önce granülosit fonksiyonu 3,4,13,15 ilgili elde edilebilir hangi bilgilerin bir uzantısı temsil eder. Diğer laboratuvarlar dokunulmazlık ve hastalığın 15-17 kapsamlı bir değerlendirmesinin bir parçası olarak granülosit fonksiyonu değişiklikleri değerlendirmek önemini göstermiştir. Bu tahlilin potansiyeline rağmen bu da kısıtlı tarafları yok değildir. Büyük sınırlamalar biri yüksek numune hacmi işleme ile ilişkili maliyet ve zaman talebidir. Bir çalışma tasarımı, belirli bir günde numune çok sayıda gerektirdiğinde, bu işleme tabi tutmak zor olabilir. İşleme elektronik pipetleri ve dağıtıcılar kullanımı ile aerodinamik,ancak bu pahalı olma eğilimindedir ve her laboratuarda mutlaka mevcut değildir. Araştırma alanımız egzersiz ve beslenme alışkanlıkları bağışıklık sistemi sağlığını etkileyen ve 6,8-10,18-20 işlev nasıl bir çalışma üzerinde duruluyor. Bu tür hedefler, insan sağlığı alanlarında çeşitli önemli pratik etkileri vardır. Fagositoz fonksiyonu izlenmesi tedavi sonuçlarının kritik olduğu egzersiz ve beslenme etkileri çalışmanın ötesinde, bu yazının gösterdiği fagositoz yöntemi klinik immünoloji diğer alanlarda yararlı olabilir. Bu deney potansiyeli ile immünolojik testler sitometrede bir görüntü tabanlı akıştan olabilir olabilir eşsiz görüntüleme bilgileri avantajlarını alarak yeniden icat edilmesi pek çok ilki.

Granülositler işgalci antijenlere karşı ilk savunma hattını sağlar vücudun doğal bağışıklık sisteminin bir bileşeni temsil eder. Granülosit fonksiyonu değerlendirmede Önceki yöntemler granülositler 1-4 değişti nasıl zor topluca tespit yapma, ayrı yöntem kullanılarak fagositoz kapasitesi veya oksidatif patlama üzerinde duruldu. Akış alanındaki gelişmeler, sitometrisi veren yüksek işleme kapasiteli bir şekilde 5 hücrelerin yüksek çözünürlüklü, renkli görüntüleme kapasitesine sahip tezgah üstü aletleri üretimi ile sonuçlanmıştır. Geleneksel akışı ile görüntüleme birleştirmek için yeteneği sitometri yöntemleri sitometri mevcut akış içinde yenilik ve bağışıklık sistemi ile ilgili yeni bilgiler elde etmek gerekli teknolojik bir platform sağlayan bir gelişmeyi temsil etmektedir. Son on yılda, diğerleri arasında, bizim laboratuar, hevesle çeşitli beslenme ve egzersiz tedavileri patte etkisi üzerinde durulmuşturDoğuştan gelen bağışıklık fonksiyonu 6-9 RNS. Bu yazıda gösterdiği yöntem, klinik immünoloji alanındaki pratik etkileri vardır. Bu yöntem aynı zamanda bakteriyel parçacıklar ve oksidatif patlama fagositozunu ölçmek için görüntü tabanlı akış sitometri gücünü güçlendirir. Bu yaklaşımı kullanarak, bir analiz görüntü tabanlı bölümü tarafından sağlanan değişkenleri kullanarak aktive granülositleri ayırmak mümkün değildir. Bu alt kümeler bireysel granülositlere hücresel görüntüleri değerlendirirken sonra sadece tanımlanabilir vardı. Daha fazla tahlil inkübasyon süresi üç aktivasyon alt grupları 10 arasında geçişi etkilemiştir. Böylece, birden fazla inkübasyon sürelerinde kullanımı yöntemi, belirli bir deneysel tedavi aşağıdaki granülosit fonksiyonu değişikliği test etmek için izin verebilir olması akla yakındır. Bu yazının amacı, aynı anda oksidatif işlem ile fagositoz ölçmek için görüntü tabanlı akış sitometrik kullanarak değerlendiren granülosit fonksiyonu bir yöntem göstermektiive patladı.

<table><tbody><tr><td>Kan alımı için kullanılan</td> <td>Vacutainers</td><td>BD Yaşam Bilimleri</td><td></td></tr><tr><td>WBC Fiksatif / RBC Lizis çözeltisi</td><td>eBioscience</td><td>00-5333-57</td><td></td></tr><tr><td>CD66b-APC</td><td>eBioscience</td><td>klonu G10F5</td><td></td></tr><tr><td>CD45-APCeFluor780</td><td>eBioscience</td><td>klonu 2D1</td><td></td></tr><tr><td>S. aureus biyopartiküller</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>A10010</td><td></td></tr><tr><td>dihidroetidyum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D7008</td><td></td></tr><tr><td>N-etilmalemid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>4259</td><td></td></tr><tr><td>7AAD</td><td>EMD Millipor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hematoloji Analiz Cihazı</td><td>Mindray</td><td>BC-3200</td><td></td></tr><tr><td>96 kanallı pipet</td><td>Integra Biosciences</td><td>ViaFlo</td><td></td></tr><tr><td>Boncuk Banyosu İnkübatörü</td><td>LabArmour</td><td>BeadBath</td><td></td></tr><tr><td>Görüntüleme Akış Sitometresi</td><td>EMD Millipore</td><td>Amnis FlowSight</td><td></td></tr><tr><td>INSPIRE Yazılımı</td><td>EMD Millipore</td><td>Amnis INSPIRE</td><td></td></tr><tr><td>IDEAS Yazılımı</td><td>EMD Millipore</td><td>Amnis IDEAS</td><td></td></tr><tr><td>X-Pierce Piercable Plaka Mühürleyen</td><td>Excel Scientific, Inc.</td><td>X-Pierce</td><td></td></tr><tr><td>Dell Precision İş İstasyonu</td><td></td><td>IDEAS analizi için Kullanılan</td> <td>Çeşitli Dell Bilgisayarlar</td></tr></tbody></table>

görüntü tabanlı sitometrisi tekniği granülosit fonksiyonu değişiklikleri değerlendirin İn vitro

Image-based Flow Cytometry Technique to Evaluate Changes in Granulocyte Function In Vitro

Granülositler, vücudun bakteriyel ve viral enfeksiyonlara karşı doğuştan gelen bağışıklık tepkisinde anahtar bir rol oynar. Granülosit fonksiyonunu ölçmek için yöntemler mevcut olsa da, genel olarak bunlar sağlayabilecekleri bilgi açısından sınırlıdır. Örneğin, mevcut tahlillerin çoğu, tek, sabit uzunlukta bir inkübasyonun ardından kaç tanenin aktive edildiğinin bir yüzdesini sağlar. Meseleleri karmaşık hale getiren çoğu tahlil, algılama teknolojisindeki sınırlamalar nedeniyle işlevin yalnızca bir yönüne odaklanır. Bu rapor, bakterilerin granülosit fagositozunun ve oksidatif patlamanın eşzamanlı ölçümü için bir tekniği göstermektedir. Bu fonksiyonların her ikisini de aynı anda ölçerek, aktive edilmiş granülositlerin üç benzersiz fenotipi tanımlandı: 1) Düşük Aktivasyon (minimal fagositoz, oksidatif patlama yok), 2) Orta Aktivasyon (orta derecede fagositoz, bazı oksidatif patlama, ancak iki fonksiyonel olayın birlikte lokalizasyonu yok) ve 3) Yüksek Aktivasyon (yüksek fagositoz, yüksek oksidatif patlama, fagositozun birlikte lokalizasyonu ve oksidatif patlama). İnaktive edilmiş granülositlerden oluşan dördüncü bir popülasyon da tanımlanmıştır. 10, 20 ve 40 dakikalık tahlil inkübasyonları kullanılarak, tahlil inkübasyon süresinin aktive edilmiş granülosit fenotiplerinin yeniden dağılımı üzerindeki etkisi değerlendirildi. Dördüncü bir inkübasyon, kontrol olarak buz üzerinde tamamlandı. Seri zaman inkübasyonlarını kullanarak, test, bir tedavinin granülosit fonksiyonunu mekansal olarak nasıl etkilediğini tespit edebilir. Tüm örnekler, kantitatif görüntüleme (QI) seçeneği, otomatik örnekleyici ve çoklu lazerler (488, 642 ve 785 nm) ile donatılmış görüntü tabanlı bir akış sitometresi kullanılarak ölçüldü.

Görüntü tabanlı akış sitometrik kullanarak bize üç farklı aktivasyon alt grupları (Şekil 3) içine aktif granülosit homojen bir nüfusa ayırmak için izin verdi. Bu yöntemde, en etkili yolu, üç aktivasyon alt kümelerini oksidatif patlama vs (S. aureus) (DHE'nin) (Şekil 4 Şekil 3) fagositoz için parlak detay yoğunluğu çizerek olduğunu çözmek için. Ayrıca, FİKİRLER yazılım co-lokalizasyon sihirbazın kullanımı son derece aktif granülosit damgasını işaretidir eşzamanlı fagositoz ve oksidatif patlama varlığı, ölçümü için izin verecektir. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/52201/52201fig3highres.jpg"> Aktif Granulosit Alt Grupları Şekil 3. Tanımlama. Hücre-yüzey belirteçleri (CD45 + / 66b +) kullanarak granülosit tanımlanmasından sonra, bir kızı arsa parlak detay niyet etme ile oluşturulmuşturoksidatif patlama için parlak detay yoğunluğu vs fagositoz için versitesi. Bu yaklaşım, etkin (mor), düşük aktif maddenin yüzdesi (kırmızı, A) orta aktif kullanarak (mavi, B) ve yüksek aktif (sarı, C), granülositler belirlenmiştir. Bu geçit tekniği de çeşitli aktif granülosit alt-görece bolluğu ile deney kuluçkalama süresi etkisini değerlendirmek için kullanıldı. "yüksek-aktif" granülosit yüzdesi en yüksek 40 dakika inkübasyon aşağıdaki mevcuttu. Elde edilen görüntü dosyalarının tüm analiz FİKİRLER v.6 yazılımı kullanılarak tamamlanmıştır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52201/52201fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Aktif granülosit üç farklı alt-gruplar varlığını gösteren ek olarak, bu deney, kuluçkalama süresi, her aktif granülosit alt-görece bolluğu etkilediği gösterilmiştir. Spesifik olarak, 40 dakika Inc.ubation "yüksek-aktif" granülosit büyük yüzdesi ile sonuçlanmıştır. En az üç tahlil inkübasyon süreleri dahil ederek verilen bir klinik tedavi granülosit zamansal aktivasyon durumunu nasıl değiştirdiğini belirlemek mümkün olabilir. Bu fagositoz ve oksidatif patlama, aynı anda ölçümlerin bir fonksiyonu olarak farklı aktif granülosit alt kümelerini tanımlamak için görüntü bazlı akış sitometrik kullanarak ilk yayınlanmış bir yöntemdir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52201/52201fig4highres.jpg"> Hücresel Markerlerinin Şekil 4. Temsilcisi Görüntüler. Yüksek aktif (A) olarak sınıflandırılan hücrelerin bir resim galerisi, orta-aktif (B), ve düşük-aktif (C) Bu şekilde sunulmaktadır. S.aureus bioparticles Ch03 vardır oksidatif patlama CD66b olduğunu, yan dağılım Ch06 olduğunu, çekirdeğin için 7AAD Ch05 olduğunu, Ch04 içindeCH11 ve CD45 CH12 bulunmaktadır. Ayrıca, oksidatif patlama vs fagositoz (Ch03) (Ch04) eş-lokalize birleştirme görüntü gösterilir. Birleştirme görüntünün sarı Alanları bu fagositoz ve oksidatif patlama aynı anda aynı anatomik alanda yaşanıyor göstermek. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52201/52201fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Bu yöntem, bakterilerin fagositozunu ve oksidatif patlamayı aynı anda ölçerek granülosit fonksiyonunu değerlendirmek için bir teknik gösterir. Görüntü tabanlı akış sitometrisi, hepsi göreceli fonksiyonel kapasitelerinde farklılık gösteren üç farklı aktive granülosit alt kümesinin tanımlanmasına izin verdi.

Görüntü tabanlı Sitometrisi Tekniği Granülosit Fonksiyonu Değişiklikleri değerlendirin İn Vitro

Granulocytes play a key role in the body&#8217;s innate immune response to bacterial and viral infections. While methods exist to measure granulocyte ...

Bu prosedürün genel amacı, granülosit fonksiyonunu iki parametreli bir yaklaşım olarak değerlendirmektir. Bu, oksidatif patlamayı görselleştirmek için önce hasta kan örneklerinden alınan granülositlerin biyo partiküller ve reaktif ile inkübe edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, inkübasyon sonrası fagositoz bloke edilir ve daha sonra ilgilenilen hücre yüzeyi reseptörleri, granülositlerin pozitif olarak tanımlanmasına izin vermek için etiketlenir.Sonuç olarak, aktive edilmiş granülosit alt kümeleri, görüntü tabanlı akış sitometrisi ile tanımlanabilir ve izole edilebilir. Bu yöntem, beslenme alışkanlıklarının ve beslenme uygulamalarının değişikliklere ve granülosit fonksiyonuna nasıl katkıda bulunduğu gibi beslenme veya klinik immünoloji alanlarındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir doktora öğrencisi olan Eric Prado olacak.Periferik kan örneğinin çözülmesini sağladıktan sonra, SIU'ların biyo partikülleri ve DHE, oda sıcaklığında ve 37 santigrat derece B banyosunda etil malamlanır, reaktifler çözüldüğünde, steril bir başlık içinde dört ayrı 1.2 mililitrelik tüpe 20 mikrolitre ssus biyo partikül ekleyin. Daha sonra, biyo partikülleri içeren her tüpe 40 mikrolitre çözülmüş DHE ekleyin ve reaktifi tüplerin dibinde toplamak için tüpleri tezgahın üzerine hafifçe vurun. Her tüpe 100 mikrolitre karışık tam kan ekledikten sonra, pamuk uçlu bir aplikatör ile tüplerin iç kenarı boyunca kirletici kanı alın ve kanı ve reaktifleri üç döngü için elektronik bir pipet seti ile karıştırın.Üçüncü döngüden sonra, tüm tüpleri ışıktan korunan bir buz kovasına yerleştirin. Daha sonra tüpleri 37 santigrat derece hızlı bir banyoda 10, 20 veya 40 dakika inkübe edin, tüm inkübasyonların aynı anda bitmesini sağlamak için 40 dakikalık tüpten başlayın. İnkübasyonların sonunda, tüplerin her birine 15 mikrolitre etil malamed dağıtın.30 dakika sonra, hücreleri uygun antikorların her biri 10 mikrolitre ile inkübe edin. Bir saat sonra, hücreleri 750 mikrolitre beyaz kan hücresi düzeltmesi kırmızı kan hücresi biti çözeltisinde inkübe edin. Bir saat sonra, inkübasyon hücreleri santrifüjleyin ve süpernatanı vakumla aspire edin ve hücre peletinin üzerinde 100 mikrolitrelik bir artık sıvı hacmi bırakın.Şimdi her numuneye 10 mikrolitre taze seyreltilmiş yedi A ve 50 mikrolitre PBS ve 25 mikrolitre kalibrasyon boncuğu ekleyin. Daha sonra tüpleri kapatın, folyoya sarın ve dört santigrat derecede saklayın. Görüntü tabanlı akış sitometresi hazır olduğunda, numuneleri analiz etmek için önceden tanımlanmış parametreleri kullanarak en az 3000 ULU saha olayı toplayarak her numune tüpünü çalıştırın.Ham görüntü dosyalarına bir telafi matrisi uygulamak ve telafi edilmiş görüntü dosyaları oluşturmak için IDEA yazılımının otomatik yazılım telafi sihirbazını kullanın. Ardından, tek tek CIF dosyalarını IDEA yazılımına yükleyin ve her hasta numunesi için granülosit alt kümelerini tanımlamak için aşağıdaki grafikleri oluşturun. Önce uyarılmamış kontrolü bir referans standardı olarak kullanarak, ilk kapıları oluşturmak ve odakta olduğu düşünülen hücreleri tanımlamak için parlak alan gradyan kök ortalama karesinin histogramını kullanın.Ardından, tekli hücreleri enkazdan ve çiftlerden ayırmak için, Parlak Alan en boy oranının parlak alan alanına karşı bir nokta grafiği oluşturun. Temiz bir hücre popülasyonu tanımlandıktan sonra, CD 45'e karşı CD 66'nın bir nokta grafiğini oluşturun B.To CD 45 pozitif CD 66 B pozitif granülositlerini pozitif olarak tanımlayın. Son olarak, aureus için parlak ayrıntı yoğunluğunun oksidatif patlama için parlak ayrıntı yoğunluğuna karşı bir nokta grafiği oluşturun.Birinci ve dokuzuncu kanallarda parlak alan görüntülerini, üçüncü kanaldaki biyo partikülleri, dördüncü kanalda DHE'yi, beşinci kanalda yedi a a d, kanal 11'de CD 66 B'yi ve Kanal 12'de CD 45'i toplayan aktive edilmiş granülositlerin alt kümelerini tanımlamak için, birleşik DHE ve biyo partikül olaylarını gösteren iki renkli bir kaplama da oluşturulabilir. Görüntü tabanlı akış sitometrisi kullanılarak, homojen bir aktive granülosit popülasyonu üç farklı aktivasyon alt kümesine ayrılabilir. Bu yöntemle, üç alt kümeyi çözmenin en etkili yolu, oksidatif patlamaya karşı fagositoz için parlak ayrıntı yoğunluğunu çizmektir.IDEAS yazılımında kolokalizasyon sihirbazının daha fazla kullanılması, yüksek aktivasyonun ayırt edici bir işareti olan granülositlerin eşzamanlı fagositozu ve oksidatif patlamasının varlığının ölçülmesine izin verir. Ek olarak, bu deneyde, 40 dakikalık inkübasyon süresi, yüksek derecede aktif granülositlerin en yüksek yüzdesini göstermiştir. Bu nedenle, protokole en az üç inkübasyon periyodunun dahil edilmesi, belirli bir klinik tedavinin granülositlerin zamansal aktivasyon durumunu nasıl değiştirebileceğinin belirlenmesini kolaylaştırır.Bu prosedürü takiben, ek soruları yanıtlamak için boncuk bazlı multipleks tahliller gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir. Örneğin, biyo partiküllere maruz kaldıktan sonra sırtüstü içindeki GRANULOCYTE kemokin üretimi nasıl değişir?

image-based-flow-cytometry-technique-to-evaluate-changes-granulocyte

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, bir fare gözünde intravitreal doğumdan sonra floresan biyopartiküllerin mikroglial alımını ölçmek için akış sitometrisini göstermektedir. Akış sitometrisi, CD11b'yi eksprese eden canlı hücreleri tespit eder ve yeşil floresan sergileyen fagositik mikroglia hücrelerini, Ly6C eksprese eden monositler ve Ly6G eksprese eden nötrofiller dahil olmak üzere diğer miyeloid hücrelerden ayırır.

Akış Sitometrisi Kullanılarak İntravitreal Olarak Verilen Floresan Partiküllerin Mikroglial Alımının Ölçülmesi

Bu videoda, insan periferik kan mononükleer hücrelerinde (PBMC'ler) CD4+ ve CD8+ T hücrelerini, γδ T hücrelerini, B hücrelerini, doğal öldürücü (NK) hücreleri ve monositleri tanımlamak için iki florokrom kullanan akış sitometrisi tabanlı bir teknik gösterilmektedir. Hücrelerin yüzey belirteçlerine karşı florokrom konjuge antikorlarla inkübe edilmesinin ardından, hücre alt kümeleri optimal bir akış sitometrik geçit stratejisi kullanılarak tanımlanır.

Periferik Kan Mononükleer Hücrelerinde İmmün Hücre Alt Kümelerini Tanımlamak için Bir Akış Sitometrisi Testi

Bu video, mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) efektör T hücresi proliferasyonu üzerindeki immünomodülatör etkisini araştırmak için bir in vitro testi göstermektedir. Test, monosit popülasyonunu immünomodülatör bir fenotip kazanmaya teşvik etmek için MSC'lerin PBMC'lerle birlikte kültürlenmesini içerir ve bu da interlökin-10'un (IL-10) salgılanmasına yol açar. Aktive edilmiş CD4 + T hücreleri ile inkübasyonun ardından, indüklenen monositler T hücresi proliferasyonunu etkili bir şekilde baskılar.

Monositlerin Lökosit Proliferasyonu Üzerindeki İmmünomodülatör Etkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test

Bu protokol, sitometri multi-spektral görüntüleme akışı ile ortokromatik eritroblastlarda enucleating erythroblast enükleasyonu işleminin bir görselleştirme temin edilmesi için bir popülasyonu belirlenmesi için yeni bir yöntem tarif eder.

Multi-spektral Görüntüleme Sitometrisi ile Enucleating Olaylar bir Kemirgen erythroblast ICSI&#39;nin Zenginleştir tanımlanması

Monositler, aktive edildiğinde glikolitik metabolizmaya dayanan insan doğuştan gelen bağışıklık sisteminin ayrılmaz bileşenleridir. Taze tam kandaki toplam monositler ve monosit alt popülasyonları tarafından glikoz taşıyıcı ekspresyonunu ve glikoz alımını ölçmek için bir akış sitometrisi protokolü tanımladık.

Basit Akım Sitometrisi Yöntemi Tüm Kan Monosit subpopulations için glikoz alımını ve Glikoz Transporter Anlatım Tedbir

Bu makalenin amacı, insan kan örneklerinde monosit ve granülosit fagositozu ve oksidatif patlama aktivitesini ölçmek için bir yöntem sunmaktır.

İnsan Kanı Ölçüm Granülosit ve Monosit Fagositoz ve Oksidatif Burst Etkinlik

Basit ve güvenilir bir yöntem, örneğin, farklı NK hücresi alt-gruplar içinde degranülasyonu, sitokin ve kemokin üretimi gibi NK hücresi fonksiyonlarının bir dizi analiz için tarif edilmektedir.

Akış NK Hücre Fonksiyonları İzleme Testi Sitometri tabanlı

doku homeostazında ve yetersiz fagositik fonksiyonunun korunması patolojisinde dahil olmuştur için mikrogliyal fagositoz kritiktir. Ancak, in vivo mikroglia fonksiyonunu değerlendirmede teknik olarak zordur. Biz tam izleme ve fizyolojik bir ortamda mikroglia fagositik potansiyelini ölçülmesi için basit ama güçlü bir teknik geliştirdiler.

Retina Mikroglial Fagositik Fonksiyonu değerlendirilmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt; A Akış Sitometri bazlı analiz kullamlarak

Burada, biz birincil insan T hücreleri ve antijen sunan hücreler arasındaki bağışıklık sinapslarda nitel ve nicel analizi için tam bir iş akışı tanımlamak. Yöntem alma ve nispeten kısa bir süre içinde birkaç bin hücre görüntülerin değerlendirme sağlar görüntüleme akış sitometresi temel alır.

Akış Sitometresi Imaging kullanılarak insan sisteminde bağışıklık Synapse nitel ve nicel analiz

Burada periton, dalak ve kemik iliği dokularındaki murin immün B hücre bölmesinin akış sitometrisine göre heterojenliğinin basit bir analizinde açıklanmaktadır. Protokol diğer fare dokularına uyarlanabilir ve genişletilebilir.

Murine B Hücre Gelişiminin Akış Sitometrik Karakterizasyonu

Diseke implantlardan hücrelerin izolasyonu ve akış sitometrisi ile karakterizasyonu, implantlara karşı immün yanıt paterninin anlaşılmasına önemli ölçüde katkıda bulunabilir. Bu makale, diseke implantlardan hücrelerin izolasyonu ve akış sitometrik analizi için boyanması için kesin bir yöntemi açıklamaktadır.

Diseke İmplant Dokularının İmmün Fonksiyon Analizi için Yüksek Boyutluluk Akış Sitometrisi

Öğrenin görüntü tabanlı akış sitometrisi ile granülosit fonksiyonunu iki parametreli yaklaşımla değerlendirmeyi. Bu yöntem, fagositoz ve oksidatif patlama ölçümüyle aktive granülosit alt kümelerini tanımlamanıza olanak tanır.

Görüntü tabanlı Sitometrisi Tekniği Granülosit Fonksiyonu Değişiklikleri değerlendirin İn Vitro

Daha fazla video keşfet