Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme
15 Aralık 2015
Burada, çoğullanmış algılamayı sağlamak için paralel segmentli akış kromatografisi kolonlarının çalıştırılması ve ayarlanması için bir protokol sunuyoruz.
Bu HPLC prosedürünün genel amacı, multipleks algılamayı etkinleştirmek için paralel segmentli bir akış sütununu ayarlamaktır. Bu yöntem, sağlık ve esenlik, çevre bilimleri, adli tıp ve biyolojik keşif gibi karmaşık örneklerin analizini gerektiren tüm alanlardaki temel soruları yanıtlar. Bu teknik, kapsamlı numune analizine izin verirken aynı zamanda karmaşık karışımlardaki maddelerin kimyasal ve biyoaktif yapıları hakkında bilgi verir.
Çoklu algılama protokolleri ayrıca hızlı analize izin verir. Bu yöntem, kahve ve şarap gibi karmaşık karışımların kimyasal parmak izini tanımlamak için stratejilerin geliştirilmesini sağlayarak, üreticilerin ürünleri ile ucuz sahte çeşitler arasındaki farkı anlamalarına olanak tanır. Başlangıçta, doğru analiz için tüm numuneyi tek bir dedektöre göndermemek alışılmışın dışında gelebilir.
Bununla birlikte, her bir akış akışı içindeki analit konsantrasyonu, geleneksel bir kolonun toplam akış akışından daha yüksektir. Başlamak için, HPLC cihazını sırasıyla mobil faz A ve B için %100 UE su ve saf metanol ile kurun. Bir MS dedektörü kullanılacaksa, her iki mobil faza da %0.1 formik asit ekleyin, ardından HPLC pompalarını üreticinin talimatlarına göre boşaltın.
MS UV VS'yi monte edin. Ve DPPH dedektörleri. Üreticinin talimatlarına göre. Bileşenlerin, dedektör hatlarındaki ölü hacim minimum olacak şekilde uygun şekilde düzenlendiğinden emin olun.
Ardından UV VISTA dedektör dalga boyunu buradaki örneğe özgü dalga boyuna ayarlayın. MS dedektörü için 280 nanometre. Tam tarama algılama yöntemiyle toplam iyon sayısı veya TIC analizi için pozitif modu kullanın.
MS dedektörünün sıcaklığını ve gaz akışını aşağıdaki değerlere dengeleyin. 500 santigrat derece buharlaştırıcı sıcaklığı, 350 santigrat derece kılcal sıcaklık, 40 birim yardımcı gaz akışı, beş birim süpürme gazı akışı, 60 birim kılıf gazı oranı ve 3,5 kilovolt püskürtme voltajı. DPPH radikali reaktifini hazırlamak için, 25 miligram DPPH radikalini hacimsel bir şişede 250 mililitre metanol içinde çözerek başlayın.
Çözeltiye 250 mikrolitre formik asit ekleyin ve çözeltiyi 10 dakika boyunca sonikleştirin. Ardından ışığa maruz kalmayı önlemek için şişeyi ve folyoyu örtün. Ardından, DPPH radikal sistemini kurmak için üreticinin önerdiği şekilde pompayı DPPH radikal solüsyonu ile boşaltın.
Pompa hattının bir T parçasının girişine sabitlendiğinden emin olun ve ardından 100 mikrolitrelik reaksiyon bobinini T parçasının çıkışına bağlayın. Dedektörü reaksiyon bobini ENC kasasının diğer ucuna, reaksiyon bobinine ve bir kolon ısıtıcısına takın. Son olarak, DPPH radikal UV V dedektörünü 520 nanometreye ayarlayın.
Paralel segmentli akışı veya PSF sütununu oluşturmak için önce sütun girişini HPLC cihazına bağlayın. Ardından, merkezi bağlantı noktasını MS dedektörüne bağlamak için bir boru parçası kullanın. Bir çevresel kolon bağlantı noktasını UV VS dedektörüne ve diğerini DPPH radikal algılama sisteminin T parçasına bağlamak için aynı boyutlarda boru kullanın.
Kullanılmayan çevresel bağlantı noktalarını sütun durdurucularla engelleyin. HPLC'nin akış hızını, 100 milimetre, iç çap ve 4.6 milimetre uzunluğunda bir sütun için %250 mobil faz B'nin dakikada bir mililitresine ayarlayın. 20 dakika dengeleyin.
PSF sistemini ayarlamaya başlamak için önce toplama kaplarını boşaltmak için yırtın. UV VS'den mobil fazı ayrı olarak toplamak için bu şişeleri kullanın. Ve DPPH radikal bağlantı noktaları. Toplama süresine dikkat edin ve her kapta en az 500 miligram çözücü toplayın.
Daha sonra, mobil fazın kütlesini belirlemek için toplama kaplarını tartın ve her bir porttan toplanan mobil fazın hacmini hesaplamak için kütleyi metanol yoğunluğuna bölün. Son olarak, MS dedektörüne giden akış hızını belirleyin ve tüm dedektörlerin akış oranlarını, metin protokolünde belirtildiği gibi toplam akışın yüzdesi olarak hesaplayın. Akış oranları ideal değerlerden önemli ölçüde saparsa, geri basıncı ayarlamak için gerektiğinde ek boru ekleyin ve toplama ve hesaplama işlemini tekrarlayın.
Son olarak, DPPH radikal reaktif pompasının akış hızını, dedektöre bağlı çıkış portunun akış hızıyla eşleşecek şekilde ayarlayın. Bir kahve numunesi üzerinde çoğullanmış bir HPLC analizi yapıldı. DPPH radikal UV VS kaydetme yeteneği. Ve Ms.Kromatogramlar aynı anda DPPH radikaline pozitif yanıt veren numunedeki bileşiklerin, MSS
TIC dedektöründen pozitif bir yanıt görüldüğünde, tutma süresi hizalamasına dayalı olarak UV vs.Ve MS yanıtlarıyla kolayca eşleştirilmesine izin verir, zirvenin moleküler kütlesi kaydedildi. Farklı algılama prosesleri arasında tepe noktalarını eşleştirmenin kolaylığı, kahve gibi karmaşık bir numune için hızlı ve daha verimli bir tarama ve karakterizasyon biçimine olanak tanır Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik yaklaşık bir saat içinde kurulabilir ve bu prosedürü takiben numune analizine hazır hale getirilebilir. Ek numune bilgileri elde etmek için kırılma indisi, floresan ve kimyasal lüminesans gibi kimyasal bazlı algılama gibi diğer dedektörler kullanılabilir.
Bu videoyu izledikten sonra, karmaşık bir numuneyi daha iyi anlamak için çoğullama algılama süreçlerinin önemini anlamalısınız. Ayrıca, paralel segmentli akış kolonları kullanılarak yapılan multipleks algılama, biyo keşif yapmak için son derece verimli bir yoldur.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu makale, paralel segmentli akış kromatografi kolonlarının çoklu tespit için ayarlanmasına yönelik bir protokol sunmaktadır. Yöntem, sağlık, çevre bilimleri ve adli tıp gibi çeşitli alanlarda uygulanabilir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Kromatografi
- Analitik Kimya
- Karmaşık Örnek Analizi
Arka Plan
- Paralel segmentli akış kolonları tespit yeteneklerini artırır.
- Bu yöntem, karmaşık örnek analizi zorluklarına yöneliktir.
- Gıda ve içecek gibi endüstriler için uygundur.
- Bu tekniğin hızlı analiz avantajı önemlidir.
Çalışmanın Amacı
- Karmaşık örneklerde çoklu tespiti mümkün kılmak.
- Kimyasal parmak izi stratejisi geliştirmek.
- Gerçek ürünler ile sahte ürünler arasında ayrım yapmak.
Kullanılan Yöntemler
- Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC)
- Paralel segmentli akış kolon işletimi
- Çoklu tespit protokolleri
- Karmaşık karışımların örnek analizi
Ana Sonuçlar
- Çoklu tespit için kromatografi kolonlarının başarılı bir şekilde ayarlanması.
- Karmaşık örneklerin kapsamlı analizi gerçekleştirildi.
- Karışımlardaki kimyasal ve biyoaktif özelliklerin belirlenmesi.
- Geleneksel yöntemlere göre analiz hızında artış.
Sonuçlar
- Yöntem, karmaşık örneklerin analizi için sağlam bir yaklaşım sunar.
- Rekabetçi pazarlarda ürünlerin ayırt edilmesini destekler.
- Bu teknik çeşitli bilim dallarına uygulanabilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Parallel segmented flow (PSF) columns with multiplexed detection address the challenge of comprehensive, high-throughput analysis of complex mixtures in discovery-stage biopharma workflows. By enabling simultaneous use of multiple detectors—including both destructive and non-destructive types—this technology increases analytical depth and efficiency, supporting rapid chemical and bioactive profiling. The approach is strategically positioned to enhance predictive confidence and accelerate decision-making at key inflection points in early discovery and screening pipelines.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables detailed chemical and bioactivity profiling of complex samples for hypothesis interrogation.
- Supports functional target validation by correlating molecular features with bioactive responses.
- Facilitates mechanistic de-risking through multiplexed detection of analytes in a single run.
- Improves predictive confidence for portfolio triage by integrating orthogonal detection outputs.
Screening & Assay Development
- Prepares validated analytical systems for downstream compound screening workflows.
- Delivers standardized, reproducible, and quantitative outputs across multiple detection modalities.
- Enables rapid, parallel evaluation of sample components, increasing screening throughput.
- Supports platform reuse by accommodating various detector types without additional dead volume.
Translational & Preclinical Research
- Aligns chemical fingerprinting with translational biomarker discovery when analyzing bioactive mixtures.
- Maintains continuity from discovery through preclinical validation by supporting multiplexed data acquisition.
- Reduces risk in advancement decisions by providing comprehensive analytical profiles.
- Enhances predictive de-risking for complex sample characterization.
Pipeline & Workflow Integration
PSF column multiplexed detection integrates into the analytical continuum from early discovery through lead identification, supporting both hypothesis-driven and screening-based workflows.
- Discovery Biology: Provides robust hypothesis testing and pathway clarification via simultaneous chemical and bioactivity readouts.
- Screening: Offers assay readiness and reproducibility by enabling parallel, quantitative detection streams.
- Analytics: Supplies multi-modal measurements and retention time alignment for confident analyte identification.
- Translational Research: Connects analytical outputs to biomarker alignment and preclinical continuity when relevant.
- Enterprise Reuse: Functions as a flexible, reusable analytical platform adaptable to evolving R&D needs.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in complex sample analysis.
- Operational Value: Delivers standardized, reproducible, and scalable multiplexed detection workflows.
- Strategic Value: Enables faster go/no-go decisions and improves capital efficiency by consolidating analytical steps.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of discovery assets.
Implementation Considerations
- Requires expertise in HPLC instrumentation and detector integration.
- Needs analytical infrastructure capable of supporting multiple detector types simultaneously.
- Demands cross-team standardization of flow rates, tubing dimensions, and detector assignment.
- Adaptable across various model systems and sample types with appropriate tuning.
- Practical limitations include the need for precise flow management and detector compatibility.
Biopharma FAQs
Chapters in this video
0:05
Title
1:15
Setup of High Performance Liquid Chromatography (HPLC) Instrument and UV-Vis/Mass Spectrometry (MS) Detectors
2:51
Preparation of 2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) Radical Reagent and System Detector
4:00
Setup of Parallel Segmented Flow (PSF) Column
5:00
Tuning the PSF Column for Multiplexed Detection
6:18
Results: Multiplexed Detection of a Coffee Sample
7:11
Conclusion
