Name: Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-12-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Öğrenin, paralel segment akış kolonlarını ayarlayarak çoklu algılama ile karmaşık örneklerin kapsamlı analizini nasıl gerçekleştireceğinizi. Bu yöntem, sağlık, çevre bilimleri ve adli tıpta hızlı tarama sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma UWS ve ThermoFisher Scientific tarafından desteklenmiştir. Yazarlardan biri (DK), Avustralya Yüksek Lisans Ödülü'nün alındığını onaylar.

Not: Bu protokol mültipleksli tespiti için birden fazla dedektörleri ile birleştiğinde bir HPLC sistemi üzerinde bir PSF sütununu nasıl kullanılacağı ile ilgili talimatları içerir. Protokol okuyucu varsayarak kromatografi ve çeşitli HPLC algılama yöntemleri temel bilgi ve deneyime sahiptir yazılmıştır. Dikkat: (metanol, yani MSDS) kullanmadan önce tüm malzeme ve reaktifler için malzeme güvenlik veri sayfaları (MSDS) bakınız. Çözücüler ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (HPLC) yıkayıcı işlerken tüm uygun güvenlik uygulamalarının kullanımını sağlamak. HPLC, analitik terazi ve dedektör enstrümantasyon mühendislik kontrolleri uygun kullanımını sağlamak ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı ayakkabı ayak) kullanımını sağlamaktadır. HPLC Enstrüman 1. Setup <ol><li> Lin için, aşırı saf su (örneğin,% 100 Milli-Q su) HPLC aleti hazırlayıne A ve mobil faz olarak B hattı için% 100 metanol ve üretici şartının olarak pompalar temizlemek. Kullanılan dedektörlerin biri MS ise burada olduğu gibi, hem mobil fazlar A ve B için% 0.1 formik asit eklemek </li><li> Dedektör ve sütun arasındaki ölü hacmi en aza indirmek amacıyla, Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi HPLC enstrümantal parça ve dedektörler ayarlayın. Bu sütuna göre dedektörlerin uygun yerleştirilmesi gerekir. HPLC sistemi yapılandırmasında esneklik istenmektedir. </li></ol> UV-Vis ve MS Dedektörleri 2. Kurulum <ol><li> İlgili örnek (örneğin, 280 nm) bağlı istenen dalga boyuna UV-Vis detektörü ayarlayın. </li><li> Tam Tarama algılama yöntemi kullanılarak toplam İyon Sayısı (TIC) analizi için pozitif modda MS dedektörü ayarlayın. Ayrıca buna göre aşağıdaki MS parametrelerini ayarlamak: buharlaştırıcı sıcaklığı 500 60 birimlik bir oranda, yardımcı gaz akışı ayarlanır ° C, kılcal sıcaklığı 350 ° C, kılıf gaz40 ve 5 adet gaz akışı, ve sprey voltajı 3.5 kV süpürme. Bu ayarlar, numune analiz edilen bağımlı özel kullanıcı ihtiyaçlarına daha sonra ayarlanabilir. </li></ol> DPPH • Sistem Dedektörü 2,2-Difenil-1 picrylhydrazyl Radikal (DPPH) • Reaktif Kur&#39;un 3. Hazırlık <ol><li> DPPH • 25 mg tartılır ve volümetrik bir şişede 250 ml metanol içinde çözülür. </li><li> DPPH • reaktifine formik asit 250 ul ekle. Işığa maruz kalmasını önlemek için folyo balon örtün. </li><li> 10 dakika boyunca DPPH • reaktifi ihtiva eden bir şişeye sonikasyon. </li><li> Üreticinin şartının gibi hazırlanan DPPH • reaktif ile DPPH • Pompayı temizleyin. </li><li> T-parçasının girişine pompa hattı takarak Şekil 2&#39;ye göre DPPH • sistemi kurmak. </li><li> Inci bir 100 ul reaksiyon bobin takınT-parçasının e çıkış ve dedektör reaksiyon bobin diğer ucunu takın. </li><li> Ve bir sütun ısıtıcı reaksiyon bobini örten 60 ° C kolon ısıtıcı sıcaklığını ayarlamak. </li><li> 520 nm DPPH • UV-Vis detektörü ayarlayın. </li></ol> PSF Sütun 4. Kur <ol><li> HPLC cihazına PSF sütunun girişini bağlayınız. </li><li> 0,13 mm id bir boru uzunluğu 15 cm kullanarak MS dedektörü merkezi bağlantısı. </li><li> 0,13 mm id bir boru uzunluğu 15 cm kullanılarak UV-Vis dedektörü çevresel bir bağlantı noktası bağlayın. </li><li> 0,13 mm id bir boru uzunluğu 15 cm kullanarak DPPH • algılama sisteminin T-parçasına bir çevresel bağlantı noktası bağlayın. </li><li> Bir sütun tıpa kullanarak kullanılmayan periferik bağlantı noktasını engelleyin. </li><li> 1 ml dk HPLC pompası akış hızını getirmek -1% 100 hattı B -% 100 metanol (% 0.1 formik asit). </li><li> % 100 metanol mobil ph ile kolon dengeyeBir 4.6 mm id x 250 mm uzunlukta sütun için 20 dakika boyunca ase. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre tartılır. </li></ol> 5. Multiplexed Algılama için PSF Sütun Tuning <ol><li> En az iki boş toplama gemiler bir analitik terazi kullanılarak (DPPH • dedektörü UV-Vis dedektör ve birine bağlı port için bir) kütlesi ölçün. </li><li> Iki ayrı, önceden tartılmış toplama kaplarının (5,1) içine, UV-Vis ve DPPH • bağlantı noktaları mobil fazı toplayın. Toplanması için süreyi kaydedin. Her bir kap içinde solventin en az 500 mg toplayın. </li><li> Toplama kabının tartın ve mobil faz kütlesini belirler. 0.791 g ml -1 metanol yoğunluğu göz önüne alındığında, her bir port toplanan mobil faz hacmi belirlemek. </li><li> Fark ile, yani anma pompa seti debisi eksi DPPH • aracılığıyla akış hızı ve UV-Vis Detector akış portu, MS dedektöre akış hızını belirler. Toplam akışın bir yüzdesi olarak, her bir akış oranını ifade eder. Not: İdeal olarak, akış oranları aşağıdaki gibidir: MS toplam akış hızının% 18 da, UV-Vis% 22, DPPH • detektörü 60% kadar. </li><li> Eğer değilse, UV-Vis detektörü arka basıncı değiştirerek akış yüzdelerini ayarlayın. UV-Vis akış çok yüksek ise, örneğin, UV-Vis detektörü çıkışına 0,13 mm id bir boru 15 cm bölüm eklemek ekleyerek oranını azaltır. Sonra 5.5 adımları 5.1 tekrarlayın. </li></ol> 6. Final Kurulum Koşullar <ol><li> DPPH • detektöre bağlanan çıkış ağzı terk eden, aynı akış hızına DPPH • reaktifi pompa akış hızını ayarlayın. Not: UV-Vis ile çoğullanır PSF sütun, DPPH • ve MS şimdi analiz için hazırdır. </li></ol>

<ol><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+design+of+a+new+concept+chromatography+column%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology%3A+Parallel+segmented+outlet+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations%3A+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology%3A+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography%3A+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr%2C+A%22%5BJournal%5D)">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li>
<li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li>
<li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns%3A+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+%27virtual%27+narrow+bore+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.%2C+A%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li>
<li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu çalışma karakterizasyonu ve mültipleksli algılama paralel parçalı akış (PSF) sütunu istihdam ile HPLC kullanılarak kahve profilleme gerektirir. PSF sütunlarını kullanarak Multiplexed HPLC geleneksel multi-algılama süreçleri kullanarak alır zaman bir kısmını içinde molekül-özel bilgilerin daha yüksek derecede elde ederken örnek veri karmaşıklığını azaltarak önemli kimyasal kişilerin belirlenmesi ve tanımlanmasını sağlar. PSF sütun mültipleksli tespiti için bir platform sağlar, ancak sadece ek ölü hacim ve boru olmadan...

Aktif Akış Teknoloji Sütunlar Aktif akım teknolojisi (AFT) kromatografi kolonları son zamanlarda akış heterojenite 1-6 ile bağlantılı ayrımları verimsizliğe üstesinden gelmek için geliştirilmiş ve aynı zamanda mültipleksli algılamayı etkinleştirmek için. Bu özel iletişim ayrıntılarıyla paralel operasyonel süreç mültipleksli algılama ile akış (PSF) sütun bölümlenmiş. PSF kolonun temel fonksiyonel avantajlar şunlardır: (1) kolon yatak radyal merkezi bölgeden akışı, (2), bir tespit tarafından işlenen mobil faz hacim akışının çevre ya da duvar bölgesinden izole edilir Kaynak azalır, ve (3) algılama kaynakları her algılama süreci boyunca tespit gecikmeleri instilling veya sonradan yazılan sütun akışın 7,8 yarma gerektirmeden örnek bilgileri genişletmek için çoğaltılmış olabilir. A sağlayan PSF sütunun tasarımında anahtar özelliğibirden fazla mesaj saptama dvantage yeni çıkış bağlantı ve frit düzeneği olup. 1, geleneksel bir kolona kıyasla AFT kolonun bir fotoğrafıdır. Bu bölme işlemi sonrası kolon akış akış bölme aynı değildir paralel parçalı akış sütunlar kullanılarak elde anlamak için önemlidir. Bir post kolon akımdan (yani, eksenel), böylece her bir akış akışı verimliliği ve duyarlılık ile eşit derecede örneklenir kuyruk ekstremitelere lider kenarından tüm numune bandı bölünmüş; duyarlılık büyüklüğü dolayısıyla sayısı böler tarafından bölünmüş. PSF ise, bölme işlemi örnekleri bant radyal, eksenel değil. Bu nedenle, merkez liman örnekleri zirve apeks - tepe en konsantre bölgesi. Pik yaygın atık bölgeye göre seyreltilmiş değildir Böylece, burada hassasiyet yüksektir. Periferik bağlantı noktalarından elüsyon Örnek merkezindeki kadar etkili değildirbandı yerine eksenel olarak daha radyal olarak örneklenmiş olduğu için l bölgesi, ancak, tepe genişliği, örneğin, eksenel yönde bir Kolon sonrası bölünme tepe bölen bir numune alma işlemi için olacağından daha dardır. Bu nedenle, konsantrasyon bağımlı bir detektör ile hassasiyet azaltılmaz. PSF sütununda, çıkış bağlantı çok sayıda çıkış ağızlarından oluşan ve montaj bu amaçla iç kısmında halka şeklinde bir cam hamuru vardır yer almaktadır. Çıkış hamuru kanallarının dış radyal kısmı çevresel veya duvar kısmı çıkış akış portları yoluyla kolondan dışarı akarlar ise, bu halka şeklindeki frit kanallarının iç kısım, radyal merkezi çıkış portu üzerinden kolondan dışarı akarlar. Çıkış frit iç ve dış kısımlar, bu akım bölgeleri 2 arasındaki çapraz akışını önleyen bir geçirmez bir bariyer ile ayrılır. Bu tasarımın bir sonucu olarak, kolon yatağı üzerinden merkezi radyal akış akımı duvar kısmı akış bileşenler ayrılırsütun ide. Bu iki bölgeden akışının ilgili kısım bu tür bir ayırma verimliliği veya algılama hassasiyeti sütun teknolojinin çeşitli fonksiyonel yönleri, optimize etmek için, basınç yönetimi hemen hemen herhangi bir arzu edilen orana değiştirilebilir. Özünde, bu tasarım etkili bir dar iç çapa sahip, geniş formatlı sütununda bir &#39;sanal&#39; sütunu içinde kurar ve kolon yatak heterojenitesini ve duvar efektleri 9,10 üstesinden gerçek bir duvar daha az sütun olarak dolayısıyla kolon fonksiyonları. PSF sütunların önemli faydaları kolon verimliliği, algılama kaynağı (lar) ve mültipleksli algılama etkinleştirmek için çözücü işlem minimize gelişmeler vardır. Bununla birlikte, ek bir avantajı, herhangi bir bandın atık ve önü bölgeleri genel elüsyon çıkarılır, çünkü elüsyon veya saptama de çözünmüş madde profili olmasıdır, aksi takdirde, aynı s gözlemlenen edilenden daha yüksek bir konsantrasyonda mevcut olduğuKullanılan bölütleme oranına bağlı olarak, geleneksel bir sütun üzerinde enjeksiyon ve konsantrasyon yük olute. Bunun bir sonucu olarak genellikle PSF sütun 2 üzerinde yapılan ayırımlar için sinyal yoğunluğundaki bir kazanç olduğu gözlemlendi. Aslında, bölütleme oranı, dört çıkış ağızlarının her biri akış çıkış% 25, ​​mor ötesi (UV) algılama kullanılarak gözlenir sinyal yoğunluğu, geleneksel bir ile belirgin olarak aynı sinyal yoğunluğu pratik gösterir, öyle ki düzeltilmiş olup olmadığını Hareketli fazın tamamı (% 100) 7 incelendiğinde kolonu. Ayrıca, merkez ve çeper akış bölgeleri arasındaki çıkış oranı ince ayar kolon verimliliği optimize edilmesini sağlar. (1) debi, (2) segmentasyon oranı ve (3) çözünen tutma faktörü: Sütun verimliliği kazançlar bu verimlilik kazançları üç faktörün fonksiyonu olduğundan, tek bir değere ifade edilemez AFT sütunlarını kullanarak gözlenen . Bununla birlikte, verimlilik kazanımları conv göreentional sütunlar hemen hemen her zaman gözlenir ve bazen bu kazanımlar teorik plaka 1,2 sayısında% 100&#39;den fazla bulunmaktadır. Ayarlamak için yeteneği segmentasyon oranı analisti etkin bir &#39;sanal&#39; sütununun çapı terzi sağlar ve bu algılama sürecine ilişkin önemli bir faktördür. Bölütleme nispeti dairesel merkez çıkış portundan elüsyon mobil faz% 21 olduğu zaman, örneğin, bir sanal 2.1 mm iç çapı (id) kolonu, fiziksel bir 4.6 mm id kolonundan kurulur. Bu koşullar altında, 2.1 mm id, sanal sütun, akış hızına bağlı olarak, geleneksel bir 2.1 mm id sütun daha fazla% 70 daha büyük olabilir verimlilik ve çözünen tutma faktörü 10 ile gerçekleştirir. Mültipleksli tespiti için kullanılan geçerli PSF kolon tasarımı 4-portlu uydurma çıkış içeriyor, ancak sütun takılabilir 2 port uç parçası da, ancak, bu algılama t sınırlarSadece iki dedektör o. Bu dört dedektörleri mültipleksli tespiti için kapsamının genişletilmesi 4-port çıkış PSF sütun aynı anda bağlanabilir dışında bu sütunlardan temel çalışma, ancak, aynıdır. Kenara öncesi ve sonrası kolon bağ borudan, sadece ek gereklilikleri PSF sütun periferal çıkış delikleri bağlanabilir boru ve her tüpe geçen mobil faz miktarı ölçülebilir hangi bir vasıta olup çalıştırmak için, tipik bir kitle ölçümü veya hacimsel ölçüm ya. Ayarlama kolaylığı açısından, bütün çıkış akış boru iç çapı ile aynı olmalıdır. Periferik ve santral radyal çıkış limanları arasında akış oranı daha sonra sadece uydurma periferal çıkışında, veya radyal merkezi çıkış noktası üzerinde tüp sonrası dedektör uzunluğu bulunan boru uzunluğunu değiştirerek, basınç yönetimi kullanımı yoluyla değiştirilir. Multiplexed Algılama PSF sütunlar kullanma </strong&gt; PSF gruplarından önemli bir avantajı, çıkış çıkış ağızlarının her biri, böylece birden fazla mesaj saptama sağlayan bir algılama kaynağına doğrudan bağlanabilir olmasıdır. Iyi tasarlanmış bir tespit sistemi olarak birden fazla mesaj göndermiş algılama ile tek bir analiz numunesi içindeki bileşenlerin doğası ile ilgili önemli bilgiler sağlayabilir. Önemlisi, yıkıcı ve tahribatsız testler algılama gecikmeden, tam olarak aynı anda yapılabilir. Bu bileşenler UV ve / veya kütle spektrometrisi (MS) tespit yanıtları 7,11 ile elüte gözlenmiştir ile DPPH • reaktifi kullanılarak, örnek, bir anti-oksidan için, mutlak atanmasına olanak verir. Bu nedenle, dört bağımsız detektörler, dört çıkış portu üzerinden her bir detektöre yönlendirilir akış uygun oranlarda eşzamanlı olarak çalıştırılabilir. Bu bağlantı noktaları üzerinden akışı kolayca dedektörleri herhangi ulaşan çözünen miktarı ayarlanabilir beri takım elbise ayarlanabilirAyrıca dedektörün kaynağının hassasiyeti. Bu en etkili çözünen geçiş radyal merkezi çıkış deliğinden görülmektedir ki, not edilmelidir. Periferik limanların her her port üzerinden% 25 olarak ayarlandığında, sadece biraz daha az verimli geleneksel sütunda daha eşdeğer ayırma verimliliği, sunuyoruz. Bunun gibi, nicel dedektör radyal merkezi çıkış ağzının numunenin analiz etmek için ayarlanmış olması önemlidir. Çoğullama tespiti amacıyla bir PSF sütun kurarken, verimli ve yüksek kalitede sonuçlar elde etmek için yapılması gereken hususlar bir dizi vardır; her port için tüp boyutları olduğunu, seçim dedektörü ve akış ayarlaması türü için hangi port. Her Limanı için Tüp Boyutları Kromatografide Kolon sonrası boru uzunluğu ayırma verimliliği ve performansında önemli bir rol oynar. Büyük deadetektöre kolon çıkışında, uzun ve geniş id boru sonucu d hacimli verimliliği, çözünürlük ve hassasiyet kaybına neden olur. Çoğullama faydalarını sağlarken etkili ayırma sağlayan maksimum potansiyel ulaşmak için PSF sütun kurarken Böylece, uygun boru ölçüleri kullanılmalıdır. Dedektör Port Şekil 2, birden fazla mesaj saptama (Ultraviyole-Görünür (U-Vis), kütle spektrometresi (MS) ve 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH) • tespiti) bir örnek kurulumun bir gösterimidir. Illüstrasyon, merkezi liman DPPH • oysa MS dedektör bağlı olduğu ve UV-Vis dedektörleri periferik limanlarına bağlı olduğunuzu gösterir. MS üç en hassas dedektör olduğundan, merkezi çıkış deliğinden yönettiği bu dedektöre akar. DPPH • algılama gibi presenc seçicidirantioksidanların e ve bu dedektöre akış, en az duyarlı ve bant genişlemesine en hoşgörülü bir çevresel limandan yönetilmiştir. UV-Vis ikincil &#39;genel&#39; dedektör olduğunu, bu yüzden ikinci bir çevresel limandan yönettiği bu dedektöre akar. Akış Ayarı Uygun boru dedektöre bir limandan bir kere yerleştirildikten sonra, dedektörden her biri çıkan akım gerekli miktara ayarlanabilir. Her dedektör çıkan akış miktarını ölçmek için basit bir yolu zaman belirli bir süre boyunca her port üzerinden elutes mobil faz miktarını tartmak etmektir. Yüzde akışı böylece tespit edilebilir ve akış oranları kısaltılması veya buna uygun olarak tercih edilen detektör gereksinimlerine uygun detektör üzerindeki çıkış hattına bağlı boru uzatma biri tarafından ayarlanabilir. Farklı detektörler, örneğin, akış hücresi, akış farklı gereksinimleri vardırBir floresan dedektörü (FLD) oranı sınırlı akış değil, ama bakım akış hücresi aşırı basınçlandırma önlemek için alınmalıdır. Bu nedenle FLD boyunca akış kontrolü genellikle, diğer dedektör boyunca basınç düşüşünü ve akışın geri kalan daha sonra FLD geçer ayarlanmasıyla elde edilir. Teslim edilir akış miktarı duyarlı olan bir detektör, MS olup. Genellikle, mevcut yüksek uç kütle spektrometre kolayca yaklaşık 1 ila 1.5 ml / orta sulu mobil faz min işleyebilir. Bu akış hızının üzerinde, kaynağın sel MS çalışamaz hale getirebilir. Ancak, çoğu kitle spektrometrelerde algılama hassasiyeti düşük akış oranları kullanılarak yararlandı; dolayısıyla PSF akış bölme yetenekleri, MS algılama içeren uygulamalar için son derece faydalıdır. Yüksek kolon hacimsel debiler ancak MS dedektör taşınan düşük hacimli yükleri ile, kullanılabilir. MS detektöre akış ayarlama Bununla birlikte, önceki basınç düşüşü ayarlama yapılmalıdırMS dedektör yerine yazılan MS. Basınç kolayca uygunsuz ölü hacim eklemeden ayarlanabilir olarak Burada, dar delik boru (0.1 mm id) kullanımı çok yararlıdır. Dedektör tipine segmentasyon oranının ayarlanması bağlı öncesi ya da sonrası her iki dedektör yapılabilir. UV-Vis kullanıldığı gibi bir tahribatsız dedektör, akış yüzdesi ölçülür ve sonrası dedektörü ayarlanmış olsaydı. Tek bir yıkıcı dedektör kurmak multipleks kullanılması durumunda akış yüzdesi geri diğer liman akış yüzdeleri bakımından hesaplanarak belirlenir. Reaktif detektör gibi DPPH • olarak kullanılır ise, akış oranı reajanı eklenmesi olmaksızın direk detektörü ölçülür; İki veya daha fazla yıkıcı dedektörleri kullanılırsa, o zaman akış oranı öncesi dedektör ölçülür. Algılama ek enstrümantasyon gibi DPPH • gerektirebilir sistemleri, akış değiştirebilir ekstra sistem basıncını olacakyüzde kez algılama sistemine bağlı. Bu nedenle, dikkatli bir değerlendirme yıkıcı bir dedektörün sistem basıncı, debi oranını ayarlayarak ön dedektöre dikkat edilmelidir. Bakılmaksızın port herhangi aracılığıyla ayarlanır akış oranı, kantitatif bilgiler uygun standardizasyon yoluyla elde edilmelidir. Akış oranları ayarlandıktan sonra, ancak, bunlar sağlam ve hatta gradient çıkma koşulları 7 altında değişmeyen, Bu yazının eşlik ayrıntılı video protokolü algılama çoklanmış modda PSF sütun işleyişini kullanmak ve ayarlamak nasıl göstermek için tasarlanmıştır.

<table><tbody><tr><td>HPLC cihazı</td><td></td><td></td><td>Çoğullanmış algılama için tercih edilen çoklu dedektörler. Tercih edilen dedektörler, pompa gibi ek enstrümantasyon gerektirebilir.</td></tr><tr><td>Paralel Segmentli Akış HPLC kolonu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Tanımlanmadı</td><td>Yakında ticarileştirilecek</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>HPLC Sınıfı</td></tr><tr><td>PEEK boru</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>Çeşitli uzunluklar ve kimlik</td></tr><tr><td>Sütun durdurucular</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>Kullanılmayan çevresel bağlantı noktalarını engellemek için.</td></tr><tr><td>PEEK tüp kesici</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Analitik Terazi Terazisi</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kronometre</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eluent toplama kapları</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td>1-2 ml numune şişeleri eluent toplama kabı olarak kullanılabilir</td></tr></tbody></table>

paralel segment akış sütun tuning ve multipleks algılama etkinleştirme

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Aktif akış teknolojisi (AFT), akış heterojenliğinin üstesinden gelmek, verimlilik ve hassasiyet açısından ayırma performansını artırmak ve çoğullanmış algılamayı etkinleştirmek için tasarlanmış yeni bir kolon teknolojisi biçimidir. Bu AFT biçimi, paralel segmentli akış (PSF) sütunu kullanır. Bir PSF kolon çıkış uç bağlantısı, 4 adede kadar dedektör bağlamak için çoğullanabilen 2 veya 4 porttan oluşur. PSF sütunu yalnızca çoğullanmış algılama için bir platforma izin vermekle kalmaz, aynı zamanda aynı anda ek ölü hacim borusu olmadan hem yıkıcı hem de tahribatsız dedektörlerin kombinasyonuna izin verir. Her bir porttan geçen akış miktarı, belirli bir dedektörün/dedektörlerin gereksinimlerine uyacak şekilde basınç yönetimi yoluyla da ayarlanabilir. Bir PSF sütunu kullanarak çoğullanmış algılama elde etmek için, optimum ayırma performansını ve sonuçların kalitesini sağlamak için kontrol edilebilecek bir dizi parametre vardır; yani her port için boru boyutları, her dedektör tipi için port seçimi ve akış ayarı. Bu protokol, çoğullanmış bir algılama modunda çalışan bir PSF sütununun nasıl kullanılacağını ve ayarlanacağını göstermek için tasarlanmıştır.

Bir multiplekslenmiş HPLC analizi PSF modunda (Şekil 1) bir AFT kolonu kullanılarak gerçekleştirilen ve Şekil 2 &#39;de gösterildiği gibi oluşturuldu. Kurulum Bu tür kahve numunesi toplam UV-Vis, DPPH • ve MS kullanılarak eş zamanlı olarak analiz edilmesine izin İyon Sayısı (TIC) modu. Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi kromatogramları eş zamanlı olarak kaydedildi beri, tutma süresi uyum dayalı TIC tepkiler - DPPH • yanıtladı kahve örnek bileşikleri dah...

Burada, çoğullanmış algılamayı sağlamak için paralel segmentli akış kromatografisi kolonlarının çalıştırılması ve ayarlanması için bir protokol sunuyoruz.

Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

Bu HPLC prosedürünün genel amacı, çoklu tespiti mümkün kılmak için paralel segmentli akış kolonunu optimize etmektir. Bu yöntem; sağlık ve refah, çevre bilimleri, adli tıp ve biyokeşif gibi karmaşık örneklerin analizini gerektiren tüm alanlardaki temel sorulara yanıt vermektedir. Bu teknik, kapsamlı örnek analizine olanak tanırken aynı zamanda karmaşık karışımlardaki maddelerin kimyasal ve biyoaktif doğaları hakkında bilgi sağlamaktadır.Çoklu tespit protokolleri aynı zamanda hızlı analiz imkanı da sunar. Bu yöntem; kahve ve şarap gibi karmaşık karışımların kimyasal parmak izini belirlemeye yönelik stratejilerin geliştirilmesine olanak tanıyarak, üreticilerin kendi ürünleri ile ucuz taklit çeşitleri arasındaki farkı ayırt etmelerini sağlar. Başlangıçta, doğru bir analiz için numunenin tamamını tek bir dedektöre göndermemek alışılmadık gelebilir.Buna karşın, her bir akış hattındaki analit konsantrasyonu, konvansiyonel bir kolonun toplam akış hattından daha yüksektir. Başlamak için, HPLC cihazını sırasıyla A ve B mobil fazlar için %100 UE su ve saf metanol ile hazırlayın. Eğer bir MS dedektörü kullanılacaksa, her iki mobil faza %0,1 formik asit ekleyin ve ardından HPLC pompalarını üreticinin talimatlarına göre temizleyin.MS UV VS ve DPPH detektörlerini üretici talimatlarına uygun olarak birleştirin. Detektör hatlarındaki ölü hacmin minimum düzeyde olması için bileşenlerin uygun şekilde düzenlendiğinden emin olun.Ardından UV VISTA dedektör dalga boyunu, buradaki örneğe özgü dalga boyuna ayarlayın. MS dedektörü için 280 nanometre. Toplam iyon sayımı veya TIC analizi için tam tarama tespit yöntemiyle pozitif modu kullanın.MS detektörünün sıcaklık ve gaz akışını şu değerlere getirin. Buharlaştırıcı sıcaklığı 500 °C, kapiler sıcaklığı 350 °C, yardımcı gaz akışı 40 birim, süpürme gazı akışı beş birim, kılıf gazı hızı 60 birim ve sprey voltajı 3,5 kV. DPPH radikal reaktifi hazırlamak için 25 mg DPPH radikalini bir balon jojede 250 mL metanol içinde çözerek başlayın.Çözeltiye 250 µL formik asit ekleyin ve çözeltiyi 10 dakika boyunca sonikasyon işlemine tabi tutun. Ardından, ışığa maruz kalmasını önlemek için balonu ve folyoyu kapatın. Son olarak, DPPH radikal sistemini kurmak için üreticinin önerdiği şekilde pompayı DPPH radikal çözeltisiyle temizleyin.Pompa hattının bir T parçanın girişine sabitlendiğinden emin olun ve ardından 100 µL reaksiyon bobinini T parçanın çıkışına bağlayın. Detektörü reaksiyon bobini ENC kasasının diğer ucuna, reaksiyon bobinine ve bir kolon ısıtıcıya bağlayın. Son olarak, DPPH radikal UV detektörünü 520 nm'ye ayarlayın.Paralel segmentli akış veya PSF kolonu oluşturmak için önce kolon girişini HPLC cihazına bağlayın. Ardından, merkezi portu MS dedektörüne bağlamak için bir boru parçası kullanın. Bir çevre kolon portunu UV VS dedektörüne, bir diğerini ise DPPH radikal tespit sisteminin T parçasına bağlamak için aynı boyutlardaki boruları kullanın.Kullanılmayan tüm çevre portlarını kolon tıpalarıyla kapatın. 4,6 mm iç çaplı ve 250 mm uzunluğundaki bir kolon için HPLC akış hızını, %100 mobil faz B ile dakikada bir mililitreye ayarlayın. 20 dakika boyunca dengeleyin.PSF sistemini ayarlamaya başlamak için önce boş toplama kaplarını hazırlayın. UV VS. ve DPPH radikal portlarından mobil fazı ayrı ayrı toplamak için bu flakonları kullanın. Toplama süresini not edin ve her bir kapta en az 500 miligram çözücü toplayın.Ardından, mobil fazın kütlesini belirlemek için toplama kaplarını tartın ve her bir porttan toplanan mobil faz hacmini hesaplamak için kütleyi metanolün yoğunluğuna bölün. Son olarak, MS dedektörüne giden akış hızını belirleyin ve metin protokolünde belirtildiği gibi, tüm dedektörlerin akış oranlarını toplam akışın yüzdesi olarak hesaplayın. Akış oranları ideal değerlerden önemli ölçüde saparsa, geri basıncı ayarlamak için gerektiğinde ek borular ekleyin ve toplama ile hesaplama işlemini tekrarlayın.Son olarak, DPPH radikal reaktif pompasının akış hızını, detektöre bağlı çıkış portunun akış hızıyla eşleşecek şekilde ayarlayın. Bir kahve örneği üzerinde çoklu HPLC analizi gerçekleştirilmiştir. DPPH radikal UV ve MS kromatogramlarının eş zamanlı olarak kaydedilebilme yeteneği, örnekteki DPPH radikaline pozitif yanıt veren bileşiklerin UV kromatogramıyla kolayca eşleştirilmesini sağlar.Retansiyon süresi hizalamasına dayalı MS yanıtlarında, MSS TIC detektöründen pozitif bir yanıt alındığında piklerin moleküler kütlesi kaydedilmiştir. Farklı deteksiyon süreçleri arasındaki piklerin kolayca eşleştirilebilmesi, kahve gibi kompleks bir örnek için hızlı ve daha verimli bir tarama ve karakterizasyon imkanı sağlar. Bu prosedür takip edildiğinde, teknik bir kez kavrandıktan sonra yaklaşık bir saat içinde kurulabilir ve örnek analizine hazır hale getirilebilir. Ek örnek bilgileri elde etmek için kırılma indisi floresansı gibi diğer detektörler ve kemilüminesans gibi kimya tabanlı deteksiyon yöntemleri kullanılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, karmaşık bir örneği daha iyi anlamak için çoklu tespit süreçlerinin önemini kavramış olmalısınız. Ayrıca, paralel bölmeli akış kolonları kullanılarak yapılan çoklu tespit, biyolojik keşif gerçekleştirmek için son derece verimli bir yöntemdir.

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Proteinin saflaştırılması işleminde kullanılmak üzere uygun hidrofobik etkileşim kromatografısi (HIC) ortam tanımlanması için otomatik bir yöntem sunulmaktadır. Otomatik bir yöntem tampon karışım, dinamik bir örnek enjeksiyon döngüsü, ardışık sütun seçimi, çoklu dalga boyu analizi, ve iki fraksiyon eluat toplama dahil olmak üzere, orta basınçlı sıvı kromatografisi sistemi kullanır.

Protein Saflaştırma Kullanım için Otomatik Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi Sütun Seçimi

Post kolon türevlendirmesi (PCD) kullanan yöntemler için reaksiyon akışlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolonlarının kullanımına yönelik bir protokol sunulmuştur.

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

Burada, gelişmiş ayırma performansı için Perde akışı (CF) modunda Aktif Akış Teknolojisi (AFT) sütununun çalışması ve optimizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Akış Sütun Perde: Verimliliği ve Duyarlılık Optimizasyonu

Bir elektrosprey iyonizasyon (ESI) kütle spektrometresine bağlı, şirket içi yerleşik akışlı triptik mikro reaktör ile proteolitik sindirim için hızlı bir protokol sunulmaktadır. Mikroreaktörün üretimi, deney düzeneği ve veri toplama süreci anlatılmaktadır.

Bir akış oranı mikroreaktör MS Algılama Proteinlerin hızlı enzimatik işlenmesi

Damlacık mikroakışkanlarında çok renkli floresan algılama, tipik olarak hacimli ve karmaşık epifloresan mikroskobu tabanlı algılama sistemlerini içerir. Burada, tek bir fotodetektör tarafından toplanan çok renkli verileri geçici olarak kodlamak için bir dizi optik fiber kullanan kompakt ve modüler çok renkli bir algılama şemasını açıklıyoruz.

Damlacık Mikroakiskan için renkli Floresan Algılama Optik Elyaf kullanma

Birden mikroakışkan kanallarda parçacıkların algılama ve boyutlandırma multipleks için, kod bölmeli çoklu erişim (CDMA) ile rezistif darbe algılama (RPS) birleştiren entegre bir yüzey elektrot ağı ile mikroakışkan platformu göstermektedir.

Parçacıkların Mekansal Takip için Çoklanmış Elektronik Algılama ile mikroakışkan Platformu

Bu iletişim kuralı tek boyutlu (1 D) Difüzyon boyunca DNA moleküllerinin çalışmak için bir basit, sağlam ve yüksek üretilen iş tek molekül akışı uzanan tahlil göstermektedir.

Basit, sağlam ve yüksek üretilen iş tek bir molekül akışı germe tahlil uygulama boyunca DNA moleküllerinin taşıma eğitimi için

Burada ayrıntılı işlem ve derleme kolloidal yarı iletken nanocrystal immobilizasyonu sistematik karakterizasyonu için modüler mikrosıvısal tarama platformun iletişim kurallarıdır. Tam ayarlanabilir sistem düzenlemeler ile yüksek verimli spectra koleksiyonu 4 büyüklük reaksiyon zamanı ölçekler bir kütle transferi kontrol örnekleme alanı içinde genelinde yürütülen.

Kolloidal yarı iletken Nanocrystals sistematik çalışmalar için modüler bir mikrosıvısal teknolojisi

Burada optimize edilmiş FlashPack kılcal sütun paketleme prosedürü için bir protokol sunuyoruz. Optimize edilmiş bir protokolün ortak bir 100 bar basınçlı bomba kurulumuna uygulanması, uzun ultra yüksek performanslı kılcal sütunların 10 kat daha hızlı paketlenerek üretilmesini sağlar.

FlashPack Yaklaşımı ile Basit Şirket İçi Ultra Yüksek Performanslı Kılcal Sütun Üretimi

Mikroakışkan odalar aracılığıyla incelenen görsel, tek moleküllü biyokimya, cam varil, gaz geçirmez şırıngalar, boruların akış hücrelerine kararlı bağlantıları ve şırıngalar ve borular arasına anahtarlama valfleri yerleştirilerek kabarcıkların ortadan kaldırılması kullanılarak büyük ölçüde kolaylaştırılmıştır. Protokol, DNA işlemlerinin ve moleküller arası etkileşimlerin görselleştirilmesini sağlayan çift optik tuzakları tanımlar.

Tek Moleküllü Çalışmalarda Çift Optik Cımbız ve Mikroakışkan Kullanımı

Bu çalışma, uyarma dalga biçimlerini optimize ederek, çok aşamalı filtreleme uygulayarak ve Karmaşık Programlanabilir Mantık Cihazı (CPLD) tabanlı düzeltme kullanarak elektromanyetik akış ölçer doğruluğunu geliştirir. Yeni bir dalga formu tabanlı boş boru algılama yöntemi, güvenilirliği artırır. Deneyler, 0,1-15 m/s içinde %0,1 doğruluk göstererek endüstriyel uygulanabilirliği doğrular.

Karmaşık Programlanabilir Mantık Cihazı Tabanlı Dalga Formu Tanıma ile Boş Boru Algılamalı Yüksek Hassasiyetli Elektromanyetik Debimetre

Öğrenin, paralel segment akış kolonlarını ayarlayarak çoklu algılama ile karmaşık örneklerin kapsamlı analizini nasıl gerçekleştireceğinizi. Bu yöntem, sağlık, çevre bilimleri ve adli tıpta hızlı tarama sağlar.

Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme

Daha fazla video keşfet