Name: Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Öğrenin, reaksiyon akış sütunları kullanarak HPLC mesaj sütun türevlendirme yönteminin verimliliğini ve duyarlılığını nasıl artıracağınızı. Bu teknik, düşük dedektör yanıtlı bileşiklerin analizinde reaksiyon bobinlerine gerek kalmadan üstün sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma UWS ve ThermoFisher Scientific tarafından desteklenmiştir. Yazarlardan biri (DK), Avustralya Yüksek Lisans Ödülü'nün alındığını onaylar.

Dikkat: (metanol, yani MSDS) kullanmadan önce tüm malzeme ve reaktifler için malzeme güvenlik veri sayfaları (MSDS) bakınız. çözücüler ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) yıkayıcı işlerken tüm uygun güvenlik uygulamalarının kullanımını sağlamak. HPLC, analitik terazi ve dedektör enstrümantasyon mühendislik kontrollerinin uygun kullanımını sağlamak ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı parmak ayakkabı) kullanımını sağlamak. Not: Bu protokol, ilgi konusu bir kimyasal bileşiğin doğası özgü, farklı bir reaktif ile reaksiyonu akış kolon sonrası türevlendirme 3 yöntem (RF-PCD) teknikleri açıklanmaktadır. ROS analizi için &quot;floreskamin kullanarak birincil aminler 2. Tespiti&quot; bölümüne bakın birincil aminler analizi için, &quot;ROS 1. Tespit DPPH • kullanarak&quot; bölümüne gidin ve fenolik bileşiklerin analizi için bölüm &quot;3 gidin . fenollerin algılama4-aminoantipiren ve potasyum ferrisiyanürünü &quot;seçeneğini kullanarak. boyunca ultra saf su (örneğin, Milli-Q su) kullanınız. Not: RF sütunun bağlantısı önemli bir fark, bir RF kolonu üzerinde son parçaları sayısı olmak geleneksel bir HPLC kolonu ile hemen hemen aynı şekilde elde edilir. HPLC sistemi standart bir HPLC kolonu bağlamak için kullanılan Bağlantı HPLC sistemine RF sütun bağlamak için kullanılabilir edebiliyoruz. 1. ROS Algılama DPPH • Kullanımı <ol><li> HPLC aletinin kurmak <ol><li> A hattı% 100 su ve mobil faz olarak, B hattı üzerindeki% 100 metanol ile HPLC aleti hazırlayın. üreticinin ihtiyaçlarına göre pompaları temizleyin. </li><li> HPLC aracı bileşenleri ve Şekil 4A&#39;da gösterildiği gibi, ek bir türetme pompa ayarlayın. </li><li> 520 nm&#39;lik bir dalga uzunluğunda analiz edilmesi, UV-Vis detektörü ayarlayın. </li></ol></li><li> Kadar ayarlayınRF sütunu <ol><li> HPLC aleti RF sütununun girişine bağlayın. </li><li> RF sütunu merkezi çıkış limanına 0.13 mm ID tüp içinde 15 cm uzunluğunda bağlayın. </li><li> 0.13 mm ID tüp içinde 15 cm uzunluğunda kullanılarak UV-Vis detektörü bir çıkış çevre portunu. </li><li> RF sütunun çıkışına bir çevresel bağlantı noktasına DPPH • Pompa hattı bağlayın. </li><li> Bir sütun tıpa kullanarak RF sütunun çıkışında kullanılmayan periferik bağlantı noktasını engelleyin. </li><li> 1 mi dak HPLC pompası akış oranı getirmek -1% 100 hattı B -% 100 metanol. </li><li> Bir 4.6 mm iç çap x 100 mm uzunluk sütun için 10 dakika boyunca% 100 metanol hareketli faz ile sütun dengelenmesi. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre ölçeklenebilir olmalıdır. </li></ol></li><li> DPPH • ayıracın hazırlanması <ol><li> Metanol DPPH • bir 0.1 mg / ml çözelti hazırlayın. </li&gt; <li> 10 dakika boyunca DPPH • reaktifı ihtiva eden şişenin sonikasyon. </li><li> Işığa maruz kalmasını önlemek için folyo balon örtün. </li><li> Üreticinin ihtiyaçlarına göre hazırlanan DPPH • reaktif ile DPPH • Pompayı temizleyin. </li></ol></li><li> RF kolon çıkışı Tuning <ol><li> Doğru iki temiz ve kuru damarları tartın. bir merkezi olarak gemi ve periferik gibi diğer etiketleyin. </li><li> 1.0 dakika boyunca orta etiketli kabın içine orta noktasını çıkan atık toplamak. </li><li> merkez liman gemi yeniden tartmak ve aşağıdaki gibi merkezi bağlantı noktasından akışının ağırlığı hesaplamak: Merkez Liman Gemi başlangıç ​​Ağırlık (g) - Merkez Port (g) Ağırlık Orta Liman Gemi (g) Nihai Ağırlık = </li><li> Tekrarlayın UV-Vis RF sütunun çevresel bağlantı noktasına bağlı ve periferik liman gemisi olarak ağırlığını hesaplamak olduğunu çıkan atığın için 1.4.2 ve 1.4.3 adımlarıaşağıdaki gibidir: Periferik Liman Gemi başlangıç ​​Ağırlık (g) - Çevresel Port (g) Ağırlık Periferik Liman Gemi (g) Nihai Ağırlık = </li><li> aşağıdaki şekilde, merkezi ve periferik bağlantı noktaları gelen akış yüzdesini hesaplayın: % Merkezi Port Central Port (g) = Ağırlık / (Merkez Limanı (g) + Çevresel Port (g) Ağırlık Ağırlık) x 100 % Periferik Liman Periferik Port (g) = Ağırlık / (Merkez Limanı (g) + Çevresel Port (g) Ağırlık Ağırlık) x 100 </li><li> merkezi akış ve çevresel akış arasındaki segmentasyon oranını sağlamak 30:70 (: periferik santral) &#39;dir. orta akış% 30 üzerinde ise, merkezi bağlantı çıkışına 0.13 mm ID tüp uzunluğu eklenerek çıkan akış miktarını azaltır. merkezi akış% 30 altında ise merkez limanından 0,13 mm boru uzunluğunu azaltır. </li><li> (: Periferik santral) elde edilir 30:70 bir segmentasyon oranı kadar adımı yineleyin 1.4.1 1.4.6 için. </li><li> D akış hızını ayarlama0.5 ml dk -1 PPK • reaktif pompası. Not: DPPH • reaktif ile kurmak RF sütun artık analiz için hazırdır. Örnekler hemen enjekte edilebilir. </li></ol></li><li> Mesaj çalıştırmak kapatma koşulları <ol><li> Numunelerin tüm çalışma bittikten belirten enjekte edildikten sonra, türetme reaktif pompa akışını durdurun. </li><li> Periferik bağlantı noktasından DPPH • reaktif pompa satırını kaldırın ve bağlantı noktası tıpalayın. </li><li> Mobil faz 1 ml dk sütun üzerinden geçirmek için -1, 10 dakika için izin depolanacak olan mobil faz ile sütun dengelenmesi. </li><li> HPLC cihazı üzerinde mobil faz pompanın akışını durdurun. </li><li> Metanol ile DPPH • reaktifi değiştirin ve ilave pompa temizlemek. Not: HPLC sistemi şimdi kapanma olabilir. </li></ol></li></ol> Fluoresc kullanılarak primer aminlerin 2. Tespitamin <ol><li> Mobil faz hazırlanması <ol><li> hacme seyreltme öncesi 5 M amonyum hidroksit ile 9.0&#39;a çözeltinin pH&#39;ının ayarlanmasını, 10 mM amonyum asetat çözeltisi bir 1 L hazırlayın. </li><li> 95:05 (: ACN tamponu) bir önceden karıştırılmış mobil faz elde etmek için amonyum asetat tampon asetonitril (ACN) ve 52.6 ml ilave edilir. </li></ol></li><li> HPLC aletinin kurmak <ol><li> mobil faz olarak A hattı üzerindeki önceden karıştırılmış hazırlanan tampon ile HPLC cihazı hazırlayın. üreticinin ihtiyaçlarına göre pompayı temizleyin. </li><li> HPLC aracı bileşenleri ve Şekil 4A&#39;da gösterildiği gibi, ek bir türetme pompa ayarlayın. </li><li> türetme pompasına bir darbe dampener bobin takın. </li><li> Ayar floresans dedektörü (FLD) 475 nm 390 nm ve emisyon dalga bir eksitasyon dalga boyu ile. </li></ol></li><li> RF sütunun kurmak <ol><li> th bağlayınHPLC aleti RF sütunun e girişi. </li><li> RF sütunu merkezi çıkış limanına 0.13 mm ID tüp içinde 15 cm uzunluğunda bağlayın. </li><li> 0.13 mm ID tüp içinde 15 cm uzunluğunda kullanılarak FLD detektöre RF sütunu bir çıkış çevre portunu. </li><li> RF sütunun çıkışına bir çevresel bağlantı noktasına türetme pompa hattı bağlayın. </li><li> Bir sütun tıpa kullanarak RF sütunun çıkışında kullanılmayan periferik bağlantı noktasını engelleyin. </li><li> 1 mi dak HPLC pompası akış oranı getirmek -1% 100 hattı A -% 5 ACN ile önceden karıştırılmış, 10 mM amonyum asetat tampon pH 9. </li><li> Bir 4.6 mm iç çap x 100 mm uzunluk sütun için 10 dakika boyunca% 100 A hattı hareketli faz ile sütun dengelenmesi. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre ölçeklendirilebilir. </li></ol></li><li> Floreskamin ayıracın hazırlanması <ol><li> Bir 0.1 mg mi -1 floreskamin reaktif 100 ml olun. </li> &lt;1 dakika boyunca li&gt; sonikasyon. </li><li> Işığa maruz kalmasını önlemek için folyo ile örtün. </li><li> üreticinin ihtiyaçlarına göre hazırlanmış floreskamin reaktif ile reaktif pompasını temizleyin. </li></ol></li><li> RF kolon çıkışı Tuning <ol><li> Doğru iki temiz ve kuru damarları tartın. bir merkezi olarak gemi ve periferik gibi diğer etiketleyin. </li><li> 1.0 dakika boyunca orta etiketli kabın içine orta noktasını çıkan atık toplamak. </li><li> Merkezi damar yeniden tartın ve aşama 1.4.3 şu şekilde merkez limanından akış ağırlığı hesaplamak. </li><li> Tekrarlayın RF sütunun çevresel bağlantı noktasına bağlı ve adım 1.4.4 şu şekilde periferik için ağırlığı hesaplamak olduğunu FLD çıkan atığın için 2.5.3 için 2.5.2 adımları. </li><li> Adım 1.4.5 şu şekilde santral ve periferik limanlarından gelen akış yüzdesini hesaplayın. </li><li> merkezi akış ve periferik arasındaki segmentasyon oranını sağlamakAkış 43:57 (: periferik santral) &#39;dir. orta akış% 43 üzerinde ise, merkezi bağlantı çıkışına 0.13 mm ID tüp uzunluğu eklenerek çıkan akış miktarını azaltır. orta akış% 43 altında ise, merkezi bağlantı noktasından 0,13 mm boru uzunluğunu azaltır. </li><li> (: Periferik santral) elde edilir 43:57 bir segmentasyon oranı kadar adımı yineleyin 2.5.1 2.5.6 için. </li><li> 0.7 mi dakika mobil faz pompa akış hızını ayarlama -1. </li><li> 0.1 ml dk akış türetme pompa ayarlama -1. Not: floreskamin reaktif ile kurmak RF sütun artık analiz için hazırdır. Örnekler hemen enjekte edilebilir. </li></ol></li><li> Mesaj çalıştırmak kapatma koşulları <ol><li> Numunelerin tüm çalışma bittikten belirten enjekte edildikten sonra, türetme pompayı durdurun. </li><li> Periferik liman ve stoper gelen türetme pompa hattını sökün. </li><li> mobil fazda ile kolon dengeyebu da mobil faz 1 ml dk sütun üzerinden geçirmek için -1, 10 dakika boyunca izin vererek saklanacaksa. </li><li> mobil faz pompanın akışını durdurun. </li><li> asetonitril ile floreskamin reaktifi değiştirin ve türetme pompasını temizlemek. Not: HPLC sistemi şimdi kapanma olabilir. </li></ol></li></ol> 4-aminoantipiren ve potasyum ferrisiyanür kullanılması Fenollerin 3. Algılama <ol><li> Mobil faz hazırlanması <ol><li> hacme seyreltme öncesi 5 M amonyum hidroksit ile 9.0&#39;a çözeltinin pH&#39;ının ayarlanmasını, 100 mM bir amonyum asetat çözeltisi bir 1 L hazırlayın. </li><li> (: Metanol tamponu) 5: 95 bir önceden karıştırılmış mobil faz elde etmek için amonyum asetat tampon metanol 52.6 ml ekleyin. </li></ol></li><li> HPLC aletinin kurmak <ol><li> mobil faz olarak A hattı üzerindeki önceden karıştırılmış hazırlanan tampon ile HPLC cihazı hazırlayın. üretici başına kadar pompayı Temizle &#39;; S gereksinimleri. </li><li> HPLC aracı bileşenleri ve Şekil 4B&#39;de gösterildiği gibi iki ilave belirteci pompaları ayarlayın. </li><li> reaktif pompalarının her birine bir darbe dampener bobin takın. </li><li> 500 nm&#39;lik bir dalga uzunluğunda analiz edilmesi, UV-Vis detektörü ayarlayın. </li></ol></li><li> RF sütunun kurmak <ol><li> HPLC aleti RF sütununun girişine bağlayın. </li><li> RF sütunu merkezi çıkış limanına 0.13 mm ID tüp içinde 15 cm uzunluğunda bağlayın. </li><li> 0.13 mm ID tüp içinde 15 cm uzunluğunda kullanılarak UV-Vis detektörü RF sütunu bir çıkış çevre portunu. </li><li> Her reaktifi (yani, 4-aminoantipiren ve potasyum ferrisiyanürle) RF sütunun çıkışına bir çevresel bağlantı noktasına pompa hattı bağlayın. </li><li> 1 mi dak HPLC pompası akış oranı getirmek -1% 100 hattı A -% 5 metanol ile önceden 100 mM amonyum asetat tampon pH 9. </li><li> w sütunu dengeyeBir 4.6 mm iç çap x 100 mm uzunluk sütun için 10 dakika boyunca% 100 A hattı mobil faz i. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre ölçeklendirilebilir. </li></ol></li><li> 4-aminoantipiren ayıracın hazırlanması <ol><li> adım 3.1.1 izleyerek 9 bir pH değerine sahip bir amonyum asetat tamponu hazırlayın. </li><li> 150 mg kadar 4-aminoantipiren tartılır ve hazırlanan amonyum asetat tamponu (pH 9), 100 ml içinde çözülür. </li><li> 1 dakika boyunca ultrasonik titremeye maruz bırakılır. </li><li> Işığa maruz kalmasını önlemek için folyo ile örtün. </li><li> üreticinin ihtiyaçlarına göre hazırlanmış 4-aminoantipiren reaktif ile ilk reaktif pompasını temizleyin. </li></ol></li><li> Potasyum ferrisiyanür ayıracın hazırlanması <ol><li> potasyum ferrisiyanür 150 mg ağırlığında ve adım 3.1.1 göre hazırlanan amonyum asetat tamponu, 100 ml (pH 9) içinde çözülür. </li><li> 1 dakika boyunca ultrasonik titremeye maruz bırakılır. </li><li> Işığa maruz kalmasını önlemek için folyo örtün. </li><li> Purgüreticinin ihtiyaçlarına göre hazırlanmış potasyum ferrisiyanür reaktif ile e ikinci reaktif pompası. </li></ol></li><li> RF sütunun Tuning <ol><li> Doğru iki temiz ve kuru damarları tartın. bir merkezi olarak gemi ve periferik gibi diğer etiketleyin. </li><li> 1.0 dakika boyunca orta etiketli kabın içine orta noktasını çıkan atık toplamak. </li><li> Merkezi damar yeniden tartın ve aşama 1.4.3 şu şekilde merkez limanından akış ağırlığı hesaplamak. </li><li> Tekrarlayın UV-Vis RF sütunun çevresel bağlantı noktasına bağlı ve adım 1.4.4 şu şekilde periferik için ağırlığı hesaplamak olduğunu çıkan atığın için 3.6.3 için 3.6.2 adımları. </li><li> Adım 1.4.5 şu şekilde santral ve periferik limanlarından gelen akış yüzdesini hesaplayın. </li><li> merkezi akış ve çevresel akış arasındaki segmentasyon oranını sağlamak 50:50 (: periferik santral) &#39;dir. orta akış% 50 üzerinde ise, azaltmakçıkış, merkezi noktasına 0.13 mm ID tüp uzunluğu eklenerek çıkan akış miktarı. orta akış% 50 altında ise, merkezi bağlantı noktasından 0,13 mm boru uzunluğunu azaltır. </li><li> (: Periferik santral) elde edilir 50:50 bir segmentasyon oranı kadar adımı yineleyin 3.6.1 3.6.6 için. </li><li> 0.5 mi dakika 4-aminoantipiren pompa akış hızını ayarlama -1. </li><li> 0.25 mi dk potasyum ferrisiyanür pompa akış hızını ayarlama -1. Not: İki bileşenli reaktif kurmak RF sütun artık analiz için hazırdır. Örnekler hemen enjekte edilebilir. </li></ol></li><li> Mesaj çalıştırmak kapatma koşulları <ol><li> Numunelerin tüm çalışma bittikten belirten bittikten çalışma enjekte edildikten sonra, reaktif pompaları hem dur. </li><li> Periferik limanlarından reaktif pompa satırları kaldırın ve 0,13 mm boru 15 cm parça ile değiştirin. </li><li> WHI mobil faz ile sütun dengeyeCH mobil faz 1 ml dk sütun üzerinden geçirmek için -1, 10 dakika boyunca izin vererek saklanacaksa. </li><li> HPLC cihazı üzerinde mobil faz pompanın akışını durdurun. </li><li> Değiştir hem ayıraç reaktifler metanol ile pompa ve üretici şartının gibi ek pompaları temizlemek. Not: HPLC sistemi şimdi kapanma olabilir. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Srijaranai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+1-%282-pyridylazo%29-2-naphthol+as+the+post+column+reagent+for+ion+exchange+chromatography+of+heavy+metals+in+environmental+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Use of 1-(2-pyridylazo)-2-naphthol as the post column reagent for ion exchange chromatography of heavy metals in environmental samples.</a> Microchem. J. 99, 152-158 (2011).</li>
<li>Kubickova, A., Kubicek, V., Coufal, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UV-VIS+detection+of+amino+acids+in+liquid+chromatography%3A+online+post-column+solid-state+derivatization+with+Cu%28II%29+ions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Sep+Sci%22%5BJournal%5D)">UV-VIS detection of amino acids in liquid chromatography: online post-column solid-state derivatization with Cu(II) ions.</a> J Sep Sci. 34, 3131-3135 (2011).</li>
<li>Quinto, M., Spadaccino, G., Palermo, C., Centonze, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+aflatoxins+in+cereal+flours+by+solid-phase+microextraction+coupled+with+liquid+chromatography+and+post-column+photochemical+derivatization-fluorescence+detection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Determination of aflatoxins in cereal flours by solid-phase microextraction coupled with liquid chromatography and post-column photochemical derivatization-fluorescence detection.</a> J. Chromatogr. A. 1216, 8636-8641 (2009).</li>
<li>Lee, M., Lee, Y., Soltermann, F., von Gunten, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+N-nitrosamines+and+other+nitro%28so%29+compounds+in+water+by+high-performance+liquid+chromatography+with+post-column+UV+photolysis%2FGriess+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Analysis of N-nitrosamines and other nitro(so) compounds in water by high-performance liquid chromatography with post-column UV photolysis/Griess reaction.</a> Water Res. 47, 4893-4903 (2013).</li>
<li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+isoflavonoids+in+Radix+Puerariae+for+quality+control+using+on-line+high+performance+liquid+chromatography-diode+array+detector-electrospray+ionization-mass+spectrometry+coupled+with+post-column+derivatization%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Identification of isoflavonoids in Radix Puerariae for quality control using on-line high performance liquid chromatography-diode array detector-electrospray ionization-mass spectrometry coupled with post-column derivatization.</a> Food Res Int. 48, 528-537 (2012).</li>
<li>Zacharis, C. K., Tzanavaras, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+chromatography+coupled+to+on-line+post+column+derivatization+for+the+determination+of+organic+compounds%3A+a+review+on+instrumentation+and+chemistries%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">Liquid chromatography coupled to on-line post column derivatization for the determination of organic compounds: a review on instrumentation and chemistries.</a> Anal. Chim. Acta. 798, 1-24 (2013).</li>
<li>Dousa, M., Brichac, J., Gibala, P., Lehnert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+hydrophilic+interaction+chromatography+determination+of+lysine+in+pharmaceutical+preparations+with+fluorescence+detection+after+postcolumn+derivatization+with+o-phtaldialdehyde%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharm+Biomed+Anal%22%5BJournal%5D)">Rapid hydrophilic interaction chromatography determination of lysine in pharmaceutical preparations with fluorescence detection after postcolumn derivatization with o-phtaldialdehyde.</a> J Pharm Biomed Anal. 54, 972-978 (2011).</li>
<li>Iijima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+Online+Post-Column+Derivatization+System+for+Ultra+High-Performance+Liquid+Chromatography+%28UHPLC%29+and+Its+Applications+to+Analysis+of+Biogenic+Amines%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Sci%22%5BJournal%5D)">Optimization of an Online Post-Column Derivatization System for Ultra High-Performance Liquid Chromatography (UHPLC) and Its Applications to Analysis of Biogenic Amines.</a> Anal Sci. 29, 539-545 (2013).</li>
<li>Cunico, R. L., Schlabach, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Ninhydrin+and+o-Phthalaldehyde+Postcolumn+Detection+Techniques+for+High+Performance+Liquid+Chromatography+of+Free+Amino%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparison of Ninhydrin and o-Phthalaldehyde Postcolumn Detection Techniques for High Performance Liquid Chromatography of Free Amino.</a> J. Chromatogr. A. 1983, 461-470 (1983).</li>
<li>Donahue, E. P., Brown, L. L., Flakoll, P. J., Abumrad, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Measurement+of+Leucine-specific+Activity+in+Biological+Fluids+by+Ion-exchange+Chromatography+and+Post-column+Ninhydrin+Detection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Rapid Measurement of Leucine-specific Activity in Biological Fluids by Ion-exchange Chromatography and Post-column Ninhydrin Detection.</a> J. Chromatogr. A. 571, 29-36 (1998).</li>
<li>Udenfriend, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescamine%3A+A+Reagent+for+Assay+of+Amino+Acids%2C+Peptides%2C+Proteins+and+Primary+Amines+in+the+Picomole+Range%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fluorescamine: A Reagent for Assay of Amino Acids, Peptides, Proteins and Primary Amines in the Picomole Range.</a> Science. 1972, 871-872 (1972).</li>
<li>Samejima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+of+Fluorescamine+Derivitices+of+Aliphatic+Diamines+and+Polyamines+by+High+Speed+Liquid+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Separation of Fluorescamine Derivitices of Aliphatic Diamines and Polyamines by High Speed Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 96, 250-254 (1974).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+antioxidant+activity+of+ten+compounds+in+different+tea+samples+by+means+of+an+on-line+HPLC-DPPH+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Evaluation of antioxidant activity of ten compounds in different tea samples by means of an on-line HPLC-DPPH assay.</a> Food Res Int. 53, 847-856 (2013).</li>
<li>Niu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+the+anti-oxidants+in+Flos+Chrysanthemi+by+HPLC-DAD-ESI%2FMS%28n%29+and+HPLC+coupled+with+a+post-column+derivatisation+system%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem+Anal%22%5BJournal%5D)">Identification of the anti-oxidants in Flos Chrysanthemi by HPLC-DAD-ESI/MS(n) and HPLC coupled with a post-column derivatisation system.</a> Phytochem Anal. 24, 59-68 (2013).</li>
<li>Raudonis, R., Bumblauskiene, L., Jakstas, V., Pukalskas, A., Janulis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+and+validation+of+post-column+assay+for+screening+of+radical+scavengers+in+herbal+raw+materials+and+herbal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Optimization and validation of post-column assay for screening of radical scavengers in herbal raw materials and herbal preparations.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 7690-7698 (2010).</li>
<li>Raudonis, R., Raudone, L., Jakstas, V., Janulis, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+post-column+free+radical+scavenging+and+ferric+reducing+antioxidant+power+assays+for+screening+of+antioxidants+in+strawberries%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of post-column free radical scavenging and ferric reducing antioxidant power assays for screening of antioxidants in strawberries.</a> J. Chromatogr. A. 1233, 8-15 (2012).</li>
<li>Zakrzewski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Methimazole+in+Pharmaceutical+Preparations+using+an+HPLC+Method+Coupled+with+an+Iodine-Azide+Post-Column+Reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Liq.+Chrom.+Rel.+Technol%22%5BJournal%5D)">Determination of Methimazole in Pharmaceutical Preparations using an HPLC Method Coupled with an Iodine-Azide Post-Column Reaction.</a> J. Liq. Chrom. Rel. Technol. 32, 383-398 (2008).</li>
<li>Zakrzewski, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+reversed-phase+HPLC+method+with+post-column+iodine-azide+reaction+for+the+determination+of+thioguanine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a reversed-phase HPLC method with post-column iodine-azide reaction for the determination of thioguanine.</a> J. Anal. Chem. 64, 1235-1241 (2009).</li>
<li>Gritti, F., Guiochon, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+measurements+of+the+true+column+efficiency+and+of+the+instrument+band+broadening+contributions+in+the+presence+of+a+chromatographic+column%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Accurate measurements of the true column efficiency and of the instrument band broadening contributions in the presence of a chromatographic column.</a> J. Chromatogr. A. 1327, 49-56 (2014).</li>
<li>Stewart, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post+cotumn+derivatization+methodology+in+high+performance+liquid+chromatography+%28HPLC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Post cotumn derivatization methodology in high performance liquid chromatography (HPLC).</a> Trends Anal. Chem. 1, 170-174 (1982).</li>
<li>Rigas, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-column+labeling+techniques+in+amino+acid+analysis+by+liquid+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Bioanal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Post-column labeling techniques in amino acid analysis by liquid chromatography.</a> Anal. Bioanal. Chem. 405, 7957-7992 (2013).</li>
<li>Frei, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+Detectors+in+Modern+Liquid+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Chromatographia%22%5BJournal%5D)">Reaction Detectors in Modern Liquid Chromatography.</a> Chromatographia. 15, 161-166 (1982).</li>
<li>Pravadil-Cekic, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Reaction+Flow+Chromatography+for+the+Analysis+of+Amino+Acid%3A+Derivatisation+With+Fluorescamine+Reagent%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Using Reaction Flow Chromatography for the Analysis of Amino Acid: Derivatisation With Fluorescamine Reagent.</a> Microchem. J. , (Accepted Manuscript) (2015).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection%3A+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li>
<li>Koleva, I. I., Niederlander, H. A. G., van Beek, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+On-Line+HPLC+Method+for+Detection+of+Radical+Scavenging+Compounds+in+Complex+Mixtures%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">An On-Line HPLC Method for Detection of Radical Scavenging Compounds in Complex Mixtures.</a> Anal Chem. 72, 2323-2328 (2000).</li>
<li>Selim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Two-component+Post-column+Derivatisation+Method+Utilsing+Reaction+Flow+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Microchem.+J%22%5BJournal%5D)">A Two-component Post-column Derivatisation Method Utilsing Reaction Flow Chromatography.</a> Microchem. J. 116, 87-91 (2014).</li>
<li>Bigley, F. P., Grob, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+Phenols+in+Water+and+Wastewater+by+Post-column+Reaction+Detection+High-performance+Liquid+Chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Determination of Phenols in Water and Wastewater by Post-column Reaction Detection High-performance Liquid Chromatography.</a> J. Chromatogr. A. 350, 407-416 (1985).</li>
<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reaction+flow+chromatography+for+rapid+post+column+derivatisations%3A+The+analysis+of+antioxidants+in+natural+products%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Chromatogr.+A%22%5BJournal%5D)">Reaction flow chromatography for rapid post column derivatisations: The analysis of antioxidants in natural products.</a> J. Chromatogr. A. 1303, 62-65 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

RF-PCD bant genişletilmesi etkilerinin en aza indirilmesi ve ayırma performansını artırmak, reaksiyon bobinler kullanılmadan HPLC atık sonrası sütun ile türetme reaktif verimli karıştırma sağlar. RF-PCD yöntemler de tespit yöntemi ile ilgili olarak, sinyal yanıt olarak iyileşme göstermiştir. Camenzuli ve ark., 28 espresso kahve numunesinde ROS tespiti için DPPH • reaksiyon akış sütun kullandığını rapor için ilk oldu. Yaptıkları çalışmada çeşitli DPPH • reaktif akış oranları ile ...

Kolon sonrası türevlendirme (PCD) ile birleştirilen yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) analiz laboratuarda bir dizi konu çözümünde yararlı olan güçlü bir araçtır. Bu, 1,2 uygun dedektörler paketi ile başka bir tespit edilemeyen bileşikler tespit seçici saptanması ve nicelenmesi 3-5 alt sınırları sağlar veya hedef analitin sinyal geliştirmek için kullanılabilir önlemek için bir hedef analitin türetmek matriks etkileri 6. Yaygın olarak kullanılan PCD reaksiyonları 9,10 veya floreskamin 11,12, 2,2-difenil-ile reaktif oksijen türlerinin türetme (ROS) ninhidrin orto-phthaladehyde 7-9 olan amino asitler gibi aminlerin reaksiyonu içerir 1-picrylhydrazil kökü (DPPH) • 13,14 veya 2,2&#39;-azino-bis (3-etilbenzotiazolin-6-sülfonik asit (ABTS) 15,16 ve sülfür c türetmek için iyodid-azit belirteci kullanılmasıiçeren gruptur bileşikler 17,18. HPLC sistemleri 6 PCD reaksiyonlarının kullanılması ile pek çok dezavantajları, ancak vardır. Prensip olarak, bu arasında karıştırılması ve reaksiyon, 8 oluşması için zaman tanımak türetme reajan (lar) ve dedektör, ilave alanına arasındaki reaksiyon, rulo kullanılmasıdır. Bu reaksiyon genellikle HPLC sistemi 19 geri kalan hacmi ile karşılaştırıldığında önemli 500 ul ya da daha fazla, hacimleri var döngüler. Bu yüksek hacim, reaksiyon bölgesinin kullanımı Reaksiyon bağın varlığı olmaksızın gözlenebilir etkilere kıyasla artırılmış tepe genişletilmesi sonuçları döngüler. Bu kantitatif ve algılama yüksek sınırları var kısa, daha geniş zirveleri ile sonuçlanır ve olumsuz kromatografik çözünürlüğü etkiler. 1 Rakamlar ve 2 farklı sonrası kolon reaksiyon döngü hacimlerinin yanı sıra kaynaklanan pik şeklinin bozulmasını vurgulayın. Bu analiz,bir cep 94% metanol faz bileşimi ve% 6 Milli-Q su ile yapıldı. Hareketli fazın akış oranı 1 ml / dak, enjeksiyon hacmi 20 ul ve analiz dalga boyu 265 nm idi. 20 ul 1.000 ul ölü hacimleri değişen Rulo sütun ve PCD yöntemleri reaksiyon döngü ölü hacim etkilerini simüle etmek için dedektör arasına yerleştirildi. Bu ilmekler, 0.5 mm iç çapa sahip, paslanmaz çelik boru hazırlandı. Deney, denetleyici (SCL-10AVP) &#39;den oluşan bir HPLC sistemi üzerinde gerçekleştirilmiştir, bir düşük basınç Gradyan Vana (FCL-10ALVP), bir pompa (LC-20AD), bir enjektör (SIL-10ADVP) ve PDA dedektör ( SPD-M10ADVP). Mobil faz önce HPLC sistemine sokulmadan bir faz giderme yoluyla pompalanmıştır. Ayırma 250 mm x 4.6 mm İD 5 um kolonu kullanılarak gerçekleştirildi. Deney koşulları en son literatürde yayınlanmıştır PCD reaksiyonlar tipik olarak seçilmiştir. En basit, en yaygın sonrası kolon reaktör kurulum etkili bir sıvı akabilir ve reaksiyon gerçekleşebilir hangi aracılığıyla uzun, ince bir tüp olmayan bir parçalı boru şeklinde reaktör denir. Bu sistem, zirve genişleme sadece sisteme eklenen ölü hacim değil, aynı zamanda lijima ve arkadaşları. 8 tarafından belirtildiği gibi borunun iç çapına bağlıdır. Ayrıca, bobin geometrisi gözlenen marka genişlemesi bir rol oynar. Reaktörün sarma ölü hacim minimize edilebilir, yani daha iyi bir karıştırma sonucu, ikincil akış profilleri değiştirir Stewart 20 belirtti. 21 bobin örme açık boru şeklinde kullanırken pik genişlemesi önemli olmadığı ifade edilmiştir. Pik genişletilmesi aşırı büyük olduğunda, başka reaktör tipleri de 20,22 düşünülebilir. Bunlar yatak reaktörleri veya parçalı akış reaktörleri içerebilir. Bu reaktörler, ki bunlar aksi takdirde requir olur yavaş reaksiyonlar için özellikle yararlı olane&#39;nin büyük tepki döngüler. olmayan parçalı boru şeklinde reaktörler PCD uygulamalarında kullanılan reaktörlerin en yaygın türleri, reaktör kurulum bu tür ile bu makalede fırsatlar geri kalanı gibi. Reaksiyon akışı (RF) sütunun tasarımı mobil faz dış bulunan radyal merkez kolonun bölge veya üç limanlarında bulunan tek bir bağlantı noktası aracılığıyla ya sütunu çıkmak (veya girmek) için izin veren bir çok portlu sonu uydurma içermektedir sütunun duvar kısmı (bakınız Şekil 3). Bu iki akım deliklerden dışarı uzanan bir dış gözenekli cam malzeme ile çevrili da bir su geçirmez halka tarafından çevrelenen bir merkezi gözenekli cam malzeme ihtiva eden bir uç teçhizatı kullanılarak ayrılır. Santral geçirmeyen bir halka çapraz akışına iki gözenekli bölgeler arasında mümkün değildir. Reaksiyon akış kromatografisi sırasında, türetme reaktif (ler) bir veya TW olarak mobil faz akış yönüne karşı pompalanırReaksiyon akış sütunun dış limanlarından o. Elüsyon maddesi serbest bir dış port üzerinden dış frit türetme reajan (lar) ile karıştırılmış ve dedektör geçirilir. Reaksiyon akımı ya tek reaktif türetme için kullanılabilir ya da ikili bir madde sistemi (türevlendirme reaktifleri 2 portu ve 1 bağlantı noktası (türetme reaktifin 1 bağlantı noktasına 1 bağlantı dedektörü ve 1 bağlantı bloke kolon eluent geçmek için) ) dedektöre sütun eluent geçmektedir. Merkezi akıştan akış ya da türetilmemiş Elüsyon maddesi etkin çoklayıcı algılama 23 ya da atık geçer tespit etmek için kullanılabilir. RF-PCD kromatografisi çalışan santral ve periferik akımlarının oranı olduğunda kullanılabilir bir büyük ayar tekniği. Her bir türetme için en uygun oranı, merkezi akış tespit edilmesi veya atık geçilecek olmadığı gibi bir dizi faktöre bağlıdır. Bu nedenle, optimum oranı tespit edildikten sonra, Doğru akım oranı her çalışma gerçekleştirildiğini önce elde edilir sağlanmalıdır. Bir cam hamuru kullanımı Elüsyon maddesi akışı ve tipik olarak sıfır ölü hacim T parçasını ya da düşük bir ölü hacmi kullanılması, geleneksel karıştırma teknikleri ile karşılaştırıldığında, daha etkili karıştırma RF-PCD sonuçlarında türetme reaktif karışımı olduğu bulunmuştur W- parça iki akışları karıştırmak için. Bu nispeten küçük Reaksiyon döngüleri kullanımı için izin verilen ya da tamamen reaksiyon, döngünün bile ortadan kaldırılması yer alır. Geleneksel sonrası sütun türevlendirme yöntemlerine göre daha keskin zirveleri reaksiyon döngü boyutu sonuçlarının azaltılması. Bu, tüm sütun elüsyon türetilmiş olmasına rağmen, gürültü oranı daha büyük bir sinyal gözlenir ve saptanması ve nicelenmesi dolayısıyla alt sınırları elde edilebilir olduğu anlamına gelir. Reaksiyon akış kromatografisi PCD reaksiyon adaptasyonu ile zorlukların üstesinden gelmek için geliştirilmiştirnedeniyle büyük hacimli reaksiyon döngüler istihdam ihtiyacı nedeniyle büyük yazılan sütun ölü hacimleri modern HPLC kolon ve sistemleri, genişletilmesi bant kaynaklanan verimlilik özellikle kaybına s. Geleneksel PCD göre RF-PCD daha verimli karıştırma işlemleri daha az, reaksiyon döngüsü hacimleri gözlenen ayırma veriminde bir artışa yol kullanılabilir anlamına gelir. Ayrıca, RF-PCD kromatografisi her iki sinyal artan geleneksel PCD yöntemlerine göre saptanması ve nicelenmesi alt sınırları ile sonuçlanan klasik PCD tekniklere kıyasla gürültü azalması gösterir. Geleneksel PCD yöntemlerine göre RF PCD ilave bir avantajı, RF sütun merkez noktası olarak kolonun çevre bölgesinde elute olur türevlendirilmiş akımından ayrılır be türetilmemiş akışı izleme yeteneği. RF-PSD geleneksel PCD yöntemlerine göre birçok avantaj görüntüler nispeten yeni ama gelecek vaat eden bir tekniktir. <p class="jove_content"&gt; RF sütunun bağlantısı önemli bir fark, bir RF kolonu üzerinde son parçaları sayısı olmak geleneksel bir HPLC kolonu ile hemen hemen aynı şekilde elde edilir. HPLC sistemi standart bir HPLC kolonu bağlamak için kullanılan Bağlantı HPLC sistemine RF sütun bağlamak için kullanılabilir edebiliyoruz.

<table><tbody><tr><td>HPLC cihazı</td><td>Agilent</td><td>1290 Serisi HPLC</td><td></td></tr><tr><td>Türevlendirme sistemi için Ek Pompa(lar)</td><td>Shimadzu</td><td>LC-20A</td><td></td></tr><tr><td>RF sütun</td><td></td><td></td><td>Ticari olmayan</td></tr><tr><td>PEEK boru</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z227307</td><td></td></tr><tr><td>Kolon durdurucular</td><td></td><td></td><td>Kolon</td></tr><tr><td>PEEK tüp kesici</td><td>Sigma ile sağlanır Aldrich</td><td>Z290882</td><td></td></tr><tr><td>Analitik Terazi Terazisi</td><td></td><td></td><td>4 noktalı analitik terazi</td></tr><tr><td>Kron izle</td><td></td><td></td><td>Bilimsel Olmayan ekipman</td></tr><tr><td>Eluent toplama şişeleri</td><td></td><td></td><td>Düz tabanlı herhangi bir Küçük şişe işe yarayacaktır, örn, HPLC şişeleri HPLC</td></tr><tr><td>Şişeleri</td><td></td><td></td><td>Kullanılan</td></tr> <tr><td>alete bağlı olacaktırMobil faz ve türevlendirme çözüm(ler)i için</td> <td>kaplarSigma Aldrich</td><td>Z232211</td><td></td></tr><tr><td>Genel Laboratuvar cam malzemeleri</td><td></td><td></td><td>Hacimsel Şişeler, pippetler, vb. Miktar ve hacimler numune hazırlama yöntemine bağlı olacaktır.</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>DPPH</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9132</td><td></td></tr><tr><td>Amonyum Asetat</td><td>Sigma Aldrich</td><td>17836</td><td></td></tr><tr><td>Amonyak</td><td>Sigma Aldrich</td><td>320145</td><td>Aşındırıcı</td></tr><tr><td>Asetonitril</td><td>Sigma Aldrich</td><td>34998</td><td></td></tr><tr><td>Floresamin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F9015</td><td></td></tr><tr><td>4- aminoantipiren&nbsp;</td><td>Acros Organics BVBA</td><td>AC103151000</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum ferrisiyanür&nbsp;</td><td>AnalaR</td><td>B10204-30</td><td></td></tr></tbody></table>

mesaj sütun türevlendirme reaksiyon akış yüksek performanslı sıvı kromatografi sütunlar kullanma

Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

Post kolon türevlendirmesi (PCD) kullanan yöntemler için reaksiyon akışlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolonlarının kullanımına yönelik bir protokol sunulmuştur. PCD'nin modern HPLC sistemlerine ve kolonlarına uyarlanmasındaki en büyük zorluk, reaktif karışımını ve ardından türevlendirme reaksiyonunun gerçekleşmesini sağlayan büyük hacimli reaksiyon bobinlerine duyulan ihtiyaçtır. Bu büyük direk kolon ölü hacmi, bant genişlemesine yol açar, bu da gözlemlenen ayırma verimliliğinin kaybına ve aslında hassasiyette algılamaya neden olur. Reaksiyon akışı sonrası kolon türevlendirmesinde (RF-PCD), türevlendirme reaktifi/reaktifleri, mobil fazın akışına karşı, reaksiyon akış kolonunun dış portlarından bir veya ikisine pompalanır ve burada kolon ucu bağlantı parçası içinde bulunan bir frit içinde kolon atık suyu ile karıştırılır. Bu teknik, kolon çıkış suyunun ve türevlendirme reaktiflerinin daha verimli bir şekilde karıştırılmasına izin verir, bu da reaksiyon döngülerinin hacminin en aza indirilebileceği ve hatta tamamen ortadan kaldırılabileceği anlamına gelir. RF-PCD yöntemlerinin, gözlemlenen ayırma verimliliği ve sinyal-gürültü oranı açısından geleneksel PCD yöntemlerinden daha iyi performans gösterdiği bulunmuştur. RF-PCD tekniklerinin bir başka avantajı, merkezi limandan gelen atık suyun yetersiz durumda izlenmesi yeteneğidir. RF-PCD şu anda nispeten küçük bir kolon sonrası reaksiyon aralığı üzerinde denenmiştir, ancak şu anda RF-PCD'nin mevcut herhangi bir veya iki bileşene (her iki reaktif aynı anda eklendiği sürece) adapte edilemeyeceğini öne sürmek için hiçbir neden yoktur.

RF-PSD tarafından kullanılmak üzere uyarlanmıştır ilk PCD yöntemi 2,2-difenil-1-picrylhydrazil kökü (DPPH) • 24 ile antioksidanların türetilmesi olmuştur. Bu reaksiyon. Koleva ve ark 25 tanıtıldı ve yaygın beri kullanılmaktadır. Algılama, reaktif oksijen türlerinin varlığında, radikal DPPH • renksizleşme, gözlenen absorbans bir damla antioksidanlar sonuçlar dolayısıyla varlığına dayanır. DPPH • Reaksiyon genellikle 500 ul veya 13-15 daha...

Post kolon türevlendirmesi (PCD) kullanan yöntemler için reaksiyon akışlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolonlarının kullanımına yönelik bir protokol sunulmuştur.

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

Bu yöntemin genel amacı, bir reaksiyon akış kolonu kullanımı yoluyla yüksek performanslı sıvı kromatografisi kolon sonrası türevlendirme veya PCD yönteminin verimliliğini ve hassasiyetini artırmaktır. Bu yöntem; ilaç, biyomedikal ve çevre bilimleri gibi, HPLC dedektörlerine karşı düşük yanıt veren bileşiklerin analiz edildiği alanlardaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, herhangi bir reaksiyon bobinine ihtiyaç duyulmamasıdır.Kolon çıkış sıvısı ile türevlendirme reaktifinin karıştırılması, geleneksel yöntemlerden daha verimli gerçekleştiğinden, bu yöntem antioksidanlar, amino asitler ve fenoller hakkında bilgi sağlamak için kullanılmıştır. Ayrıca tiyoller, metaller, antibiyotikler ve toksinler gibi diğer bileşik sınıflarına da uygulanabilir.Numunenin tamamı türevlendirilmemiş olsa da, daha düşük bant genişlemesi sayesinde, çıkış akış hattındaki analit konsantrasyonu geleneksel kolon sonrası türevlendirme analizine göre daha yüksektir. Bu prosedüre başlamak için, mobil faz olarak Hat A'da %100 su ve Hat B'de %100 metanol kullanarak HPLC cihazını hazırlayın ve pompaları üretici gereksinimlerine göre temizleyin. HPLC cihaz bileşenlerini ve ek türevlendirme pompasını kurun.Bunu takiben, UV/VIS detektörünü 520 nanometre dalga boyunda analiz yapacak şekilde ayarlayın. Reaksiyon akış (RF) kolonunun girişini HPLC cihazına bağlayın. Bir çıkış çevre birimi portunu, 15 santimetre uzunluğunda ve 0,13 milimetre iç çaplı bir tüp kullanarak UV/VIS detektörüne bağlayın.Ardından, DPPH pompa hattını RF kolonunun çıkışındaki bir çevre portuna bağlayın. RF kolonunun çıkışındaki kullanılmayan çevre portunu bir kolon tıpası kullanarak kapatın. RF kolonunun çıkış merkez portuna, 0,13 milimetre iç çapında 15 santimetre uzunluğunda bir boru bağlayın.HPLC pompasının akış hızını %100 metanol ile dakikada bir milimetreye getirin. Ardından kolonu 10 dakika boyunca %100 metanol ile dengeleyin. Bu aşamada, DPPH ve metanol ile 0,1 miligram/mililitre konsantrasyonunda bir çözelti hazırlayın.DPPH reaktifi içeren balonu 10 dakika boyunca sonikasyona tabi tutun. DPPH pompasını, üretici gereksinimlerine uygun olarak hazırlanan DPPH reaktifi ile temizleyin. Ardından, iki adet kuru ve temiz kap alın ve birini "merkezi", diğerini ise "periferik" olarak etiketleyin. İki kabı da hassas bir şekilde tartın.Merkezi porttan çıkan eflüenti, "merkezi" olarak etiketlenmiş kaba bir dakika boyunca toplayın. Merkezi port kabını yeniden tarttıktan sonra, merkezi porttan gelen akışın ağırlığını hesaplayın. Önceki adımları, RF kolonunun periferik portuna bağlı olan UV/VIS'den çıkan eflüent için tekrarlayın.Periferik port damarı için ağırlığı hesaplayın. Ardından, merkezi ve periferik portlardan gelen akışın yüzdesini hesaplayın. Akış oranı doğru olana kadar önceki adımları tekrarlayın, ardından DPPH pompasının akış hızını 0.5 milliliters per minute olarak ayarlayın.Çalışma tamamlandığında, türevlendirme reaktifi pompası akışını durdurun. DPPH reaktifi pompa hattını çevre birim portundan çıkarın ve portu tıpayla kapatın. Kolonu, saklanacağı mobil faz ile dengeleyin; mobil fazın 10 dakika boyunca dakikada bir milimetre hızla kolondan geçmesini sağlayın.Ardından, HPLC cihazındaki kabarcık fazı pompasının akışını durdurun. Son olarak, DPPH reaktifini metanol ile değiştirin ve ek pompayı temizleyin. Burada, hem geleneksel PCD hem de RF-PCD cihazları kullanılarak DPPH radikali ile türevlendirilmiş bir ristretto kahve örneğine ait iki kromatogram gösterilmiştir.Hem RF-PCD hem de geleneksel PCD modlarında analiz edilen amino asitlerin her biri için hesaplanan kantifikasyon ve deteksiyon limitleri burada listelenmiştir. Geleneksel PCD yöntemi, RF-PCD yöntemi ve RF-PCD yönteminden gelen türevlendirilmemiş akış kullanılarak analiz edilen dört amino asidin kromatogramı burada gösterilmiştir. Geleneksel PCD ve RF-PCD yöntemlerinin her ikisi kullanılarak glisin ve lösin kaynaklı pikler için elde edilen sinyallerin karşılaştırması burada sunulmuştur.Geleneksel PCD yöntemi, RF-PCD yöntemi ve RF-PCD yönteminden elde edilen türevlendirilmemiş akış kullanılarak yapılan analizlerde, triptofan pik genişliğinin karşılaştırması burada gösterilmiştir. Türevlendirme şemasına yanıt veren ve vermeyen bazı bileşenleri içeren 21 bileşenli bir test örneği ayrıştırılmış, türevlendirilmiş ve tespit edilmiştir. Karşılaştırma amacıyla aynı karışma türevlendirilmeden de ayrıştırılmış ve tespit edilmiştir.Hem RF-PCD kolonu kullanılarak türevlendirilmiş hem de türevlendirilmemiş para-Kresol'ün pik şekillerinin bir karşılaştırması burada gösterilmiştir. Bu teknik bir kez kavrandığında, geleneksel kolon sonrası türevlendirme analiziyle aynı sürede kurulabilir. Bu prosedür uygulanırken, belirtilen akış oranlarına mümkün olduğunca yakın kalınması gerektiğini hatırlamak önemlidir.Bu prosedürün ardından, diğer bileşikleri analiz etmek amacıyla OPA, ninhidrin veya halojenler gibi diğer kolon sonrası türevlendirme reaktifleri kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, bir reaksiyon akış kolonunun nasıl kurulacağı ve ayarlanacağı konusunda iyi bir fikir edinmiş olmalısınız.

post-column-derivatization-using-reaction-flow-high-performance

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Burada, gelişmiş ayırma performansı için Perde akışı (CF) modunda Aktif Akış Teknolojisi (AFT) sütununun çalışması ve optimizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Akış Sütun Perde: Verimliliği ve Duyarlılık Optimizasyonu

Burada optimize edilmiş FlashPack kılcal sütun paketleme prosedürü için bir protokol sunuyoruz. Optimize edilmiş bir protokolün ortak bir 100 bar basınçlı bomba kurulumuna uygulanması, uzun ultra yüksek performanslı kılcal sütunların 10 kat daha hızlı paketlenerek üretilmesini sağlar.

FlashPack Yaklaşımı ile Basit Şirket İçi Ultra Yüksek Performanslı Kılcal Sütun Üretimi

Kütle spektrometresi (UPLC-MS) ile birleştirilmiş ultra performanslı sıvı kromatografisi ile hedeflenmemiş metabolit profili, metabolizmayı araştırmak için güçlü bir tekniktir.  Bu makale, numune organizasyonu ve hazırlama, veri toplama, veri analizi, kalite kontrol ve metabolit tanımlaması dahil olmak üzere serumun hedeflenmemiş metabolit profili için kullanılan tipik bir iş akışını özetlemektedir.

Ultra Performans Sıvı Kromatografisi-Kütle Spektrometresi (UPLC-MS) ile Serum Büyük Ölçekli Sigara hedefli metabolomik Profilleme

Hedefsiz metabolomik bir metabolik profili anlık üreten bir hipotez sağlar. Bu protokol, serum hücreler veya doku metabolitlerinin çıkarma ve analiz gösterecektir. Metabolitleri bir dizi sıvı-sıvı faz ekstraksiyon kullanılarak anket vardır, Mikrosirkülasyon Ultra Performanslı sıvı kromatografisi / diferansiyel analiz yazılımı için birleştiğinde yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (UPLC-HRMS).

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi-Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometre (UPLC-HRMS) kullanarak Biyolojik Kaynaklar gelen hedefsiz Metabolomik

Bakteri hücre duvarı peptidoglikan, peptitler tarafından çaprazlanmış şeker iplikçiklerinden oluşan bir makromoleküler ağdır. Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi, peptidoglikan kompozisyonunun yeni keşifleri için yüksek çözünürlük ve verim sağlar. Hücre duvarlarının izolasyonu (sakculi) ve daha sonra UPLC aracılığıyla analize hazırlanmaları için bir prosedür sunuyoruz.

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografisi ile Bileşimsel Analiz için Bakteriyel Hücre Duvarlarının İzolasyonu ve Hazırlanması

Burada, çoğullanmış algılamayı sağlamak için paralel segmentli akış kromatografisi kolonlarının çalıştırılması ve ayarlanması için bir protokol sunuyoruz.

Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme

Fosfoinosititler nispi bolluk hızlıca, çeşitli uyarılara cevap olarak değişen lipidleri işaret ediyor. Bu makalede, ekstre etme ve Deaçillendirme ardından 3 H, miyo -inositol ile metabolik etiketlenmesi hücreleri tarafından fosfoinositidlerde bolluğunu ölçmek için bir yöntem tarif edilir. Çıkarılan glisero-inositides daha sonra yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile ayrılmıştır ve akış sintilasyon ile nicelendirilir.

Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi-birleştiğinde Akış Parıldama tarafından Radyoetiketleme ve Fosfoinosititler Hücresel Düzeylerinin Quantification

Bir yeni bir yöntem sentez ve programın ana zincirli sıvı kristalin elastomerleri, ticari olarak temin edilebilir başlangıç ​​monomerler kullanılarak sunulmuştur. Tahrik performansı programlama sırasında, tatbik edilen gerilim miktarına bağlı ise, termomekanik özelliklerin geniş bir yelpazede, çapraz bağlayıcı miktarının ayarlanması ile özel.

Bir iki-aşamalı Tiol akrilat reaksiyonu kullanılarak programlanabilir ana zincirli Sıvı kristal Elastomerler sentezi

Burada, öğütülmüş bitki materyallerinden glukozinolatların ekstraksiyonu için yerleşik ve sağlam bir protokolü ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Ekstraktların kolon üzerinde sülfataz muamelesinden sonra, desülfoglukozinolatlar ayrıştırılır ve yüksek basınçlı sıvı kromatografisi ile analiz edilir.

Yüksek basınçlı Sıvı Kromatografi ile Glukosinolat Ekstraksiyon ve Analiz A Basit Yöntemi (HPLC)

Biz aynı anda üç monoamin nörotransmitter belirlenmesi ve iki onların metabolitleri bebekler idrar için yüksek basınçlı sıvı Kromatografi (HPLC) elektrokimyasal algılama (ECD) ile birleştiğinde uygun bir katı fazlı çıkarma mevcut. Biz Ayrıca metaboliti MHPG beyin hasarı erken tanısı için potansiyel bir biyomarker olarak bebekler için tanımlar.

Ayıklama ve çözümleme katekoiamin nörotransmitter ve onların metabolitleri yüksek basınçlı sıvı Kromatografi ile uygun bir yöntem

Öğrenin, reaksiyon akış sütunları kullanarak HPLC mesaj sütun türevlendirme yönteminin verimliliğini ve duyarlılığını nasıl artıracağınızı. Bu teknik, düşük dedektör yanıtlı bileşiklerin analizinde reaksiyon bobinlerine gerek kalmadan üstün sonuçlar sağlar.

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

Daha fazla video keşfet