Name: Yüksek basınçlı Sıvı Kromatografi ile Glukosinolat Ekstraksiyon ve Analiz A Basit Yöntemi (HPLC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: Öğrenin bitki materyallerinden glukozinolat ekstraksiyonu ve HPLC ile analiz yöntemini. Bu doğrulanmış teknik, bitki-ekoloji ve gıda bilimleri araştırmalarında çeşitli biyolojik örneklerde uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NMvD, 16 yıl önce bu yöntemi kullanmaya başladığında ilk referans örneklerini sağladığı için Dr. Michael Reichelt'e (Max-Planck-Kimyasal Ekoloji Enstitüsü, Jena, Almanya) teşekkür eder. Ciska Raaijmakers (NIOO-KNAW, Wageningen, Hollanda), Sebastian Krosse (B-Ware, Nijmegen, Hollanda) ve Christian Ristok (iDiv, Leipzig) yıllar boyunca protokolü geliştirdikleri için kabul edildi. Mirka Macel ve Martine Huberty (Tübingen Üniversitesi, Almanya) Rorippa kromatogramını kullanma izinleri için onaylanmıştır. Yazarlar, Alman Araştırma Vakfı (FZT 118) tarafından finanse edilen Alman Bütünleştirici Biyoçeşitlilik Araştırma Merkezi (iDiv) Halle-Jena-Leipzig'in desteğini minnetle kabul ederler.

Glukosinolat Ekstraksiyon için gerekli Çözümler 1. Hazırlık <ol><li> bir cam şişe içinde, su içinde% 70 metanol (MeOH) 500 mL (ultra saf) hazırlayın. 100 numune, 5 standart,% 70 420 ml MeOH gereklidir. </li><li> NaOAc 0.82 g veya NaOAc X3, H 1.36 g eklenerek 20 mM sodyum asetat (NaOAc) (pH = 5.5) hazırlanması 2 O 500 mL su içinde; hidrojen klorür (HCl) ile pH ayarlanır. buzdolabında NaOAc saklayın. 100 numune ve 5 standartları, su içinde 20 mM NaOAc (pH = 5.5) 370 ml gereklidir. </li><li> Sütun malzemesi elde ultra saf su 125 mL &#39;si ile çapraz bağlanmış dekstran jel (tip G-25) 10 g karıştırın. bir buzdolabı (4 ° C) &#39;de elde edilen karışımın saklayın. </li><li> sülfataz çözeltisinin hazırlanması <ol><li> Ultra saf su 30 mL aril sülfatazın 10.000 adet (tip H-1 Helix pomatia gelen) çözündürün ve mutlak etanol 30 mL (EtOH) ekleyin. iyi çözüm karıştırın ve bir 250 ml cen transfertrifuge tüp veya doluluk durumuna bağlı olarak birden fazla küçük tüpler. </li><li> Oda sıcaklığında 20 dakika boyunca (RT) 2.650 x g&#39;de karışımı santrifüjleyin. Bir behere süpernatant (ler) aktarın; EtOH 90 ml ekleyin ve karıştırın. Oda sıcaklığında 15 dakika boyunca 1,030 x g&#39;de bir veya daha fazla santrifüj tüplerine karışımı santrifüjleyin. </li><li> süpernatantlar atın. Çözündürün ve ultra saf su 25 ml&#39;lik toplam pelet birleştirir. Vorteks de, -20 ° C&#39;de bir dondurucuda 1 ml&#39;lik tüplerde dağıtılması ve depolamak; en az bir yıl süreyle devam edecektir. </li></ol></li><li> sinigrin referans çözeltisinin hazırlanması <ol><li> 1-ug doğruluk (örneğin, 8,769 mg) ile sinigrin monohidrat 9 mg civarında tartılır. 10 mL&#39;lik volümetrik bir şişeye içine aktarılır ve ultra saf su 10,0 mL Sinigrin monohidrat çözülür. </li><li> stok solüsyonu molaritesi nedir ve stok solüsyonu seyreltilmesi ile 50-750 uM arasında beş sinigrin başvuruları hazırlar. Ayrıntılı bir örnek için, bakınız<html> <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55425/20160918GrosservanDamJoVEGlucosinolates_S1.docx" target="_blank">Ek Dosya S1</a> . </li><li> 1.5 ml&#39;lik tepkime tüpleri farklı Sinigrin referanslar koyun ve 20 ° C&#39;de dondurmak. Her çıkarma toplu beş sinigrin referansların bir dizi içerir. konsantrasyonları hesaplanırken her zaman şu anda başvurular sinigrin kullanılan doğru molarite değerlerini kullanın. </li></ol></li></ol> Ekstraksiyon Kur&#39;un 2. Hazırlık <ol><li> Pasteur pipeti sütun için bir sütun raf hazırlama (sütun hazırlanması için, adım 3.1). Örnek numaraları takip etmek için raf veya sütun etiketi (Şekil 1 e bakınız). </li><li> Etiketli 2 mL mikrosantrifüj tüpleri aynı sayıda tutan bir blok hazırlanması (adım 3.3 ve Şekil 1 e bakınız) </li></ol>5 / 55425fig1.jpg &quot;/&gt; Şekil 1: glukosinolat çıkarılması için Raf. Önden görünüm (solda) ve glukozinolat çıkarılması için bir self-made sütun raf ve bloğun üst görünümü (sağda). Yükseklik: 100 mm arasında bir mesafe (Pasteur pipeti sütun tutmak için) delik kayar: 30 mm (x-ekseni) 15 mm (y-ekseni) x. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55425/55425fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Sütunlar ve Mikrosantrifüj Tüpler 3. hazırlanması <ol><li> Numune başına bir sütun ve beş sinigrin referans örnekleri için fazladan beş sütun hazırlayın. <ol><li> her bir cam pipet olarak, cam yünü, yaklaşık 1 cm x 1 cm&#39;lik bir parçası eklenir. pipet daraltır noktaya cam yünü aşağı itmek için bir tahta veya cam çubuğu kullanın. cam yünü tükeniyor sütun malzeme önlemek gerekir, ancak sütunların elüsyon yavaş olacak gibi, çok fazla kullanmayın. eldiven wh Wearcam yünü ile çalışan tr. </li></ol></li><li> Sütun rafa sütunları yerleştirin (Şekil 1). ardışık sütun yıkama için kullanılan yürütücüler yakalamak için bir laboratuar tepsisi (atık tepside) sütun raf yerleştirin. </li><li> plastik bir 1-ml pipet ucu ve pipet hazırlanan kolon malzemesi 0.5 ml ucunda ilk 5 mm ve kesik de her sütuna (su içinde G-25 jel, basamak 1.3). pipetleme önce iyice sütun malzeme içeren şişeyi çalkalayın. sızıntı sütunları (cam yünü katmanı üzerinden tükeniyor G-25 malzeme) atın ve yenileriyle değiştirin. <ol><li> sütunlar halinde kolon malzemesi pipetleme sonra, malzeme aşağı temizlemek için ultra saf su 1 ml ekleyin. </li></ol></li><li> numune başına bir 2 ml&#39;lik reaksiyon tüpü ve beş sinigrin referans örnekleri için beş tüpleri hazırlayın; etiketlemek. Daha sonra dondurarak kurutma için kapaklar delik yapmak için bir diseksiyon iğnesi kullanın ve tam olarak aynı desende tüp bloğu içine hazırlanmış tüpler yerleştirinsütunlar (adım 2.2, bakınız Şekil 1). </li></ol> Glukozinolatların 4. Ekstraksiyon <ol><li> (Ekstrakt son glukozinolat konsantrasyonları bir referans eğrisi aralığında olmalıdır kuru ağırlığın genellikle 50,0-100,0 mg), 2-mL, en yakın 0.1 mg, etiketlenmiş, yuvarlak liyofiliz ve ince öğütülmüş bitki maddesi, tartılır -Dip reaksiyon tüpleri. Her tüpe geciktiriciler kaynama iki küçük metal bilyeler (Çapı 3 mm) ekleyin. Not: protokol, sıvı azot altında öğütüldü ve ekstre kadar donmuş tutulmuştur taze anında donduruldu malzemelere uygulanabilir. Malzeme 19 su ile seyreltme için telafi etmek için% 85 ekstraksiyon sıvısı içinde ekstraksiyon Tartılan malzeme miktarı ve MeOH yüzdesini arttırır. </li><li> Kısaca, her bir tüp ve girdap içine% 70 MeOH pipetle 1 ml. tüpleri kapatın ve w sıcak içine mümkün olduğunca çabuk koymadan önce emniyet kapakları ile mühürMeOH sadece kaynar% 70 kadar bir kaç dakika (~ 5 dakika) için bırakmayın banyo (90-92 ° C). Dikkat: Bu adımı sırasında koruyucu gözlük takın! </li><li> 15 dakika boyunca ultrasonik bir banyoda numune tüpleri yerleştirin. Bu arada, sülfataz almak ve dondurucu dışına beş sinigrin referans örnekleri oda sıcaklığında onları Çözülme. </li><li> ultrasonikasyonla sonra oda sıcaklığında 10 dakika boyunca bir tezgah üstü santrifüj içinde 2700 x g&#39;de santrifüj numune tüpleri; Pelet, her bir tüp içinde oluşturmalıdır. etiketli sütunlara süpernatantlar ekleyin ve ayrı sütunlarda üzerine beş referans örnekleri pipetle. <ol><li> süpernatantlar pipetleme ederken, pipet bitki materyalleri önlemek için pelet üzerine de ucu tutun. Kurutulan örnekler kullanıldığında, üst faz hacmi en az 1,0 ml olacağına dikkat ediniz. </li></ol></li><li> Örnek tüpler geri kalan topaklar,% 70 MeOH 1 ml ilave edilir ve 15 dakika boyunca ultrasonik bir banyoda yerleştirmeden önce tüpleri girdap. Adım 4.4 olduğu gibi yine tüpleri santrifüj ve Superna ekleyinİlgili sütunlara tants; Sütun malzemesi özellikleri nedeniyle, glukozinolatların negatif yüklü sülfat grubu, özellikle kolon üzerinde muhafaza edilecektir. </li><li> Üç sıralı adımda özleri ile sütun yıkayın. <ol><li> Her bir kolon üzerine 70% MeOH Pipet 2 x 1 mi. sonraki 1 mL eklemeden önce kuru çalıştırmak için sütun için bekleyin; Bu ekstrelerin (örneğin, klorofil) daha apolar bileşikler kaldıracaktır. </li><li> Her sütun ultra saf su 1 ml ekleyerek MeOH dışarı floş. </li><li> Pipet 2 x 1 ml 20 mM NaOAc sülfataz Reaksiyon için en uygun şartları oluşturmak için her bir kolon tamponu. </li></ol></li><li> Atık tepsinin dışına sütunları ile raf alın ve bir doku ile raf ayakları kuru. şişeleri ve etiketli tüpler blok üzerine rafa yerleştirin. Her sütun ucu karşılık, etiketli, 2-ml tüp içinde olduğundan emin olun (bakınız Şekil 1). </li><li> sülfataz soluti 20 mcLsütun üzerine. sülfataz sütun malzemesinin yüzeyine ulaşır emin olun. NaOAc&#39;den Pipet 50 ul sülfataz aşağı temizlemek için her kolona tampon. alüminyum folyo ile örtün sütunları ve gece boyunca bekletin. Not: sülfatazın aktiviteleri nedeniyle, sülfat grubu su ile elüte böylece sütun desulfoglucosinolates serbest, kaldırılacaktır. Ayrıntılı bir açıklama için, Crocoll ve diğ. 19. </li><li> Sonraki gün, her bir kolon üzerinde ultra saf su, 2 x 0.75 mL pipetleme desulfoglucosinolates elüte. tüm sütunlar kuru çalıştırmak, sütun raf kaldırın ve reaksiyon tüpleri çıkarın. <ol><li> tüpleri (kapaklar delikleri vardır emin olun) Cap ve sıvı azot ya da bir bunları dondurmak -80 ° C derin dondurucuda 30 dakika boyunca. -Freeze kuru tüm suyu uzaklaştırmak için (numune sayısı ve dondurularak kurutucunun kapasitesine bağlı olarak) 12-24 saat için örnekler. </li></ol></li> &lt;li&gt;, dondurularak kurutulduktan sonra, ultra saf su tam bir hacimde (çoğunlukla 1.0 mL) içinde bir tortu yeniden çözülür. etiketli HPLC şişelere örnekleri ve beş sinigrin referansları aktarın. iki hafta kadar bir buzdolabına (4 ° C) ya da HPLC ile analiz etmeden önce, bir dondurucu (-20 ° C) kadar bir yıl örnekleri tutun. </li><li> Gecede başlık altında sütun kurumasını cam edelim ve kuru bunları elden çıkarın. yeniden kullanım için adım 4.5 kullanılan numune tüpleri metal topları kurtarmak ve atık bidonuna tüpleri koydu. </li></ol> Ayıklanan Örneklerinin 5. HPLC Ölçümleri <ol><li> Bir asetonitril-su derecesi ile ters-fazlı C18 sütunu (4.6 x 150 mm, 3 um, 300 A) üzerinde glukozinolatların ayrılır ve 0.75 ml / dk&#39;lık bir akış ve 40 ° C kolon sıcaklığı (Tablo 1 e bakınız) . 229 nm&#39;de algılama ve ölçümü gerçekleştirin. </li><li> aynı sütunda ama uyarlanmış gradyan ile sinigrin referanslar ölçünÇözücü kullanımını azaltmak için bir yöntem (bakınız Tablo 2). en düşük konsantrasyon ile referans ile başlayan, beş sinigrin referanslar enjekte başlayın. Sonra sütunu temizlemek için ve piklerin taşınmasını önlemek için her onuncu numuneden sonra metanol enjeksiyonu (boşluk) de dahil olmak üzere, örnekleri enjekte edilir. </li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Zaman [dk] </td><td> Akış [mL / dak] </td><td> % Bir su </td><td> % B ACN </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 0.750 </td><td> 98 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> 35 </td><td> 0.750 </td><td> 65 </td><td> 35 </td></tr><tr><td> 40 </td><td> 0.750 </td><td> 98 </td><td> 2 </td></tr><tr><td colspan="4"> Kolon sıcaklığı 40 ° C. </td></tr></tbody></table> Tablo 1: glukozinolat ayırma ve analysi asetonitril-su gradyanıters fazlı HPLC ile ilgili. <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Zaman [dk] </td><td> Akış [mL / dak] </td><td> % Bir su </td><td> % B ACN </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 0.750 </td><td> 98 </td><td> 2 </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 0.750 </td><td> 89.3 </td><td> 10.7 </td></tr><tr><td> 11 </td><td> 0.750 </td><td> 98 </td><td> 2 </td></tr><tr><td colspan="4"> Kolon sıcaklığı 40 ° C. </td></tr></tbody></table> Tablo 2: glukozinolatların miktarının kullanılan beş Sinigrin referans ölçümü için kısaltılmış asetonitril-su gradyanı. 6. Glukosinolat Belirlenmesi ve Ölçümü <ol><li> Kimlik <ol><li> ticari boşuna ile numunelerde piklerin UV spektrumları ve saklama süreleri karşılaştırmakmümkün, saf glukozinolat referanslar. Çeşitli glukozinolat sınıflardan UV spektrumlarının örnekleri için Şekil 2&#39;ye bakınız. </li><li> Mümkünse, referans standartları ile veya LC-MS 18, 19 bilinmeyen glikozinolitleri tanımlayın. </li><li> nükleer manyetik rezonans (NMR), mümkünse bilinmeyen glikozinolitleri tanımlayın. </li><li> Şekil 2 ve Tablo 3, veri tabanları ya da literatür referanslarında karşılaştırılmasına UV spektrumlan ve tutma kere. </li></ol></li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55425/55425fig2.jpg" /> En yaygın glukosinolat sınıfların Şekil 2. UV spektrumları. Altı desulfoglucosinolates (GSL) UV absorpsiyon spektrumları (200-350 nm), en sık görülen yapısal sınıfları temsil eden, burada açıklandığı gibi ekstre piyasada mevcut referans bileşikleri yapılan çözümlerine dayalı. ortak ad, structural adı (parantez içinde), ve yapısal sınıf verilmiştir. (A) Sinigrin (2-propenil GSL) alkenil; (B) glukoerusin (4-metiltiyobutil GSL), thioalkenyl; (C) glukorafanine bağlıdır (4-methylsulfinlybutyl GSL) sülfinil; (D) glukobrassisin (indol-3-ilmetil GSL) indol; (E) gluconasturtiin (2-feniletil GSL), aromatik; (F) sinalbin aromatik (4-hidroksibenzil GSL). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55425/55425fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="2"><li> Niceleme <ol><li> Beş sinigrin referanslar ve numunelerin tepelerin altındaki alanların entegre edin. </li><li> Entegre alan üzerine kurulu beş ölçülen sinigrin referansların bir kalibrasyon eğrisi hesaplayın. regresyon çizgisinin denklemi kullanın glukozinolatların (Denklem 2 bakınız) interpole miktarını hesaplamak için (Denklem 1).</li><li> Farklı glukozinolatların konsantrasyonunun hesaplanması için, AT 229 nm&#39;de tespit için yanıt faktörü (M) ile interpolasyon miktar (X) çarpma (1990) 16, Buchner (1987) 15 ya da Brown ve ark. (1993) 17; En sık tespit edilen desulphoglucosinolates konsensüs tepki faktörleri Tablo 3&#39;te verilmiştir. NOT: arasında değişebilir Tepki faktörleri sistemleri-bu farklı referanslar verdiği farklı değerler vardır sebebi olabilir (Başvurular 15-17 bakınız). Bununla birlikte, değerler daha çok oldukça yakın ve yapısal sınıfları ile benzer bir aralık içindedir. Kongre sonra, glukobrassisin ve indol glukozinolatlarının (Şekil 2) benzer bir UV spektrumu bilinmeyen indol glukozinolatların için, elde edilmesi için bir tepki çarpanı 0.25 kullanmak tavsiye edilebilir, ancak, 1 tanımlanamayan glukozinolatların yanıt faktörünükonsantrasyon gerçekçi tahmini (Tablo 3). </li><li> Örnek glukozinolatların nihai bir miktar (x T) hesaplamak için, dikkate analizi için kullanılan seyreltme faktörü (D) ve numunenin kütlesi (g) alır (Denklem 3). <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55425/55425eq1.jpg" /> (1) <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55425/55425eq2.jpg" /> (2) <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/55425/55425eq3.jpg" /> (3) Y tepe alanını Referans 5 puanlık gerileme eğrisinin m = eğim C = Y-ekseni regresyon çizgisinin kesişme özü glukozinolatların X = miktarı Bitki örnek glukozinolatların x T = konsantrasyon D = seyreltme faktörü Ve arkadaşları Buchner (1987) ya da Brown 229 nm&#39;de tespit için M = yanıt faktörü. (1993) W = numune kütlesi çıkarılması için kullanılan </li></ol></li></ol>

<ol><li>Hartmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+waste+products+to+ecochemicals%3A+Fifty+years+research+of+plant+secondary+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">From waste products to ecochemicals: Fifty years research of plant secondary metabolism.</a> Phytochemistry. 68 (22-24), 2831-2846 (2007).</li>
<li>Will, H., Laubenheimer, A. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jlac.18791990109/abstract">Ueber das Glucosid des weissen Senfsamens.</a> Justus Liebigs Annalen der Chemie. 199 (1), 150-164 (1879).</li>
<li>Agerbirk, N., Olsen, C. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22405332">Glucosinolate structures in evolution.</a> Phytochemistry. 77, 16-45 (2012).</li>
<li>Halkier, B. A., Gershenzon, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16669764">Biology and biochemistry of glucosinolates.</a> Ann Rev Plant Biol. 57, 303-333 (2006).</li>
<li>Sønderby, I. E., Geu-Flores, F., Halkier, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+glucosinolates+-+gene+discovery+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22TIPS%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of glucosinolates - gene discovery and beyond.</a> TIPS. 15 (5), 283-290 (2010).</li>
<li>Kliebenstein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+control+of+natural+variation+in+Arabidopsis+glucosinolate+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Genetic control of natural variation in Arabidopsis glucosinolate accumulation.</a> Plant Physiol. 126 (2), 811-825 (2001).</li>
<li>van Leur, H., Raaijmakers, C. E., van Dam, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+heritable+glucosinolate+polymorphism+within+natural+populations+of+Barbarea+vulgaris%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">A heritable glucosinolate polymorphism within natural populations of Barbarea vulgaris.</a> Phytochemistry. 67 (12), 1214-1223 (2006).</li>
<li>Kelly, P. J., Bones, A., Rossiter, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sub-cellular+immunolocalization+of+the+glucosinolate+sinigrin+in+seedlings+of+Brassica+juncea%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Sub-cellular immunolocalization of the glucosinolate sinigrin in seedlings of Brassica juncea.</a> Planta. 206 (3), 370-377 (1998).</li>
<li>van Dam, N. M., Tytgat, T. O. G., Kirkegaard, J. A. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11101-008-9101-9">Root and shoot glucosinolates: a comparison of their diversity, function and interactions in natural and managed ecosystems.</a> Phytochem Rev. 8 (1), 171-186 (2009).</li>
<li>Ratzka, A., Vogel, H., Kliebenstein, D. J., Mitchell-Olds, T., Kroymann, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12161563">Disarming the mustard oil bomb.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (17), 11223-11228 (2002).</li>
<li>Wittstock, U., Kliebenstein, D. J., Lambrix, V., Reichelt, M., Gershenson, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWittstock%2C+U+%22Integrative+Phytochemistry%3A+From+ethnobotany+to+molecular+ecology%3A+Recent+Advances+in+Phytochemistry%22">Integrative Phytochemistry: From ethnobotany to molecular ecology: Recent Advances in Phytochemistry</a>. Romeo, J. T. 37, Ch. 5 Pergamon (2003).</li>
<li>Hopkins, R. J., van Dam, N. M., van Loon, J. J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+glucosinolates+in+insect-plant+relationships+and+multitrophic+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Entomol%22%5BJournal%5D)">Role of glucosinolates in insect-plant relationships and multitrophic interactions.</a> Ann Rev Entomol. 54 (1), 57(2009).</li>
<li>Kliebenstein, D. J., Gershenzon, J., Mitchell-Olds, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+quantitative+trait+loci+mapping+of+aliphatic%2C+indolic+and+benzylic+glucosinolate+production+in+Arabidopsis+thaliana+leaves+and+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Comparative quantitative trait loci mapping of aliphatic, indolic and benzylic glucosinolate production in Arabidopsis thaliana leaves and seeds.</a> Genetics. 159 (1), 359-370 (2001).</li>
<li>Mithen, R., Bennett, R., Marquez, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucosinolate+biochemical+diversity+and+innovation+in+the+Brassicales%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Glucosinolate biochemical diversity and innovation in the Brassicales.</a> Phytochemistry. 71 (17-18), 2074-2086 (2010).</li>
<li>Buchner, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBuchner%2C+R+%22Glucosinolates+in+rapeseed%22">Glucosinolates in rapeseed</a>. Wathelet, J. P. , Martinus Nijhoff Publishers. 50-58 (1987).</li>
<li>Oil seeds - determination of glucosinolates High Perfomance Liquid Chromatography. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Official+Journal+of+the+European+Communities%22">Official Journal of the European Communities</a>. , L 170/28. Annex VIII 03.07 27-34 (1990).</li>
<li>Brown, P. D., Tokuhisa, J. G., Reichelt, M., Gershenzon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+of+glucosinolate+accumulation+among+different+organs+and+developmental+stages+of+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Variation of glucosinolate accumulation among different organs and developmental stages of Arabidopsis thaliana.</a> Phytochemistry. 62 (3), 471-481 (2003).</li>
<li>Glauser, G., Schweizer, F., Turlings, T. C. J., Reymond, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Profiling+of+Intact+Glucosinolates+in+Arabidopsis+Leaves+by+UHPLC-QTOFMS+Using+a+Charged+Surface+Hybrid+Column%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochem+Analysis%22%5BJournal%5D)">Rapid Profiling of Intact Glucosinolates in Arabidopsis Leaves by UHPLC-QTOFMS Using a Charged Surface Hybrid Column.</a> Phytochem Analysis. 23 (5), 520-528 (2012).</li>
<li>Crocoll, C., Halkier, B. A., Burow, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrocoll%2C+C+%22Current+Protocols+in+Plant+Biology%22">Current Protocols in Plant Biology</a>. , John Wiley & Sons, Inc. (2016).</li>
<li>Griffiths, D. W., Bain, H., Deighton, N., Botting, N. P., Robertson, A. A. B. <a target="_blank" href="https://pubag.nal.usda.gov/pubag/article.xhtml?id=1446175">Evaluation of liquid chromatography-atmospheric pressure chemical ionisation-mass spectrometry for the identification and quantification of desulphoglucosinolates.</a> Phytochem Analysis. 11 (4), 216-225 (2000).</li>
<li>Gimsing, A. L., Kirkegaard, J. A. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11101-008-9105-5">Glucosinolates and biofumigation: fate of glucosinolates and their hydrolysis products in soil.</a> Phytochem Rev. 8 (1), 299-310 (2009).</li>
<li>Fahey, J. W., Zalcmann, A. T., Talalay, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemical+diversity+and+distribution+of+glucosinolates+and+isothiocyanates+among+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">The chemical diversity and distribution of glucosinolates and isothiocyanates among plants.</a> Phytochemistry. 56, 5-51 (2001).</li>
<li>de Graaf, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+4-%CE%B1-rhamnosyloxy+benzyl+glucosinolate+in+Noccaea+caerulescens+showing+intraspecific+variation%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of 4-α-rhamnosyloxy benzyl glucosinolate in Noccaea caerulescens showing intraspecific variation.</a> Phytochemistry. 110 (0), 166-171 (2015).</li>
<li>van Dam, N. M., Raaijmakers, C. E. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00049-005-0323-7">Local and systemic induced responses to cabbage root fly larvae (Delia radicum) in Brassica nigra and B. oleracea.</a> Chemoecology. 16 (1), 17-24 (2006).</li>
<li>Gols, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1439179106000892">Temporal changes affect plant chemistry and tritrophic interactions.</a> Bas Appl Ecol. 8 (5), 421-433 (2007).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu kurulan ve yaygın olarak kullanılan yöntemin en büyük avantajı, sağlam, oldukça basit ve örnek başına nispeten düşük maliyetli olmasıdır. ekstraksiyon ve analiz için gerekli ekipman çoğu standart laboratuar mevcut olmalıdır ya da HPLC-PDA hariç olmak üzere, kendinden-inşa edilebilirler. Diğer bir avantajı, su içinde çözüldü desulfoglucosinolates serin ve hava geçirmez (HPLC) şişelerde muhafaza zaman, kimyasal olarak çok kararlıdır, yani ekstreler başka bir yerde kolaylıkla HPLC analizi için sevk olmasıdır. eğitim ve veri yazılımı yönetmek ve analiz etmek için kapsamlı uygulamalı deneyim uzman gerektiren LC-MS platformları, aksine, HPLC-UV / PDA kolayca kısa bir eğitim döneminden sonra çalıştırılabilir. Bu prosedürün maliyetlerini azaltır, aynı zamanda öğrencilerin de dahil olmak üzere bilim adamları geniş bir yelpazede, bu yöntem daha erişilebilir hale değil sadece. Genel olarak, yukarıda tarif edilen prosedürler dikkatli bir şekild uyulduğundaLly, bazı problemler meydana gelmelidir. Genel olarak, glukozinolat pikleri çok iyi kromatogramda ayrılır. Bu durum söz konusu değilse, bir dereceleme programı akıtıcı asetonitril artış hızını azaltarak uyarlanabilir. Alternatif olarak, yeni ön-kolon (200-500 enjeksiyon) veya sütun (1.500 -2.000 enjeksiyon) bina sorunu çözebilir. Bazen, bir toplu tek numunelerin kromatogramları çok küçük veya hiç doruklarına gösterebilir. Bu sülfatazı eklerken nedeniyle pipetleme hataları genellikle (örneğin, bir sütun atlanır edilmiş veya sülfataz düzgün sütuna aşağı yıkadı değildi). beklenen ve çok az malzeme çıkarılması için kullanılan daha Seçenek olarak ise, deney malzemeleri glukozinolat konsantrasyonunun daha düşük olabilir. İkinci durumda ise, enjeksiyon hacmi 100 uL kadar yükseltilebilir, veya ekstre tam kısım (örneğin, 800 uL) konsantre edildi olabilir. ikinci dondurarak kurutma ile elde edilebilirsu daha küçük bir hacimde (örneğin, 100 uL) içinde eritilmesi, özü ing ve aynı referans eğrisi kullanılarak reinjecting. ekstresi orijinal konsantrasyonu için hesaplamalarda, sayılar seyreltme faktörü ile çarpılmalıdır. Bu sorunu çözmek değilse, malzeme başlangıç ​​malzemesi kullanılarak daha ekstre edilmelidir. Bu fazla 100 mg ise, ekstraksiyon çözücü hacmi ve borular boyutu ekstraksiyon verimini korumak için orantılı olarak ayarlanmalıdır. Diğer bir avantaj, bu yöntem iyi-valide edilmiş olmasıdır. Bu usul ve doğruluğu birçok labaratuvar 16 doğrulanmıştır olan kolza glukozinolatların miktarının, standart bir yöntem olarak tarif edilmiş olmasına olmasıdır. Buna ek olarak, genetik arka plan, biyosentez ve glukozinolatların biyolojik fonksiyonları mod, yoğun araştırma çabaları tabidirdiğerleri 4, 6, 12 arasında el bitki türleri Arabidopsis thaliana. Bu nedenle, Sinigrin ilişkin desulfoglucosinolates tam ölçümü için birçok tepki faktörleri iyi tanımlanmış ve 15,17 kamuya açık. LS-MS-tabanlı protokoller daha yüksek verimli, daha duyarlı ve mümkün olsa da (geçici) bir standart 18, 19, 20, LC-MS için evrensel tepki faktörlerinin eksikliği sınırlar mevcut olduğu glukozinotlar belirlemek glukosinolat konsantrasyonlarının 18 tam ölçümü. Ayrıca, bu yöntemler genellikle taze bitki malzemesinin bir kurutma adımı, ve su miktarını içermez tam miktar zorlaştırır hesaplamalarda kayıt dışı olan. Bizim ekstraksiyon yöntemi içerir çünkü Son olarak, bir sütun tabanlıarındırma ve yoğunlaştırma aşamaları, aynı zamanda bu tür topraklarda 21 olarak glukozinolatların düşük konsantrasyonları ile &quot;kirli&quot; örnekleri uygulanabilir. Genellikle, taze dondurulmuş malzeme elde çıkarılması için, 96 gözlü levhalar kullanmak ve sülfataz adım 18, 19 kapsamamaktadır LC-MS-tabanlı yöntemler ile karşılaştırıldığında, yöntem, nispeten zaman alıcı ve emek yoğundur. Bu yazıda anlatılan sütun raflarla, tek bir kişi bir günde yaklaşık 100-150 örnekleri elde edebilirsiniz. Elüsyon (ertesi gün), (gece) dondurarak kurutulmuş ve yeniden çözülmesini takip eden iki gün içinde yer alabilir. otomatik HPLC enjektör, enjeksiyon başına 40-45 dakikalık bir çalışma ve dengeleme zamanında ve hiçbir beklenmedik olaylar, bu örnek seti için veri elde etmek 3-4 gün sürer. HPLC yazılımı otomatik ölçümü sinigrin eğri, kromatogramlar ve pe manuel kontrol dayalı sağlar zamanveri istatistiksel analizler için kullanılmadan önce 100 numune için ak atamalar yalnızca başka bir 1 veya 2 saat sürebilir. glukosinolat standartlarının artması bulunmasına karşın, 130&#39;dan fazla adayın sadece küçük bir kısmı şu anda ticari olarak satın alınabilir. Bununla birlikte, sentetik sınıfların her biri için bir kaç referanslarla; bileşikleri belirten literatür veri tabanlarına erişim, daha önce bitki türlerinde bulunan (örneğin, Fahey ve ark 22.); Böyle eluotropic dizi mantığı olarak kromatografik ilkeler, temel bilgi (örneğin, alifatik bileşikler yan zinciri üzerindeki Cs sayıları artan için, 3 Şekiller ve 4); ve NMR 23 LC-MS 19 ya da izole glukozinolatların tek numunelerin doğrulama, kolayca bu sınırlama üstesinden gelebilir. glukosinalatının En protokolleri iç referans eğrileri kullanmak analizleri(Örneğin, solvent çıkarımı 16, 17, 19 Sinigrin ekstre ya sinalbin belirli konsantrasyon). Prensip olarak, iç referans eğrileri daha yüksek bir hassasiyet elde böylece teorik olarak bireysel numune işleme hataları düzeltmek ve daha uygundur. Bu avantajına rağmen, biz sık sık (örneğin, Brassica nigra 24) ya da sinalbin (örn Sinapis alba 25), Sinigrin yüksek düzeyde içeren bazıları farklı yabani türler, analiz gibi bir beş noktalı harici referans eğrisi kullanmayı tercih iki glukosinolat referanslar hangi yanıt faktörleri mevcuttur. yüksek dereceli glukosinolat referans standartları genellikle oldukça pahalı Dahası, her bir örnek için iç standartlar ekleyerek, analizlerin maliyetini artırmaktadır. Sonuç olarak, zaman alıcı adımlara rağmen, bu protokolayıklamak ve bitki örneklerinde glukozinotlar ölçmek için basit ve erişilebilir bir yöntem sağlar. Bununla birlikte, glukozinolat düzeyleri kendileri tek bir glukozinolat 11 kaynaklanabilecek reaksiyon ürünlerinde sadece mirosinaz ile tepkimeye gereklilik olarak görülen potansiyel biyolojik aktivitesinin göstergesi, ve varyasyonu olduğu dikkate alınması önemlidir. Doğrulama deneyleri biyolojik ilgisini onaylamak için gerçekleştirilmelidir.

Bitkiler kimyasal bileşiklerin 1 200.000 farklı türleri üretmek olduğu tahmin edilmektedir. Sadece bu bileşiğin azınlık bitkilerin primer metabolizma, yakıtlar büyüme ve üreme bir rol oynadığı görülmektedir; çoğunluğu ikincil metabolitler olarak adlandırılmaktadır. Onlar pollinatorsu çekmeyi veya patojenler ve otobur 1 karşı bitki savunmak için hizmet olarak kendi adına rağmen, sekonder metabolitler, genellikle bitki hayatta kalma ve üreme için kritik öneme sahiptir. Glucosinolates 150 yıldır 2 çalışılmıştır ikincil metabolitlerin bir çok farklı sınıf bulunmaktadır. Bugüne kadar, en fazla 130 yapısal olarak farklı glukozinolatlar 3 tespit edilmiştir. Genel olarak, glukozinolatlar da sentezlenmiş olan bir amino asit göre farklı sınıflara bölünebilir. Indol glukozinolatların, örneğin amino asitten sentezlenirlertriptofan, oysa fenilalanin aromatik glukozinolatların 4 sentezi için baz iskeleti sağlar. Sınıfları içinde, alifatik glukozinolatların sınıf olarak biyosentetik yollardaki sıralı zincir uzatma adımlar getirdiği ya da yan zincir modifikasyon (örneğin, hidroksilasyon) 4, 5 ile yapısal çeşitlilik, yüksek düzeyde vardır. Bir glukosinolat bitki türleri farklı yapısal sınıflardan 6 mensup kadar 37 farklı glikozinolitleri içerebilir. Bitki türleri tipik glukozinolat profillerine sahip olsa da, glukozinolatların türleri için intraspecific varyasyon sık sık bireyler ve nüfus 6, 7 arasında bulunur. Bozulmamış glukozinolatlar, bitki hücrelerinin vakuolleri içinde saklanır ve bir yer altı veya toprak altında organı 7 bulunabilir &lt;sup class = &quot;xref&quot;&gt; 8, 9. Hücre parçalanması (örn herbivory olarak) üzerine, glukozinolatların serbest bırakılır ve hardal yağı bomba 10 yola, mirosinaz ile karıştırılır. Mirosinaz aktivitesi için ve glukozinolat, reaksiyon koşulları ve modifiye enzimlerin varlığı yapısına bağlı olarak, farklı, keskin, toksik veya zararlı bileşikler, nitriller ve (izo) 11 tiyosiyanatlar olarak oluşturulmaktadır. reaksiyon ürünleri yüksek biyolojik aktivitelere sahip; Örneğin, kültürlü haşere otçul 12 geri püskürtme ajanları olarak hizmet vermektedir. Glukozinolatların kalıtım ve biyosentez yolları iyi, esas olarak, çünkü otobur ve patojen direnci, mustards ve lahana lezzet bileşenleri olarak kendi değer ve negatif (progoitrin) ve insan sağlığına 5 pozitif (glukorafanine bağlıdır) etkileri önemleri, incelenmiştir </sup&gt; 13, 14. Çünkü ters fazlı yüksek basınçlı sıvı kromatografisi ultraviyole (UV) ya da fotodiyot dizi ile donatılmış (HPLC) göre biyolojik olarak etkin olan bileşikleri, ekstraksiyon ve saptama yöntemleri glukozinolatlar açısından büyük bir ilgi (PDA) detektörleri mutat olarak 1980&#39;lerden 15 beri kullanılmaktadır . Bu yönteme dayalı, Avrupa Toplulukları Yağlı tohumlardan glukozinolatların analizi (Brassica napus, kolza, kanola 16) için çeşitli laboratuarlarda test edilmiş ve onaylanmış bir standart protokol yayınladı. Diğer 17 (kolza mevcut değildir glukozinolatların ek müdahale katlarının belirlenmesi ile, örneğin), bu yöntem için ilave edildi. Glukosinolat analizi 18 için sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (LC-MS) platformları ve yüksek verimlilik protokolleri artan bulunmasına karşın <sup&gt;, 19, orijinal HPLC-UV / PDA yöntemi hala yaygın olarak bilim adamları tarafından kullanılır. başlıca nedenleri bu yöntem basit, düşük maliyetli ve kapsamlı bir kimyasal analitik bilgi altyapısının olmayan laboratuvarlarda nispeten erişilebilir olmasıdır. Bu topluma hizmet etmek, bitkisel maddelerden glukozinolatların çıkarılması ve HPLC-PDA ile desulfo-formlarının analizi için biz burada detay protokolü.

<table><tbody><tr>HPLC sınıfı <td>VWR</td><td>20864.320</td><td></td>Sodyum asetat (NaOAc) <td>için metanol HiPerSolv CHROMANORM & reg; gradyan sınıfı</td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302406-1KG-K</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>VWR</td><td>1.09057.1000</td><td></td></tr><tr><td>Sephadex</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A25120-10G</td><td></td></tr><tr><td>(&eksi;)-Yaban turpundan Sinigrin hidrat &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1647-500MG</td><td></td></tr><tr><td>Aril Sülfataz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9626-10KU</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>20816.298</td><td></td></tr><tr><td>Pastör Pipeti</td><td>Carl Roth</td><td>4518.1</td><td></td></tr><tr><td>Cam Yünü</td><td>Carl Roth</td><td>7377.1</td><td></td></tr><tr><td>Cam / tahta çubuk</td><td>VWR</td><td>HERE1080766</td><td></td></tr><tr><td>2 mL reaksiyon tüpleri</td><td>VWR</td><td>211-2120</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon iğnesi</td><td>Carl Roth</td><td>KX93.1</td><td></td></tr><tr><td>Rotilabo-laboratuvar yemekleri</td><td>Carl Roth</td><td>0772.1</td><td>Atık tepsisi</td></tr><tr><td>Rotilabo-sızdırmazlık klipsleri</td><td>Carl Roth</td><td>N217.1</td><td></td></tr><tr><td>Dondurarak Kurutucu Freezone 12 L</td><td>Labconco</td><td>7960030</td><td></td></tr><tr><td>Asetonitril süper gradyan sınıfı</td><td>VWR</td><td>83639.320</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td>VWR</td><td>462-5112</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasonik banyo</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB 15061</td><td></td></tr><tr><td>PH Elektrot</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>STARA2115</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj Heraeus Multifuge X1</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75004210</td><td></td></tr><tr><td>Ön Sütun</td><td>Termo Fisher Scientific</td><td>69697</td><td>C<alt>18</alt> sütun (4,6 x 10 mm, 5 &mikro; m, 300 &aring;)&nbsp;</td></tr><tr><td>Sütun Acclaim 300</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>60266</td><td>C18 sütun (4,6 x 150 mm, 3 & mikro; m, 300 &aring;)&nbsp;</td></tr><tr><td>HPLC Ultimate 3000</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td></td><td>, kolonlu fırın ve UV veya PDA dedektörlü</td></tr><tr><td>Şişe 1.000 mL</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td></td></tr><tr><td>Glukozinolat referans bileşikleri</td><td>Fitoplan</td><td>çeşitli</td><td>http://www.phytoplan.de/</td></tr></tbody></table>

yüksek basınçlı sıvı kromatografi ile glukosinolat ekstraksiyon ve analiz a basit yöntemi (hplc)

A Straightforward Method for Glucosinolate Extraction and Analysis with High-pressure Liquid Chromatography (HPLC)

Glukozinolatlar, iyi çalışılmış ve çok çeşitli bir doğal bitki bileşikleri sınıfıdır. Bitki direncinde, kolza yağı kalitesinde, gıda aromasında ve insan sağlığında önemli roller oynarlar. Glukozinolatların biyolojik aktivitesi, mirosinaz enzimi ile karıştırıldıklarında doku hasarı üzerine salınır. Bu, izotiyosiyanatlar ve nitriller gibi keskin ve toksik parçalanma ürünlerinin oluşumuna neden olur. Şu anda, yapısal olarak farklı 130'dan fazla glukozinolat tanımlanmıştır. Glukozinolatın kimyasal yapısı, oluşan ürünün önemli bir belirleyicisidir ve bu da biyolojik aktivitesini belirler. Sonuncusu zararlıdan (ör., progoitrin) faydalıya (ör., glukorafanin). Glukozinolat içeren her bitki türünün kendine özgü glukozinolat profili vardır. Bu nedenle, brassicaceous yaprak, tohum ve kök bitkilerinde veya ekolojik çalışmalar için yabani akrabalarında bulunan farklı glukozinolatların doğru bir şekilde tanımlanması ve güvenilir bir şekilde ölçülmesi önemlidir. Burada, çok çeşitli bitki türlerinde ve bitki organlarında glukozinolat profillerini analiz etmek için iyi doğrulanmış, hedeflenmiş ve sağlam bir yöntem sunuyoruz. Bozulmamış glukozinolatlar, mirosinaz aktivitesini devre dışı bırakmak için yüksek sıcaklıklarda bir metanol-su karışımı ile öğütülmüş bitki materyallerinden ekstrakte edilir. Daha sonra, elde edilen ekstrakt, saflaştırma için bir iyon değişim kolonuna getirilir. Sülfataz muamelesinden sonra, desülfoglukozinolatlar su ile ayrıştırılır ve elüat dondurularak kurutulur. Kalıntı, bir fotodiyot dizisi (PDA) veya ultraviyole (UV) dedektörü ile yüksek basınçlı sıvı kromatografisi (HPLC) ile analiz edilen kesin bir hacimde su içinde alınır. Algılama ve miktar tayini, ticari referans standartlarının alıkonma sürelerinin ve UV spektrumlarının karşılaştırılmasıyla elde edilir. Konsantrasyonlar, bir sinigrin referans eğrisine ve iyi bilinen yanıt faktörlerine dayalı olarak hesaplanır. Bu basit yöntemin avantajları ve dezavantajları, daha hızlı ve teknolojik olarak daha gelişmiş yöntemlerle karşılaştırıldığında burada tartışılmaktadır.

Bu yöntem algılama ve yapısal sınıfın yaygın olarak bulunan desulfoglucosinolates ayrılmasını (Şekil 3) sağlar. zararlı 2-hydroxyglucosinolate progoitrin nispeten erken kromatogramda gelir ve açık bir şekilde olumlu glukozinolat glukorafaninin bu örnekte sadece methylsulfinylglucosinolate ayrılır. Sinigrin, gluconapin ve glucobrassicanapin artan yan zincir uzunlukları (sırasıyla C3, C4 ve C5,) sahip alkenil glukozinolatların bir eluotropic dizi oluşturur. Benzer bir mantıksal dizi iki methylthioalkenyl glukozinolatların için, glucoiberverin (C3) ve glukoerusin (C4) görülebilir. 4-hidroksi, 1-methoxyglucobrassicin (neo- glukobrassisin) üç indol glukozinolatlar, glukobrassisin tepe ve türevleri, aynı zamanda açık bir şekilde birbirinden ayrılır. Bu dikkat edilmelidir ki, neo- glukobrassisin ve glukoerusin tepeleri gibi gluconasturtiin, sadece aromatik glukoBu örnekteki sinolate nedeniyle karışımı 9 kök özleri ilavesinden Bu Brassica özü özellikle yüksek olur. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/55425/55425fig3.jpg" /> Şekil 3: Bir glukozinolat özü kromatogramı. Birleştirilen Brassica nigra kök ve filiz örnekleri, B. rapa, B. oleracea analizinden elde edilen bir HPLC kromatogramıdır detay (1-32 dakika). zirve etiketleri tutma süresine ve belirlenen desulfoglucosinolates için kısaltmalar (GSL) gösterir. PRO = progoitrin (2-OH-3-bütenil GSL); Ralph = glukorafanine bağlıdır (4-methylsulfinlybutyl GSL); SIN = Sinigrin (2-propenil GSL), GNA = gluconapin (3-bütenil GSL); 4OH = 4-hydroxyglucobrassicin; IBV = glucoiberverin (3-metiltiopropil GSL); GBN = glucobrassicanapin (4-pentenil GSL); ERU = glukoerusin (4-metiltiyobutil GSL); GBC = glukobrassisin (indol-3-ilmetil GSL); NAS gluconasturtiin (2-feniletil GSL); NEO = neo- glukobrassisin (1 MeOH glukobrassisin). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55425/55425fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Rorippa Austriaca bir kökü özü görüldüğü gibi yaygın model bitkisi Arabidopsis&#39;te bulunan uzun zincirli metilsülfinil glukozinolatlar, aynı zamanda, bir eluotropic serisi yer almaktadır. Glucohesperalin (C6), glucosiberin (C7), glucohirsutin (C8), ve glucoarabin (C9) kromatogram (Şekil 4) düzenli aralıklarla görünür. Birlikte tepe UV spektrumu ile, örneğin eluotropic mantık dizisi, bilinmiyor glukozinolatlar sınıflandırır, ve geçici olarak tespit etmek için kullanılabilir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/55425/55425fig4.jpg" /> Şekil 4: kromatogramı (çerçeve 9-30 dk) Bir Rorippa Austriaca kök özü desulfoglucosinolates arasında. zirve etiketleri tutma süresine ve belirlenen desulfoglucosinolates için kısaltmalar (GSL) gösterir. HES = glucohesperin (6-methylsulfinylhexyl GSL); SBE = glucosiberin (7-methylsulfinylheptyl GSL); GBC = glukobrassisin (indol-3-ilmetil GSL); HIR glucohirsutin (8-methylsulfinlyoctyl GSL) =; ARA = glucoarabin (9-methylsulfinylnonylglucosinolate); NEO = neo- glukobrassisin (1 MeOH glukobrassisin). <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55425/55425fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Yaygın isim </td><td> Yan zincir yapısı </td><td> R (dakika) * </td><td> 229 nm </td><td> referans# </td></tr><tr><td> aliphatic glukozinolatlar </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucocapparin </td><td> metil </td><td> 3.5 </td><td> 1 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Sinigrin </td><td> 2-propenil </td><td> 5.5 </td><td> 1 </td><td> Brown, AK </td></tr><tr><td> Gluconapin </td><td> 3-bütenil </td><td> 9.5 </td><td> 1.11 </td><td> AK </td></tr><tr><td> Glucobrassicanapin </td><td> 4-pentenil </td><td> 13.5 </td><td> 1.15 </td><td> AK </td></tr><tr><td> Glucoiberverin </td><td> 3-metiltiopropil </td><td> 10.9 </td><td> 0.8 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> glukoerusin </td><td> 4-metiltiyobutil </td><td> 14.0 </td><td> 0.9 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Glucoiberin </td><td> 3-methylsulfinylpropyl </td><td> 3.7 </td><td> 1.2 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> gLUKORAFANİN </td><td> 4-methylsulfinylbutyl </td><td> 4.9 </td><td> 0.9 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Glucoalyssin </td><td> 5-methylsulfinylpentyl </td><td> 7.6 </td><td> 0.9 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Glucohesperin </td><td> 6-methylsulfinylhexyl </td><td> 10.5 </td><td> 1 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Glucosiberin </td><td> 7-methylsulfinylheptyl </td><td> 13.5 </td><td> 1 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Glucohirsutin </td><td> 8-methylsulfinyloctyl </td><td> 16.8 </td><td> 1.1 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Glucoarabin </td><td> 9-methylsulfinylnonyl </td><td> 20.5 </td><td> 1 </td><td></td></tr><tr><td> Glucocheirolin </td><td> 3-metilsülfonilpropil </td><td> 4.2 </td><td> 0.9 </td><td> Kahverengi </td></tr><tr><td> Progoitrin </td><td> 2 (R) -OH-3-bütenil </td><td> 4,5 </td><td> 1.09 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> Gluconapoleiferin </td><td> 2-OH-5-pentenil </td><td> 8.3 </td><td> 1 </td><td> AK </td&gt; </tr><tr><td> indol glukozinolatlar </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4-hydroxyglucobrassicin </td><td> 4-hidroksiindol-3-ilmetil </td><td> 11.2 </td><td> 0.28 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> glukobrassisin </td><td> indol-3-ilmetil </td><td> 15.3 </td><td> 0.29 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> 4-Methoxyglucobrassicin </td><td> 4-metoksiindol-3-ilmetil </td><td> 18.2 </td><td> 0.25 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> neo- glukobrassisin </td><td> 1-metoksiindol-3-ilmetil </td><td> 22.5 </td><td> 0.2 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> aromatik glukozinolatlar </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sinalbin </td><td> 4-hidroksibenzil </td><td> 8.1 </td><td> 0.5 </td><td> Buchner </td></tr><tr><td> Glucosibarin </td><td> 2 (R) -OH-2-feniletil </td><td> 12.1 </td><td&gt; 0.95 </td><td> Bir sonraki bakın </td></tr><tr><td> Glucobarbarin </td><td> 2 (S) -OH-2-feniletil </td><td> 12.7 </td><td> 0.95 </td><td> Buchner </td></tr><tr><td> Glucotropaeolin </td><td> benzil </td><td> 13.8 </td><td> 0.95 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> Gluconasturtiin </td><td> 2-feniletil </td><td> 18.0 </td><td> 0.95 </td><td> Büchner, AK </td></tr><tr><td> bilinmeyen - alifatik / UV spektrumu gibi aromatik </td><td></td><td></td><td> 1 </td><td> AK </td></tr><tr><td> bilinmeyen - Yelpazenin gibi indol </td><td></td><td></td><td> 0.25 </td><td> AK </td></tr><tr><td colspan="5"> * Yaklaşık tutma süresi (R,) (sütun, elüan kalitesi ile ilgili olarak 0,3 dakika ±) en yakın 0.1 dakika yuvarlanır. Alıkonma süreleri, bir C18 kolonu (150 x 4.6 mm, 3 mikrometre parçacık büyüklüğü) artı C18 ile donatılmış ThermoFisher / Dionex nihai HPLC platformlarında belirlenir </sTablo 1 &#39;deki gibi bir gradyan programı ile UB&gt; Kolon öncesi (10 x 4.6 mm, 5 mikrometre parçacık büyüklüğü). </td></tr><tr><td colspan="5"> tepki faktörleri arasında Referanslar: kolza glukozinolatların içinde Buchner, R. (ed JP WATHELET) 50-58 (Martinus NijhoffPublishers, 1987); Brown, PD, Tokuhisa, JG, Reichelt, M. &amp; Gershenzon, farklı organ ve Arabidopsis thaliana gelişim evreleri arasında glukosinolat birikim J. değişimi. Bitki Kimyası. 62 (3), 471-481, DOI: 10,1016 / S0031-9422 (02) 00549-6 (2003); AK. Yağlı tohumlar - glukozinolatların Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi belirlenmesi. Avrupa Toplulukları Resmi Gazetesi. L 170/28. Ek VIII 03.07.27-34 (1990). </td></tr></tbody></table> Tablo 3: Tepki faktörleri en yaygın bulundu desulfo-glukozinolatların C 18 sütun üzerinde bitki özleri ve bunların yaklaşık tutma süreleri. Elüsyon, gradyanTablo 1 &#39;de T, kolon sıcaklığı ve akış hızı.

Burada, öğütülmüş bitki materyallerinden glukozinolatların ekstraksiyonu için yerleşik ve sağlam bir protokolü ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Ekstraktların kolon üzerinde sülfataz muamelesinden sonra, desülfoglukozinolatlar ayrıştırılır ve yüksek basınçlı sıvı kromatografisi ile analiz edilir.

Yüksek basınçlı Sıvı Kromatografi ile Glukosinolat Ekstraksiyon ve Analiz A Basit Yöntemi (HPLC)

Glucosinolates are a well-studied and highly diverse class of natural plant compounds. They play important roles in plant resistance, rapeseed oil ...

Bu protokolün genel amacı, bitkilerde ve diğer biyolojik örneklerde glukozinolatların kolay ve basit bir analizini gerçekleştirmektir. Glukozinolatları ekstrakte etmek ve analiz etmek için kullanılan bu yöntem; bitki-böcek ekolojisi, bitki patolojisi, bitki ıslahı ve gıda bilimlerindeki temel soruları yanıtlamak için kullanılabilir. Bu tekniğin temel avantajı, iyi valide edilmiş olması ve çok çeşitli biyolojik örneklere yaygın şekilde uygulanabilmesidir.Bu yöntem temel olarak bitkisel materyallerdeki glukozinolatları miktar tayini yapmak için kullanılsa da, topraklara veya hazırlanmış gıdalara da uygulanabilir. Çoğunlukla standart laboratuvar ekipmanları kullanıldığı için bu ekstraksiyon prosedürü hemen hemen her laboratuvarda gerçekleştirilebilir. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler, videoyu en az bir kez okuyup izlediklerinde analizleri ve incelemeleri daha iyi gerçekleştireceklerdir.Prosedüre başlamak için, 10 gram G-25 çapraz bağlı dekstrin jeli ile 125 mililitre ultra saf suyu karıştırın. Karışımı kapalı bir şişede 4 °C'de saklayın. Ardından, 10.000 ünite tip H-1 arilsülfatazı 30 mililitre ultra saf su içerisinde çözün.Buna 30 mililitre absolut etanol ekleyin ve karışımı iyice karıştırın. Karışımı oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 2.650 xg'de santrifüjleyin. Süpernatantı bir beherde 90 mililitre absolut etanol ile birleştirin.Karıştırın ve yeni santrifüj tüplerine aktarın. Karışımı oda sıcaklığında, 1.030 ×g'de 15 dakika boyunca santrifüjleyin. Süpernatantı uzaklaştırın.Peletleri toplam 25 mililitre ultra saf suda çözün ve birleştirin. Karışımı vorteksle iyice karıştırın ve ardından karışımı 1 mililitrelik tüplere aktarın. Sülfat örneklerini 20 derece Celsius'ta bir yıla kadar saklayın.Ardından, yaklaşık 90 miligram sinogram tartın ve ağırlığı 1 mikrogram hassasiyetle kaydedin. Daha sonra, sinogram monohidratı 10 mililitre ultra saf suda çözün. Bu sinogram stok çözeltisinden, konsantrasyonları 50 ile 750 mikromolar arasında değişen beş referans çözelti hazırlayın.Referans çözeltileri 1,5 mL'lik tüplerde 20 °C'de saklayın. Ardından, her bir örnek ve referans için, bir kolon raf konumundaki 2 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünü etiketleyin. Daha sonraki dondurarak kurutma işlemi için her bir mikrosantrifüj tüpünün kapağını bir diseksiyon iğnesi ile delin.Etiketli tüpleri, etiketli kolonlarla aynı yapılandırma ve aralıkta olacak şekilde bir bloğa yerleştirin. Cam pipet kolonlarını hazırlamak için, 1 santimetre x 1 santimetrelik bir cam yünü parçasını bir tahta veya cam çubuk yardımıyla nazikçe pipetin içine bastırın. Cam yününü, pipet gövdesinin sapla birleştiği geçiş noktasına yerleştirin.Raf üzerindeki her etiketli konuma bir pipet kolonu yerleştirin. Rafı bir atık tepsisinin üzerine konumlandırın. Plastik 1 mililitre pipet ucunun ucunu kesin.Hazırlanan dekstrin jelini iyice çalkalayın. Ardından, genişletilmiş pipet ucu kullanarak her bir kolona 0.5 milliliters hazırlanan dekstrin jeli yükleyin. Kolonları dekstrin jeli sızıntısı açısından kontrol edin ve sızdıran kolonları değiştirin.Tüm kolonlar dekstrin jel ile doldurulduktan sonra, her kolonu 1 mililitre ultrapure su ile yıkayın. Güvenlik kapaklı 2 mililitre hacmindeki bir reaksiyon tüpüne, ince öğütülmüş bitki materyalinden 50 ile 100 miligram arasında serbest stride tartın ve ağırlığı 0,1 miligram hassasiyetle kaydedin. Her tüpe 3 milimetre çapında iki adet metal küre yerleştirin.Her tüpe ultra saf suda %70 metanolün 1 mililitresini ekleyin ve her karışımı kısaca vorteksleyin. Tüpleri ek güvenlik kapaklarıyla kapatın ve hemen 90 ila 92 °C'lik bir su banyosuna yerleştirin. Tüpleri, örnek kaynamaya başlayana kadar ısıtın.Tüpleri bir ultrasonik banyoya aktarın ve örnekleri 15 dakika boyunca sonikasyonla ısıtın. Sonikasyon sırasında, sülfat örneğini ve sinogram referanslarını çözmeye başlayın. Sonikasyonun ardından, örnekleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 2.700 ×g kuvvetinde santrifüjleyin.Süpernatanları ve çözünmüş sinogram referanslarını, pipete bitki materyali çekmemeye dikkat ederek ilgili kolonlara yükleyin. Her tüpe 1 mililitre %70 methanol ekleyin. Karışımları vorteksleyin.Ardından karışımları 15 dakika boyunca ultrasonik ısıtmaya tabi tutun. Tüpleri daha öncekiyle aynı koşullar altında tekrar santrifüjleyin. Süpernatanları ilgili kolonlara yükleyin.Her kolona, porsiyonlar arasında kolonların tamamen kurumasına izin vererek, iki kez 1 mililitre %70 metanol ekleyin. Her kolondaki kalıntı metanolü 1 mililitre ultrapure su ile yıkayın. Ardından, her kolonu iki kez 1 mililitre 20 milimolar sodyum asetat tamponu, pH 5.5 ile yıkayın.Sodyum asetat tamponunun son kısımları atık rafına süzüldüğünde, rafı atık tepsisinden çıkarın ve rafın ayaklarını peçete ile kurulayın. Rafı, kolon uçları ilgili tüplerin içine gelecek şekilde etiketli mikro santrifüj tüpleri bloğunun üzerine yerleştirin. Her kolona, çözeltinin kolon materyalinin yüzeyine ulaştığından emin olarak 20 µL sülfat çözeltisi yükleyin.Sülfat çözeltisini 50 µL sodyum asetat tamponu ile kolon materyalinin içine itin. Sülfatın kolonun içine yıkanması çok önemlidir. Enzimin, kolona bağlı sağlam glukozinolatlarla reaksiyona girebilmesi için kolon üzerinde olması gerekir.Sülfat çözeltisi her bir kolona yıkandıktan sonra, kolonları alüminyum folyo ile kapatın. Kolonları gece boyunca bekletin. Ardından, her bir kolondaki de-sulfo-glukozinolatları iki adet 0,75 milliliter ultrapure su porsiyonu ile elüe edin.Kolonlar kuruduktan sonra kolon rafını çıkarın ve her tüpün kapağını kapatın. Tüpleri sıvı azot içerisinde veya -80 °C'de en az 30 dakika boyunca dondurun. Örnekleri 12 ila 24 saat boyunca liyofilize edin.Her bir kalıntıyı 1 mililitre ultrapure su içerisinde çözün. Ardından her bir örneği ve referansı etiketli HPLC örnek tüplerine aktarın. Ekstraktları ters faz CAT kolonunda ayırın.Deteksiyon dalgaboyu olarak 229 nanometre kullanın. HPLC ile ayrılan glukozinolatlar, alıkonma sürelerinin ve UV spektrumlarının bilinen glukozinolat standartlarıyla karşılaştırılmasıyla tanımlanabilir. Örnekteki glukozinolat konsantrasyonları, bir sinogram kalibrasyon eğrisi ve yanıt faktörleri için literatür değerleri kullanılarak hesaplanır.Buna dayanarak, orijinal bitki örneğindeki glukosinolat konsantrasyonları belirlenebilir. Kullanılan HPLC koşulları altında, sağlıksız progoitrin oldukça erken elüe olur ve biyolojik olarak faydalı glukorafaninden ayrılır. Endo-glukosinolatlar da iyi bir şekilde ayrıştırılmıştır.Alkonol, metilfol-alkonol ve daha uzun zincirli metil-solfinol-glukosinolatlar için yan zincir bağları arttıkça lyotropik seriler gözlemlenir. Böylece, bilinmeyen glukosinolatlar, UV spektrumları ile birlikte bu lyotropik serilere dayanarak geçici olarak sınıflandırılabilir. Uygun hazırlıkla, bir kişi bir çalışma gününde 150 ila 200 örneği ekstrakte edebilir.Numunelerin liyofilizasyonu, kolonların hazırlanması ve HPLC için hazır hale getirilmesi bir gün daha sürecektir. Bu prosedürü takiben, kromatogramınızdaki bilinmeyen desulfo-glukozinolatları tanımlamak için LCMS gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, biyolojik numunelerinizden glukozinolatların nasıl ekstre edileceği ve HPLC aracılığıyla nasıl analiz edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Metanol ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemin her zaman çeker ocak altında yapılması gerektiğini unutmayın.

a-straightforward-method-for-glucosinolate-extraction-analysis-with

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Küçük doku örneklerinde birden fazla bitki hormonların hızlı çıkarma ve analiz için izin veren basit bir yöntem sağlanır. Bu prosedür, buhar faz ekstraksiyon ağırbaşlı arıtma adımı olarak kullanır. Örnekleri, GC / MS ile ağırlıklı olarak üretir kimyasal iyonizasyon (M 1) + iyonları tarafından analiz edilir.

Stres Cevaplarının sırasında Bitki Hormonları İzlenmesi

Bu videoda, önceden hasat edilmiş bir donör böbrekten metabolitlerin SPME probu tabanlı ekstraksiyonunu gösteriyoruz. Ekstrakte edilen metabolitler, transplantasyon için organ kalitesini değerlendirmek amacıyla metabolomik ve lipidomik analiz yapmak için kullanılabilir.

Katı Faz Mikroekstraksiyon Örneklemesi: Greft Dokularından Örnek Ekstraksiyonu için Prob Tabanlı Bir Teknik

Bir örnek kullanarak biyolojik dokulardan lipidlerin, metabolitlerin ve proteinlerin kapsamlı şekilde ekstraksiyonu için bir protokol sunulmuştur.

Tek Bir Numuneden Metabolitlerin, Lipidlerin ve Proteinlerin Kapsamlı Analizi için Basit Fraksiyonlu Ekstraksiyon Metodu

Biz aynı anda üç monoamin nörotransmitter belirlenmesi ve iki onların metabolitleri bebekler idrar için yüksek basınçlı sıvı Kromatografi (HPLC) elektrokimyasal algılama (ECD) ile birleştiğinde uygun bir katı fazlı çıkarma mevcut. Biz Ayrıca metaboliti MHPG beyin hasarı erken tanısı için potansiyel bir biyomarker olarak bebekler için tanımlar.

Ayıklama ve çözümleme katekoiamin nörotransmitter ve onların metabolitleri yüksek basınçlı sıvı Kromatografi ile uygun bir yöntem

Bu iletişim kuralı tek bir üretim için doğal organik madde ve mikrobiyal proteomik farklı ekosistemleri içinde tam olarak eşleştirilmiş karakterizasyonu sonuçlanan tamamlayıcı analitik ve omics teknikleri açıklar. Bu yaklaşım sağlam karşılaştırmalar metabolik yollar ve sera gazı üretim tanımlamak ve çevresel değişimin yanıt tahmin için önemli dönüşümleri tanımlamak için izin verir.

Karmaşık doğal organik madde karışımları karakterize için tek işlem hacmi tamamlayıcı yüksek çözünürlüklü analitik teknikler

Burada bitkilerdeki inositol polifosfatları tespit etmek ve ölçmek için son derece hassas bir yöntem olan[3H]-myo-inositol etiketli fidelerin güçlü aniyon değişimi yüksek performanslı sıvı kromatografisini tanımlıyoruz.

SAX-HPLC kullanılarak Farklı Bitki Türlerinden Çözünür, Radiolabeled Inositol Polifosfatların Ekstraksiyonu ve Niceliği

Sıvı kromatografisi yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi ile birleştirilmiş 13C6-Glikoz etiketleme yöntemi çok yönlüdür ve tıbbi bitkilerde ikincil metabolitlerin sentezinde yer alan birincil organlar ve yollar ile bu ikincil metabolitlerin kapsamlı kullanımı hakkında gelecekteki çalışmaların temelini oluşturur.

13C 6-LC-MS ile İlişkili Glikoz Etiketlemesi: İkincil Metabolit Sentezinde Bitki Birincil Organlarının Tanımlanması

Bu çalışma, Anisodus tanguticus'ta tropan alkaloidleri (hyoscyamin, aniisodamin, skopolamin) tanımlamak ve nicelendirmek için üçlü quadrupol kütle spektrometrisi (HPLC-QQQ-MS) yöntemiyle birleşen yüksek performanslı sıvı kromatografi geliştirmiştir. Yöntem, tıbbi bitkilerin yüksek verimli analizinde hızlı, doğru ve güvenilir olduğunu kanıtladı.

Tıbbi Bitkilerde Tropan Alkaloidlerin Nicelenmesi İçin Verimli ve Hızlı Bir HPLC-QQQ-MS yöntemi

Hedefsiz metabolomik bir metabolik profili anlık üreten bir hipotez sağlar. Bu protokol, serum hücreler veya doku metabolitlerinin çıkarma ve analiz gösterecektir. Metabolitleri bir dizi sıvı-sıvı faz ekstraksiyon kullanılarak anket vardır, Mikrosirkülasyon Ultra Performanslı sıvı kromatografisi / diferansiyel analiz yazılımı için birleştiğinde yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (UPLC-HRMS).

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi-Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometre (UPLC-HRMS) kullanarak Biyolojik Kaynaklar gelen hedefsiz Metabolomik

Bakteri hücre duvarı peptidoglikan, peptitler tarafından çaprazlanmış şeker iplikçiklerinden oluşan bir makromoleküler ağdır. Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi, peptidoglikan kompozisyonunun yeni keşifleri için yüksek çözünürlük ve verim sağlar. Hücre duvarlarının izolasyonu (sakculi) ve daha sonra UPLC aracılığıyla analize hazırlanmaları için bir prosedür sunuyoruz.

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografisi ile Bileşimsel Analiz için Bakteriyel Hücre Duvarlarının İzolasyonu ve Hazırlanması

Öğrenin bitki materyallerinden glukozinolat ekstraksiyonu ve HPLC ile analiz yöntemini. Bu doğrulanmış teknik, bitki-ekoloji ve gıda bilimleri araştırmalarında çeşitli biyolojik örneklerde uygulanabilir.

Yüksek basınçlı Sıvı Kromatografi ile Glukosinolat Ekstraksiyon ve Analiz A Basit Yöntemi (HPLC)

Daha fazla video keşfet