Name: Insan hepatoselüler karsinoma hücre hattı HepG2 ile üç boyutlu Karaciğer modeli yeniden doldurulur Viral Vektörler Study (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Öğrenin, HepG2 hücreleriyle yeniden doldurulmuş üç boyutlu karaciğer modeli oluşturmayı ve AAV viral vektörlerle gen transferini incelemeyi. Bu yöntem, insan fizyolojisine uygun viroloji araştırmaları için hayvan kullanımını azaltır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, teknik yardım için Bernd Krostitz'e, projeye ilk katkıları için Radoslaw Kedzierski'ye, redaksiyon ve yardımcı yorumlar için Erik Wade'e ve biyoreaktörü sağladığı ve organ hücresinden arındırma konusundaki değerli deneyimini paylaştığı için Prof. Heike Walles'e teşekkür eder. Projenin Berlin Teknoloji Üniversitesi tarafından finanse edilmesi ve yayınlanması için de müteşekkiriz.

NOT: RL Landesamt für Gesundheit und Soziales (LaGeSo) organlarının eksplantasyonu etik onay aldı. Karaciğerler Wister sıçanları eksplante edildi. inferior vena kava ve karaciğer portal ven 22 G kanül ile kanüle edildi. Çıkarılan karaciğerin Decellularization yöntemleri daha önce tarif edilmiştir.% 1 sodyum deoksikolat, bir sıçan karaciğer aşın perfüzyon ile elde edilmiştir Burada kullanılan 4,5 hücre dışı matrisler. Bir Sıçan Karaciğer Ekstrasellüler Matriks (ECM) 1. Recellularization <ol><li> karaciğer hücre hattı HepG2 genişletilmesi <ol><li> Kültür Roswell Park Memorial Institute (RPMI),% 10 fetal dana serumu, 2 mM glutamin, penisilin ve streptomisin, 2 mM her biri ile takviye 1640 ortamında hepatoselüler karsinom hücre çizgisi HepG2. </li><li> T175 şişelerde 1.5 x 10 7 hücre Tohum ve 37 ° C ve% 5 CO 2 hücreleri büyümek </sub&gt;. 37 ° C&#39;de 5 dakika boyunca tripsinizasyon ile 4 gün sonra hasat hücreleri,% 5 CO2. </li><li> 300 xg&#39;de hücreleri aşağı spin ve 4 ml PBS onları tekrar süspansiyon ve mikroskop altında Neubauer odasına sahip hücreleri saymak. Bir T175 şişesi yaklaşık 4,5 x 10 7 hücreleri verecektir. NOT: kültür ECM başına 6 x 10 8 HepG2 hücrelerinde (4-5 x 10 8 hücre her 10 x 175 cm 2 kültür şişeleri) ile sıçan karaciğer ECM recellularization için yeterli hücre numaralarını içerir emin olun. </li></ol></li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54633/54633fig1.jpg" /> Şekil 1. Biyoreaktör sistemi. A) Bu biyoreaktör sistemi ısmarlama oldu. Bu, 37 ° C&#39;de ve% 5 CO2 seviyesinde organ modelleri tutar. Peristaltik pompaların debileri karaciğer büyüme odasına yerleştirilir) Oda. Ayrı ayrı düzenlenir ve bağlantı olabilirbir peristaltik pompa, orta rezervuar, bir kabarcık kapanı ve basınç sensörü oluşan perfüzyon devresine ed. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54633/54633fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="2"><li> ECM&#39;nin Recellularization <ol><li> Bir karaciğer perfüzyon odasına, bir perfüzyon sistemi, orta bir rezervuar ve kabarcık tuzak içeren, biyoreaktör sistemi kurmak. biyoreaktör sistemi (121 ° C, 15 dakika) sterilize edin. </li><li> Peristaltik bir pompa ile biyoreaktör sistemi bağlayın ve bir inkübatör uygun koşulları sağlayarak yerleştirin (37 ° C,% 5 CO 2). Biyoreaktör sistemi (Şekil 1) karaciğer perfüzyon odasında decellularized sıçan karaciğer inşaat iskelesi 8 yerleştirin. </li><li> Perfüzyon sistemine tüp klipleri kullanılarak kanüle portal ven ve vena kava bağlayın. (1.1 &#39;de tarif edildiği gibi) 150 ml RPMI ortamı ile iskele dengeye/ Dakika 1.25 ml bir akış oranı ile 5 gün boyunca. </li><li> Ortam devresi karaciğer iskele çıkarın ve 5 ml&#39;lik bir şırınga kullanılarak portal ven aracılığıyla (5 ml) 3 x 10 8 HepG2 hücreleri ile iskele inoküle, hava kabarcığı oluşumunu önlemek ve hücreler için inkübe edilerek ECM yeniden doldurmak için izin pompa ile iskele 1 saat kapalı. </li><li> Yavaş yavaş 10 dakika boyunca 1.25 ml / dakika ile başlayarak, pompa ayarlanması sureti ile akış hızını artırır; 20 dakika boyunca 2.5 mL / dakika ve son olarak 3.75 ml / 30 dakika min. </li><li> Yineleyin 6 x 10 8 toplam hücre sayısına ulaşmak için 1.2.4-1.2.5 adımları. </li><li> / Dakika 3.75 ml bir akış hızında biyoreaktör sistemi çalıştırın. Kültür 2 hafta recellularized sıçan karaciğeri. Not: taze ortam (50 mi) her gün ortam üçte birini değiştirin. Böyle laktat dehidrogenaz aktivitesi, orta örneklerin pH ve glukoz ve laktat konsantrasyonu gibi fizyolojik parametreleri ölçmek için kültür ortamı tadabilirsiniz. </li></ol></li></ol> Recellularized Sıçan Karaciğer 2. İletimi <ol start="1"><li> AAV vektörlerinin büyük ölçekli üretimi <ol><li> Daha önce tarif edildiği gibi, üretmek, saflaştırmak ve AAV vektörleri ölçmek: 11 <ol><li> Kısaca, silindir şişelerde AAV vektörleri üretmek ve iyodiksanol dereceli santrifüj yoluyla onları arındırmak. PD10 jel filtrasyon sütunları üzerinde süzme ile artık iyodiksanol çıkarın. Standart olarak genomik AAV DNA kullanılarak qPCR AAV vektörü konsantrasyonunu belirlemek. NOT: Bu çalışmada kullanılan kendi kendini tamamlayan, pseudotyped AAV2 / 6 vektör transdüksiyon verimliliği ve endojen olarak ifade edilen genin demonte bir ShRNA ifade kaseti (insan siklofilin B (hCycB), Şekil 2) göstermek için bir muhabir olarak EmGFP kodlanmış . Serotip 6 (karaciğer model başına 2.7 x 10 13 AAV vektörleri) pseudotyped scAAV vektörlerinin yeterli bir miktarını sağlamak. </li></ol></li></ol></li></ol><img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54633/54633fig2.jpg" /> Bu çalışmada kullanılan kendi kendini tamamlayan, pseudotyped AAV2 / 6 vektör Şekil 2. ilk. Genom AAV2 ters çevrilmiş terminal tekrarları (ITR) oluşur ve kontrolü altında bir shRNA yanı sıra, CMV promoterinin kontrolü altında EmGFP kodlayan bir U6 organizatörü evi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54633/54633fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <ol start="2"><li> Karaciğer Modelinin İletimi <ol><li> PBS, ilgili hacim ilave edilerek 5 ml 2.7 x 10 13 vektör genomlarının bir son konsantrasyon elde etmek için, AAV vektörü solüsyonunun ayarlayın. </li><li> kanül hortumunu kaldırarak medya devre karaciğeri ayırın. portal ven kanül 5 ml&#39;lik bir şırınga bağlayın ve tam AAV vektörü çözeltisi (5 mi) enjekte edilir. NOT: OptionallY, karaciğer boyunca AAV vektörü solüsyonunun dağıtımı takip fenol kırmızısı (5 ug / ml) ekleyin. </li><li> Pompa açık olarak 1 saat süre ile inkübe edilir. Yavaş yavaş 10 dakika boyunca / 1.25 ml dk başlayarak akış hızını artırır; 2.5 ml / 20 dakika ve 30 dakika boyunca 3.75 ml / dakika min. Kültür 6 gün boyunca recellularized sıçan karaciğeri. NOT: orta üçte birini yerine 1.2.7 altında NOT verilen </li></ol></li></ol> Recellularized kalıt aktarımlı Sıçan Karaciğer 3. Değerlendirme <ol start="1"><li> Hematoksilen ve eosin (HE) boyama ve immünohistokimyasal analizi <ol><li> Bir neşter kullanılarak her bir karaciğer lobunun örnekleri (0.5 x 0.5 x 1.5-2 cm) alın. </li><li> % 4 paraformaldehit (PFA), 4 ° C de 1.5 saat +% 4 sakroz çözeltisi içinde (3.1.1 den) örnekler inkübe edin. (Dikkat:.. PFA daima davlumbaz içinde PFA tutmak ve uygun koruyucu elbise giyin toksik ve kanserojen) yıkayın PBS ile üç kez (yıkama adım başına 1 dk) ve% 8 inkübe4 ° C&#39;de bir gece boyunca sakroz. </li><li> Plastik cryomolds içine orta sabitleme dökün hava kabarcıkları orta serbest sabitleme içine örnekleri yer. Numune iyi kaplıdır kadar sabitleme orta ekleyin. Mağaza sonraki kullanıma kadar -80 ° C &#39;de numuneler gömülü. </li><li> Bir kriyotom 12 cryo-bölümleri (10 mikron) hazırlayın. Hematoksilen + eosin boyaması 8 ile Recellularization değerlendirin. (: EmGFP burada) geninin-faiz için immünohistokimyasal boyama ile transdüksiyon etkinliğini değerlendirmek. </li></ol></li><li> Moleküler biyoloji örnekleme <ol><li> biyopsi yumruk (çapı 4 mm) her karaciğer lobu Örnek. EmGFP transgen ifadesinin değerlendirilmesi için, üreticinin talimatlarına uygun olarak, toplam RNA, DNA ve protein izole ve 8 yıkmak hCycB. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Chang, T. T., Hughes-Fulford, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monolayer+and+spheroid+culture+of+human+liver+hepatocellular+carcinoma+cell+line+cells+demonstrate+distinct+global+gene+expression+patterns+and+functional+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Monolayer and spheroid culture of human liver hepatocellular carcinoma cell line cells demonstrate distinct global gene expression patterns and functional phenotypes.</a> Tissue Eng. Part A. 15 (3), 559-567 (2009).</li>
<li>Butler, D., Callaway, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scientists+in+the+dark+after+French+clinical+trial+proves+fatal%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Scientists in the dark after French clinical trial proves fatal.</a> Nature. 529 (7586), 263-264 (2016).</li>
<li>Enger, P. O., Thorsen, F., Lonning, P. E., Bjerkvig, R., Hoover, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viral+vectors+penetrate+human+solid+tumor+tissue+in+vivo+more+effectively+than+adenoviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viral vectors penetrate human solid tumor tissue in vivo more effectively than adenoviral vectors.</a> Hum. Gene Ther. 13 (9), 1115-1125 (2002).</li>
<li>Uygun, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decellularization+and+recellularization+of+whole+livers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Decellularization and recellularization of whole livers.</a> J. Vis. Exp. (48), e2394(2011).</li>
<li>Hillebrandt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedure+for+Decellularization+of+Rat+Livers+in+an+Oscillating-pressure+Perfusion+Device%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Procedure for Decellularization of Rat Livers in an Oscillating-pressure Perfusion Device.</a> J. Vis. Exp. (102), e53029(2015).</li>
<li>Baptista, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+whole+organ+decellularization+for+the+generation+of+a+vascularized+liver+organoid%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">The use of whole organ decellularization for the generation of a vascularized liver organoid.</a> Hepatology. 53 (2), 604-617 (2011).</li>
<li>Yagi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human-scale+whole-organ+bioengineering+for+liver+transplantation%3A+a+regenerative+medicine+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Human-scale whole-organ bioengineering for liver transplantation: a regenerative medicine approach.</a> Cell Transplant. 22 (2), 231-242 (2013).</li>
<li>Wagner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+three-dimensional+humanized+liver+model+for+the+study+of+viral+gene+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Use of a three-dimensional humanized liver model for the study of viral gene vectors.</a> J. Biotechnol. 212, 134-143 (2015).</li>
<li>Kay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+gene-based+therapies%3A+the+road+ahead%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art gene-based therapies: the road ahead.</a> Nat. Rev. Genet. 12 (5), 316-328 (2011).</li>
<li>Yla-Herttuala, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endgame%3A+glybera+finally+recommended+for+approval+as+the+first+gene+therapy+drug+in+the+European+union%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Endgame: glybera finally recommended for approval as the first gene therapy drug in the European union.</a> Mol. Ther. 20 (10), 1831-1832 (2012).</li>
<li>Wagner, A., Röhrs, V., Kedzierski, R., Fechner, H., Kurreck, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+for+the+quantification+of+adeno-associated+virus+vectors+for+RNA+interference+applications+using+quantitative+polymerase+chain+reaction+and+purified+genomic+adeno-associated+virus+DNA+as+a+standard%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Gene+Ther.+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel method for the quantification of adeno-associated virus vectors for RNA interference applications using quantitative polymerase chain reaction and purified genomic adeno-associated virus DNA as a standard.</a> Hum. Gene Ther. Methods. 24 (6), 355-363 (2013).</li>
<li>Takagi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdissected+region-specific+gene+expression+analysis+with+methacarn-fixed%2C+paraffin-embedded+tissues+by+real-time+RT-PCR%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Microdissected region-specific gene expression analysis with methacarn-fixed, paraffin-embedded tissues by real-time RT-PCR.</a> J. Histochem. Cytochem. 52 (7), 903-913 (2004).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Burada anlatılan yeniden 3D karaciğerleri insanlaştırılmış sistemde viral vektörlerin incelemek için bir model. Bir insan hepatoselüler karsinoma hücre hattı ile, bir sıçan karaciğer ECM popülasyonu büyük biyolojik çalışmasına izin verir vaskülarize sistemi oluşturur. Bu sonuçlar, bir proof-of-concept sulandırılmış karaciğer modeli verimli bir viral vektör ile transduced olabilir sağlar. Burada gösterilen deney için, karaciğer her lobun AAV vektör ile kalıt edildi. Bununla birlikte, bazı ön deneylerde tek loblar hücreleri ile yeniden doldurulur değildi. Vasküler sistem kapatılmasıy hücre artıkları ya da diğer bileşenleri bilmek önemlidir. Tüm lobu perfüze edilip edilemeyeceğini test etmek için, örneğin fenol kırmızısı gibi toksik olmayan boya karaciğer modeli ile temizlenebilir. Bir başka önemli madde steril karaciğer iskele tutuyor. etanol ya da antibiyotikler ile tedavi disadv ikenantageous vasküler sistem için, γ-radyasyonla hücre dışı matrisin ışınlama damarları korunmuş ve örnek sterilize edilmiştir. Recellularization prosedürü ve repopulation defa kullanılan hücre sayısı yeniden üretilebilir sonuçlar elde etmek için ayarlanması gerekebilir, böylece Ayrıca, eksplante karaciğerler büyüklüğü, farklı olacaktır. Bu çalışmada kullanılan fare karaciğerleri nispeten büyüktür ve hücre ve test reaktifleri (örneğin, AAV vektörleri) ihtiyaç duyar. Buna ek olarak, yeniden çoğalması prosedürü iki haftadan fazla sürmüştür. Bu makul bir çaba ile yapılabilir çoğaltır sayısını sınırlar. Şu anda daha az hücre ve daha az test reaktiflerinin kullanımına izin veren, sıçan karaciğerinden hacminin yalnızca yaklaşık beşte biri olan fare karaciğerleri, modelini kurmaktadır. Hücre sayısının oransal ölçek aşağı makul görünse de, kesin miktarlar furt tespit edilmesi gerekenOnun deneyleri. Bu modelin bir diğer sakıncası hepatoselüler HepG2 hücre hattı kullanılmasıdır. Deneyler fizyolojik daha alakalı bir model sağlayacak uyarılmış pluripotent kök hücrelerin ayırt hepatositlerin kullanımını geliştirmek için çalışmalar devam etmektedir. Ayrıca, karaciğer hepatositleri, örneğin, Kupffer hücreleri ve sinosoids ek olarak birden çok hücre tipinde oluşur. Biz bir ECM birden fazla hücre tipleri ile recellularized zaman farklı hücre tipleri kendi doğal ortamları yeniden doldurmak olacağını varsayıyorum. 3D karaciğer modeli birçok avantajlarını birleştirir. In vivo modeller, geleneksel önemli bir dezavantajı, Bitki Fizyolojisi, insan fizyolojisinin esasen farklı olmasıdır. bir insan hastanın tedavisi için toksik yan etkileri, bu nedenle tespit edilmemiş kalabilir. Bu eksiklik daha yakından hu biyolojisini yansıtan insan hücreleri ile 3D karaciğer modeli sulandırılması ile aşılabiliradam hasta. Karaciğer modelinin ikinci avantajı hayvan refahına katkısı olduğunu. Hayvan bileşenleri yeniden oluşturma deneyleri için gerekli olsa da fazlası hayvanlar, yani, herhangi bir ek hayvan gereklidir, diğer hayvan deneyleri için kurban edildi ve kullanılabilir olduğu, bu yaklaşım hala, 3R prensibi (değiştirme, redüksiyon, arıtma) amaçlarını aşağıdaki yaklaşımı tamamen sıkça in vivo deneyler ile ilişkili hayvanların acı önler. Sferoidler 3D sisteminde hücresel süreçleri incelemek için alternatif bir araçtır. Büyük maddeler ve biyolojik yapının iç bölüme derinlemesine nüfuz kalmaması Ancak, sferoidler vaskülarize değildir. Bu sorunlar vaskülarize 3D karaciğer modeli ile aşılmıştır. bunlar, gen terapi uygulamaları için en ümit verici adaylar arasında, çünkü burada tarif edilen deneylerde, AAV vektörleri, araştırılmıştırUygulamalar. Gibi çok sayıda gen terapötik yaklaşımlar hepatit virüsü veya alfa-1 antitripsin eksikliği enfeksiyonlarının tedavisi için, örneğin, karaciğer hedefleme amaçlamaktadır, 3D karaciğer bu AAV vektörü geliştirme sürecinde kullanılabilir. Ayrıca, tabii ki, diğer hepatotropik viral vektörler, örneğin, adenoviral vektörlerin çalışma için uygundur. Buna ek olarak, hepatit B ya da C virüsü gibi bulaşıcı hepatit virüsleri incelemek için kullanılabilir. Örneğin, yeni bir antiviral stratejiler tasarlamak için de kullanılabilir. Ayrıca, 3D organı modelleri kanserini tedavi etmek ve toksikolojik çalışmaları yürütmek için yeni sitostatik ilaçlar geliştirebilmek için umut verici araçları temsil etmektedir. uzun vadede, yapay karaciğerler nakli gibi rejeneratif tıpta kullanılabilir. Birlikte ele alındığında, 3D karaciğer modeli enfeksiyon biyoloji uygulamaları ve biyomedikal araştırmanın diğer alanlarda geniş bir yelpazede sunuyor.

Mevcut biyomedikal araştırmaların çoğu, doğası gereği üç boyutlu (3B) olan iki boyutlu (2B) hücre kültürü deneyleri veya hayvan modelleri olmak üzere iki yaklaşımdan birine dayanmaktadır. Ancak, bu yaklaşımların bazı ciddi dezavantajları vardır. 2D kültürde yetiştirilen hücrelerin, gen ekspresyon paternleri ve hücre fizyolojisi açısından 3D koşullar altında yetiştirilenlerden farklı olduğu gösterilmiştir. 1 Hayvan modelleri, etik kaygılarla ilişkilendirilmelerinin yanı sıra, çoğu zaman insan fizyolojisini iyi bir şekilde modellemezler. Bir bileşiğin belirgin toksik etkilerinin eksikliğinin, insanlarda ilk dozlamadan önce hayvan modellerinde doğrulanması gerekmesine rağmen, klinik çalışmalarda ciddi, bazen ölümcül yan etkilerin meydana geldiği çok sayıda vaka belgelenmiştir. 2
Bu eksikliklerin üstesinden gelmek için, insanlaştırılmış 3D ex vivo organ modelleri önemli araştırma araçları haline geldi. Uygun koşullar altında yetiştirildiğinde, hücreler sferoidler olarak bilinen 3 boyutlu yapılar halinde kendi kendine birleşir. Bununla birlikte, bu sferoidler, küçük moleküler bileşiklerin, büyük biyolojiklerin ve viral vektörlerin dağılımını sınırlayan bir vasküler sistemden yoksundur. Örneğin, adenoviral vektörler sadece insan glioblastomlarından hazırlanan sferoidlerin dış hücre katmanlarını dönüştürdü. 3 Bu soruna bir çözüm, vasküler sistem içeren bir organ modelinin kullanılmasıdır. Bu amaçla, ilgilenilen organ bir hayvandan çıkarılabilir ve hayvan hücreleri insan hücreleri ile değiştirilebilir. Deterjan veya sodyum kolat ile muamele edilerek hayvan karaciğerlerinin hücreden arındırılması için çeşitli yöntemler tanımlanmıştır. 4-6 Elde edilen hücre dışı matris (ECM), çeşitli hücresel süreçleri düzenleyen sitokinleri ve büyüme faktörlerini barındırır. 7 İşlevsel bir organ modeli elde etmek için insan hücreleri ile yeniden hücrelendirme için bir iskele olarak kullanılabilir.
Yakın tarihli bir çalışmada, adeno-ilişkili bir virüs (AAV) vektörünün dağılımını ve transgen ekspresyonunu incelemek için insanlaştırılmış bir 3D karaciğer modeli kullandık. 8 AAV vektörü, gen terapötik uygulamaları için en umut verici viral vektörlere aittir. 9 Batı dünyasında ilk ve bugüne kadar onaylanmış tek gen terapötik müdahalesi, lipoprotein lipaz transferi için bir AAV vektörü kullanır. 10

<table><tbody><tr><td>Kuluçka makinesi</td><td>Fraunhofer</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompa</td><td>Fraunhofer</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Flanşlı yivli</td><td>Duran</td><td>2439454</td><td>gaffer tarafından modifiye</td></tr> edilmiştir <tr><td>O-Ring Şeffaf</td><td>Duran</td><td>2922551</td><td></td></tr><tr><td>Hızlı Bırakma Kelepçesi</td><td>Duran</td><td>2907151</td><td></td></tr><tr><td>Düz Flanş Kapağı</td><td>Duran</td><td>2429857</td><td>gaffer tarafından değiştirildi</td></tr><tr><td>Vida dişi Tüp</td><td>Duran</td><td>2483802</td><td>gaffer tarafından değiştirildi</td></tr><tr><td>Vida dişi Tüp</td><td>Duran</td><td>2483602</td><td>gaffer tarafından değiştirildi</td></tr><tr><td>Silikon sızdırmazlık Halkası</td><td>Duran</td><td>2862012</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı Kapak</td><td>Duran</td><td>2924013</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı Kapak</td><td>Duran</td><td>2924008</td><td></td></tr><tr><td>Diyaframlı</td><td>Vidalı Kapak Duran</td><td></td><td></td>2922709</tr><tr><td>Diyaframlı Vidalı Kapak</td><td>Duran</td><td>2922705</td><td></td></tr><tr><td>Filtre</td><td>Sarstedt</td><td>831,826,001</td><td></td></tr><tr><td>Silikon Boru</td><td>VWR</td><td>228-1500</td><td></td></tr><tr><td>Boru konektörü</td><td>Ismatec</td><td>ISM556A</td><td></td></tr><tr><td>Biyouyumlu Boru</td><td>Ismatec</td><td>SC0736</td><td></td></tr><tr><td>T175 kültür şişeleri</td><td>Greiner bio-one</td><td>660 160</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>BioWest SAS (Th. Geyer)</td><td>L0501-500</td><td></td></tr><tr><td>glutamin</td><td>BioWest SAS (Th. Geyer)</td><td>X0551-100</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin BioWest</td><td>SAS (Th. Geyer)</td><td>L0940-100</td><td></td></tr><tr><td>penisilin / streptomisin</td><td>BioWest SAS (Th. Geyer)</td><td>L0022-100</td><td></td></tr><tr><td>fetal buzağı serumu</td><td>cc pro</td><td>S-10-M</td><td></td></tr><tr><td>Doku-Tek O.C.T.</td><td>Weckert-Labortechnik</td><td>600001</td><td></td></tr><tr><td>HepG2</td><td>DSMZ</td><td>ACC 180</td><td></td></tr><tr><td>Kriyokalıp 15 x 15 x 5 mm</td><td>Sakura</td><td>4566</td><td></td></tr><tr><td>Biyopsi zımbası 4 mm</td><td>pfm medikal</td><td>48401</td><td></td></tr><tr><td>Nucleospin miRNA</td><td>Macherey & Nagel</td><td>740971.10</td><td></td></tr><tr><td>Nükleospin RNA/DNA Tampon Seti</td><td>Macherey & Nagel</td><td>740944</td><td></td></tr></tbody></table>

insan hepatoselüler karsinoma hücre hattı hepg2 ile üç boyutlu karaciğer modeli yeniden doldurulur viral vektörler study

Study of Viral Vectors in a Three-dimensional Liver Model Repopulated with the Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line HepG2

Bu protokol, üç boyutlu (3D) üretilmesini eks vivo karaciğer modeli ve viral vektör sistemleri çalışma ve gelişime uygulamaları açıklanmıştır. Model, insan hepatosit hücre hattı ile hücresizleştirilmiş sıçan karaciğer dışı matris repopulating ile elde edilir. Model yaşayan hayvanların potansiyel olarak zararlı deneyler yerine, bir vaskülarize 3D hücre sistemi çalışmaları izin verir. Diğer bir avantajı hayvan modellerinde daha insan fizyolojisi yakın olan modelin, insanlaştınlmış doğasıdır. Bu çalışmada, adeno-ilişkili virüs (AAV vektörü) elde edilen bir viral vektör ile karaciğer modelinin transdüksiyonunu göstermektedir. medya ile 3D karaciğer modeli malzemeleri perfüzyon devre vektör uygulamak için kolay bir yol sağlar. Sistem karaciğer başlıca metabolik parametrelerin izlenmesini sağlar. Nihai analiz için, doku örnekleri recellulariza kapsamını belirlemek için alınabilirhistolojik teknikler ile yon. teslim transgenin virüs vektörü ve ekspresyon dağılımı kantitatif PCR (qPCR), Western blot ve immünohistokimya ile analiz edilebilir. Temel araştırma ve gen terapötik uygulamalarının geliştirilmesi vektör modelinin çok sayıda uygulama yeni antiviral terapötik maddelerin geliştirilmesi, Cancer Research, ve viral vektörlerin çalışma ve potansiyel yan etkileri de dahil olmak üzere, tasavvur edilebilir.

recellularization derecesinin değerlendirilmesi için, kriyo-bölümleri, her recellularized karaciğer modelinin her lobun hazırlandı. Kesitler daha sonra hematoksilin ve eozin boyama ile analiz edilmiştir. Şekil 3&#39;te görülebileceği gibi, TLM1, TLM2 olarak belirtilen üç karaciğer modellerin her lob, (recellularized ama transduse değil kontrol karaciğer modeli) ve Ctrl (karaciğer modeller 1 +2 transduse) HepG2 hücreleri ile yeniden doldurulur edildi. Bu hepatosellüler karsinom hücre hattı 15 yaşındaki Arjantinli çocuk tümör dokusundan kurulmuştur. Karaciğer modellerinin bazı alanlarda daha yoğun diğerlerinden daha recellularized bulundu. Bu varyasyonların nedenleri belirlenmelidir. <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/54633/54633fig3.jpg" /> Şekil 3. Hematoksilen ve her üç lob eozin boyama, karaciğer modellerini analiz TLM1 + 2. Transduse karaciğerModeller 1 ve 2; recellularized ancak kalıt değildi Ctrl .: kontrol karaciğer modeli. Ölçek çubuğu: 200 mikron. (Ref izni ile yeniden basılmış. 8.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54633/54633fig3large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Bir sonraki adımda, karaciğer modelleri transdüksiyon değerlendirildi. Bu amaçla, DNA, karaciğer modellerinin her birinden 28 zımba biyopsilerinden elde edilmiştir vektör titre qPCR ile nicelendirildi. Ortalama olarak, hücre (VG / hücre) her 55 ile 90 içsel vektör genomlarının iki kalıt karaciğer model ölçüldü. 2B hücre kültüründe Deneyler 30 VG / hücre güçlü transgen ifade ve RNAi aracılı susturulması için yeterli olduğunu göstermiştir. EmGFP üretimi RT-PCR ve Batı lekeleme ile analiz edilmiştir. Aslında, raportör ekspresyonu sırasıyla mRNA ve protein düzeyleri üzerinde biyopsi% 80-90 saptandı.8 transdüksiyon verimliliği kapsamlı bir resmini elde etmek için, cryo-kesitler immunohistologically analiz edildi. Şekil 4&#39;te görülebileceği gibi, DAPI lekelemesi ile göz önüne başarılı olarak, recellularized edildi karaciğer modeli alanları da EmGFP ekspresyonunun immünohistokimyasal analizi güçlü flüoresan sinyal verdi. Beklendiği gibi değil, AAV vektörleri ile muamele edilmiş kontrol karaciğer modeli, bir EmGFP ifade göstermemiştir. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54633/54633fig4.jpg" /> EmGFP ifade Şekil 4. immünohistokimyasal analizi, karaciğer modelleri DAPI lekelemesi (mavi) ile görselleştirilmiştir yeniden doldurulur hücreler.; EmGFP sentezleme boyanma (kırmızı) ile görünür hale getirildi. TLM1 + 2: transduced karaciğer modelleri 1 ve 2; recellularized ancak kalıt değildi Ctrl .: kontrol karaciğer modeli. Ölçek çubuğu: 200 mikron. (Izni ile yeniden basılmışRef. 8.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54633/54633fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Son bir testte, hCycB AAV aracılı demonte QRT-PCR ile analiz edilmiştir. HCycB demonte, 70 ve% 90 arasında bulunmuştur iki transduced karaciğer modellerinin tüm lobu (Şekil 5) üzerinden ortalama edildi. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/54633/54633fig5.jpg" /> HCycB Şekil AAV-transdüksiyonlu 3D karaciğer modellerinde hCycB 5. RNAi aracılı demonte. Susturma QRT-PCR ile tespit edilmiştir. Ortalama değerleri ve standart sapmalar (SD) transdüksiyona kontrol ortalama değeri ile (sırasıyla TLM1 ve 2), her bir transduse 3B karaciğer modeli tüm örnekler için hesaplanan, normalize edildi (CTRL).. (R izni ile yeniden basılmışef. 8.) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54633/54633fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Decellularized bir sıçan karaciğerinin hücreselleştirilmiş hücre dışı matrisi, bir virüsün veya viral vektörün dağılımını ve transgen ekspresyonunu incelemek için insanlaştırılmış, üç boyutlu bir ex vivo model olarak kullanılabilir.

Insan hepatoselüler karsinoma hücre hattı HepG2 ile üç boyutlu Karaciğer modeli yeniden doldurulur Viral Vektörler Study

This protocol describes the generation of a three-dimensional (3D) ex vivo liver model and its application to the study and development of viral vector ...

Bu prosedürün genel amacı, virüsleri ve viral vektörleri incelemek için üç boyutlu bir karaciğer modeli geliştirmektir. Bu yöntem, fizyolojisi fare veya sıçan modellerindeki kemirgen hücrelerinden farklı olan insan hücrelerine sahip, vaskülerize edilmiş üç boyutlu bir sistemde biyolojik süreçlerin incelenmesine olanak tanır. Ayrıca, canlı hayvanlarla yapılan deneylerden kaçındığı için hayvan refahını artırmaya yönelik bir adımdır ve uzun vadede hayvan bileşenlerinin tamamen yerini alması amaçlanmaktadır.Bu yöntemi gen transferi için viral vektörleri incelemek amacıyla geliştirmiş olsak da, yöntem bulaşıcı vital virüslerin çalışılmasına ve kanser araştırmaları gibi diğer araştırma alanlarına da uygulanabilir. Prosedürü, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Viola Rohrs uygulamalı olarak gösterecektir. Hayvan refahı adına, mevcut çalışmada yalnızca diğer hayvan deneyleri için sakrifiye edilen fazla hayvanlar kullanılmıştır, yaniKaraciğer iskeletlerini elde etmek için ek hayvanlara ihtiyaç duyulmamıştır. Başlamak için öncelikle Hep G2 hepatik hücre hattını genişletin. 15 milyon hücreyi, %10 fetal dana serumu ile iki millimol glutamin, penisilin ve streptomisin içeren 30 mililitre besiyerinin bulunduğu T175 şişelerine ekin. Dört günlük kültürleme sürecinin ardından, hücreleri gevşetmek için kültürleme koşullarında beş dakika boyunca tripsin çözeltisine maruz bırakın ve ardından hücreleri hasat edin.Ardından hücreleri 300 Gs'de üç dakika boyunca santrifüjleyin. Sonra hücreleri dört mililitre PBS içinde tekrar süspanse edin ve hücre sayımı yapın. Her şişeden yaklaşık 45 milyon hücre elde edilmelidir.Sıçan karaciğer ECM'sini yeniden hücrelendirmek için 600 milyon hücre gereklidir. ECM'yi yeniden hücrelendirmek için öncelikle bir karaciğer perfüzyon odası, bir perfüzyon sistemi, bir ortam rezervuarı ve bir hava kabarcığı tuzağı içeren biyoreaktör sistemini kurun. Yeniden hücrelendirme prosedürünün iki kritik adımı vardır.Birincisi, perfüzyon sisteminde hava kabarcığı kalmamasını sağlamaktır. İkincisi ise tüm sistemin steril tutulmasıdır. Öncelikle, biyoreaktör sisteminin bu bileşenlerini 121 °C'de 15 dakika boyunca sterilize edin.İkinci olarak, tüpleri ve sterilize edilmiş perfüzyon odasını besiyeri ile doldurun. Ardından, deselülarize edilmiş sıçan karaciğer iskeletini karaciğer perfüzyon odasına yerleştirin. Bir sonraki adım, kanüle edilmiş portal veni perfüzyon sistemine bağlamak için tüp klipslerini kullanmaktır.Şimdi biyoreaktör sistemini inkübatöre yerleştirin ve bir peristaltik pompaya bağlayın. Ardından, iskeleyi beş gün boyunca 150 milliliters takviye edilmiş besiyeri ile dengeleyin. Akış hızını 1.25 milliliters/dakika olarak ayarlayın.Beş gün sonra, biyoreaktör sistemini pompadan ayırın ve steril bir kabine transfer edin. Karaciğer iskelesini besiyeri devresinden ayırın. Ardından, 300 milyon Hep G2 hücresi içeren beş mililitre besiyeri ile bir şırıngayı doldurun ve hava kabarcığı oluşumuna dikkat ederek hücreleri portal ven aracılığıyla enjekte edin.Ardından, pompayı çalıştırmadan hücrelerin bir saat boyunca ECM'yi yeniden doldurmasına izin verin. Bir saat sonra, pompayı dakikada 1.25 mililitre hızında başlatın. 10 dakika sonra, basıncı dakikada 2.5 mililitreye yükseltin.20 dakika sonra, pompayı dakikada 3,75 mililitre çalışma hızına ayarlayın. Tam pompa hızında 30 dakika geçtikten sonra pompayı kapatın, 300 milyon hücre daha ekleyin ve hücrelerin ECM'ye yerleşmesi için bir saat bekleyin. Bir saat sonra, sirkülasyonu daha önce olduğu gibi pompa hızında kademeli ayarlamalar yaparak yavaşça artırın.Şimdi kültürün iki hafta boyunca karaciğeri yeniden hücrelendirmesine izin verin. Gün aşırı, ortamın 50 mililitresini değiştirin ve kullanılan ortamdan alınan bir örnek üzerinden fizyolojik parametreleri ölçün. AAV vektörlerinin üretimi, metin protokolünde özetlenen birçok adımı içeren karmaşık bir prosedürdür.Videonun bu bölümünde, bazı kritik adımlar gösterilmektedir. İlk olarak, AAV vektörlerini üretin, saflaştırın ve miktarını belirleyin. Kısaca, AAV vektörlerini roller şişelerde üretin ve iodixanol gradyan santrifüjasyonu ile saflaştırın.Kalıntı iodixanol, PD10 jel filtrasyon kolonları üzerinden filtrasyon yapılarak uzaklaştırılır. Ardından, genomik AAV DNA'sı standart olarak kullanılarak QPCR ile AAV vektör konsantrasyonu belirlenir. Model başına toplam 27 trilyon AAV vektör gereklidir.Şimdi karaciğer modelini transduce edin. İlk olarak, 5 mL PBS içinde 27 trilyon vektörü bir şırıngaya çekin. Mililitre başına 5 µg fenol kırmızısı eklenebilir.Ardından karaciğeri medya devresinden ayırın ve vektörleri sisteme enjekte edin. Enjeksiyon sonrası, sistemi pompa çalıştırmadan bir saat boyunca inkübe edin. Daha sonra, akışı daha önce açıklandığı şekilde kademeli olarak artırın.Daha sonra, transduce edilmiş karaciğer altı gün boyunca inkübe edilirken, her iki günde bir ortamın 50 mililitresini değiştirin. Bir skalpel kullanarak, her bir karaciğer lobundan yaklaşık yarım santimetre kalınlığında ve 1,5 ila iki santimetre uzunluğunda örnekler kesin. Kesitleri %4 paraformaldehit ve %4 sükroz içeren çözeltide dört derece Celsius'ta 90 dakika boyunca inkübe edin.Ardından örneği, her yıkama bir dakika sürecek şekilde üç kez PBS ile yıkayın. Yıkama işlemlerinin ardından örnekleri, dört °C'de %8 sükroz içinde gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, örnekleri bir miktar tespit ortamı içeren kriyokalıplara yerleştirin.Hava kabarcığı oluşmamasına dikkat edin. Yükleme tamamlandıktan sonra, numuneleri tespit medyumu ile tamamen kaplayın ve -80 °C'ye yerleştirin. Donma işlemi gerçekleştikten sonra, bir kriyotom kullanarak numunelerden 10 mikronluk kriyokesitler hazırlayın.Reselülarizasyonu doğrulamak için örnekleri gerektiği gibi boyayın. Gen ekspresyon analizi için dört milimetrelik bir biyopsi punch'ı kullanarak örnekler alın. Reselülarizasyonu değerlendirmek için kriyokesitler hematoksilin ve eozin ile boyanmıştır.İki transdükte karaciğer ve reselülarize edilmiş ancak transdükte edilmemiş bir kontrol karaciğerden alınan lobların tamamı Hep G2 hücreleri ile yeniden popüle edildi. Her bir karaciğer modelinden alınan 28 punch biyopsiden RNA ekspresyonu ve vektör titresile ölçüldü. İki transdükte karaciğer modelinde, hücre başına 55 ve 90 vektör genomu ölçüldü ve bu miktar gen susturmasını indüklemek için yeterli vektör miktarıdır.Beklendiği üzere, kontrolde herhangi bir genom ölçülmemiştir. EmGFP ekspresyonu RT-PCR ve western blotting ile analiz edilmiştir. Biyopsilerin çoğunda EmGFP mRNA ekspresyonu ve EmGFP protein ekspresyonu görülmüştür.Kriyokesitlerin immün boyaması, modelin başarıyla yeniden hücrelendiği her yerde EmGFP ekspresyonunun da görülebildiğini göstermiştir. Bu durum, iyi bir AAV gen ekspresyonuna işaret etmektedir. Ardından, insan siklofilin B'nin AAV aracılı nakavt etkisi kantitatif RT-PCR ile analiz edilmiştir.Transdüksiyonu gerçekleştirilen iki karaciğerin tüm loblarında, insan siklofilin B'nin ortalama nakavt oranı %70 ile %90 arasındaydı. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, araştırmacıların vaskülize, üç boyutlu organ sistemindeki virüslerin ve viral vektörlerin dağılımını incelemelerine yol açmıştır. Bu tür çalışmalar, mevcut gen transferi tekniklerinin iyileştirilmesine katkıda bulunacak ve yeni antiviral stratejilerin geliştirilmesine yardımcı olacaktır.

study-viral-vectors-three-dimensional-liver-model-repopulated-with

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Bu makalede, insan karaciğer kanser hücrelerini hedef için en verimli bir vektör olarak adeno-ilişkili virüs serotip 3 (AAV3) tanımlanması için.

Rekombinant Adeno Associated Virus serotip 3 Vektörler Karaciğer Kanseri Hücreleri Yüksek Verimlilik İletimi

Hepatit C Virüsü (HCV), siroz ve kanser dahil olmak üzere karaciğer bozukluklarına neden olan önemli bir insan patojenidir. HCV enfeksiyöz hücre kültürü sistemi, HCV replikasyonunun moleküler mekanizmasını anlamak ve yeni terapötik yaklaşımlar geliştirmek için gereklidir. Burada, HCV replikasyon döngüsünün çeşitli aşamalarını araştırmak için bir protokol açıklıyoruz.

Hepatit C Virüsü Çoğaltma Analizi için Protokol

Burada HBV yaşam döngüsünün erken aşamalarında izlemek için yeni geliştirilmiş hepatit B virüsü (HBV) muhabiri sistemini açıklar. Vitro sistemde BASİTLEŞTİRİLMİŞ yüksek verimli bir strateji kullanılarak anti-HBV maddelerinin taranması yardımcı olacaktır.

Bir Hepatit B Virüsü Muhabir Sisteminin Geliştirilmesi Çoğaltma Döngüsü Erken Aşamaları Monitör

3-b "karaciğer-on-a-chip" enfeksiyon hepatit B virüs ile deneyler gerçekleştirmek için adım adım bir kılavuz sağlamak için bu protokolü hedefidir.

"Karaciğer-on-a-Chip" kültürleri birincil tetkikine ve Kupffer hücreleri için Hepatit B virüs enfeksiyonu

Bu iletişim kuralı modelleri otolog hücre transplantasyonu ile metabolik hastalıkların tedavisi için domuz hepatosit yalıtım ve ex vivo gen teslim açıklamak için tasarlanmıştır. Her ne kadar bu modelle başarılı terapi lehine benzersiz avantajlar sahiptir, uygulama ek hastalıklar ve göstergeler yönelik olarak ilgili bir temelidir.

Lentiviral vektör-aracılı gen terapisi tetkikine Ex Vivo domuz otolog nakli için

Burada açıklanan hepatit E virüsü (HEV) yüksek viral titresi üretmek için nasıl etkili bir yöntemdir verimli hepatoma hücreleri enfekte etmektir. Sunulan yöntemle, hem zarfsız, hem de zarflı viral parçacıklar hasat edilebilir ve çeşitli hücre hatları aşılamak için kullanılabilir.

Yüksek Titer Hepatit E Virüs Stokları Üretmek için Bir Hücre Kültürü Modeli

Bu el yazması, insan NTCP, HNF4α, RXRα ve PPARα'yı ifade eden 293T-NE-3NR' ler ve geleneksel hepatik hücreler (HepG2-NE, insan NTCP'yi ifade eden) yeni mühendislik temalı 293T hücreleri (293T-NE-3NR) enfeksiyonu için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Hepatik Olmayan 293T-NE-3NR Hücrelerinde Hepatit B Virüs Enfeksiyonunun Modelilmesi

Bu protokol, eşlik eden fibrotik stromal bölmeli 3D biyomimetik bir model sunar. Hücresel etkileşimlerin, tümör büyümesinin ve metastazın aktif bir arabulucu olan stromal hücre dışı matrisin biyo-fiziksel özelliklerini taklit eden oranlarda fizyolojik olarak ilgili hidrojellerle hazırlanmıştır.

Ayarlanabilir Biyo-Fiziksel Özelliklere Sahip 3D Ortamda Tümör-Stroma Etkileşimlerini İncelemek İçin Karaciğer Kanseri için Biyomimetik Model

İlgili insan hastalığını sadakatle nükseden kapsamlı in vitro modeller eksiktir. Mevcut çalışma, insan hepatosellüler karsinomunda tümör-stromal etkileşimi incelemek için güvenilir bir in vitro araç olan üç boyutlu (3D) tümör sferoid oluşturma ve kültürü ssunuyor.

Hepatosellüler Karsinomdaki Tümör-Stromal Etkileşimi Araştırmak İçin Üç Boyutlu Sferoid Modeli

Konakçı sodyum taurokolat birlikte taşınan polipeptit ile bağlanma afinitesini (KD) ölçmek için izotermal titrasyon kalorimetrisini kullanarak, viral giriş öncesi ve sonrası yaşam döngüsü aşamalarını hedefleyen anti-hepatit B virüsü (HBV) bileşiklerini taramak için bir protokol sunuyoruz. Antiviral etkinlik, viral yaşam döngüsü belirteçlerinin (cccDNA oluşumu, transkripsiyon ve viral montaj) baskılanması yoluyla belirlendi.

Terapötik Hedef Olarak Polipeptitin Sodyum Taurokolat Kotransportasyonu Yoluyla Hepatit B Virüsü Girişini İnceleyen Yetkin Bir Hepatosit Modeli

Organoidler, organ geliştirme, ilaç keşfi ve hastalık araştırmaları için kişiselleştirilmiş doku modellemesinde devrim yaratıyor. Organoid mühendisliği, karmaşık sentetik dokular oluşturmaya doğru ilerler. Amaç, doku mühendisliğini ilerletmek için morfogenez, assembloid teknolojisi ve biyomatrisleri entegre etmektir. Bu protokol, karaciğer organogenezinin modellenmesine ve sentetik doku yapımı için kılavuzların oluşturulmasına yardımcı olur.

Karaciğer Organogenezini Modellemek, Assembloidler Oluşturmak ve İnsan Hücre Hatlarını Kullanarak Sentetik Dokular Tasarlamak için İn Vitro Yetiştirme Teknikleri

Öğrenin, HepG2 hücreleriyle yeniden doldurulmuş üç boyutlu karaciğer modeli oluşturmayı ve AAV viral vektörlerle gen transferini incelemeyi. Bu yöntem, insan fizyolojisine uygun viroloji araştırmaları için hayvan kullanımını azaltır.

Insan hepatoselüler karsinoma hücre hattı HepG2 ile üç boyutlu Karaciğer modeli yeniden doldurulur Viral Vektörler Study

Daha fazla video keşfet