Name: Yatay Gen Transferi Çalışmasında Metodolojisi Staphylococcus aureus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-10T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 39 s
Description: Öğrenin, Staphylococcus aureus'ta yatay gen transferini konjugasyon, transdüksiyon ve doğal transformasyon yöntemleriyle nasıl çalışılacağını. Antibiyotik direnci genlerinin yayılımını anlamak için bu protokoller kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma kısmen Takeda Bilim Vakfı, Pfizer Akademik Katkı ve JSPS Yabancı Araştırmacılar için Doktora Sonrası Bursu (FC) tarafından desteklenmiştir.

NOT: Bu çalışmada kullanılan suşlar ve malzemeler sırasıyla Tablo 1&#39;de belirtilen ve Malzeme Tablosu vardır. Iletim deneylerinde, N315 ve pozitif türevleri cfr COL CFR geninin donör (N315-45 ve Col-45) olarak kullanılmıştır. Bu suşlar, daha önceden standart konjügasyon protokolü (aşağıya bakınız), aşağıdaki, verici klinik CFR pozitif Staphylococcus epidermidis soyu (ST2) halinde kullanılarak konjugasyon ile elde edilmiştir. Bu suş pSCFS7 benzeri plazmid 7 cfr genini barındırmıştır. 1. Konjugasyon Filtre çiftleşme Yöntemiyle Not: CFR gen (N315-45) 7 (Cm R) taşıyan bir S. aureus N315 suşu verici olarak kullanılmıştır. COL 8 veya Mu50 9 suş (Tet R Cm S) alıcı olarak kullanılmıştır. Çift-dirençli koloniler 32 mg / kloramfenikol ve 8 mg L mevcudiyetinde büyüyebilen (Tet R Cm R) / tetrasiklin L, farazi Transkonjuganlardaki olarak kabul edildi ve koloni PCR ile CFR varlığını tespit etmek ve belirlemek için analiz edilmiştir alıcı duyarlılık profili. <ol><li> Bir kaç değişiklik ile önceden tanımlanmış bir protokole 10 aşağıdaki çekimleri gerçekleştirin: <ol><li> 37 ° C&#39;de çalkalanarak (ve sırasıyla, 32 mg / L kloramfenikol olmadan) triptik soya suyu (TSB) ortam içinde alıcı ve verici arasındaki bir gece boyunca kültür 5 mL hazırlayın. </li><li> Taze TSB ortamı kullanılarak 1 (OD = 1.0 600) gecede kültürlerin optik yoğunluk (OD 600) ayarlayın. Alıcı kültürü 0.5 mL (COL ya Mu50) donör kültürü (N315-45) 0.5 mL karıştırın. karışıma PBS 1 ml ilave edilir. </li><li> 0.45 um&#39;lik bir membran filtre USI üzerine bakteri karışımı aktarınBir vakum pompası sistemi ng. </li><li> Bir koyun kanlı agar plaka üzerinde filtre membranlar koyun. 1 gün süreyle 37 ° C&#39;de inkübe edin. NOT: Bu adımda, zenginleştirilmiş orta çift dirençli hücrelerin büyümesine izin vermek için gereklidir. </li><li> plaka filtre membran dışarı atın ve fosfat tamponlu salin (PBS) 10 ml askıya. Vortex iyi membran üzerine bağlı tüm bakterileri toplamak için. </li><li> Taze TSB kullanılarak bir bakteri süspansiyonu içerisinde seri 10-misli seyreltme sağlayın. TSB agar üzerinde 0-10 -4 seyreltilmiş numune levhalar 100 ul (TSA) levhalarında 32 mg / ml Kloramfenikol ve 8 mg / transkonjugamn seçimi L tetrasiklin ile takviye edilmiştir. Seyreltilmiş süspansiyonu (10 -5 -10 -6) TSA plakaları üzerine tek başına 8 mg / L tetrasiklin plaka 100 ul alıcı sayısını saymak için. 18-24 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Cf varlığı için çift dayanıklı koloniler (varsayılan transkonjugamn) analizKoloni PCR 7 ve duyarlılık profili (antibiyograma) ile r geni. </li><li> Standart mikrodilüsyon yöntemi veya disk difüzyon yöntemi 11&#39;e göre, uygun antibiyotik minimum inhibitör konsantrasyonlar (MIC) ölçerek antibiyogram belirler. Transkonjugamn duyarlılık profili kloramfenikol (ve cfr geni tarafından etkilenen diğer bileşiklerin) hariç, alıcıya aynı olmalıdır. Bu belirleme donör suşu tarafından geliştirilen tetrasiklin direnci ekarte etmek için esastır. </li></ol></li></ol> 2. Faj İletimi Not: Sıphovındae ailesi (laboratuvar stok) ait bakteriyofaj MR83a transdüksiyon deneyleri kullanılmıştır. N315-45 faj enfeksiyonu için CFR verici olarak kullanılmıştır. N315, COL ya da Mu50 suşları alıcı olarak kullanılmıştır. CFR edinimi ab belirlendiAlıcı soyunun ility 32 mg / L kloramfenikol varlığında gelişme. Bu koşullarında yetiştirilen Kolonileri (koloni PCR ile) CFR varlığını belirlemek ve potansiyel kontaminasyonu ekarte etmek duyarlılık profilini belirlemek için analiz edilmiştir. <ol><li> Donör üzerinde faj amplifikasyon <ol><li> (180 rpm) çalkalanarak 37 ° C&#39;de 3.6 mM Ca2 + (NBCaCl 2) ile takviye edilmiş bir besin sıvısının 5 ml N315-45 bir gecelik kültürü hazırlayın. Not: Kalsiyum faj enfeksiyonu için gereklidir. Malzemeler Tablo Bkz. diğer şirketlerden Besin suyu, kalsiyum yağış gibi konuları, olabilir. </li><li> 50 ml cam şişeler veya cam şişeler içinde NBCaCl 2 10 mL&#39;lik bir son hacim içinde 1.000: gece boyunca kültür 1 seyreltilmesi ile alt kültür hazırlayın. (180 rpm) çalkalama ile 37 ° C&#39;de 1 saat boyunca bakteri büyütün. </li><li> NBCaCl 2 medi içinde seyreltilmiş faj MR83a bir dizi hazırlanmasıum (10 -2 10 -3 10 -4 10 -5 ve 10 -6). Bakteriyel kültür seyreltilmiş faj 20 ul ekle. Ayrıca, bakteriyel hücre büyümesi için pozitif kontrol olarak hizmet eder ve bir sonraki gün faj titresini belirlemek için kullanılabilen faj enfeksiyonu olmayan bir kontrol kültürü hazırlamak. </li><li> gece boyunca hafifçe çalkalanarak (100 rpm) ile 37 ° C &#39;de kültür büyütün. NOT: bulaşmasını faj fazla değilken hücrelerin bir ölçüde artacaktır; Daha sonra, onlar yüzünden litik döngüsü boyunca faj amplifikasyon lizis fazına girecektir. faj ile kültürler şeffaflık farklı oranlarını gösterir iken faj olmadan kültür, tam büyüme gösterecek. </li><li> katma faj en yüksek seyreltme ile bir ya da iki temizlenir kültür şişeleri seçin. </li><li> 15 mi santrifüj tüplerine kültürleri aktarın. kloroform 250 ul ekleyin ve tüpler tersini iyice karıştırın. </li><li> 5,000 tüpler santrifüj <em&gt; 4 ° C&#39;de 20 dakika boyunca x g. </li><li> yeni tüplere transfer süpernatantlar ve kullanılana kadar 4 ° C&#39;de saklayın. faj en az birkaç ay boyunca stabil, ancak çok uzun süre faj hazırlık depolama titre ve transdüksiyon etkinliğini azaltır: NOT. </li></ol></li><li> Faj titresi Ölçme (faj plak deneyi) <ol><li> besin sıvısı agar (% 1.5 ağar) orta hazırlayın; 55 ° C &#39;de bir su banyosunda sıcak tutmak. 3.6 mM&#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar orta otoklavlanmış, 0.5 M CaCI2 çözeltisi ekleyin. 90 mm Petri kapları (NBCaCl 2 tabak) içine dökün. </li><li> Çalkalanarak 37 ° C&#39;de NBCaCl 2 5 ml N315 bir gecelik kültürü hazırlamak; Bu, yukarıda tarif edilen kontrol kültürü (aşama 2.1.3) ile ikame edilebilir. </li><li> NBCaCl 2 200 ul içinde bir gece boyunca kültürün 10 ul ekle ve eşit NBCaCl 2 plaka üzerine yayıldı. zaman yüzey yayılmasını durdurmakPlaka, sıvı ile kaplanır. plaka kurumasını bekleyin. </li><li> Seri 1:10 seyreltme yapın (10 -5 -10 -10) NBCaCl 2 ortamı kullanılarak önceden hazırlanmış faj (aşama 2.1.8) arasında. </li><li> Noktası bakteri ile kaplı plaka üzerine, her faj seyreltme 3 ul. </li><li> 30 ° C&#39;de gece boyunca inkübasyona bırakılır. </li><li> Plak sayıları sayın ve aşağıdaki denklem kullanılarak faj titresi hesaplanır: plak oluşturma birimi (pfu) / ml = plakların sayısı x seyreltme faktörü / lekeli hacmi (3 x 10 mi -3) </li></ol></li><li> faj iletimi NOT: Bir önceki aşamada (2.1.8) &#39;da hazırlanmış faj havuzu, S. aureus suşları içine CFR genin transdüksiyonunu test etmek için kullanılır. Bu deneyde, N315, sütun veya Mu50 alıcı olarak kullanılan türler. <ol><li> (180 rpm) çalkalanarak 37 ° C&#39;de NBCaCl 2 5 ml N315, COL ya da Mu50 gece boyunca kültür hazırlayın. </li><li> t seyreltinO 10 9 pfu / mL ° &#39;ye kadar NBCaCl 2 faj. </li><li> 50 ml&#39;lik bir cam şişe içinde, bir gece boyunca kültür, 500 ul taze NBCaCl 2 500 ul ve faj 1 ml (~ 10 9 pfu / ml) karışımı; enfeksiyonun beklenen (MOI) yumuşak bir 30 dakika (100 rpm) çalkalanarak 37 ° C&#39;de 1 inkübe kanşım aşmamalıdır. Not: hemen önce faj ilavesiyle (endojen restriksiyon enzimleri etkisiz hale getirmek 2 dakika boyunca 52 ° C), alıcı hücrelerin ısı tedavisi verimliliği 12 artırabilir. </li><li> % 20 Na 3 -Citrate 50 ul ekle. 37 ° C&#39;de 30 dakika boyunca hafif sallama devam edin. Not: Na 3 -Citrate kalsiyum ılımlı kenetleyici olarak işlev görür. </li><li> Erimiş beyin kalp infüzyon (BHI) agarı (% 1.5 ağar) orta hazırlayın ve 55 ° C&#39;de bir su banyosu içinde muhafaza edin. </li><li> , 100 ml&#39;lik bir şişeye bakteri faj karışımı aktarın 32 mg / ml ile takviye edilmiş chloramp sıcak BHI agar 50 ml ilavehenicol ve iyice karıştırın. 90 mm Petri kapları içine karışımı dökün. NOT: Bu yöntem, büyüyen koloniler (putatif transdüklenmişler) az sayıda belirlenmesini sağlar. </li><li> 24-48 saat boyunca 37 ° C&#39;de inkübe plakası. </li><li> Bundan başka, 32 mg / L kloramfenikol ile takviye edilmiş yeni bir BHI agar plakları üzerine koloniler aktarılarak direnç koloniler (transdüklenmişler) test edin. Kolonisi PCR 7 tarafından cfr genin varlığını doğrulamaktadır. </li></ol></li></ol> 3. Doğal Dönüşüm Not: S. aureus doğal transformasyon deneyi daha önceki çalışmamızda 2 de tarif edilen yönteme göre gerçekleşir. N315 türevi N2-2.1 2, 7, alıcı olarak kullanılmıştır. Bu zorlanma ise, iç çekişi odağı çoğaltılamaz edildi yapısal ekspres sigh 2 şekilde. det içiniç-ifade yetkinlik varyantlarını izole etmek için nasıl ailed prosedürler, bir önceki açıklamasına 2 bakınız. Transfer edilecek direnç marker kloramfenikol değilse, pRIT-nefes (Cm R), daha önce tarif edildiği gibi, 2, iç geçirerek ifade etmek için kullanılabilir. Saflaştırılmış plasmid ya da CFR gelen bütün DNA ekstraktı, S. aureus COL-45 7 transformasyon için donör DNA olarak kullanılmıştır -acquired. <ol><li> Donör DNA&#39;nın hazırlanması <ol><li> TSB 50 mL içeren 300 ml&#39;lik bir şişe içinde 37 ° C&#39;de çalkalama ile COL-45, gece boyunca yetiştirmek 32 mg / L kloramfenikol ile takviye edilmiştir. Kültür, E. coli HST04 taşıyan pHY300 Plazmid (Tet R) kontrol deneyi için plazmid elde etmek için. NOT: HST04 (baraj - / dcm -) DNA genleri 13 metilazıyla yoksundur. DNA, metilazlar olan diğer geleneksel suşlar da kullanmak olabilirDNA metilasyonu devlet dönüşüm verimini etkilemez çünkü d DNA donör hazırlamak. Seçenek olarak ise, S. aureus, COL suşundan saflaştırılmıştır pT181 Plazmid aynı zamanda transformasyon deneyi 2 için bir pozitif kontrol olarak kullanılabilir. </li><li> Santrifüj (4 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 8,000 x g) hücreleri toplamak. </li><li> Bütün DNA arındırmak için bir plazmid DNA ekstraksiyon kiti ya da geleneksel DNA saflaştırma yöntemiyle plasmidler ekstrakte edin. </li><li> spektrometresi ile saflaştırılmış DNA sayısal olarak ve kullanılana kadar 4 ° C&#39;de tutun. NOT: dönüşüm deneyi, eski genellikle az bir hafta taze bir DNA hazırlık kullanın. Alt DNA preparatları dönüşümün etkinliğini azaltır. </li></ol></li><li> Dönüşüm deneyi <ol><li> Kültür çalkalanarak 37 ° C&#39;de gece boyunca TSB 5 ml alıcı hücre (N2-2.1). </li><li> 1.5 ml tüp içine gece boyunca kültür 0.5 mi aktarın. precipisantrifüj (4 ° C &#39;de 1 dakika süre ile 10,000 x g) hücreleri Tate. </li><li> 50 ml&#39;lik bir tüp içinde CS2 ortamı 10 mL süspanse. NOT: CS2 orta (Malzeme Tablo orta kompozisyon bakınız) S. aureus 2 doğal dönüşümü için yeterlilik uyaran bir tam sentetik ortamıdır. Örneğin TSB ya BHI gibi diğer standart laboratuvar ortamı, dönüşüm 2, 13 için uygun değildir. </li><li> Geç üstel faz (yaklaşık 8 saat) kadar (180 rpm) çalkalanarak 37 ° C&#39;de bakterileri büyür. </li><li> Santrifüj (4 ° C&#39;de 5 dakika boyunca 5000 xg) hücreleri hasat. </li><li> Taze CS2 ortamı 10 ml tekrar süspansiyon hücreleri. </li><li> Hücre süspansiyonuna saflaştırılmış plazmid ya da genom DNA (aşama 3.1.4) 10 ug ekleyin. 37 ° C &#39;de çalkalanır ve 2.5 saat için 180 rpm. Not: DNA ile kısa bir kuluçkalama süresi (&lt;2.5 saat) daha düşük transf nedenormation frekansları. </li><li> Santrifüj (5,000 x g 5 dakika, 4 ° C) hücreleri toplamak. </li><li> BHI ortamı 10 mL tekrar süspansiyon hücreleri. erimiş BHI agar ve 90 ml 32 mg / L kloramfenikol (kontrol deneyinde veya 5 mg / L tetrasiklin) ile (55 ° C) ek hücre süspansiyonu karıştırın. 90 mm Petri kapları içine karışımı dökün. Hızla serin ve agar katılaşmaya edelim. </li><li> 2 gün boyunca 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> onların direnç özelliklerini teyit etmek için uygun antibiyotik içeren yeni BHI agar plakalarına (kürdan kullanarak) koloniler aktararak üretilen koloniler (dönüştürücüler) çoğaltmak. Kolonisi PCR 7 tarafından satın direnç geni (cfr veya tetM) onaylayın. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Lindsay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+variation+and+evolution+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22IJMM%22%5BJournal%5D)">Genomic variation and evolution of Staphylococcus aureus.</a> IJMM. 300, 98-103 (2010).</li>
<li>Morikawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+a+cryptic+secondary+sigma+factor+gene+unveils+natural+competence+for+DNA+transformation+in+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Expression of a cryptic secondary sigma factor gene unveils natural competence for DNA transformation in Staphylococcus aureus.</a> PLoS Pathog. 8, e1003003(2012).</li>
<li>Caryl, J. A., O'Neill, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+nucleotide+sequence+of+pGO1%2C+the+prototype+conjugative+plasmid+from+the+Staphylococci%5BTitle%5D)+AND+%22Plasmid%22%5BJournal%5D)">Complete nucleotide sequence of pGO1, the prototype conjugative plasmid from the Staphylococci.</a> Plasmid. 62, 35-38 (2009).</li>
<li>Novick, R. P., Christie, G. E., Penades, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phage-related+chromosomal+islands+of+Gram-positive+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The phage-related chromosomal islands of Gram-positive bacteria.</a> Nat. Rev. Microbiol. 8, 541-551 (2010).</li>
<li>Dubey, G. P., Ben-Yehuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercellular+nanotubes+mediate+bacterial+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Intercellular nanotubes mediate bacterial communication.</a> Cell. 144, 590-600 (2011).</li>
<li>Dubey, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architecture+and+Characteristics+of+Bacterial+Nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+cell%22%5BJournal%5D)">Architecture and Characteristics of Bacterial Nanotubes.</a> Dev cell. 36, 453-461 (2016).</li>
<li>Cafini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Horizontal+gene+transmission+of+the+cfr+gene+to+MRSA+and+Enterococcus%3A+role+of+Staphylococcus+epidermidis+as+a+reservoir+and+alternative+pathway+for+the+spread+of+linezolid+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Horizontal gene transmission of the cfr gene to MRSA and Enterococcus: role of Staphylococcus epidermidis as a reservoir and alternative pathway for the spread of linezolid resistance.</a> J. Antimicrob. Chemother. 71, 587-592 (2016).</li>
<li>Dyke, K. G., Jevons, M. P., Parker, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penicillinase+production+and+intrinsic+resistance+to+penicillins+in+Staphylococcus+aures%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Penicillinase production and intrinsic resistance to penicillins in Staphylococcus aures.</a> Lancet. 1, 835-838 (1966).</li>
<li>Kuroda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+genome+sequencing+of+meticillin-resistant+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Whole genome sequencing of meticillin-resistant Staphylococcus aureus.</a> Lancet. 357, 1225-1240 (2001).</li>
<li>Marraffini, L. A., Sontheimer, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+interference+limits+horizontal+gene+transfer+in+staphylococci+by+targeting+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">CRISPR interference limits horizontal gene transfer in staphylococci by targeting DNA.</a> Science. 322, 1843-1845 (2008).</li>
<li>Clinical Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Methods+for+Dilution+Antimicrobial+Susceptibility+Tests+for+Bacteria+that+Growth+Aerobically+-+Seventh+Edition%3A+Approved+Standard+M7-A7%22">Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria that Growth Aerobically - Seventh Edition: Approved Standard M7-A7</a>. , CLSI. Wayne, PA, USA. (2006).</li>
<li>Edwards, R. A., Helm, R. A., Maloy, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+DNA+transfer+efficiency+by+temporary+inactivation+of+host+restriction%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Increasing DNA transfer efficiency by temporary inactivation of host restriction.</a> BioTechniques. 26, 892-894 (1999).</li>
<li>Thi, L. T., Romero, V. M., Morikawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+wall-affecting+antibiotics+modulate+natural+transformation+in+SigH-expressing+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antibiot%22%5BJournal%5D)">Cell wall-affecting antibiotics modulate natural transformation in SigH-expressing Staphylococcus aureus.</a> J. Antibiot. , (2015).</li>
<li>Long, K. S., Poehlsgaard, J., Kehrenberg, C., Schwarz, S., Vester, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Cfr+rRNA+methyltransferase+confers+resistance+to+Phenicols%2C+Lincosamides%2C+Oxazolidinones%2C+Pleuromutilins%2C+and+Streptogramin+A+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">The Cfr rRNA methyltransferase confers resistance to Phenicols, Lincosamides, Oxazolidinones, Pleuromutilins, and Streptogramin A antibiotics.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 50, 2500-2505 (2006).</li>
<li>Ando, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restriction-modification+system+differences+in+Helicobacter+pylori+are+a+barrier+to+interstrain+plasmid+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+microbiol%22%5BJournal%5D)">Restriction-modification system differences in Helicobacter pylori are a barrier to interstrain plasmid transfer.</a> Mol microbiol. 37, 1052-1065 (2000).</li>
<li>Evans, B. A., Rozen, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significant+variation+in+transformation+frequency+in+Streptococcus+pneumoniae%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">Significant variation in transformation frequency in Streptococcus pneumoniae.</a> ISME J. 7, 791-799 (2013).</li>
<li>Wilson, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+of+the+natural+transformation+frequency+of+Campylobacter+jejuni+in+liquid+shake+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Variation of the natural transformation frequency of Campylobacter jejuni in liquid shake culture.</a> Microbiology. 149, 3603-3615 (2003).</li>
<li>McCarthy, A. J., Witney, A. A., Lindsay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+temperate+bacteriophage%3A+carriage+and+horizontal+gene+transfer+is+lineage+associated%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus temperate bacteriophage: carriage and horizontal gene transfer is lineage associated.</a> Front Cell Infect Microbiol. 2, 6(2012).</li>
<li>Lindsay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+genomics+and+the+impact+of+horizontal+gene+transfer%5BTitle%5D)+AND+%22IJMM%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus genomics and the impact of horizontal gene transfer.</a> IJMM. 304, 103-109 (2014).</li>
<li>Uchiyama, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intragenus+generalized+transduction+in+Staphylococcus+spp.+by+a+novel+giant+phage%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">Intragenus generalized transduction in Staphylococcus spp. by a novel giant phage.</a> ISME J. 8, 1949-1952 (2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

<html> Bu eser S. aureus genetik belirleyicilerin HGT incelemek için üç büyük yöntem açıklanır. Iletimi ve konjügasyon yıllardır incelenmiştir, ancak doğal dönüşümün mevcudiyeti son 2 tanındı. Böylece, S. aureus HGT üç ana modları hepsi ile donatılmıştır ve hepsi test genetik belirleyicilerinin olası yayma yolları açıklığa kavuşturmak için gereklidir. Bu çalışmanın amacı, tam protokolleri derlemek ve önceden yayınlanmış çalışmaları 7 kullanılan metodolojil...

Staphylococcus aureus, doğal insan ve hayvanların deri ve burun boşluğu yaşar bir ortakçı Gram pozitif bir bakteridir. Bu bakteri türleri hastane ve sağlık ortamlarında hastane enfeksiyonlarının önde gelen nedenidir. Ayrıca, farklı antimikrobiyal bileşiklere direnç geliştirme kabiliyeti küresel bir endişe içine bu bakterinin neden olduğu enfeksiyonların yönetimini yapmıştır. direnç fenotipleri yayılmasında karışan iki ana yollar bilinmektedir: dayanıklı genotiplerin klonal yayılmasını ve bakteriyel havuz arasındaki genetik belirleyicileri yayılmasını. S. aureus, farklı antibiyotik direnç genleri (ve hastalık oluşumunu belirleyen etkenin) durumunda, hareketli genetik elemanlara (MGES) ile ilişkili bulunmuştur 1. S. aureus genomunda bu unsurların varlığı gen kazanılması ve transfer olduğunu gösterirBakteriyel nüfus içinde etik malzeme S. aureus adaptasyonu ve evrim için önemli bir rol oynayabilir. dönüşüm, konjugasyon ve faj iletimi: Genetik materyal, Gram-pozitif bakterilerde HGT üç iyi bilinen mekanizmalarla değiştirilebilir. Dönüşüm serbest DNA alımını kapsar. yetkinlik sahne: yabancı DNA elde etmek için, bakteri hücrelerinin özel bir fizyolojik faz geliştirmek gerekir. Bu aşamada ulaşıldığında, kompetan hücreler, sitoplazmaya DNA taşıyan yeni genetik determinantlar elde edebilmektedir. S. aureus durumunda, doğal transformasyon varlığı en son 2 gösterilmiştir. Buna paralel olarak, bizim grubun kurucu ifade reachin yeteneğine sahip S. aureus işler nasıl gelişme yeterlilik aşamasında ve üzerinde iç çekişi faktörünün ifade alaka (şifreli ikincil transkripsiyon sigma faktörü) ışık tutmuşturDoğal dönüşümü 2 ile dayanıklı fenotipleri edinimi için izin verir g yetkinlik sahne. Konjugasyon başka bir (alıcı), bir canlı hücrenin (donör) DNA iletimi ile ilgili bir süreçtir. Her iki hücreleri, tüpler ya da gözenek gibi özel yapılar tarafından korunması suretiyle, DNA değiştirilmesine olanak verir, doğrudan temas içinde olması gerekmektedir. Bu yöntemle DNA transferi konjugatif makine gerektirir. S. aureus, prototip konjugatif plazmid konjugatif operon traa 3 barındıran PGO1 vardır. Faj transdüksiyon bakteriyofaj enfeksiyonu yoluyla hücreden hücreye DNA transferini içermektedir ve faj kapsid içine yerine viral DNA&#39;nın bakteriyel DNA ambalaj ifade eder. S. aureus izolatlarının çoğu bakteriyofajlar 1 ile lysogenized edilir. stres koşullarında üzerine prophages bakteriyel genom eksize edilebilirE ve litik döngüsü vardiya. Bunlar S. aureus DNA aktarımı için üç iyi bilinen mekanizmalardır. Bu tür &quot;sözde dönüşüm&quot; 2 ve patojenite adaları 4 transferinde faj benzeri sistemler gibi bazı ek aktarım mekanizmaları vardır. Son zamanlarda, bir grup &quot;nanotüpler&quot; komşu hücreler 5, 6 arası (plazmid DNA dahil), hücresel materyallerin transferi dahil, ancak bir izlem çalışması şimdiye kadar diğer gruplardan ortaya olmadığını bildirdi. Konjugasyon, transdüksiyon ve doğal dönüşümü: Bu çalışma üç ana aktarma yollarının ele alarak S. aureus HGT incelemek için gerekli bir metodoloji sağlar. Bu yöntemler ile elde edilen sonuçlar arasındaki CFR gen iletimini (kloramfenikol / florfenikol direnci) yapısını incelemek için kullanılmıştırS. aureus 7 suşları. Bu üç teknik S. aureus MGE iletim soruşturma çok yönlü araçlardır.

<table><tbody><tr><td>Triptik Soya Suyu (TSB)&nbsp;</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td></td><td></td>211825</tr><tr><td>Beyin Kalp İnfüzyonu (BHI)</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td></td><td></td>211059</tr><tr><td>Besin Suyu No. 2</td><td>Oxoid</td><td>CM0067</td><td></td></tr><tr><td>Koyun kanı agar</td><td>Eiken Chemical Co., Ltd.</td><td>E-MR96</td><td>Üreticiye göre %5 (h/h) koyun kanı ilave edilen triptik soya agarı.</td></tr><tr><td>Agar tozu</td><td>Wako Saf Kimya Endüstrileri</td><td>010-08725</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum sitrat (Trisodyum sitrat dihidrat)</td><td>Wako Saf Kimya Endüstrileri</td><td>191-01785</td><td></td></tr><tr><td>Selüloz Ester Izgaralı 0.45 &mu; L HAWG filtresi</td><td>Merck Milipore</td><td>HAWG 02500</td><td></td></tr><tr><td>QIAfilter Plazmid Midi kiti</td><td>QIAGEN</td><td>12243</td><td></td></tr></tbody></table>

yatay gen transferi Çalışmasında metodolojisi<em&gt; staphylococcus aureus</em

Methodology for the Study of Horizontal Gene Transfer in Staphylococcus aureus

Ana fırsatçı insan patojeni Staphylococcus aureus önemli bir özelliği, hızlı bir şekilde antibiyotiklere direnç elde etmek için olağanüstü yeteneğidir. Genomik çalışmalar S. aureus yatay gen transferi (HGT) S. aureus evriminde önemli bir rol oynadığını düşündürmektedir mobil genetik elementlerin bulunan birçok virülans ve direnç genleri taşıdığını ortaya koymaktadır. Ancak, yine de, eksik özellikle son zamanlarda bu bakterinin rapor edilmiştir doğal dönüşümü ile ilgili olan S. aureus HGT incelemek için kullanılan metodolojinin tam ve ayrıntılı bir açıklama. Konjugasyon faj iletimi ve doğal dönüşümün Bu çalışma, in vitro, S. aureus HGT incelemek için yararlı olan, üç protokollerini tasvir eder. Phenicols veren bu amaçla, cfr gen (kloramfenikol / florfenikol direnci), linkozamitler, Oksazolidinonlar, Pleuromutilins ve streptogramin A (PhLOPS içinA) fenotipi -karşı kullanılmıştır. S. aureus, diğer suşlar genetik materyaller aktaran geçtiği mekanizmaları anlamak direncin hızlı satın kavrama esastır ve yaygınlaştırma modları gözetim programlarında bildirilen veya gelecekte daha da yayılmasını moduna tahmin etmek netleştirmek için yardımcı olur.

Burada temsil edilen sonuçlar, daha önce yayınlanmıştır (yayıncının izni ile referans 7 uyarlanmıştır). Biz HGT üç mekanizmaları araştırmak düşük düzeyli linezolid direnci ve S. aureus suşları PhLOPSA dirençli fenotip 14, 15 ifade edilmesine neden olur CFR geninin, potansiyel iletim yollarını inceledi. Şekil 1,...

Burada Staphylococcus aureus konjugasyon, transdüksiyon ve doğal dönüşümün, in vitro incelenmesi için, üç farklı protokoller açıklanmaktadır.

Yatay Gen Transferi Çalışmasında Metodolojisi<em&gt; Staphylococcus aureus</em

One important feature of the major opportunistic human pathogen Staphylococcus aureus is its extraordinary ability to rapidly acquire resistance to ...

Bu prosedürün genel amacı, üç ana transfer yolunu ele alarak staphylococcus aureus'ta DNA'nın yatay iletimini incelemek için ayrıntılı bir metodoloji sağlamaktır. Konjugasyon, transdüksiyon ve doğal dönüşüm. Bu yöntem, insan patojeni staph aureus'ta antibiyotiğe dirençli genlerin yatay transferi ile ilgilidir.Burada tanıtılan tekniklerin temel avantajı, yakın zamanda keşfedilen doğal genetik dönüşüm de dahil olmak üzere üç ana transfer modunu test edebilmemizdir. Prosedürü göstermek, laboratuvarımızdan bir doktora öğrencisi olan Le Thuy olacaktır. Deneye başlamak için, triptik soya suyunda donör ve alıcı bakteri için beş mililitre gece boyu kültür hazırlayın. Veya sırasıyla litre başına 32 miligram kloramfenikol içeren ve içermeyen TSB ortamı.37 santigrat derecede çalkalama ile. Ertesi gün, gece boyunca kültürlerin optik yoğunluğunu taze TSB ortamı olan bir yoğunluğa ayarlayın. 0.5 mililitre donör kültürü ile 0.5 mililitre alıcı kültürü karıştırın.Ve karışıma bir mililitre fosfat tamponlu salin veya PBS ekleyin. Daha sonra bir vakum pompası sistemi kullanarak, bakteri karışımını 0,45 mikrometrelik bir filtre membranına aktarın. Filtre membranlarını bir koyun kanlı agar plakasına yerleştirin.Plakaları bir gün boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Filtre membranını plakadan çıkarın ve 10 mililitre PBS'ye asın. Zara bağlı tüm bakterileri toplamak için karışımı yaklaşık bir dakika vorteksleyin.Bakteriyel süspansiyonun taze TSB ile seri 10 kat seyreltilmesini yapın. TSB agar üzerine 0, 10, 4 seyreltilmiş numunelerin 100 mikrolitresini plakalayın. Veya transkonjuganları seçmek için litre başına 32 miligram kloramfenikol ve litre başına sekiz miligram tetrasiklin ile desteklenmiş TSA plakaları.Seyreltilmiş süspansiyonun 100 mikrolitresini, yalnızca litre başına sekiz miligram tetrasiklin ile TSA plakalarına yerleştirin. Toplam alıcı sayısını saymak için. İnkübasyondan sonra, koloni PCR ile CFR geninin varlığı ve duyarlılık profilleri için çift dirençli kolonileri analiz edin.Standart mikrodilüsyon yöntemine veya disk difüzyon yöntemine göre uygun antibiyotiklerin minimum inhibitör konsantrasyonlarını, MIC'leri ölçerek antibiyogramı belirleyin. Transkonjugantların duyarlılık profili alıcı ile aynı olmalıdır. Kloramfenikol ve CFR geninden etkilenen diğer bileşikler hariç.Donör suşu tarafından geliştirilen tetrasiklin direncini ekarte etmek için. 3.6 milimolar kalsiyum ile desteklenmiş beş mililitre besin suyunda bir gece boyunca N315-45 kültürü hazırlayın. 50 mililitrelik cam şişelerde 10 mililitrelik son hacimde gece boyunca kültürü bir ila 1.000 seyrelterek alt kültürleri hazırlayın.Bakterileri bir saat boyunca 37 santigrat derecede çalkalayarak, dakikada 180 dönüşle büyütün. Daha sonra, NB kalsiyum klorür ortamında bir dizi seyreltilmiş faj MR83a hazırlayın. Bakteri kültürüne 20 mikrolitre seyreltilmiş faj ekleyin.Bakteri hücresi büyümesi için pozitif kontrol görevi görmesi için faj enfeksiyonu olmayan bir kontrol kültürü hazırlayın. Daha sonra kültürleri gece boyunca dakikada 100 dönüşte hafifçe çalkalayarak 37 santigrat derecede büyütün. Ertesi gün, eklenen fajın en yüksek seyreltilmesine sahip bir veya iki temizlenmiş kültür şişesi seçin.Kültürleri 15 mililitrelik santrifüj tüplerine aktarın. Tüplere 250 mikrolitre kloroform ekleyin ve kültürü ters çevirerek iyice karıştırın. Kültürü 4 santigrat derecede 20 dakika boyunca 5.000 kez G'de santrifüjleyin.Süpernatanları yeni tüplere aktarın ve kullanana kadar 4 santigrat derecede saklayın. Besin suyu agar ortamını hazırlayın ve 55 santigrat derecede bir su banyosunda sıcak tutun. Ortama otoklavlanmış 0.5 molar kalsiyum klorür çözeltisini, 3.6 milimolar nihai konsantrasyona ekleyin.90 milimetre petri kaplarına, NB kalsiyum klorür plakalarına dökün. Çalkalayarak 37 santigrat derecede beş mililitre NB kalsiyum klorür içinde bir gece boyunca N315 kültürü hazırlayın. Ertesi gün, gece boyunca 10 mikrolitre kültürü 200 mikrolitre NB kalsiyum klorür içine ekleyin ve NB kalsiyum klorür plakasına eşit şekilde yayın.Plakanın yüzeyi sıvı ile kaplandığında yayılmayı durdurun. Ardından plakanın beş dakika kurumasını bekleyin. NB kalsiyum klorür ortamı kullanarak önceden hazırlanmış fajın seri bir ila 10 seyreltmesini yapın.Bakterilerle kaplı plakaya her faj seyreltmesinden üç mikrolitre tespit edin. Plakayı gece boyunca 30 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi sabah, plak numaralarını sayın ve aşağıdaki denklemi kullanarak faj titresini hesaplayın.N315, COL veya MU50'nin gece kültürünü, dakikada 180 dönüşte çalkalayarak 37 santigrat derecede beş mililitre NB kalsiyum klorür içinde hazırlayın. Gece boyunca kültürden sonra, fajı NB kalsiyum klorür içinde mililitre başına 109 PFU'ya seyreltin. 50 mililitrelik bir cam şişede, 500 mikrolitre gece kültürü, 500 mikrolitre taze NB kalsiyum klorür ve mililitre başına bir mililitre faj 109 PFU karıştırın.Karışımı 37 santigrat derecede 30 dakika boyunca dakikada 100 dönüşte hafifçe çalkalayarak inkübe edin. İnkübasyondan sonra, kültürlere 50 mikrolitre% 20 trisodyum sitrat ekleyin. 37 santigrat derecede 30 dakika boyunca hafifçe çalkalamaya devam edin.Erimiş beyin kalp infüzyonunu veya BHI agar ortamını hazırlayın ve 55 santigrat derecede bir su banyosunda tutun ve agar ortamını litre başına 32 miligram kloramfenikol ile tedavi edin. Daha sonra bakteri faj karışımını 100 mililitrelik bir şişeye aktarın. Litre başına 32 miligram kloramfenikol ile desteklenmiş 50 mililitre ılık BHI agar ekleyin ve iyice karıştırın.Karışımı 90 milimetrelik petri kaplarına dökün. Plakayı 37 santigrat derecede inkübe edin. Kolonileri litre başına 32 miligram kloramfenikol ile takviye edilmiş yeni BHI agar plakalarına aktararak, üretilen kolonileri, transdükantları direnç açısından daha fazla test edin.Koloni PCR ile CFR geninin varlığını doğrulayın. Alıcı hücreyi gece boyunca, 37 santigrat derecede beş mililitre TSB'de çalkalayarak kültürleyin. Ertesi sabah, gece boyunca süren kültürün 0,5 mililitresini 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın.Hücreleri santrifüjleme ile çökeltin. Daha sonra hücreleri 50 mililitrelik bir tüpte 10 mililitre CS2 ortamı ile askıya alın. Daha sonra bakterileri 37 santigrat derecede büyütün ve geç üstel faza kadar sekiz saat boyunca dakikada 180 dönüşte çalkalayın.Hücreleri santrifüjleme ile hasat edin. Süpernatanı atın ve hücreleri 10 mililitre taze CS2 ortamında yeniden süspanse edin. Hücre süspansiyonuna 10 mikrogram saflaştırılmış plazmit veya genomik DNA ekleyin.Kültürü dakikada 180 dönüşle çalkalayın. Daha sonra hücreleri santrifüjleme ile toplayın. Hücreleri 10 mililitre BHI ortamında yeniden süspanse edin.Hücre süspansiyonunu 90 mililitre erimiş BHI agar takviyesi ile karıştırın Litre başına 32 miligram kloramfenikol ve kontrol deneyinde litre başına beş mikrogram tetrasiklin ile. Karışımı 90 milimetrelik petri kaplarına dökün ve hızla soğutun ve agarın katılaşmasına izin verin. Direnç özelliklerini doğrulamak için kürdan kullanarak kolonileri uygun antibiyotik içeren plakalara çoğaltın.Konjugasyon protokolü, CFR donörü olarak staphylococcus epidermidis'in kullanıldığı tür içi iletim için yararlıdır. Ve alıcı olarak staphylococcus aureus N315 suşu kullanıldı. Türler arası aktarım için kullanılan protokol, farklı konjugatif donörlerde aynı konjugatif vektörü kullanarak benzer sonuçlar verir.Bu, doğal dönüşüm detaylarının anlatıldığı ilk makaledir. Sağlanan metodoloji, araştırmacının antibiyotik direncinin iletimini ve yayılmasını ve ayrıca insan patojeni staph aureus'ta birincil belirleyiciyi incelemesi için yararlı olacaktır.

methodology-for-study-horizontal-gene-transfer-staphylococcus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Cafini, F., et.al. Staphylococcus aureus'ta Yatay Gen Transferinin İncelenmesi için Metodoloji. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, doğal dönüşüm yoluyla Staphylococcus aureus'ta yetkinlik kaynaklı DNA alımını göstermektedir. Bir sigma faktörünü yapısal olarak eksprese etmek üzere tasarlanmış kloramfenikol'e duyarlı bir suş, yeterliliği arttırmak için besin sınırlayıcı koşullar altında kültürlenir, daha sonra bir direnç geni taşıyan donör DNA'sı ile inkübe edilir. Başarılı gen transferi,...

Staphylococcus aureus'ta Yetkinliğe Bağlı DNA Alımı

Burada, plazmit konjugasyonunda yer alan bir geni nakavt etmek için bir protokol sunuyoruz ve ardından çiftleşme tahlilleri kullanarak yokluğunun etkisini analiz ediyoruz. Genin işlevi, delesyon veya nokta mutasyonları kullanılarak dizisinin belirli bir bölgesine daha fazla araştırılır.

Bakteriyel Konjugasyon ilgilendim Transferi Proteinlerin Dizi özgü Analiz konjugatif Çiftleşme Tahliller

Bir amaçla çeşitli bakteri Konjügatif DNA öğeleri farklı koşullar altında davranışlarını anlamak için biz nasıl verimli bir şekilde tahmin etmek için yüksek çözünürlüklü konjugasyon frekans farklılıkları algılamak için bir protokol tarif donör bakteri konjugasyon başlatır.

Bakteriyel konjugasyon frekans yüksek çözünürlüklü karşılaştırma

Burada açıklanan bakteri gen ekspresyonu hayvan dokularında hücresel düzeyde analiz etmek için bir yöntemdir. Bu yöntem ve doku ortamındaki bakteriyel bir nüfus enfeksiyon sırasında içinde meydana gelen fenotipik çeşitlilik eğitimi için bir kaynak sağlar.

Bakteriyel gen düzenlemesi enfekte dokularda çalışmaya bir floresan tabanlı yöntemi

Bu analitik hesaplama platformu, bakteriyel popülasyon genomiği ile ilgilenen mikrobiyologlar, ekolojistler ve epidemiyologlar için pratik rehberlik sağlar. Özellikle, burada sunulan çalışma nasıl gerçekleştirileceğini göstermiştir: i) hiyerarşik genotiplerin filogeni rehberliğinde haritalanması; ii) genotiplerin frekansa dayalı analizi; iii) akrabalık ve klonalite analizleri; iv) Soy farklılaştırıcı aksesuar lokuslarının tanımlanması.

Bakteriyel Popülasyonlarda Hiyerarşik Genotiplerin ve Aksesuar Genom Loci'nin Sezgisel Madenciliği

Konjugasyon, plazmid DNA'sını iki farklı hücre boyunca harekete geçirerek yatay gen transferine aracılık eder ve faydalı genlerin yayılmasını kolaylaştırır. Bu çalışma, konjugatif plazmid, donör ve alıcıda transkonjugasyonu tespit etmek için diferansiyel belirteçlerin kullanımına dayanan konjugatif plazmid transferinin etkili tespiti için yaygın olarak kullanılan bir yöntemi açıklamaktadır.

E. coli'de Doğal Konjugatif Plazmidlerin Aracılık Ettiği Yatay Gen Transferinin Saptanması

Bu yazıda, Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus için antibiyotik sağkalımını değerlendirmek için kapsamlı bir protokol sunuyoruz, plazmitleri P. aeruginosa ve S. aureus'a dönüştürerek raportör suşlar oluşturmak ve persistanlar gibi fenotipik varyantları hızlandırılmış epifloresan mikroskobu ile görselleştirmek için.

Pseudomonas aeruginosa ve Staphylococcus aureus Heterojen Fenotiplerinin Hızlandırılmış Epifloresan Mikroskobu Görüntülemesi

Damla akış reaktörleri, açık sistem akış biyofilm kullanan ve diski reaktörler dönen için Protokoller ayrıntılı olarak sunulmuştur.

Damla Akış ve Döner Disk Reaktörler kullanın Staphylococcus aureus Biyofilm Analizi

Murin deri ve yumuşak doku enfeksiyonu modeli metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) ve ev sahibi immünolojik yanıtlar virülans fonksiyonu değerlendirmek için kullanılmaktadır. Burada, biz, deri ve yumuşak doku enfeksiyonu için bir deri altı enfeksiyon modeli sundu.

Subkutan Enfeksiyon Metisiline Dirençli Stafilokok Aureus (MRSA)

Metisiline dirençli nedeniyle deneysel rat endokardit...

Metisiline Dirençli Deneysel Endokardit Modeli<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) Sıçan

Öğrenin, Staphylococcus aureus'ta yatay gen transferini konjugasyon, transdüksiyon ve doğal transformasyon yöntemleriyle nasıl çalışılacağını. Antibiyotik direnci genlerinin yayılımını anlamak için bu protokoller kritik öneme sahiptir.

Yatay Gen Transferi Çalışmasında Metodolojisi

Daha fazla video keşfet