Katı Faz Mikroekstraksiyon Örneklemesi: Greft Dokularından Örnek Ekstraksiyonu için Prob Tabanlı Bir Teknik

Bir organ greftinin uzun süreli saklanması, organ fonksiyonunun ve erken evre organ reddinin bir göstergesi olan metabolik profilini etkiler.

Bu metabolitleri izole etmek için, biyouyumlu bir sorbent ile kaplanmış ince bir katı fazlı mikroekstraksiyon veya SPME probu alarak başlayın. Kaplanmış sorbenti nemlendirmek ve bağlı kirleri gevşetmek için probu hidroalkolik bir temizleme solüsyonuna daldırın.

Kirleri gidermek için probu çalkalayın. Ardından, probu bir aktivasyon çözeltisine yerleştirin ve tekrar çalkalayın. Aktivasyon solüsyonundaki kimyasallar prob yüzeyini değiştirerek adsorpsiyon potansiyelini arttırır. Probu suyla durulayın ve mikrobiyal kirleticileri gidermek için sterilize edin.

Şimdi, steril ve aktive edilmiş probu, doku matrisi tüm sorbent yüzeyini kaplayacak şekilde organ greftine yerleştirin. Sorbent materyali, greftten serbest polar ve polar olmayan metabolitleri çekerek yüzeyine adsorpsiyon sağlar. Probu geri çekin ve kalan dokuyu çıkarmak için suyla durulayın.

Daha sonra, probu, adsorbe edilen metabolitlerle etkileşime giren bir desorpsiyon çözeltisine yerleştirin. Yakalanan metabolitleri ayırmak ve desorpsiyon çözeltisine çözündürmek için probu çalkalayın. Son olarak, probu çıkarın ve elde edilen metabolit karışımını sonraki analiz için işleyin.

1 ila 1 metanol ve sudan oluşan bir ön koşullandırma karışımı hazırlayarak başlayın. Her 2 mililitrelik cam şişeye 1 mililitre çözelti pipetleyin ve her şişeye bir prob yerleştirin. Şişeleri 1,200 rpm'de 1 saat boyunca bir vorteks karıştırıcı üzerinde çalkalayın. Daha sonra probları LC-MS dereceli su ile durulayın ve standart cerrahi sterilizasyon protokolüne göre veya steril işleme bölümünde sterilize edin.

Numuneyi çıkarmaya hazır olduğunuzda, steril ambalajı açın ve kaplamanın tüm uzunluğunun doku matrisi tarafından kaplandığından emin olarak, her zaman noktasında 10 dakika boyunca iki probu doğrudan böbrek korteksine yerleştirin. Her prob için numune alma süresini takip ettiğinizden emin olun. Probu dokudan çekerek geri çekin ve kalan kanı çıkarmak için kaplamayı hemen LC-MS dereceli suyla durulayın, cerrahi bölgeden duruladığınızdan emin olun.

Probları taşımak için ayrı şişelere koyun ve kapatın. Ardından, şişeleri kuru buz veya sıvı nitrojen ile dolu bir kutuya koyun. Numuneleri eksi 80 santigrat derecede saklayın veya hemen desorpsiyona devam edin.

Metabolomik analiz için asetonitril ve sudan oluşan bir desorpsiyon çözeltisi ve lipidomik analiz için izopropanol ve metanolden oluşan başka bir desorpsiyon çözeltisi hazırlayın. 2 mililitrelik etiketli şişelerdeki eklere 100 mikrolitre çözelti ekleyin ve her şişeye bir prob yerleştirin. Şişeleri 2 saat boyunca 1.200 rpm'de çalkalayın. Ardından, probları şişelerden çıkarın ve LC-MS analizine devam edin.