Name: Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 20 s
Description: Öğrenin, hücre istilası ve göçünü değerlendirmek için Boyden odası ve video mikroskop tabanlı çizik yara analiz yöntemlerini karşılaştırın. Bu teknikler iyileşme ve doku rejenerasyonu çalışmalarında da uygulanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu teknikler LabEx ASAL (ANR-11-LABX-0063), ETOILE (CPER 2009-2013) ve lirik Grant İnka-DGOS-4664 bilimsel çerçevesinde Kervansaray'a planı-Etat-bölge (CPER) desteği ile geliştirilmiştir.

Not: ECM dahil olmadan Boyden odası ve çizik deneyleri için geçiş tahlil olarak adlandırılır ve ECM ile aynı deneyleri işgali tahlil olarak adlandırılır.
1. Boyden odası tahlil
Not: Bu protokolü tekrarlayan bir baş ve boyun Skuamöz Hücre Karsinomu (HNSCC) gırtlak kanseri türetilir ve John elde edildi SQ20B hücre satırı için adapte Little (Boston, MA, USA).
Gün 1
<ol><li>
Tohum hücre
	<ol>
<li>Tohum 2 106 SQ20B 175 cm2 şişeye bir gün önce 72 h 12 mL kültür orta (CM) hücreleri ve hücrelerin % 80 hücre izdiham için büyümeye izin.<ol>
<li>CM SQ20B hücreler için hazırlamak için Dulbecco'nın değiştirilmiş kartal orta (DMEM) % 10 fetal buzağı serum (FCS), 0,04 mg/mL hidrokortizon, 100 U/mL penisilin ve 0,1 g/L streptomisin ile ek.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Laminar akış başlık altında hücreleri trypsinize. Orta kaldırmak, steril fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) hücrelerle yıkama ve tripsin ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) (0,5 g/L) 2.5 mL ekleyin. 37 ° C'de 5 min için hücreleri kuluçkaya ve reaksiyon 37 ° C'ye ısındı cm 12.5 mL ekleyerek durdurun Bir hücre sayaç kullanarak hücreleri saydırmak.</li>
		<li>25 cm2 şişesi 6 105 hücre değerlendirilecek her koşul için bir hücre yoğunluğu, hücrelerde tohum. 24 h cm 3 ml için hücreleri kuluçkaya.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. gün
<ol start="2"><li>
Hücre açlık ve kaplı odaları hazırlanması
	<ol>
<li>Hücreleri her şişeyi ortamda ile 3 mL %0,1 sığır serum albumin (BSA) kullanarak düşük fetal sığır serum (FBS) orta yerine FBS değiştirerek açlıktan. Kuluçka 24 h için hücreleri açlıktan.<ol>
<li>Açlık CM (s-CM) hazırlamak için DMEM % 0.1 BSA, 0,04 mg/mL hidrokortizon, 100 U/mL penisilin ve 0,1 g/L streptomisin ek.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Geçiş tahlil için 1.3 adıma geçin.</li>
		<li>İstila tahlil, günde 3, önce 12 h için kaplamalı her odasına s-cm 500 μL ekleyerek kaplı Boyden odaları hazır olun. Ticari olarak hazırlanan kuşe Boyden Chambers'ı kullanın ve onları kullanmadan önce 4 ° C'de tutun. Her Boyden Oda arkadaşı tabağına yerleştirin ve 37 ° C'de kuluçka gecede ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. gün
<ol start="3"><li>
Boyden odasında tohum hücre
	<ol>
<li>Eşlik eden plaka chemoattractant hazırlamak için kullanın. Her doldurmak tam orta %10 FBS, 0,04 mg/mL hidrokortizon, 100 U/mL penisilin ve 0,1 g/L streptomisin 750 μL 24-iyi arkadaşı plakalı, iyi.<ol>
<li>Chemoattractant her hücre satır ve her tedavi koşul için uyum. Chemoattractant CM (ca-CM) hazırlamak için DMEM % 10 FCS, 0.4 mg/mL hidrokortizon, 100 U/mL penisilin ve 0,1 g/L streptomisin ek.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Üst odası kabarcıklar önlemek için dikkat çekici doldurulmuş arkadaşı kalenin aktarın.</li>
		<li>İstila tahlil için dikkatli bir şekilde her Boyden odasından cm 450 μL çıkarın.</li>
		<li>Laminar akış başlık altında hücreleri trypsinize. Orta kaldırmak, steril PBS hücrelerle yıkama tripsin EDTA (0.5 g/L) 0.5 mL ekleyin ve sonra hücreleri 37 ° C'de 5 min için kuluçkaya 37 ° C'ye ısındı CM ekleyerek reaksiyonu durdurmak Bir hücre sayaç kullanarak hücreleri saydırmak.</li>
		<li>Tohum 3 104 SQ20B % 0.1 BSA orta, 6 104 hücre/mL nihai bir seyreltme veren 500 μL hücrelerde. Not: Hücre konsantrasyonu her hücre satırı için adapte edilmelidir.</li>
		<li>Plaka 37 ° C'de kuluçka makinesi 24 h için yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. gün
<ol start="4"><li>
Hücre fiksasyon ve boyama
	<ol>
<li>Önce katlama zaman o hücre satırıyla belirli hücreleri tamir. 24 saat önce SQ20B hücreleri tamir.</li>
		<li>Her ekleme arkadaşı plaka çıkarın ve hücreleri bir pamuklu çubukla kullanarak üst odasından dikkatli bir şekilde çıkarın. Üst bölmede bulunan tüm hücreleri kaldırmak özellikle önemlidir.</li>
		<li>Düzeltme ve leke Mayıs-Grunwald Giemsa renklendirme9 sağlanan boyama seti kullanarak elde etmek için tek tek ekleyin. Alternatif olarak, % 4 paraformaldehyde 30 dk fiksasyon için başka bir arkadaşı tabak içinde kullanın.</li>
		<li>Ekler bir boş 24-iyi arkadaşı plaka her odası kuruması için bir laboratuvar başlık altında tutun.</li>
	</ol>
</li>
</ol>Gün 5
<ol start="5"><li>
Mikroskopik analiz
	<ol>
<li>Eşlik eden plaka ekler 20 faz kontrast mikroskop üzerine yerleştirin ve geçirilen her hücre zarının alt kısmında say. Amaç aşağıdan yukarı hareket ettirerek doğru odak konumunu en iyi duruma getirme ve pozisyon membran alt kısmı durdurun.</li>
		<li>Geçirilen hücrelerin sayıları ve numaralı seribaşı hücreleri arasındaki oran hesaplamak. Her sayısı nüsha her tedavi koşul için yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. çizik tahlil yara: Hücre göç
Not: Talimatları hücre türüne göre adapte olmalıdır.
Gün 1
<ol><li>
Tohum hücre
	<ol>
<li>Tohum 2 x 106 SQ20B 175 cm2 şişeye bir gün önce 72 h cm 12 ml hücreleri ve hücrelerin % 80 hücre izdiham için büyümeye izin.</li>
		<li>Laminar akış başlık altında hücreleri trypsinize. Orta kaldırmak, steril PBS hücrelerle yıkama tripsin EDTA (0.5 g/L) 2.5 mL ekleyin ve 37 ° C'de 5 min için hücreleri kuluçkaya 37 ° C'ye ısındı cm 12.5 mL ekleyerek reaksiyonu durdurmak Bir hücre sayaç kullanarak hücreleri saydırmak.</li>
		<li>Prediluted bir örneği 4 x 105/mL, hücre yoğunluğu ' 4 104 hücre başına 100 μL her şey son bir yoğunluk vererek oluşturmak. Bu konsantrasyon her hücre satırı için adapte olmalı ve 1 x 104 6 104 hücre aralığında olmalıdır.</li>
		<li>2.1.2. adımda hazırlanan solüsyona yatırma 100 μL tarafından bir 96-şey plaka her kuyuya tohum hücreleri.</li>
		<li>Hücreler eşit olarak kuyu dibinde dağıtmak 5 min için oda sıcaklığında plaka bırakın.</li>
		<li>Plaka da kuluçka yerleştirin ve 12-16 (en fazla) h 37 ° C'de plaka uygun hücrelere sağlar</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. gün
<ol start="2"><li>
Yara tahlil kaşı
	<ol>
<li>Adım 2.1 kuluçka makinesi'hazırlanan tabak çıkarın.</li>
		<li>Başlık altında üreticinin protokolüne göre ticari yaralama aygıtı kullanarak bir yara olun.</li>
		<li>Hemen orta her şey bir pipet yara dokunmamaya dikkat çekici bir adapte konik ucuyla kullanarak kaldırın.</li>
		<li>Hücreleri aspirasyon yinelenen ve her şey için 37 ° c sıcak cm 100 μL kullanarak tarafından iki kez yıkayın.</li>
		<li>Bir pipet adapte bir konik ucuyla sonra çamaşır adımları kullanarak CM kaldırın.</li>
		<li>Orta her tedavi koşul için belirli 100 μL her şey için ekleyin.</li>
		<li>Wells için yapılan herhangi bir kabarcık oluşturma önlemek için deneyin. Bir ters pipetting teknik burada yararlı olabilir. Alternatif olarak, bir şırınga iğnesi kabarcıklar kaldırın.</li>
		<li>Plaka video mikroskobu adapte raf yerleştirin.</li>
		<li>Görüntü kalitesini artırmak için en az 15 dk önce plaka alt tarafındaki yoğunlaşmayı önlemek için ilk inceden inceye gözden geçirmek için sıcak plaka izin.</li>
		<li>Zamanlamayı iyi başına bir görüntü, video mikroskop bilgisayar yazılımı kullanarak tarama programı. En çok 2-h Aralık işgali-geçiş deney için gereklidir. Denemenin amacı bir video üretmek için ise 30 dk maksimum aralığını tercih edilir.</li>
		<li>Deney sonunda, yaralama aygıt dikkatle yıkama ve her üretici tarafından belirtilen dört çamaşır adımları izleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>Gün 3, 4 ve 5
<ol start="3"><li>
Video mikroskop kullanarak geçiş analizi
	<ol>
<li>En az 24 h ve 5 gün, izlemek ve hücre göç denetleyin.</li>
		<li>Her hücre türü için uyarlanmış bir uygun cep maskesi hücre göç çözümlemek için kullanın. Her hücre satırı için uyarlanmış bir cep maskesi elde etmek için bir hücre belirli hücre resim koleksiyonu kullanarak yazılım tanımından işleme oluşturmak.</li>
		<li>Eğrileri izleme ve veri analiz ve sonuçları karşılaştırmak için kullanılan bir elektronik tabloya ver.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. çizik tahlil yara: Hücre Invasion
Not: Talimatları hücre türüne göre adapte olmalıdır.
Gün 1
<ol><li>
Tohum hücre
	<ol>
<li>2.1. adımda açıklandığı gibi hücre tohum için aynı iletişim kuralını kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. gün
<ol start="2"><li>
ECM hazırlanıyor
	<ol>
<li>Matris için en az 12 h 4 ° C'de kullanmadan önce defrost Hiçbir toplamları görünür olduğundan emin olun. Toplamları görünür durumdaysa, matrix 4 ° C'de kadar agrega ortadan daha uzun süre tutmak. Matris buz üzerinde tutun. Precooled pipet ipuçlarını kullanın. Not: Matrix kuvvetlendirmek değil Eğer 4 ° C'de muhafaza</li>
		<li>5 min için buz üzerine microcentrifuge boruları chill.</li>
		<li>CM 4 ° C-buzdolabından soğutmalı ve 300 μg/mL nihai bir konsantrasyon elde etmek için precooled microcentrifuge tüpler matrisinde oranında seyreltin.</li>
		<li>Buzdolabı 4 ° C'de prediluted matris microcentrifuge tüplerini dönmek Not: microcentrifuge tüpler için uyarlanmış bir soğutma rafa deneme boyunca 4 ° C'de tüpler korumak için yardımcı olur.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. gün
<ol start="3"><li>
Yara tahlil ve ECM tedavisinde kazı kazan
	<ol>
<li>Adım 3.1 kuluçka makinesi'hazırlanan tabak çıkarın.</li>
		<li>Başlık altında üreticinin protokolüne göre ticari yaralama aygıtı kullanarak yara olun.</li>
		<li>Hemen orta her şey bir pipet yara dokunmamaya dikkat çekici bir adapte konik ucuyla kullanarak kaldırın.</li>
		<li>Hücreleri aspirasyon yordamı yinelenen ve 37 ° C'ye ısındı cm 100 μL kullanarak tarafından iki kez yıkamak</li>
		<li>İkinci yıkama sonra plaka 5 min için sıcaklık equilibrate için 4 ° C kuluçka makinesi yerleştirin.</li>
		<li>Her şey dikkatle kenarından pipet ve yara dokunmaktan kaçının için dikkat çekici bir konik uç ile aspirasyon pipet ile soğuk orta kaldırın.</li>
		<li>4 ° C'de precooled konik ipuçlarını kullanarak her şey 50 μL prediluted matris ekleyin</li>
		<li>37 ° C'de kuluçka 30 dk için plaka yerleştirin. Not: Bir prewarmed destek raf 37 ° C'de ve 96-şey levha ısınma hızlandırmak yararlıdır.</li>
		<li>Plaka da kuluçka kaldırın ve her tedavi koşul için belirtildiği gibi her şey için adapte cm 100 μL ekleyin.</li>
		<li>Wells için yapılan herhangi bir kabarcık oluşturma önlemek için deneyin. Bir ters pipetting teknik burada yararlı olabilir. Alternatif olarak, bir şırınga iğnesi kabarcıklar kaldırın.</li>
		<li>Plaka video mikroskobu adapte rafa yerleştirin.</li>
		<li>Görüntü kalitesini artırmak için en az 15 dk önce plaka alt tarafındaki yoğunlaşmayı önlemek için ilk inceden inceye gözden geçirmek için sıcak plaka izin.</li>
		<li>Taramalar, kuyuda sıfırdan yara tarama modunu başına bir görüntü, video mikroskop bilgisayar yazılımı kullanarak zamanlama programı. En çok 2-h Aralık içinde bir istila-geçiş deney için gerekli. Denemenin amacı bir video üretmek için ise 30 dk maksimum aralığını tercih edilir.</li>
		<li>Deney sonunda, yaralama aygıt dikkatle yıkama ve her üretici tarafından belirtilen dört çamaşır adımları izleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>Gün 3, 4 ve 5
<ol start="4"><li>
Video bir mikroskop kullanarak cep işgali analizi.
	<ol>
<li>2.3 arasındaki adımları yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour-cell+invasion+and+migration%3A+diversity+and+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li>
<li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-enhanced+cell+migration%2Finvasion+process%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oncol+Hematol%22%5BJournal%5D)">Radiation-enhanced cell migration/invasion process: A review.</a> Crit Rev Oncol Hematol. , (2014).</li>
<li>Burdsal, C. A., Damsky, C. H., Pedersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+E-cadherin+and+integrins+in+mesoderm+differentiation+and+migration+at+the+mammalian+primitive+streak%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The role of E-cadherin and integrins in mesoderm differentiation and migration at the mammalian primitive streak.</a> Development. 118 (3), Cambridge, England. 829-844 (1993).</li>
<li>Chen, C., Zimmermann, M., Tinhofer, I., Kaufmann, A. M., Albers, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-to-mesenchymal+transition+and+cancer+stem%28-like%29+cells+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Epithelial-to-mesenchymal transition and cancer stem(-like) cells in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Cancer Lett. 338 (1), 47-56 (2013).</li>
<li>Nelson, A. R., Fingleton, B., Rothenberg, M. L., Matrisian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+metalloproteinases%3A+biologic+activity+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Matrix metalloproteinases: biologic activity and clinical implications.</a> J Clin Oncol. 18 (5), 1135-1149 (2000).</li>
<li>Smith, A., Teknos, T. N., Pan, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+to+mesenchymal+transition+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncol%22%5BJournal%5D)">Epithelial to mesenchymal transition in head and neck squamous cell carcinoma.</a> Oral Oncol. 49 (4), 287-292 (2013).</li>
<li>Chen, H. -C. <a target="_blank" href="https://pdfs.semanticscholar.org/922b/e08c04a3ad311a32ca0fc52644681f1bf8b7.pdf">Boyden chamber assay.</a> Meth Mol Biol. 294, Clifton, N.J. 15-22 (2005).</li>
<li>Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. -L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15576902">Wound-healing assay.</a> Meth Mol Biol. 294, Clifton, N.J. 23-29 (2005).</li>
<li>Piaton, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+recommendations+and+best+practice+guidelines+for+May-Gr%C3%BCnwald-Giemsa+staining%3A+literature+review+and+insights+from+the+quality+assurance%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Path%22%5BJournal%5D)">Technical recommendations and best practice guidelines for May-Grünwald-Giemsa staining: literature review and insights from the quality assurance.</a> Ann Path. 35 (4), 294-305 (2015).</li>
<li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+a+cornerstone+of+radiation+resistance%3A+cancer+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+lett%22%5BJournal%5D)">Targeting a cornerstone of radiation resistance: cancer stem cell.</a> Cancer lett. 322 (2), 139-147 (2012).</li>
<li>Moncharmont, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+ion+irradiation+withstands+cancer+stem+cells%E2%80%99+migration%2Finvasion+process+in+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+%28HNSCC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Carbon ion irradiation withstands cancer stem cells’ migration/invasion process in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma (HNSCC).</a> Oncotarget. 7 (30), 47738-47749 (2016).</li>
<li>Gilormini, M., Wozny, A. -S., Battiston-Montagne, P., Ardail, D., Alphonse, G., Rodriguez-Lafrasse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+a+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+Subpopulation+Having+Stem+Cell+Characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics.</a> J Vis Exp: JoVE. (111), (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Biz burada iki farklı yöntemler cep işgali ve geçiş işlemi çalışma raporu Bu süreç analizi bir subpopulation kanser kök hücreleri10,11adı verilen kanser hücrelerinin artan hareketliliği tarafından açıkladı metastatik yineleme katılan faktörler anlamak için önemlidir.
Boyden odası deneyi biridir en sık kullanılan teknikler keşfetmek için hücre işgali ve geçiş. Bu yaklaşımın bir avantajı, tekrarlanabilirlik olsa da bu teknik son derece d...

Cep işgali ve geçiş direnci tedavi1 ana nedeni kanser hücrelerinin, yayılması yer alırlar ve lokal veya metastatik yineleme sonra kanser tedavi2yol açabilir. Mezenkimal epitel geçiş (EMT) hücre Invasion-geçiş hangi kanser hücreleri bir epitel Mezenkimal bir fenotip geçiş ilk işlemidir. E-Cadherin epitel fenotip3hücre dışı bir işaretleyicidir ve artan N-cadherin ve vimentin Mezenkimal fenotip4karakteristik ifadesidir. Geçiş de matris metalloproteases5eylem yoluyla iç kapasite kanser hücrelerinin temel hücre dışı Matriks (ECM) işgal bağlıdır.
Bu istila-geçiş mekanizması kanser birçok yerlerde, özellikle baş ve boyun kanser6' için tanımlanmıştır. Pek çok araştırmacı nasıl bu bilgi için yeni tedavi stratejileri götürecek umuduyla kanser hücrelerinin yaymak daha iyi anlamak için göç ve işgal işlemleri üzerinde odaklanmıştır. Bu çalışmalar güvenilir ve tekrarlanabilir deneyleri kullanarak gerçekleştirilen çok önemlidir.
Hücre hareketliliği vitro analizine zor olabilir. Uzun yıllar önce geliştirilen, Boyden odası tahlil Invasion-geçiş analiz7için standart olarak kabul edilir. Ancak, zaman alıcı ve sık sık yanlıştır. İkinci bir test bir hücre monolayer kültürü üzerinde bir çizik bile yapma ve esir alma imge cep işgali ve göç sabit zaman aralıklarında içerir yara iyileşmesi tahlil8' dir. Bu teknik yaygın olarak iki ardışık test sonuçları arasında büyük farklılıklar nedeniyle eleştirildi. Ancak, mikroskopi, özellikle de modern teknolojilerin uygulama sıfırdan yara tahlil tekrarlanabilirlik geliştirdi. Video mikroskoplar kolayca İnkübatörler içinde tanıttı olabilir ve hücre göç gerçek zamanlı görüntü oluşturabilirsiniz. Bu cihazlar mikroskobik verileri kaydetmek ve zaman içinde yara hücre izdiham otomatik olarak analiz sağlar. Bu kağıt Boyden odası tahlil ve en iyi duruma getirilmiş sıfırdan yara tahlil tarif ve avantajları ve her yaklaşımın zayıf yönlerini tartışmak için amaçtır.

<table><tbody><tr><td>Fetal Buzağı Serumu Altın</td><td>GE Healthcare</td><td>A15-151</td><td></td></tr><tr><td>Hidrokortizon suda çözünür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0396-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin 100 X</td><td>Dominique Dutscher</td><td>L0022-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>61965-026</td><td></td></tr><tr><td>F12 Fındık Karışımı (1X) + GlutaMAX-I</td><td>Gibco</td><td>31765-027</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Promega</td><td>G5021</td><td>Çözelti kullanımdan hemen önce hazırlanmalıdır çünkü çok kararsızdır</td></tr><tr><td>Z1 coulter parçacığı</td><td>Beckman Coulter</td><td>6605698</td><td></td></tr><tr><td>Optik mikroskop</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>CKX31</td><td></td></tr><tr><td>SQ20B hücre hattı</td><td>John Little'dan Hediye s</td> <td>Laboratuvar-Yara</td><td></td></tr> <tr><td>Yapıcı</td><td>Essen Bioscience</td><td>4494</td><td>Güvenli ve kuru yerde saklayın</td></tr><tr><td>96 kuyulu ImageLock Plate</td><td>Essen Bioscience</td><td>4379</td><td></td></tr><tr><td>CoolBox 96F CoolSink 96F Sistemi</td><td>Essen Bioscience</td><td>1500-0078-A00</td><td></td></tr><tr><td>M30 Sistemli CoolBox</td><td>Essen Bioscience</td><td>1500-0078-A00</td><td></td></tr><tr><td>Boyden Insert</td><td>Dominique Dutcher</td><td>353097</td><td></td></tr><tr><td>Boyden Kaplamalı Uç</td><td>Dominique Dutcher</td><td>354483</td><td>Mağazası -20 &°C; C</td></tr><tr><td>Companion 24 kuyulu Plaka</td><td>Dominique Dutcher</td><td>353504</td><td></td></tr><tr><td>BD Matrigel standardı</td><td>BD BioScience</td><td>BD 354234</td><td>-20°C.&nbsp;</td></tr><tr><td>RAL 555 Boyama Kiti</td><td>RAL Diagnostik</td><td>&nbsp; 361550</td><td>Güvenli ve kuru bir yerde saklayın</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Eppendorf</td><td>33511</td><td></td></tr></tbody></table>

cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve boyden odası tahlil yara

Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

Tümör hücreleri istila ve geçiş yeteneklerini kanser ilerlemesi ve yineleme için ana katkı kaynağı sağlamaktadır. Birçok çalışma nasıl kanser hücrelerinin yaymak yeni tedavi stratejileri geliştirmek amacı ile anlamak için geçiş ve işgal yeteneklerini incelemiş bulunuyoruz. Bu yeteneklerin hücresel ve moleküler temeli analizi hücre hareketlilik karakterizasyonu ve fizikokimyasal özellikleri sitoiskeleti ve hücresel microenvironment yol açmıştır. Uzun yıllar boyunca, Boyden odası tahlil ve sıfırdan yara tahlil cep işgali ve geçiş eğitim için standart teknikleri olmuştur. Ancak, bu iki teknik kısıtlamalar bulunmaktadır. Boyden odası tahlil zor ve zaman alıcı ve düşük tekrarlanabilirlik sıfırdan yara tahlil vardır. Mikroskobu, özellikle de modern teknolojilerin geliştirilmesini sıfırdan yara tahlil tekrarlanabilirlik artmıştır. Güçlü analiz sistemleri kullanarak, bir "içinde-kuluçka" video mikroskobu hücre göç ve işgal otomatik ve gerçek zamanlı analiz sağlamak için kullanılabilir. Amacı bu kağıt, rapor ve hücre işgali ve geçiş eğitim için kullanılan iki deneyleri karşılaştırın etmektir: Boyden odası tahlil ve bir en iyi duruma getirilmiş vitro video mikroskop esaslı çizik tahlil yara.

Biz burada hücre işgali ve geçiş analiz etmek için iki farklı yöntem raporu. Şekil 1 Boyden odası deneyi gösterir. Ekler chemoattractant orta ile bir arkadaşı tabak içine yerleştirilir ve hücreleri CM tohumlari. Membran kaplamasız olabilir (geçiş tahlil) veya (Invasion tahlil) kaplı. Hücre s-cm üst odasına numaralı seribaşı. Alt odası CM ile bir chemoattractant girilir. Hücreleri önce katlama zaman sabittir.
<p class="jove_content" fo:keep-together.within...

Bu çalışmada cep işgali ve geçiş analizi için iki farklı yöntem raporları: Boyden odası tahlil ve vitro video mikroskobu tabanlı yara iyileşmesi tahlil. Bu iki deney protokollerde açıklanmış ve kendi yararları ve dezavantajları karşılaştırılır.

Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

Bu deneyin genel amacı, hücre istilası ve göçünü incelemek için kullanılan iki testi, Boyden odası testini ve optimize edilmiş bir in vitro video mikroskobu tabanlı çizik yarası testini raporlamak ve karşılaştırmaktır. Bu deneyler, en uygun yöntemin seçimi gibi istila ve göç çalışma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu optimize edilmiş in vitro video mikroskopi tabanlı çizik yara testinin ana avantajı, tedavi koşulları arasında tekrarlanabilir ve kesin bir karşılaştırma sağlamasıdır.Bu yöntem hücre göçünü ve istilasını değerlendirebilse de, iyileşme veya doku yenilenmesi gibi diğer çalışma alanlarına da uygulanabilir. Testin birinci gününden 72 saat önce, 175 santimetre karelik bir şişede 25 mililitre kültür ortamında 1/6 hücreye 10 kez tohumlayarak SQ20B hücrelerini hazırlayın. Hücrelerin 37 santigrat derecede% 80 hücre birleşmesine kadar büyümesine izin verin.Tripsinizasyon ve hücre sayımından sonraki birinci gün, hücreleri 25 santimetre karelik bir şişede, değerlendirilecek her koşul için üç mililitre kültür ortamında altı kez 10 ila 1/5 hücre hücre yoğunluğunda tohumlayın. Hücreleri 24 saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Ertesi gün, her şi

evaluation-cell-invasion-migration-process-comparison-video

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Yaygın olarak kullanılan, in vitro olarak hücre göçü ve işgali incelenmesi için oldukça erişilebilir yöntemler tarif edilmiştir. Birinci yöntem, hücre motilitesini büyüklüğüne hücre yara kapatma deneyidir. İkinci yöntem kemotaktik ve hücrelerin invaziv kapasitesini değerlendirir transwell göç ve istila testtir.

Vitro Hücre Göç ve Invasion Tahliller

Erken endotel hücre (EEC) göçünün araştırılması, bazı hastalıkların patofizyolojisini anlamak ve terapötik müdahale için potansiyel olarak yeni stratejiler belirlemek için önemlidir. Aşağıdaki protokol, EEC'nin araştırılması için uyarlanmış hücre göçünü değerlendirmek için teknikleri açıklamaktadır.

Toksik Kimyasalların Maruz sonra Endotel Hücre Göç Değerlendirilmesi

Bu protokol, aynı zamanda, bir polimer matrisi üzerinden bir ilacın difüzyon hızını belirlemek için kullanılabilir chemoattractants yanıt olarak hücre göçü ölçmek için özelleştirilebilir yöntemi göstermektedir.

Ölçme Hücre Göç Bir Özelleştirilebilir Odası

Bu iletişim kuralı hücreleri hücre microenvironment koruma sırasında bir üç boyutlu ortamda göç ve işgal yeteneklerini ölçmek için kullanılabilir bir ters dikey işgali tahlil açıklar. Bu tahlil nadir ve/veya hassas hücreler için uygundur.

Yukarı doğru hareket: Bir basit ve esnek Vitro üç boyutlu işgali tahlil iletişim kuralı

Bu el yazması kültürlü epitel hücre monolayers üzerinde yapılan nasıl kesi benzeri lezyonlar elverişli bir konuma sahip modeli şifa vitrogörüntüleme için tarafından confocal sağlayan, yarası. açıklar veya lazer tarama mikroskobu ve yüksek kaliteli sağlayabilir nicel ve nitel veri hücre davranış ve mekanizmaları geçişinde dahil çalışmak için.

Mikroskopi Vitro yara iyileşmesi sırasında epitel hücre göç değerlendirilmesi için yöntemleri temel

Burada bir otomatik optik kamera mikroskopla hücre göç vitro test etmek için bir yordam açıklanmaktadır. Kazı-kazan tahlil nerede çizik kapatılması için bir süre takip yaygın olarak kullanılmış. Optik mikroskop hücre göç güvenilir ve ucuz tespiti sağlar.

Kazı-kazan tahlil Vitro hücre göç bir otomatik optik kamera ile test etmek için en iyi duruma getirilmiş

Burada, kantitatif geçiş ve zamanla ve birden fazla tedavi koşullar altında işgal glioblastoma Beyin tümör kök hücrelerin ölçmek için canlı hücre görüntüleme teknikleri açıklar.

Canlı hücre görüntüleme deneyleri için çalışma Glioblastoma Beyin tümör kök hücre göç ve işgali

Geçerli protokol kanser hücre göç ve gerçek zamanlı olarak tek bir platformda işgali araştırma, kolayca tekrarlanabilir ve zamanı verimli bir seçenek hücre hareketlilik ve morfoloji çalışmaya sağlayan entegre bir yöntemini açıklar.

Otomatik bir canlı hücre Imager kullanarak basit geçiş/işgali iş akışı

Burada, primer fibroblastlar kullanarak in vitro çizik testve farelerde in vivo deri yara iyileşmesi test için bir protokol salıyoruz. Her iki tahliller in vitro ve in vivo yara iyileşmesini değerlendirmek için basit yöntemlerdir.

In Vitro ve In Vivo In Vivo Analizi Yara İyileşmesi için Scratch Migration Tahlil ve Dorsal Skinfold Odası

Ekipman yoğun yöntemler kullanılmadan hücre göçünün belirlenmesinde yeni bir yaklaşım sağlayan sıfırdan geçiş testini uygun maliyetli bir yöntem savuruyoruz. Bu protokolde fibroblastlar kullanılırken, ek hücre tipleri ve hücre göçü üzerindeki etkileri incelemek için uyarlanabilir ve kullanılabilir.

Maliyet Etkin ve Uyarlanabilir Çizilme Göçü Tsası

Bu çalışma, iki boyutlu (2D) çizik yara migrasyon testini ve üç boyutlu (3D) küresel filizlenme testini, RNA ekstraksiyonu ve immünositokimya dahil olmak üzere ilgili aşağı akış analiz yöntemleriyle birlikte, in vitro anjiyogenezi incelemek için uygun testler olarak sunmaktadır.

Çizik Yara Migrasyon Testi ve Sferoid Filizlenme Testinden Yararlanarak Anjiyogenezin Fonksiyonel ve Moleküler Düzeyde İncelenmesi

Öğrenin, hücre istilası ve göçünü değerlendirmek için Boyden odası ve video mikroskop tabanlı çizik yara analiz yöntemlerini karşılaştırın. Bu teknikler iyileşme ve doku rejenerasyonu çalışmalarında da uygulanabilir.

Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara

Daha fazla video keşfet