Name: Burun ve bronş sıvıları emilimini: hassas örnekleme insan solunum mukoza ve laboratuvar işleme örnekleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 54 s
Description: Öğrenin sentetik emici matris kullanarak nazal ve bronşiyal mukoza sıvısı örnekleme yöntemlerini. Bu hassas teknikler solunum hastalıklarında tanısal ve araştırma uygulamaları için standartlaştırılmış örnekleme sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Fonlama: Bu eser imparatorluk Ulusal Enstitüsü Sağlık Araştırma (NIHR) Biyomedikal Araştırma Merkezi (BRC için) NIHR sağlık koruma araştırma birimi (HPRU) anda Imperial College London'da solunum yolu enfeksiyonları içinde ortaklaşa finansman tarafından desteklenen Halk sağlığı İngiltere (PHE) ve NIHR imparatorluk hasta güvenliği translasyonel araştırma merkezi ile. Görüşler yazarlar ve ille bu NHS, NIHR, Sağlık Bakanlığı veya halk sağlığı İngiltere vardır.

Aşağıdaki protokolünde kullanılan teknikleri Batı Londra araştırma Etik Komitesi (referans numarası 15/lO/0444) tarafından onaylanmış olması.
1. burun emme (NA)
<ol><li>
NA örnekleme öncesi hazırlık
	<ol>
<li>Ne zaman NA taşıma, önce ellerinizi yıkayın ve eldivenler, tercihen hastanın önünde koymak.</li>
		<li>Kafa bir meşale kullanarak burun boşluğuna inceleyin ve klinisyen hastanın burun burun boşluğuna görselleştirmek için geri çekmek için onların baskın başparmak kullanın sahip. Not: Burun bir spekulum genellikle gerekli değildir.</li>
		<li>Burun boşluğuna ve aşağı örnekleme önce konka görselleştirin. Not: Siklikla (burun) kesit içinde yuvarlak değildir ve düz geriye doğru gidiyorlar. Genellikle, alt konka bir şişkinlik ya da burun lateral duvarındaki girinti olarak görülebilir nazal septum ile düz, düz medial duvarı şekillendirme. Temel epitel solunum yolu44basit bir siliyer epitel olduğundan örnek bu alt konka, istiyoruz.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
NA örnekleme
	<ol>
<li>Örnekleme zaman NA konka inferior karşı düz olmasını süsleme SAM yavaşça burun deliği, lumen başarılı.</li>
		<li>SAM nazal mukoza üzerine basılacak bir işaret parmağı kullanmak için donör sor. NA MLF emilir gibi bir hafif, olası göz sulama ile gıdıklama neden olabilir. Not: Yetişkinlerde, biz genellikle NA 60 için gerçekleştirmek s.</li>
		<li>MLF emilimini sonra burun deliği NA aygıtı kaldırın ve özgün tüpün içine geri koy.</li>
		<li>Laboratuvar hemen örneklerinde işlemek veya onları, bu iletişim kuralını, daha sonra detaylı olarak dondurma. Not: NA nazal Mukozal meydan modelleri çeşitli ve farklı airways hastalıkları incelenmiştir. Ancak, diğer solunum örnekleme yöntemleri dayalı doğrulamayı her çalışma ve hasta popülasyon için yapılmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. bronşiyal emme (BA)
<ol><li>
BA örnekleme öncesi hazırlık Not: BA Bronkoskopi paketindeki uzman personel tarafından gerçekleştirilir.<ol>
<li>Kateter BA aygıtı yerleştirmeden önce SAM ekstrüzyon ve kateter geri çekilmesi emin olun.</li>
		<li>Bir hastaya BA gerçekleştirmeden önce sahte BA Bronkoskopi simülatör davranış.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
BA örnekleme
	<ol>
<li>Trakea ve sağ ana bronş aşağı bronkoskop bronş intermedius, sadece sağ alt ve sağ orta LOB lige proksimal seviyesine geçmek. Not: hava yolu diğer sitelerle tatmak mümkündür rağmen genellikle bronş intermedius, örnek. Kateter ve SAM gözlemleyerek, bir bronkoskop ucunu göremiyorum. Bronkoskop istenen örnekleme sitesi ulaştı bir kez biz BA için aşağıdaki basit adımları izlemek.</li>
		<li>Kateter aşağı: beyaz ucu sadece hava yolu, en fazla 1 cm bronkoskop sonuna kadar distal görünene kadar bronkoskop çalışma kanalından BA kateter takın. Bronkoskop ve kateter ucu hava yolu Lümen ortasında tutun. Kateter ucu ve aşınma mukoza için riskini azaltmak için bronş mukoza arasında teması en aza indirmek için dikkatli olun.</li>
		<li>SAM OUT: Böylece SAM sağ orta veya sağ alt LOB hava yolu Lümen kalıptan çekilmiş BA aygıt tanıtıcısı düşürmek. Direkt görüş altında SAM hava yolu duvardaki MLF ile temas ediyor emin olmak için bronkoskop ucu viraj. SAM hava yolu içinde 30 Mukozal duvara düz bırakmak s.</li>
		<li>SAM inç: nemli SAM sonda düz ve değil bükülmüş sonuna kateter üzerinde olduğundan emin olmak için bronkoskop bakın. Gerekirse, kateter ve bronkoskop ipucu SAM düzeltmek için geri getirilebilir. Direkt görüş altında düz SAM yavaşça geri kateter geri çek. Not: SAM geri kateter geri çeker zorluk ise, tam aygıt SAM ile geri geri hava yolu dışında kalıptan çekilmiş.</li>
		<li>Kateter kadar: tüm kateter bronkoskop çalışma kanalından geri alıyorum.</li>
		<li>: SAM SAM steril makasla kesip kesip sonra bir cryotube buza koy. Bu örnekler bu protokolündeki daha sonra detaylı olarak değişen yöntemleri ile işlenebilir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. NA ve BA örnekleri işleme
Not: NA ve BA kaynaklanan örneklerinin laboratuvar işleme için çok sayıda seçenek vardır. Bu iletişim kuralları örnekleri daha sonra kullanmak üzere depolamak ve Sam MLF örnek elute için arıyorum.
<ol><li>
NA ve BA örnekleri hemen işleme seçenekleri
	<ol>
<li>Seçenek 1: nemli SAM daha fazla işleme önce bir kaç saat için buza saklayın.</li>
		<li>Seçenek 2: Hemen NA SAMs koleksiyonu derin dondurucu tüp. Benzer şekilde, kriyojenik şişeleri BA SAMs makas, örnekleme cihazı ile kaldırıldıktan sonra dondur.</li>
		<li>Seçenek 3: Müstakil SAM dondurucu doğrudan ve derin işleme öncesinde elüsyon arabellek (300 µL) yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
NA ve BA örnekleri için elüsyon arabellek seçenekleri Not: MLF örnekte çözümlenmesi için neler olduğunu elüsyon arabellek seçim bağlıdır ve dört ana alternatifler öneririz:<ol>
<li>İmmunoassay yordamlar için uygun bir önceden hazırlanmış tahlil arabellek kullanın. Böyle arabellekleri deterjan (% 0.05) az miktarda protein, Örneğin, sığır serum albumin (BSA) % 1 yanı sıra içermelidir.</li>
		<li>Böylece hücre lizis oluşur alternatif olarak, deterjan, daha büyük bir miktarı içeren bir arabellek kullanın. Not: Triton-X veya NP40% 1 konsantrasyonu içeren arabellekleri kullanıyoruz. Hücre lizis arabellekleri SAM eluted ve genellikle daha yüksek düzeyde sitokinler ve kemokinler sonuç hücre içi ve hücre dışı sitokinler etkinleştirin. Bu arabellekleri aynı protein içermelidir ve BSA ile % 1'e yapılır.</li>
		<li>Gibi kantitatif PCR viral RNA veya ölçüm ana bilgisayar RNA, RNA ölçümler için doğrudan nemli SAM'a RNA ayıklama arabellek ekleyin. Not: Chaotropic RNA ayıklama arabellekleri proteinler denatures guanidinium içerir. İmmunoassay veya hücre lizis arabellekte bulunan eluted MLF sıvı RNA ayıklama arabellek eklemek için bir alternatiftir.</li>
		<li>Trifluoroacetic asit gibi organik çözücüler lipidler ve metabolitleri, kütle spektrometresi tarafından değerlendirilmesi için çıkarım için kullanın. Not: Tüm bu ayıraçlar ayrıntılarını malzemeler bölümünde yer almaktadır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Elüsyon tekniği
	<ol>
<li>Herhangi yukarıdaki elüsyon teknikleri için istenen ekstraksiyon arabellek ile birlikte 2 mL mikro-santrifüj tüpü SAM takın.</li>
		<li>Girdap karışımı 30 için örnek s SAM gevşek bağlı sıvı ve biomolecules yıkamak için.</li>
		<li>Tam örnek malın güvenliğini garantiye almak için nemli SAM yıkamak için kullanılan aynı 2 mL mikro-santrifüj tüpü ekler spin filtre Mini sütun ekleyerek santrifüj elüsyon gerçekleştirin. Not: İki tür spin filtre Mini sütun kullanılabilir. İlki sadece bir plastik kafes, hangi SAM yerinde tutan, sıvı dolu elüsyon izin içerir. Alternatif olarak, eğer bulaşıcı malzemeleri ile çalışma, 0,22 µm gözenek boyutu ile spin filtreleri kullanın. Bu filtrelerin örnekleri sterilize ve örnekleri ile şüpheli Mikobakteriyel Enfeksiyon için uygundur. Ancak, bu filtreleri ile arabellek bağlama filtresi arabulucu tarafından non-spesifik etkileşim en aza indirmek için önceden inkübe olmalıdır.</li>
		<li>Steril forseps nemli SAM spin filtre aktarmak için kullanın. Forseps kontaminasyonu önlemek için örnek arasında değiştirin.</li>
		<li>Mini santrifüj 16.000 x g de 20 dk santrifüj örnekleri 4 ° C'ye soğutmalı</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Özet örnek Protokolü
	<ol>
<li>Laboratuvarda, 2 mL mikro-santrifüj tüpleri örnek koleksiyonu için etiket ve elüsyon Arabellek istenen hacmi ekleyin (NA için; genellikle 300 µL BA için 100 µL). Kapağı kapatın ve Buza koyun.</li>
		<li>(Hemen veya laboratuarda) SAM örnekleme takip forseps kullanarak tanıtıcıdan kaldırılır ve toplama tüp (önceki adımda üretilen) içeren arabellek içine yerleştirilir. Microcentrifuge tüp kapağı güvenli bir şekilde kapatılır ve örnekleri, buz, işlenmesi için laboratuvar aktarmak olun.</li>
		<li>SAM ve elüsyon arabelleğinden 30 için onların transferi konteyner ve girdap karışımı içeren tüpler kaldırın s.</li>
		<li>Steril forseps kullanarak, SAM kaldırmak ve bir spin sütununa (veya 0,22 µm selüloz asetat filtre olmadan) yerleştirin.</li>
		<li>Koleksiyon tüpünden elüsyon arabellek toplamak ve muhafaza.</li>
		<li>SAM ile spin sütun özgün koleksiyonu tüpte yerleştirin (veya steril filtreleme Eğer yeni bir örnek) ve koleksiyon arabellek sütun dönmeye ekleyin. Bu şekilde, yıkama sıvısı içinde spin sütun Sam örnek elute için yardımcı geri toplama tüp içine geçecek.</li>
		<li>Örnekler santrifüj kapasitesi ile kapalı kapakları (16.000 x g, 20 dk, 4 ° C).</li>
		<li>Örnekler santrifüj çıkarın ve bir raf yerleştirin.</li>
		<li>Tüplerin kapalı kapağını açın ve SAM içeren spin sütun kaldırmak. SAM ve spin sütununda uygun bir atık konteyner atın.</li>
		<li>Dikkatle tüpün içine içinde bulunan eluate kriyojenik etiketli aliquot tüpleri. Eluate hacmi ve birimin her aliquot kaydedin.</li>
		<li>Mühürlü kriyojenik tüpler-80 ° C dondurucu aktarın ve dik kadar kullanmak depolayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Mevcut hava yolu örnekleme teknikleri sonuçlarından son derece değişken olarak kabul edilmektedir; Alternatif örnekleme teknikleri araştırma içinde bu alan5standart hale getirmek için ihtiyaç vardır. NA ve BA MLF örnekleme non-invaziv bir şekilde izin ve sağlıklı ve hastalıklı airways bağışıklık yanıtları ölçmek için heyecan verici bir potansiyele sahip. Bu tekniklerin daha büyük tolerabilite, örnekleme hızı, örnekleme, sık sık tekrarlamak için yeteneği dahil olmak üzere varolan teknikleri üzerinde çok sayıda potansiyel avantajları arası kullanıcı değişkenliği daha düşük teklif ve seyreltme bağışıklık arabulucu5 azaldı . Emme ve işleme tekniği kullanılan süresi her çalışma için en iyi duruma getirilmiş ve titizlikle örnekleme olaylar arasında yapılmaktadır. Ayrıca, söz konusu olduğunda BA, örnekleme hava yolu içinde sitenin dikkatle bireyler arasında yinelenmelidir.
NA ve özellikle BA, klinik araştırma için hala nispeten yeni teknikler vardır. Ancak, bu teknikler Faydaları bunların kullanımı alternatif teknikleri5karşı dikkatli doğrulama dahil olmak üzere çok sayıda çalışmalarda sonuçlandı. Bu cihazlar şimdi Cihazlar CE işaretli solunum araştırma yaygın kullanım için hazır olarak mevcuttur. NA ve BA alternatif örnekleme teknikleri daha çok daha küçük örnek birimleri içinde sonucu iken, daha yüksek elde edilen konsantrasyonları düşük bereket için bağışıklık arabulucu büyük duyarlılık neden olabilir.
Bağlı olarak istenilen aşağı akım uygulamaları, NA ve BA örnekleri doğrudan çalışma fizibilite klinik araştırma ortamında geliştirilmesi daha sonra işlenmek donmuş olabilir. Örnek işleme için protokol Ayrıca belirli aşağı akım uygulamaları uyacak şekilde uyarlanabilir. Önerilen işleme teknikleri protein veya lipid bağışıklık arabulucu veya nükleik asitler topluluğu için kullanılabilir ancak her çalışma için optimize edilmelidir. Özellikle, MLF ile farklı arabellekleri eluted. İlk olarak, immunoassay arabellek Mukozal sitokinler, kemokinler ve antikorlar6,45ölçmek için kullanılabilir. Arabellekleri deterjan düzeyler ile hücre lizis oluşur, intra hücresel sitokinler eklenmesi izin güvence altına almak için de kullanılabilir. Chaotropic RNA ayıklama arabellekleri viral enfeksiyon, viral belirlenmesi için kullanılması gereken yük, mRNA ve microbiome ana. Alternatif olarak, lipidomics ve kütle spektrometresi organik çözücüler kullanılabilir.
Sonuç olarak, doğrudan emilimini MLF Mukozal yüzeyler Mukozal hastalıklarda solunum, mide-bağırsak, idrar ve diğer potansiyel kullanımı ile heyecan verici bir tekniktir. Ancak, bu umut verici emme teknikleri örnekleme ve bireysel deneyleri (biyolojik) her hastalık ayarı için teknik işleme kesin doğrulama gerektirir. Buna ek olarak, bu roman hassas Mukozal örnekleme teknikleri geleneksel örnekleri, dayalı doğrulamayı gibi kan, nefes ve balgam gerektirir. Bu teknikler ile MLF mikrop, sitokinler, kemokinler, prostanoids ve antikorlar ölçmek için kullanılabilir.

Çoğu solunum yolu hastalıkları bir enflamatuar yanıt neden ve alerjik rinit, viral ve fungal enfeksiyonlar, tüberküloz, astım, kronik obstrüktif akciğer hastalığı, akciğer solunum Mukozal yüzeyinden örnekleme için acil bir ihtiyaç olduğunu fibrozis ve akciğer kanseri 1. Nazofarenks aspiratı (NPA), nazal lavaj ve bronchoalveolar lavaj (BAL) alt ve üst hava yolu örnekleme için ortak teknikler vardır. Ancak, bu teknikler zavallı tolerabilite, seyreltme inflamatuar arabulucu ve örnekleme2sık sık tekrarlamak için yetersizlik de dahil olmak üzere önemli sorunlar mevcut. NPA örnekleme için bir alternatif temizleme bezi, naylon akın etti, pamuk, kullanımı veya onlar neden rahatsızlık ve hasar nazal epitel ve bazı durumlarda geri dönüşü olmayan bağlama beri Rayonu3,4, ama bunlar da sınırlamalar, sahip inflamatuar aracılar5. Bu teknikler genellikle bir saatten fazla seri olarak yinelenemez ve alternatif teknikleri daha düşük bereket sitokinler ve kemokinler5,6tespiti için etkili olabilir. Ayrıca, bu teknikleri ile ilişkili kullanıcı değişkenlik veri, büyük hasta tabur gereksinim olarak ortaya çıkan tutarsızlıkları oluşturabilir.
Alternatif olarak, doğal ve sentetik sünger kullanarak emme teknikleri MLF Mukozal yüzeyler arasında toplamak için kullanılmaktadır. Oftalmik sünger oluşur (örneğin, Weck-cel) doğal selüloz örnek tükürük, servikal ve vajinal salgılar7için kullanılmıştır. Buna ek olarak, polivinil alkol (PVA) sentetik sünger yaptı ve hydroxylated polivinil asetat (HPVA) faydalanılan8olmuştur. Yedi farklı dinsel malzeme poliüretan mini-sünger insan gözyaşları10toplamak için kullanılan süre antikorlar9, ölçme öncesinde oral sıvı örnekleme için karşılaştırılmıştır.
Filtre kağıdı Pamuk bitki doğal selüloz oluşan yaygın Alam ve arkadaşları, 1992-11,12,13,14öncü kağıt beri burun salgıları emmek için kullanılmıştır, 15,16,17. Filtre kağıdı diskler (örneğin Shandon) filtresi kartlardan üretilen ve histamin ve sitokinler sonra burun alerjen zorluklar kontrollü ve doğal alerjen pozlama18,19 ile ölçmek için kullanılan ,20,21. Ancak, filtre kağıdı farklı gruplar halinde protein bağlayıcı ve sitokinler serbest bırakmak için bazı başarısız onların derecesi değişir. Sentetik dinsel matrisi (SAM) kullanarak yöntemleri bu nedenle gelişmiş2,22,23olmuştur. SAMs şimdi genellikle burun MLF almak için na tarafından kullanılır Bu emici malzemelerdir rahat kullanın ve MLF bile iltihaplı burun uzun bir süre sık aralıklarla elde edebilirsiniz.
Burun emme hassas Mukozal MLF örnekleme üst solunum yolu içinde için bir SAM kullanarak örnekleme bir şeklidir. NA Cihazlar CE işaretli tıbbi cihazlar Medikal dereceli malzemelerden temiz odalar kullanarak olarak imal edilmiş olup, toz ve alerjenleri serbest. NA örnekleyici bir kolu ve SAM bir steril cryotube oluşur. SAM polimerler, genellikle lifleri, oluşur ama de köpük mevcuttur ve bunlar yumuşak ve dinsel, hızlı örnek koleksiyon için esneklik ile seçilir. SAMs absorbe salgıları verimli elüsyon izin vermek için en az protein bağlayıcı var. NA üzerinde her yaştan bağış yapılabilir çok nazik, non-invaziv bir tekniktir. Buna ek olarak, seri örnekleme, birkaç dakikada bile, mümkündür. NA karşı varolan üst solunum yolu örnekleme teknikleri5 doğrulandı ve tekrarlayan örnekleme Kinetik veri meydan alerjen23,24,25ile hava yolu takip nesil izin verdi, Bakteriyel endotoksin26 ve viral türü TLR agonistler (Jha, A. vd., el yazması hazırlık). NA da doğa tarihi Atopi27,28,29 araştırmak bebeklerde ve viral bronşiyolit30kullanılmıştır.
Bronchoscopic microsampling (BMS) Olympus31,32,33tarafından geliştirilen alt solunum yolu MLF koleksiyonunda için bir yöntemdir. Ne yazık ki, bu BMS sistem sadece Japonya'da lisanslıdır. Olympus tedarik iki BMS sistemleri: fibröz hydroxylated polyester (FHPE) ile bir sonda34,35,36,37ve bir pamuk ile bir sonda33,38, 39 , 40 , 41 , 42 , 43. bir büyük engel astımı olan hastalarda kullanılan BMS sonda Mukozal temas kanama, tüm örnekleri kanla kontamine yarısı neden olmuştur. Yazarlar örnek MLF periferik airways bu BMS sistemden astım hastaları43yılında kullanarak mümkün olduğunu reddetmektedir.
Alternatif olarak, BA rhinovirus6olan astımlı bireylerde deneysel enfeksiyonu takip dahil olmak üzere alt solunum yolları, bronchoscopic incelenmesi sırasında gerçekleştirilen bir yumuşak SAM kullanarak geliştirdik. BA aygıt oluşur: bir dış içi boş kateter, bu SAM dışarı üstünde harekete geçirmek bir el parça ve SAM onun ucunda sahip bir merkez plastik kılavuz tel. NA, gelince BA kitleri temiz odalar kullanarak tıbbi malzemelerden üretilmektedir ve toz ve alerjenleri serbest. Ayrıca, CE işaretli ve gama radyasyona maruz sağlanan aygıtlardır. SAM şerit yumuşak, dinsel ve hızlı örnek koleksiyon için esneklik vardır. Ayrıca absorbe salgıları verimli elüsyon izin vermek için en az protein bağlayıcı vardır. Cihazın bir bronkoskop çalışma kanalı ile uygun ve için hızla kullanılabilir ve doğru bir şekilde MLF hava yolu içinde ilgi belirli siteleri, örnek. BAL veya BMS aksine, BA iletişim kanama veya ek hasta rahatsızlık sonrası yordam yol açmaz.
Dikkatli bir değerlendirme NA ve BA örnekleri işleme için verilmelidir. Örnekleri-ebilmek var olmak doğrudan donmuş ve toplu olarak işlenen veya hemen işlenebilir. Konak hücre RNA ilgili ve işlem türü uzun sitokinler, kemokinler ve immünglobulin veya viral, bakteriyel, elutions de dahil olmak üzere bazı aşağı akım uygulamaları doğru uygun olabilir. Biz klinik toplama ve laboratuvar işleme teknikleri klinik araştırmacılar için bir rehber olarak NA ve BA ile ilgili mevcut.

<table><tbody><tr><td>Nazosorpsiyon (yetişkin, 7mm genişlik)</td><td>Hunt Developments</td><td>NSFL-FXI-11</td><td>Farklı hasta grupları/yaşları için farklı boyutlar mevcuttur.</td></tr><tr><td>Bronkosorpsiyon</td><td>Avı Gelişmeleri</td><td>BSFL-FXI-11</td><td>Minimum bronkoskop kanal boyutu 2mm; Maksimum çalışma uzunluğu 815mm</td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Costar&nbsp; Döndürme-X&nbsp; santrifüj tüp filtreleri (membransız)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>CLS9301-1000EA</td><td></td></tr><tr><td>Corning&nbsp; Costar&nbsp; Döndürme-X&nbsp; santrifüj tüpü filtreleri (0.22um membran)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>CLS8160-24EA</td><td>Enfeksiyon riski olan numunelerin sterilizasyonu için.</td></tr><tr><td>Tahlil (elüsyon) tamponu</td><td>Millipore</td><td>AB-33k</td><td>Millipore web sitesinde listelenmemiştir, ancak sorgulama veya Cedarlane gibi genel laboratuvar tedarik şirketleri aracılığıyla edinilebilir. %0,05 Tween-20 ve %1 BSA içerir.</td></tr><tr><td>NP-40 Hücre lizis tamponu</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>FNN0021</td><td>Sığır serum albüminini %1'e (a/h) ekleyin. Daha yüksek mutlak arabulucu seviyelerini geri kazanabilir.</td></tr><tr><td>Tampon RLT (RNA ekstraksiyonu)</td><td>Qiagen</td><td>79216</td><td>Nazosorpsiyon ve bronkosorpsiyon örneklerinden RNA'nın geri kazanılmasına izin verir.</td></tr><tr><td>Trifloroasetik asit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>302031-100ML-M</td><td>HPLC uygulamalarında kullanılacak numunelerin elüsyonu için</td></tr><tr><td>2.0ml mikro santrifüj tüpleri</td> Spin-X tüp filtreleri için <td>Costar</td><td>3213</td><td>2ml tüpler gereklidir, geleneksel 1.5ml tüpler bunlara uymaz.</td></tr></tbody></table>

burun ve bronş sıvıları emilimini: hassas örnekleme insan solunum mukoza ve laboratuvar işleme örnekleri

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

Burun emme (NA) ve bronş emme (BA) yöntemlerini insan solunum yolu Mukozal astar sıvı (MLF) emmek için sentetik dinsel matrisler (SAM) kullanın. NA konka aşağı sıvı emer ve en az düzeyde rahatsızlık neden olan non-invaziv bir tekniktir. NA sık üst solunum yolu örnekleme tekrarlamak için yeteneği ile tekrarlanabilir sonuçlar doğurdu.
Buna karşılık, nazofarenks aspirasyon (NPA) ve geleneksel ev temizliği, gibi solunum mukoza örnekleme farklı yöntemi daha invaziv ve daha büyük veri değişkenlik neden olabilir. Diğer yöntemleri kısıtlamaları bulunmaktadır, örneğin, biyopsi ve bronş yordamlar invaziv, balgam içeren birçok ölü hücreleri ve الرسالة gerektirir, su ve tükürük dışarı solunan nefes Yoğuşma (EBC) içerir ve lavaj örnekleri seyreltik ve değişken.
BA bronkoskop Kliniği çalışma kanalı aracılığıyla gerçekleştirilebilir. Örnekleme iyi tolere edilir ve hava yolu içinde birden çok site yapılabilir. BA bronchoalveolar lavaj (BAL) örnekleri daha az sulu olmak MLF örnekleri sonuçlanır.
Bu makalede, NA ve BA teknikleri, hem de laboratuar işleme ölçülen istenen aşağı akım biyomarker uyarlanabilir elde edilen örneklerin gösterilir. Bu emme teknikleri klinik solunum araştırmalarında kullanılan geleneksel örnekleme teknikleri için yararlı alternatifleri vardır.

NA çalışmaları için bir dizi kolayca kullanılmıştır ve non-invaziv Mukozal inflamasyon ölçün. Alerjen burnuna yönetiminin, prostaglandin D2 (PGD2) düzeyleri yükselmeye ve mast hücresi degranulation (Thwaites vd., el yazması hazırlık) doğrultusunda (şekil 1), birkaç dakika içinde düşüş görülebilmektedir. Ayrıca, arabulucu IL-5 ( 24izni ile yayımlanmaktadırŞekil 2,), gibi tip-II iltihabı burun alerjen challenge23,24saat içinde ölçülebilir. Alerjik astımlı ve sağlıklı kontrol deneysel enfeksiyonunda NA arabulucu, interferon-gamma (IFN-γ), dahil olmak üzere bir panel ölçmek için 7 gün (şekil 3,) 6izni ile yayımlanmaktadır boyunca kullanıldı. Ayrıca, bebekler doğal respiratuvar sinsityal virüs (RSV) enfeksiyonunda NA göre sigara RSV bebekler bronşiyolit ve sağlıklı kontrol ( ile IFN-γ gibi inflamatuar sitokinlerin düzeyleri ile ilişkilendirilecek RSV gösterdi Şekil 4, yazdırılan 30izniyle). İlginçtir, bu ayrımcılık RSV ve sigara RSV bronşiyolit arasında zaman eşlemeli NPA örnekleri (şekil 4) önemli değildi.
BA rhinovirus ile Alerjik astımlı deneysel enfeksiyon sırasında da kullanıldı. IL-10 ve IL-5 gün rhinovirus enfeksiyon, düzeyleri, IFN-γ, CXCL11, 4 satır taban çizgisi (şekil 5; yükseltilmiş A, B, C ve D, sırasıyla). Ayrıca, bu teknik Alerjik astımlı alt havayolu yükseltilmiş IL-5 düzeyleri sağlıklı kontrol (şekil 5 d) (şekil 5 6izni ile yayımlanmaktadır) göre rhinovirus enfeksiyon sırasında gösterdi.
Bu temsilci sonuçlar % 0.05 ara-20 ve % 1 BSA içeren tahlil tampon kullanarak eluted örnekleri oluşturulan ( Tablo malzemelerigörmek).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig1.jpg"> Resim 1 : Hızlı üretimi ve prostaglandin D2 burun alerjen meydan takip yetkisi. Burun emme eluates seri örneklerinde burun alerjen meydan okuma ile Timothy çimen poleni takip itibaren ölçülen prostaglandin D2 (PGD2) düzeyleri (n = 5). Her satır veri tek bir kişi temsil eder. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig2.jpg"> Resim 2 : IL-5 burun alerjen meydan takip Kinetik ölçüm. Burun alerjen meydan takip seri burun emme örneklerinde üretim IL-5. Üç alerjen meydan okuma yürütülen çalışmalar, katılımcılar ile tekrar (n = 19) plasebo (mavi) alma, düşük doz (10 mg) oral prednizon (turuncu) veya yüksek doz (25 mg) oral prednizon (kırmızı) alerjen yönetim önce bir saat. Geometrik ortalama satırları belirtmek ve hata çubukları tüm katılımcıların % 95 güven aralıkları vardır. (Şekil izninden Leaker vd., Mukozal İmmünoloji, 2017 ile yeniden basıldı). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig3.jpg"> Şekil 3 : Interferon γ indüksiyon rhinovirus enfeksiyon sırasında. Sağlıklı yetişkinlerin enfeksiyon mücadele sırasında (n = 11, mavi) ve Alerjik astımlı (n = 28, kırmızı) rhinovirus-16 ile burun emme örnekleme interferon-γ (IFN-γ) düzeylerini ölçmek için kullanıldı. Veri hata çubukları interquartile aralıkları ifade eden bireylerin ve B) medyan düzeyleri A) pişmemiş spagetti araziler temsil edilir. (Şekil Hansel ve ark. izni ile yayımlanmaktadır 6). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig4.jpg"> Şekil 4 : Nasosorption ayrımcılık bebeklerde RSV enfeksiyonu ile ilişkili yükseltilmiş Interferon γ. Burun emme ve nazofarenks aspirasyon (NPA) solunum sinsisyal virüs (RSV) enfeksiyonu ile ilişkili bronşiyolit bebeklerde interferon γ düzeylerini ölçmek için kullanılmıştır (kırmızı, n = 12), bir sigara RSV solunum patojen (yeşil, n = 12) ve sağlıklı denetimleri (mavi, n = 9). Veriler analiz Kruskall Wallis testi ile Dunnlar düzeltme birden fazla karşılaştırmalar için kullanma (***p&lt; 0.001). Satırları gösterir medyan değerleri ve hata çubukları interquartile aralıkları. (Şekil Thwaites vd izninden modifiye 30). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56413/56413fig5.jpg"> Şekil 5 : Bronş emme örneklerinde rhinovirus enfeksiyon sırasında inflamatuar arabulucu. Sağlıklı kontrol rhinovirus-16 enfeksiyonu takip (n = 10, mavi) ve Alerjik astım gönüllü (n = 23, kırmızı), bronş emme düzeyi A) IFN γ, B) CXCL11, C) IL-10, D) IL-5 temel ve günde 4 enfeksiyon ölçmek için kullanıldı. Veri analiz Wilcoxon tarafından rank testi (eşleşen örnekleri) ve Mann-Whitney testi (eşsiz örnekleri) imzaladı. Şekil Hansel ve ark. izni ile yayımlanmaktadır 6 <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56413/56413fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Bu el yazması burun ve bronş emme teknikleri, özellikle alt ve üst hava yolu Mukozal astar sıvı (MLF) örnek için sentetik dinsel matrisler (SAM) kullanarak açıklar. Bu yöntemleri daha iyi standardizasyon ve tolerabilite mevcut solunum örnekleme teknikleri daha sağlar.

Burun ve bronş sıvıları emilimini: hassas örnekleme insan solunum mukoza ve laboratuvar işleme örnekleri

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

Bugün, mukozal astar sıvısını emmek için sentetik bir emici matris kullanan bir hassas mukozal örnekleme şekli olan nazosorpsiyon tekniğini göstereceğiz. Nazosorpsiyon örnekleyicisi, steril bir kriyotüp içinde bir tutamak ve SAM'den oluşur. SAM, elyaf veya köpük polimerlerden oluşur ve numune toplama için hızlı fitilleme ile yumuşak ve emici olacak şekilde özel olarak seçilmiştir.SAM'ler ayrıca, emilen sekresyonların verimli bir şekilde elüsyonunu sağlamak için minimum protein bağlanmasına sahiptir. Nazosorpsiyon, bebekler de dahil olmak üzere her yaştan hastaya uygulanabilen çok nazik, noninvaziv bir tekniktir. Ek olarak, birkaç dakikada bir bile seri örnekleme mümkündür.Nazosorpsiyon yaparken önce ellerinizi yıkamalı ve tercihen hastanın önünde eldiven giymelisiniz. İlk olarak, burun boşluğu incelenir. Bir kafa feneri kullanılmasını ve klinisyenin burun boşluğunu görselleştirmek için hastanın burnunu geri çekmek için baskın olmayan baş parmağını kullanmasını öneririz.Nazal spekulum genellikle gerekli değildir. Burun boşluğuna bakarsanız, burunlar veya burun delikleri enine kesitte yuvarlak değildir ve düz bir şekilde geriye doğru giderler. Genellikle alt konkayı bir çıkıntı, burun deliğinin yan duvarında bir girinti olarak görürsünüz ve nazal septum pürüzsüz, düz medial duvarı oluşturur.Altta yatan epitel solunum yollarının basit bir siliyer epiteli olduğu için bu alt konkadan örnek almak istiyoruz. Numune alırken, nazosorpsiyon SAM'ı lümenden nazikçe geçirilir ve alt konkalara karşı düz olacak şekilde yönlendirilir. Ardından SAM'ı burun mukozasına bastırmak için işaret parmağını kullanın.Bu, MLF emilirken olası göz sulanması ile hafif bir gıdıklanmaya neden olabilir. Genellikle zamanlanmış 60 saniyelik bir absorpsiyon kullanırız. Nazosorpsiyon cihazı daha sonra burun deliğinden çıkarılır, kriyotüpe geri konur ve hemen buz üzerinde saklanabilir ve daha sonra derin dondurulabilir.Alternatif olarak, MLF'yi hemen elüte etmeye devam edebilirsiniz. Nazosorpsiyon, çeşitli nazal mukozal zorluk modellerinde ve ayrıca farklı hava yolu hastalıklarında incelenmektedir. Bununla birlikte, bu nispeten yeni yöntem, diğer solunum örnekleme yöntemlerine karşı hala resmi doğrulama gerektirmektedir.Bronkosorpsiyon tekniği, bronşun mukozal astar sıvısını örneklemek için sentetik bir emici matris kullanır. Yöntem, uzman personel tarafından fiberoptik bronkoskop aracılığıyla gerçekleştirilir. Bronkosorpsiyon cihazı, merkezi bir plastik kılavuz tel ile harici bir içi boş kateterden oluşur.Bunun sonunda, el aletinin etkinleştirilmesi üzerine ekstrüde edilebilen bir SAM vardır. Nazosorpsiyon gibi, SAM şeridi de yumuşak ve emicidir ve numune toplama için hızlı fitilleme özelliğine sahiptir. Ayrıca, emilen salgıların verimli bir şekilde elüsyonuna izin vermek için minimum protein bağlanmasına sahiptir.Bronkosorpsiyon cihazını bronkoskoptan aşağı yerleştirmeden önce, SAM'ın ekstrüde olup olmadığını ve katetere kolaylıkla geri çekildiğini kontrol etmek olağandır. Şimdi bir bronkoskopi simülatörü kullanarak bronkosorpsiyon yöntemini göstereceğiz. İlk olarak, bronkoskopu trakeadan geçirerek sağ ana bronşa ve sağ alt ve sağ orta lobların bölünmesinin hemen proksimalindeki bronş intermedius seviyesine geçiren standart bir bronkoskopi yapılır.Bu seviyeye yerleştirildikten sonra beş adım izlenir. Bir, kateter aşağı. Bronkosorpsiyon kateterini, bronkoskopun ucunun ucuna en fazla bir santimetre distal olacak şekilde hava yolunda beyaz uç görünene kadar bronkoskopun çalışma kanalından geçirin.Bronkoskop ve kateter ucunu hava yolunun lümeninin merkezinde tutun. Mukozal hasar riskini azaltmak için kateter ucu ile bronş mukozası arasındaki teması en aza indirmeye dikkat edin. İki, SAM dışarı.Bronkosorpsiyon cihazının tutamağına bastırın, böylece SAM şeridi sağ orta veya sağ alt lob hava yolunun lümenine ekstrüde edilir. Doğrudan görüş altında, SAM'ın hava yolu duvarındaki mukozal astar sıvısı ile temas ettiğinden emin olmak için bronkoskopun ucunu bükün. SAM şeridini hava yolu içinde, zamanlanmış 30 saniye boyunca mukozal duvara düz bir şekilde bırakın.Üç, SAM içeride. Doğrudan görüş altında, SAM'ı doğrudan katetere geri çekin. Geri çekerken, nemli SAM probunun düz olduğundan emin olun.Gerekirse, SAM'ı düzeltmek için kateter ve bronkoskop ucu geri getirilebilir. SAM'ın geri çekilmesinde zorluk varsa, SAM ekstrüde edilmiş tüm cihazı hava yolundan geri çekin. Dört, kateter yukarı.Tüm kateteri bronkoskopun çalışma kanalından çekin. Beş, SAM'ı kesin. SAM steril makasla kesilir, bir kriyotüpe konur ve derin dondurulmadan veya doğrudan ayrıştırılmadan önce hemen buzun üzerine yerleştirilmelidir.Aşağıdaki video klip, bir araştırma bronkoskopisi geçiren bir hastanın hava yoluna bir SAM'ın ekstrüzyonunu göstermektedir. Bronkosorpsiyon şu anda çeşitli farklı akciğer hastalıklarında incelenmektedir. Bu hassas mukozal örnekleme yönteminin tanısal çalışma ve hasta tabakalaşması ve izlenmesinde yararlı olacağını umuyoruz.Nazosorpsiyon ve bronkosorpsiyon sonrası laboratuvar işlemleri. Sentetik Emici Matristen Mukozal Astar Sıvısının Elüsyonu. Bugün, nazosorpsiyon ve bronkosorpsiyon gibi noninvaziv mukozal örnekleme tekniklerinden sonra laboratuvar numunesi işlemenin genel prensiplerini göstereceğiz.Özellikle, mukozal astar sıvısı örneğini sentetik emici matristen nasıl ayrıştırdığımızı göstereceğiz. Toplama noktasında numuneler laboratuvara taşınmak üzere buz üzerine yerleştirilmelidir. Numuneler hemen işlenebilir veya daha sonraki bir tarihte elüsyon için orijinal numune tüpünde doğrudan derin dondurucuya yerleştirilebilir.Acil işlem yapılıyorsa, numune buz üzerinde orijinal numune tüpünde laboratuvara aktarılabilir. Veya SAM ayrılabilir ve toplama noktasında elüsyon tamponuna yerleştirilebilir ve daha sonra buz üzerinde laboratuvara aktarılabilir. Numuneler, işlenmeden önce birkaç saat boyunca tampon içinde veya numune tüpü içinde buz üzerinde kalabilir.SAM'ın santrifüjleme ve spin elüsyonundan önce bir yıkama adımı, numune verimini optimize etmeyi amaçlar. Bunu başarmak için SAM, istenen ekstraksiyon böceği ile birlikte bir Eppendorf tüpüne yerleştirilir. Numune daha sonra gevşek bir şekilde bağlanmış sıvıların ve biyomoleküllerin SAM'ını yıkamak için bir vorteks karıştırıcı üzerinde 30 saniye karıştırılır.Tam numune geri kazanımını sağlamak için, daha sonra nemli SAM, yıkama için kullanılan aynı Eppendorf tüpünün içindeki bir spin ekine eklenerek spin elüsyonu gerçekleştirilir. Bu prosedür için temiz forseps kullanılmalı ve kontaminasyonu önlemek için numuneler arasında değiştirilmelidir. Bu yöntem, sıvıyı SAM'den çıkarmak için santrifüjleme kullanır.Numuneleri dört santigrat dereceye kadar soğutulmuş bir santrifüjde 16.000 g'da 20 dakika santrifüj ediyoruz. Kullanılan elüsyon hatası, istenen uygulama tarafından belirlenecektir. Genellikle protein içeren amino tahlil tamponu veya RNA lizis tamponu kullanırız.İki tip sıkma filtresi kullanılabilir. Birincisi, yalnızca SAM'ı yerinde tutan ve sıvıların tam olarak elüsyonuna izin veren plastik bir ağ içerir. Alternatif olarak, bulaşıcı malzemelerle çalışılıyorsa, 0,2 mikrometre gözenek boyutuna sahip spin filtreleri kullanılabilir.Bu filtreler, enfekte olmuş numuneleri dekontamine eder ve mikrobakteriyel enfeksiyon şüphesi olan numuneler için uygundur. Bu tür filtreler gerekiyorsa, numunenin eklenmesinden önce proteinli tamponun filtreden geçmesine izin verilen bir ön inkübasyon adımının dahil edilmesi önemlidir. Bu adım, spesifik olmayan protein absorpsiyonu ile aracıların filtreye bağlanmasını en aza indirir.Aşağıda, ikinci sınıf patojenler de dahil olmak üzere, dekontaminasyon adımı gerektirmeyen numunelerin nazosorpsiyon ve bronkosorpsiyon işlemleri için laboratuvarımız tarafından kullanılan örnek bir yöntem yer almaktadır. Birinci adımda, SAM, 30 saniye boyunca uygun tampon ve girdap içeren bir Eppendorf'a yerleştirilir. Nazosorpsiyon için tipik olarak 300 mikrolitre tampon ve bronkosorpsiyon için 100 mikrolitre kullanırız.İkinci adımda, SAM forseps kullanılarak çıkarılır ve SAM'ı yıkamak için kullanılan tamponla birlikte plastik bir ağ filtre kabına yerleştirilir. Üçüncü adımda, SAM'ı içeren plastik ağ filtre kabı orijinal Eppendorf'a geri gönderilir. Dördüncü adım, filtre kabı, tampon ve SAM içeren Eppendorf, dört santigrat derecede 16.000 g'da 20 dakika santrifüjlenir.Santrifüjlemeyi takiben, SAM içeren filtre kabı çıkarılır ve atılır. Elute daha sonra analiz edilmek üzere serbest bırakılabilir ve derin dondurulabilir. Nazosorpsiyon örneklemesi bir dizi klinik solunum araştırma ortamına uygulanmıştır.Bu, prostaglandin D2 ve interlökin 5 gibi nazal alerjen mücadelesi sırasında inflamatuar mediatörlerin ölçümlerini içerir. Bu meydan okuma modeli ayarlarında daha da önemlisi, nazosorpsiyonla örnekleme, örneklemenin birkaç dakikada bir tekrarlanabildiği aracı seviyelerinin sık sık kinetik profilinin çıkarılmasına izin verir. Nazosorpsiyon, sağlıklı deneklerde ve alerjik astımlılarda rinovirüs enfeksiyonu sorunu sırasında da kullanılmıştır ve nazosorpsiyon, çalışma süresi boyunca günlük olarak tekrarlanmıştır.Çalışmada nazosorpsiyon kullanılması, rinovirüs enfeksiyonuna interferon yanıtlarının hassas karakterizasyonuna izin verdi. Son olarak, bronşiolitli bebekleri incelemek için nazosorpsiyon örneklemesini kullandık. Bu çalışmada, respiratuar sinsityal virüs enfeksiyonu, interferon gama gibi daha yüksek seviyelerde inflamatuar mediatörler ile ilişkilendirilmiştir.Daha da önemlisi, nazosorpsiyon ile örnekleme, bebeklerde yapılan çalışmalara sağlıklı bir kontrol grubunun dahil edilmesine olanak sağlar. Bronkosorpsiyon, sağlıklı deneklerde ve alerjik astımlılarda rinovirüs meydan okuma çalışmasında da kullanılmıştır. Bu çalışma, rinovirüs enfeksiyonu sırasında alt solunum yolunda inflamatuar mediatörler interferon gama, ITAC, IL-10 ve IL-5'te önemli artışlar göstermiştir.Bu tekniğin alt solunum yolu çalışmalarına dahil edilmesi, bronkoalveoler lavaj gibi geleneksel yöntemlerle tespit edilemeyen mediatör seviyelerinin ölçülmesi olasılığını yaratır. Sonuç olarak, mukozal astar sıvısı noninvaziv olarak elde edilebilir ve enfeksiyon ve inflamasyonda inflamatuar yanıtları ölçmek için heyecan verici bir potansiyele sahiptir. Elüsyon yöntemlerinin, numunelerin doğasına ve ölçülecek parametrelere göre uyarlanması gerekir.Özellikle, MLF, mukozal sitokinleri ve kemokinleri, viral enfeksiyonları, viral yükü, bakteri ve mantar enfeksiyonlarını ve mikrobiyom ve mukozal antikorları ölçmek için kullanılabilir. Son olarak, mukozal örnekleme ve elüsyon yöntemleri, bireysel projeler için özel geliştirme ve dikkatli doğrulama gerektirecektir.

absorption-nasal-bronchial-fluids-precision-sampling-human

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, spiral kanallara sahip bir mikroakışkan cihaz kullanarak nötrofillerin trakeal sekresyonlardan ayrılmasını göstermektedir. Cihaz, değişen kalınlıklar ve trapez şekilli kanallar kullanarak hücre boyutuna göre verimli bir ayırma sağlar. Kuvvetler arasındaki etkileşim, büyük nötrofillerin iç duvarın yakınında birikmesine neden olurken, eritrositler ve müsin agregatları dış duvarın yakınında kalarak etkili nötrofil ayrışmasını sağlar.

Spiral Mikroakışkan Kanal Kullanılarak Trakeal Sekresyondan Etiketsiz Nötrofil Ayrımı

Bu video, yenidoğan insan nazal mukozal astar sıvısı ekstraktındaki immün mediatör seviyelerinin miktar tayinini göstermektedir. Elektrokemilüminesans tabanlı bir multipleks tahlil sistemi, uyarıldıklarında yayılan ışığın yoğunluğunu değerlendirerek bu aracıları ölçer.

İnsan Mukozal Astar Sıvısında İmmün Mediatör Seviyelerinin Miktar Tayini

Insan gönüllülerin yüzeysel sıyrık biyopsi yoluyla elde edilen nazal epitel hücreleri, doku kültürü ekler üzerine genişletilmiş ve aktarılır. Ortak akışkanlığa eriştikten sonra hücreler, kirpikli olmayan silli hücre kültürleri, sonuçta hava sıvı arayüzü yetiştirilir. Farklılaşmış nazal epitel hücre kültürleri solunum mukozasını eğitim için uygun deneysel modeller sunar.

Hava Sıvı Arayüz İnsan Burun Epitel Hücrelerinin ekimi

Bu makalede deneysel koşullar altında sığır bronkoskopik teknikler, yani bronkoskopik güdümlü aşılama, bronkoalveoler lavaj, bronş fırçalama ve transbronşiyal akciğer biyopsisi açıklanır.

Biyomedikal Araştırma Sığır Akciğer: Görme Kılavuzlu Bronkoskopi, intrabronşiyal Aşılama ve<em&gt; In Vivo</em&gt; Örnekleme Teknikleri

Bu iletişim kuralı için üst solunum yolları rahatsız edilmeden Mukozal astar sıvı örnekleme invaziv olmayan bir teknik anlatılmaktadır. Vivo düzeyleri sitokinler ve kemokinler, gibi protein arabulucu miktar her yaştan bireylerde gerçekleştirmek için kullanılabilir.

Mukozal astar sıvı noninvaziv örnekleme için In Vivo üst solunum yolu bağışıklık arabulucu düzeyleri miktar

Burada biz balgam indüksiyon tekniğini tanımlamak. Bu iletişim kuralı bir fark hücre sayısı gerçekleştirmek ve balgam süpernatant toplamak için işleme balgam ve hücreleri daha fazla çözümleme için da açıklanmaktadır.

Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

Bu araştırmada, sarmal atalet Havacilik kapalı çevrim işlemi kullanılarak klinik hava yolu salgıları bir etiket içermeyen nötrofil ayırma yöntemi göstermektedir. Önerilen yöntem çeşitli solunum yolu hastalıkları klinik vitro deneyleri artıracağı.

Kapalı çevrim atalet Havacilik kullanarak hasta kaynaklı hava yolu salgı dan etiket içermeyen nötrofil zenginleştirme

PCD tanısı için başarılı ve yüksek kaliteli siliyer fonksiyonel analizi garanti etmek için, solunum epitel örneklemesi ve işlenmesi için hassas ve dikkatli bir yöntem şarttır. COVID-19 pandemisi sırasında PCD tanı hizmeti vermeye devam etmek için, siliyer videomikroskopi protokolü uygun enfeksiyon kontrol önlemlerini içerecek şekilde güncellenmiştir.

Dijital Yüksek Hızlı Siliyer Videomikroskopi Kullanarak Burun Fırçalama Örneklemesi ve İşleme – COVID-19 Pandemisine Adaptasyon

Çeşitli bakteriyel patojenler, doğru bir şekilde tespit edilmez ve derhal tedavi edilmezse solunum yolu enfeksiyonlarına neden olabilir ve ciddi sağlık sorunlarına yol açabilir. Döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla bu patojenlerin hızlı ve doğru tespiti, klinik ortamlarda solunum yolu enfeksiyonlarının etkili bir şekilde yönetilmesini ve kontrol edilmesini sağlar.

Mikroakışkan çip bazlı döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla alt solunum yolu enfeksiyonlarına neden olan bakteriyel patojenlerin hızlı tespiti

Mevcut protokol, murin nazal lavaj sıvısında (NLF) kan kontaminasyonunu önlemek için yeni bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, kan kontaminasyonu olmadan NLF toplanmasını sağladığından, immünolojik bileşenlerin ve çeşitli solunum yolu patojenlerinin daha doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar.

Kan Kirliliği Olmadan Murine Nazal Lavaj Sıvısı Toplama

Bu protokol, yoğun bakım ünitesindeki hastalarda alt solunum yolu enfeksiyonlarına yol açan 15 patojenin bir saat içinde hasta başında tespit edilmesini sağlayan, tamamen entegre mikroakışkan çip tabanlı bir LAMP yöntemini açıklamaktadır.

YBÜ Hastalarında Alt Solunum Yolu Enfeksiyonlarına Yol Açan Patojenlerin Hasta Başı Hızlı Tespiti

Öğrenin sentetik emici matris kullanarak nazal ve bronşiyal mukoza sıvısı örnekleme yöntemlerini. Bu hassas teknikler solunum hastalıklarında tanısal ve araştırma uygulamaları için standartlaştırılmış örnekleme sağlar.

Burun ve bronş sıvıları emilimini: hassas örnekleme insan solunum mukoza ve laboratuvar işleme örnekleri

Daha fazla video keşfet