Kalibrasyon-Alerjik Vitro miktar Protein Homo-Oligomerizasyonda ticari araçları ve ücretsiz, açık kaynak parlaklık analiz yazılımı kullanarak

Bu yöntem, protein-protein etkileşimleri için küçük moleküllü inhibitörlerin çok düşük konsantrasyonlar üzerindeki etkisini aydınlatmak gibi ilaç tarama alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, kalibrasyon gerektirmemesi, herhangi bir konfokal mikroskopta uygulanabilmesi ve çok az miktarda etiketli protein kullanmasıdır. Bu tekniğin etkileri, protein-protein etkileşimleri hakkında nicel bilgi sağladığı için kanser ilaçlarının, küçük moleküllü inhibitörlerin ve çeşitli füzyon inhibitörlerinin geliştirilmesine kadar uzanır.

Bu yöntem, in vitro protein etkileşimleri ve agregasyonları hakkında bilgi sağlayabilse de, canlı hücre protein dinamikleri ve hücre-hücre etkileşimleri gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Başlamak için, pLysS hücrelerini monomerize insan FKBP12 ve N-terminal His6 ve mVenus etiketlerini içeren bir pET-22b vektörü ile dönüştürün. Hücreler inkübe edilmekten ve ısı şokundan sonra iyileştikten sonra, bunları antibiyotiklerle takviye edilmiş LB agar üzerine koyun.