Name: Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Öğrenin Drosophila melanogaster'de viral enfeksiyon kurma ve virüs-konak etkileşimlerini analiz etme yöntemini. Nano-enjeksiyon tekniği, viral doz kontrolü sağlar ve viroloji araştırmaları için güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Tüm Pan lab IPS teşekkür etmek istiyorum. CA'LARI. Biz Dr Lanfeng Wang (IPS, CAS) deneysel destek ve Dr Gonalo Cordova Steger (Springer doğa), Dr Jessica VARGAS (IPS, Paris) ve Dr. Seng Zhu (IPS, Paris) için yorum için teşekkür ederiz. Bu eser, Çin Bilimler Akademisi stratejik öncelik araştırma programdan hibe L.P (XDA13010500) ve H.T (XDB29030300), Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin L.P (31870887 ve 31570897) ve J.Y (31670909) tarafından desteklenmiştir. L.P CAS gençlik yenilik promosyon Derneği (2012083) üyesi olduğunu.

Not: deney başlamadan önce hücre satırları ve sinek stokları kullanılan DCV, FHV, Drosophila gibi virüs virüs (DXV) ve kuş nefrit virüs (ANV) X için özellikle diğer patojenler tarafından kirlenmiş gerekir değil. İdeal olarak, RNA sıralama veya daha basit bir PCR tabanlı kimlik kirlenme10,45algılamak için kullanılır. Kirlenme oluştuysa, hücre satırları ve sinek stokları kullanılmaması gereken daha fazla onlar kadar tamamen46dekontamine.
1. virüs ve sinek hazırlık
<ol><li>Virüs yayılması ve koleksiyon Not: Drosophila S2 * hücreler DCV yayılması ve titrasyon için kullanılır. S2 * hücre kültürünü geç sahne D. melanogaster embriyo bir birincil kültüründen elde edilir. Bu hücre kültürünü iyi oldu daha önce açıklanan47.<ol>
<li>1 x 107 canlı hücre/mL yoğunluğu, bir 10 cm hücre kültür tabak içinde gevşek, yarı yapisan monolayer olarak S2 * Schneider'ın Drosophila orta ek CO2, olmadan 25 ° C'de hücrelerinde büyür. Kullanım tam orta S2 * hücreler için: Schneider'ın Drosophila % 10 ısı içeren orta inaktive FBS, 100 adet/mL penisilin ve 100 μg/mL streptomisin. Not: Sağlıklı hücreler yuvarlak bir şekil göstermek ve homojen boyutu sergilemek gerekir.</li>
		<li>Hızlı bir şekilde-80 ° C 25 ° C su banyosunda DCV stoktan çözülme. S2 * DCV MOI, hücrelerle bulaştırmak virüs çözümü 1 mL doğrudan hücre kültür yemekleri ekleyerek hemen 0,01 = (büyüme alanı: 55 cm2) S2 * hücreler için tam orta 10 mL ile.</li>
		<li>25 ° C'de hücreler için 3-5 gün kuluçkaya. Virüs koleksiyonu için hazır olduğunda, hücre morfolojisi anormal (hücre şekil görünüyor bulanıklık) ve kültür orta siyah parçacıkların hücre artıkları gösterge dolu.</li>
		<li>Yukarı ve aşağı pipetting tarafından bir 15 mL tüp tüm hücre kültüründe toplamak ve-80 ° C'de dondurmak (için bir yıl kadar). Not: DCV uzun bir süre için-80 ° C'de infektivite, en az kayıp ile bir yıl süreyle saklanır.</li>
		<li>Sürekli titriyor ile 25 ° C su banyosu hücre kültüründe çözülme ve 4 ° C'de 15 dakika 6.000 x g, santrifüj kapasitesi Steril 15 mL tüp ve girdap süpernatant toplamak. Aliquot virüs çözüm tüp başına 200 μL kadar. Not: Virüs aliquots 4 ° C'de 3 gün kısa bir süre için ve ilâ 1 yıl-80 ° C'de saklanabilir Tekrarlanan donma-çözülme çevrimleri kaçınılmalıdır. Her zaman aynı anda tüm aliquot kullanmak daha iyidir.</li>
		<li>Ortalama virüs doku kültürü infektif doz (TCID50) tarafından cytopathic etkisi (CPE) tahlil belirlemek için 5 rasgele virüs içeren tüpler almak (TCID501 adet 0,7 = birim [PFU] şekillendirme plak). Not: CPE viral istilası nedeniyle konak hücreleri yapısal değişiklikler gösterir. Bulaşmasını virüs lizis konak hücre veya hücre lizis48çoğaltmak bir yetersizlik nedeniyle olmadan öldüğünde neden olur.<ol>
<li>1 gün pipetting tarafından hazırlanan S2 * hücreleri toplamak. Hücre sayısı. Hücreler için 300 x g 4 dk santrifüj kapasitesi ve süpernatant atın. 1 x 106 hücre/mL 1.1.1. adımda açıklandığı gibi S2 * hücreler için tam orta ile yoğunluğu hücrelere sulandırmak.</li>
			<li>1 x 105 S2 tohum * hücreleri düz-alt 96-iyi-plaka (~ %30 confluency) iyi (100 μL).</li>
			<li>Tam orta ile DCV stokunun seri 10 kat dilutions S2 * hücreler için gerçekleştirin. 50 µL dilutions kuyunun içine ekleyin. Virüs olmadan kültür ortamının 50 µL negatif kontrol de gizli kuyu ekleyin. Not: her seyreltme oranı için 8 wells kullanılmıştır. Tipik DCV verim yaklaşık 108-109 PFU/mL olarak, seyreltme en az ~ 10-5-10-10kapsamalıdır.</li>
			<li>Gün 4, CPE X 20 veya 40 X hedef alan parlak mikroskop ile gözlemlemek. Hücreleri bulanık görünüyor ve Orta parçaları bir "olumlu", ve bir de hücre morfolojisi "olumsuz yanı sıra" normaldir dolu bir kuyunun sınıflandırmak.</li>
			<li>Mark CPE pozitif veya negatif wells ile + veya-, anılan sıraya göre. Virüs TCID50 Reed ve Muench yöntemi49tarafından hesaplayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Tüm kirli malzeme ve eldiven dekontaminasyon tavada atmayın. Virüs istenen TCID50erişemiyorlarsa, 68.000 x g 4 ° C'de 1 h için de centrifuging tarafından virüs çözümü 100 mL konsantre Not: bağlı deneme, 10 doz aralığı amacı olarak2 ' ye 106 TCID50 birim-ebilmek var olmak kullanılmış için virüs enfeksiyonu. Tipik olarak, biz 3 x 106 TCID50 birimleri kullanın.</li>
		<li>Süpernatant atın ve 1 mL Tris-HCl tampon (10 mM, pH 7.2) yeniden askıya alma. Virüs çözüm tüp ve-80 ° C'de mağaza başına aliquot 20 μL 5 rastgele tüpler ortalama virüs TCID50 yeniden belirlemek için Seç.</li>
	</ol></li>
	<li>Enfeksiyon için hazırlık sinek Not: Simbiyotik bakteriler Wolbachia pek çok böcek30,31,32,33,41RNA virüsü enfeksiyonu gizle. Böylece, ana bilgisayar virüs enfeksiyonu vivo içinde33eğitim önce sinekler Wolbachia temizlemek için esastır.<ol>
<li>50 µg/mL tetrasiklin (içinde % 70 etanol) 400 μL ekleyerek tetrasiklin içeren sinek yemek hazırlamak için 4 g taze standart Mısır unu sinek gıda (gıda 1 L Mısır unu, Maya, agar, 0.726 g CaCl2 10.6 g 32.19 g 77,7 g içerir sukroz, glikoz, 2 g Potasyum Sorbat ve 15 mL % 5 C8H8O363.3 g 31.62 g). İyice karıştırın ve 4 ° etanol buharlaşır için C bir gecede yemek yer. Not: Bu adımı atlarsanız değil bu yüzden sinek doğurganlık, etanol yüksek bir doz etkileyebilir.</li>
		<li>Oda sıcaklığında yemeğe sıcak ve yeni eclosed yetişkin sinekler (20 kadın ve 10 erkek) şişede koymak. 25 ° c, % 60 nem normal bir ışık/karanlık döngü altında sinekler doğurmak. Not: Genellikle, o yeterli yumurtlamak sinekler için 3-4 gün sürer. Çok fazla yumurta larva geliştirme inhibe ve tetrasiklin verimliliği azaltır.</li>
		<li>Yeni eclosed yetişkin sinekler toplamak (içinde 3 ~ 5 gün) CO2ve adımı yineleyin hafif bir akış altında ~ 1.2.1-1.2.2. Tipik olarak, en az 3 kuşaktır tamamen ortadan kaldırılması Wolbachiaiçin gereklidir.</li>
		<li>Tetrasiklin tedavi ile 3 kuşaktır sonra 5 sinekler CO2 Wolbachia enfeksiyon test için hafif bir akış altında toplamak. Sinekler 250 μL çift distile su (GKD2O) ve birkaç 0,5 mm steril seramik boncuklar bir homogenizer kullanarak bir 1,5 mL tüp ile 1 dk. için eziyet. 2 x 250 μL bir arabelleğe A Ekle (0,2 M Tris-HCl, pH 9.0; 0.2 M EDTA; % 2 SDS) örnek ve girdap. Not: Bu yana SDS boncuk hareket engel, 1 x arabellek A doğrudan sinekler öğütmek için kullanılamaz. Sinekler kırmızı gözleri var, bu DNA ürün rengini etkileyebilir gibi kafaları zımpara önce kaldırın.</li>
		<li>-80 ° c (en fazla bir yıl için keep) örnekleri dondur. Hızlı bir şekilde çözülme-80 ° c eriyene kadar bir 25 ° C su banyosunda örnek. Örnekleri için 30 dk 70 ° C'de kuluçkaya.</li>
		<li>5 190 μL eklemek M KOAc, girdap ve buz üzerinde 15 dakika veya daha uzun kuluçkaya.</li>
		<li>13.000 x g oda sıcaklığında 5 min için de örnekler santrifüj kapasitesi, süpernatant toplamak ve yeni tüpler aktarmak.</li>
		<li>1.2.7 DNA ile daha iyi kalite elde etmek için adımları yineleyin.</li>
		<li>Her örnek için isopropanol 750 μL ekleyin ve bir kaç kez el ile yavaşça tersine çevirin. 5 min için oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>13.000 x g oda sıcaklığında 5 min için de örnekler santrifüj kapasitesi ve süpernatant atın. Beyaz genomik DNA Pelet tüp alt kısmında kalacak.</li>
		<li>1 mL % 70 etanol granül, 5 min için 13.000 x g, santrifüj ekleyin ve süpernatant atın. Saydam hale gelene kadar DNA kuruması.</li>
		<li>DNA GKD2O 100 μL içinde dağıtılması, UV-VIS emme spectrophotometry tarafından DNA toplama titre ve DNA 100 ng/μL'yı oranında seyreltin.</li>
		<li>Kullanım 200 ng DNA PCR reaksiyon (20 μL sisteminde Malzemeler tablogörmek). PCR tarafından aşağıdaki program yerine: 95 ° C 15 dakika; 36 çevriminde 45 95 ° c s, 50 ° C 45 s ve 72 ° C için 1 dk; ve termal cycler bir son uzantısı adım (1 dk 72 ° C). Not: Wolbachia 16S rRNA üzerinde bağlı olarak, aşağıdaki astar kullanın: 5' TGAGGAAGATAATGACGG 3' (İleri) ve 5' CCTCTATCCTCTTTCAACC 3' (ters). WSP için astar 5' CATTGGTGTTGGTGTTGGTG vardı 3' (İleri) ve 5' ACCGAAATAACGAGCTCCAG 3' (ters).</li>
		<li>PCR ürünlerinin % 1'özel Jel Elektroforez ile analiz. 200 civarında Wolbachia 16S rRNA ve wsp PCR ürünü boyutudur bp ve 600 bp, anılan sıraya göre.</li>
		<li>Arka Wolbachia özgür sinek stok standart Mısır unu sinek gıda. 3-5 gün yeni eclosed erkek uçar enfeksiyon için toplamak. Not: Tetrasiklin tedavi daha sonra ev sahibi antiviral yanıt etkiler bağırsak microbiota kompozisyon da etkileyebilir. Tüm sinekler aynı tetrasiklin tedavi alması gereken tavsiye ediyoruz. Wolbachia-Alerjik sinekler gut microbiota geri yüklemek en az 3 nesiller için standart koşullar altında büyüyen tutun.</li>
	</ol></li>
	<li>Pastrel Genotipleme Not: S veya R alleli genetik arka planda pst genin varlığı Drosophila34,35enfeksiyonunda DCV etkiler bildirilmiştir. Özellikle DCV enfeksiyon için pst genotip kontrol etmek gereklidir. Virüs enfeksiyonu etkileyen pst içinde birkaç SNPs vardır, Binbaşı SNP 512 C/T. Sıcaklık gradyanı PCR pst genotip tanımlamak için hızlı bir yöntemdir.<ol>
<li>Özü genomik DNA (yukarıdaki adım 1.2.4 - 1.2.15) açıklandığı gibi uç.</li>
		<li>Kullanım 100 ng Şablon 5' CAGCATGGTGTCCATGAAGTC 512C astar olarak DNA'ın 3' (İleri) ve 5 R alleli, 5' CAGCATGGTGTCCATGAAGTT 512T astar algılamak için ' ACGTGATCAATGCTGAAAGT 3' (ters) algılamak için 3' (İleri) ve 5' ACGTGATCAATGCTGAAAGT 3' (ters) S alleli.</li>
		<li>(Erime sıcaklığı) Tm degradeleri aşağıdaki gibi ayarlayın: 54 ° C, 54,7 ° C, 55,5 ° C, 58 ° C, 59,7 ° C, 62.2 ° C, 63,7 ° C ve 64 ° C (45 s her sıcaklıkta). Not: 30 döngüleri PCR zincirleme reaksiyon (20 μL sistemi) tavsiye edilir.</li>
		<li>100-bp PCR ürünü % 2 özel Jel Elektroforez tarafından görselleştirin.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Drosophila viral enfeksiyon
<ol><li>
Nano-enjeksiyon Sineklerin bulaştırmak ve hayatta kalma deneyleri gerçekleştirmek.
	<ol>
<li>Enjeksiyon iğneler hazırlamak için kılcal çek, geri-dolgu enjeksiyonu yağı ile iğne ve enjektör monte daha önce50açıklandığı gibi.</li>
		<li>Sinekler panelindeki CO2hafif bir akış altında uyuşturan. İntra torasik enjeksiyon44 50,6 Sineklerin aşılamak nL virüs çözüm (100 PFU, Tris-HCl tampon, pH 7.2 ile seyreltilmiş). En az 3 şişeleri uçar (şişe başına 20 sinekler) enjekte. Not: Enjeksiyon zaman alıcı (genellikle 100 sinekler) saat ve DCV çoğaltma çok hızlı, bu yüzden tam olarak ne zaman bir kez her şişe (20 sinekler) kaplama tüp yazmak çok önemlidir. Arabellek tek enjeksiyon sahte bir denetim olarak ayarlanır. Genellikle, daha istikrarlı ve hormonal değişimleri çiftleşme ve üreme sırasında kadın51okuma etkileyebilir beri kadın kullanarak zaman daha tekrarlanabilir sonuçlar olduğu gibi erkek yetişkin sinekler tercih edilen, vardır.</li>
		<li>Büyümek enjekte sinekler 25 ° c, % 60 nem normal bir ışık/karanlık döngü altında. Her gün taze gıda sinekli tedarik ve ölü ﬂies kaydedin.</li>
		<li>En az 3 Biyolojik çoğaltır gerçekleştirmek ve sağkalım eğrisi çizmek.</li>
		<li>Hayatta kalma verilerin istatistiksel analizi için istatistiksel yazılım tarafından Kaplan-Meier hayatta kalma eğriler oluşturmak. P değerleri hesaplamak için günlük-rank testi gerçekleştirin. Hayatta kalma masada her ders için bilgileri girin. Belgili tanımlık bilgisayar yazılımı her zaman yüzde hayatta kalma hesaplar ve bir Kaplan-Meier hayatta kalma arsa Arsalar. Not: ek Maya şişeyi eklemeyin. Sahte denetimleri ile karşılaştırıldığında, DCV-enfekte sinekler bazen asit var ve hantal, hangi onları yapışkan Maya için savunmasız. Ön denemede en büyük ölüm enfekte sinekler için olacak bir zaman dilimi için daha fazla zaman Puan kaydetmek iyidir. Genel olarak, enfekte sinekler nadiren Dcr-2 mutant satırları için bile ilk iki gün ölür. Ücretsiz w1118 (Bloomington 5905) sinek enfekte Wolbachia için 100 PFU DCV ile bu zaman penceresini yaklaşık 3-5 gün enfeksiyon yazı olduğunu. İğne yaralanma öldürdükleri için 0,5 h mesaj enjeksiyon saat içinde ölmek meyve sinekleri bir kısmet değil viral enfeksiyon tarafından sayılması değil.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DCV yük ölçü CPE tahlil tarafından Not: Viral yük virüs hisse senedi (Adım 1.1.6) titrasyon için benzer şekilde ölçülür ancak ek numune hazırlama (Adım 2.2.1-2.2.4) gerektirir.<ol>
<li>Gün 1, adım 2.1.1-2.1.2 içinde açıklandığı gibi erkek sinek bulaştırmak. Gruplar halinde 20 enjekte sinekler grup ve onları tutmak (genellikle 24 saat veya 3 gün için) istenen süre taze uçmak gıda üzerinde büyüyor. Sinekler her gün taze gıda ile sağlar.</li>
		<li>Gün 2, Drosophila S2 * 10 cm hücre kültür yemek için yaklaşık 5 yoğunluğu hücrelerde tohum x106 -1 x 107 hücre/mL 1.1.1. adımda açıklandığı gibi.</li>
		<li>3 günde 5 sinekler (altında bir ışık akışı CO2) toplamak ve 1,5 mL santrifüj tüpü 30 için yapılan eziyet 200 μL Tris arabellek ve seramik boncuklar homogenizer kullanarak bir iyimsersin. -80 ° C'de örnekleri depolamak veya hemen sonraki adıma geçin.</li>
		<li>İyice girdap örnek. 1 mL şırınga ve 0,22 mikron süzgeci, süzgeç süpernatant yeni 1,5 mL tüp için kullanın. Titrasyon ile adımları 1.1.6.1-1.1.6.5 içinde açıklandığı gibi devam edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DCV yük qRT-PCR tarafından ölçülen
	<ol>
<li>Gün 1, yukarıda açıklandığı gibi sinekler bulaştırmak. Grup enjekte erkek (20 sinek/grup) uçar ve taze uçmak gıda büyümek için istediğiniz zaman, genellikle 24 saat veya 3 gün için. Sinekler her gün taze gıda ile sağlar.</li>
		<li>3 günde 5 sinekler CO2 1.5 mL tüp içinde bir ışık akışı 200 μL lizis arabellek ve 20 seramik boncuklar ile altında toplamak (çapı 0,5 mm =), örnekleri için her tüpün 30 s. 800 eklemek μL ek lizis arabelleği için yüksek hız ile homogenizer tarafından eziyet ve s depolamak amples-80 ° C'de veya hemen RNA çıkarma ve qRT-PCR kuralları.</li>
		<li>RNase ücretsiz ipuçları, tüpler hazırlamak ve deiyonize, tedavi diethylpyrocarbonate (DEPC) ve 0,22 µm membran filtre su. Kloroform (≥99.5%) 200 μL Ekle örnek içine ve şiddetle 15 için sallamak elle s. Su faz ve organik faz açıkça ayrılmış kadar 5 dakika veya daha uzun oda sıcaklığında kuluçkaya. Not: Kloroform son derece tehlikeli ve bakımı ile ele alınması gerekir. DEĞİL girdap DNA bulaşma riskini artıracak örnek yapmak.</li>
		<li>Santrifüj örnekleri 4 ° C'de 15 dakika 13.000 x g de</li>
		<li>400 μL süpernatant, toplamak ve süpernatant yeni tüpler için transfer. Aynı birim isopropanol (≥ % 99.5) ile karıştırmak, yavaşça örnekleri el ile 20 kez tersine çevirin ve oda sıcaklığında 10 dakika veya daha uzun çökelti. Not:-20 ° C'de yağış RNA verim artacak.</li>
		<li>Santrifüj örnekleri 13.000 x g 4 ° C'de 10 dk de Beyaz RNA granül tüp alt kısmında görünür.</li>
		<li>Süpernatant atmak ve 1 mL % 70 etanol (etanol DEPC su) ekleyin ve RNA yıkamak için birkaç kez tersine çevirin.</li>
		<li>Santrifüj örnekleri 4 ° C'de 5 min için 13.000 x g de 5-10dk süpernatant ve kuru RNA atmak; RNA şeffaf hale gelmelidir.</li>
		<li>DEPC su 50 μL örnek, pipet birkaç kez ve girdap için ekleyin.</li>
		<li>RNA'ın 3 μL RNA konsantrasyon titrating için al. 260 RNA ölçmek nm. Normalde, bu iletişim kuralı tarafından çıkarılan RNA konsantrasyon cDNA sentezi için uygun olan yaklaşık 100-500 μg/μL, dür.</li>
		<li>RNA'ın 2 μg cDNA sentezi için kullanın. GKD2O ve mağaza-20 ° C'de 100 μL örnek sulandırmak</li>
		<li>QRT-PCR üretici yönergelerine göre gerçekleştirmek ve qRT-PCR çalıştırın. Not: DCV cDNA sentezi için rasgele astar bizim ellerimizde Poli A astar daha iyi çalıştı. DCV mRNA ifade endojen ribozomal protein 49 (rp49) mRNA normalleştirilmiş. Bu bölümünde kullanılan Oligonükleotid astar: rp49 5' AGATCGTGAAGAAGCGCACCAAG 3' (İleri) ve 5' CACCAGGAACTTCTTGAATCCGG 3' (ters); DCV, 5' TCATCGGTATGCACATTGCT 3' (İleri) ve 5' CGCATAACCATGCTCTTCTG 3' (ters); Vago, 5' TGCAACTCTGGGAGGATAGC 3' (İleri) ve 5' AATTGCCCTGCGTCAGTTT 3' (ters); virüs RNA 1 (vir-1) 5' GATCCCAATTTTCCCATCAA 3' (İleri) kaynaklı ve 5' GATTACAGCTGGGTGCACAA 3' (ters).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu makalede, biz ayrıntılı bir yordam içinde yetişkin Drosophila melanogaster viral bir enfeksiyon sistemi kurmak nasıl nano-enjeksiyon kullanarak mevcut. İletişim kuralları uygun sinek çizgiler ve virüs hisse senedi, enfeksiyon teknikleri, bulaşıcı göstergelerin değerlendirilmesi ve antiviral yanıt ölçümü hazırlanması içerir. DCV viral bir patojen bir örnek olarak kullanılmasına rağmen onlarca çeşit virüs başarıyla çalışması için Drosophila sistemi uygulandı. Ayrıca, düzenleyici faktörler, virüs veya ev sahibi,...

Viral enfeksiyonlar, özellikle Chikungunya virüsü1, gibi arboviruses tarafından ortaya çıkan dang virüs, sarı humma virüsü2 ve Zikavirüs3,-si olmak be halk sağlığı için büyük bir tehdit salgınları neden olarak 4. böylece, virüs ana bilgisayar etkileşimi daha iyi bir anlayış salgın kontrol ve insanlarda viral hastalıkların tedavisinde giderek önem kazanmıştır. Bu hedef için virüs enfeksiyonu altta yatan mekanizmaları araştırmak için daha uygun ve etkili modelleri oluşturulmuş olmalıdır.
Meyve sineği, Drosophilamelanogaster (D. melanogaster), virüs-ana etkileşim5,6 araştırmak için güçlü bir sistemi sağlar ve bir insan viral hastalıkları7 çalışmaya en verimli model olduğu ispatlanmıştır , 8 , 9. son derece korunmuş antiviral yolları ve eşsiz genetik araçları sinyal sinekler insan antiviral çalışmaları için gerçek etkileri ile önemli sonuçlar üretmek için harika bir model. Buna ek olarak, sinekler kolay ve laboratuvar olarak korumak ucuz ve roman düzenleyici faktörler6,10 virüs ve ev sahibi olarak büyük ölçekli tarama sırasında enfeksiyon için uygundur.
Dört son derece korunmuş antiviral yollar büyük (örn., RNA müdahale (RNAi) yolu11, JAK-STAT yolu12, NF-κB yolu ve autophagy yolu13) de Drosophila içinde son olarak incelendiği yıl6. Çoğu virüs enfeksiyonu6,14çeşit önleyebilirsiniz geniş bir antiviral mekanizma RNAi yoludur. Bu yolu dilici-2 (Dcr-2) veya Argonaute 2 (AGO2) gibi genlerde mutasyon tarafından bozulma artan virüs titresi ve ana bilgisayar ölüm15,16,17' ye yol açabilir. JAK-STAT yolu enfeksiyon kontrol altında Dicistroviridae aile ve böcekler, e.g Flaviviridae ailesinde bir virüs tarafından karıştığı olmuştur., Drosophila C virüsü (DCV) sinekler16 ve Batı Nil virüsü (WNV) ve dang virüs sivrisinek18,19. Drosophila Toll (insan NF-κB yolun homolog) ve bağışıklık yetersizliği (IMD) yolları (insan NF-κB ve TNF yolun benzer) virüs istilası20,21, savunan dahil her ikisi are 22. autophagy korunmuş mekanizması tür Drosophila23,24saat içinde de karakterize viral enfeksiyon ile ilgili başka bir şey. Böylece, kimliği roman düzenleyici faktörler bu yollar ve bu antiviral sinyal ve diğer arasında parçalanmış crosstalk metabolizma, yaşlanma, sinirsel tepki ve benzeri gibi biyolojik yollar kolayca ayarlanabilir Drosophila içinde sistem.
Drosophila viral enfeksiyon modellerinde en köklü RNA virüsleri, omurgasız yanardöner virüs 6I tarafından Enfeksiyon Mod tarafından indüklenir rağmen (IV-6) ve Kallithea virüs sinekler25içinde, DNA virüsleri incelenmesi için potansiyel göstermiştir 26. Ayrıca, virüs Drosophila, enfeksiyon grip virüsü9gibi izin vermek için de değiştirilebilir. Bu büyük ölçüde Drosophila tarama platform uygulama genişletti. Bu yordam, biz Drosophilabir viral enfeksiyon sistemi geliştirmek nasıl açıklamak için örnek olarak DCV kullanın. DCV bir pozitif anlamda tek telli RNA virüsü yaklaşık 9300 nükleotit, 9 proteinler27kodlama olduğunu. D. melanogasterdoğal bir patojen, DCV ana bilgisayar virüs etkileşim ve işbirliği evrim28sırasında ana bilgisayar fizyolojik, davranış ve Bazal bağışıklık yanıtı çalışmaya uygun bir virüs olarak kabul edilir. Ayrıca, vahşi türü sinekler enfeksiyonu takip onun hızlı ölüm oranı DCV ekrana dayanıklı veya duyarlı genler için konak29kullanışlıdır.
Ancak, Drosophilaviral enfeksiyonlar okurken endişe çeşitli yönleri vardır. Örneğin, simbiyotik bakteriler Wolbachia geniş spectra Drosophila ve Sivrisinek30,31,32RNA virüsü yayılması etkisizleştirmek için bir yeteneğim var. Son kanıtlar hangi Wolbachia blok Sindbis virüs (SINV) yoluyla enfeksiyon upregulation metiltransferaz Mt2 ana bilgisayar33ifadesinde, olası bir mekanizma gösterir. Ayrıca, böceklerin genetik arka plan da viral enfeksiyon için önemlidir. Örneğin, gene, pastrel (pst), doğal polimorfizmi Drosophila34,35, DCV enfeksiyona yatkınlık belirler iken loci Ubc-E2H ve CG8492 Kriket felç virüs (CrPV) ve Flock ev virüs (FHV) enfeksiyonu, sırasıyla36katılmaktadırlar.
Sinekler, virüs-ana etkileşim kurmak için belirli yolları araştırma amaçlı Drosophila hücre hatları37,38, sözlü Ana hücresel bileşenleri için bir yüksek üretilen iş ekran gibi göre seçilen gerekir gut özgü antiviral yanıt22,39,40,41,42 ya da nano-enjeksiyon sistemik bağışıklık uyarmak için epitel engelleri geçerek iğneleyici iğne çalışmaya enfeksiyon yanıt. Nano-enjeksiyon, böylece yüksek deneysel tekrarlanabilirlik44güvence altına alınması kontrollü bir antiviral tepki ve fizyolojik lezyon43, ikna etmek için viral doz tam olarak denetleyebilirsiniz. Bu çalışmada, Drosophilauçar arka plan efektleri önemini vurgulayarak, etkileşimlerde virüs ana bilgisayar çalışmaya bir nano-enjeksiyon yöntemi açıklanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>0.22um filtre</td><td>Millipore</td><td>SLGP033RS</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Marka</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>1.5 ml RNaz içermeyen Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>10 cm hücre kültürü kabı</td><td>Sigma</td><td>CLS430167</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>100 Yedek tüpler</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-203-G/X</td><td></td></tr><tr><td>15 ml</td><td>tüp Corning</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>ABI 7500 qPCR sistemi</td><td>ABI</td><td>7500</td><td>qPCR</td></tr><tr><td>Hücre İnkübatörü</td><td>Sanyo</td><td>MIR-553</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendof</td><td>5810R</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendof</td><td>5424R</td><td></td></tr><tr><td></td><td>RNA ekstraksiyonu</td>DEPC 151858<td>Kloroform</td><td>Sigma</td></tr><tr><td>suyu</td><td>Sigma</td><td>95284-100ML</td><td>RNA ekstraksiyonu</td></tr><tr><td>Drosophila İnkübatör</td><td>Percival</td><td>I-41NL</td><td>Yetiştirme Drosophila</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>12657-029</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>düz tabanlı 96 kuyulu plaka</td><td>Sigma</td><td>CLS3922</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>DP73</td><td></td></tr><tr><td>İzopropil alkol</td><td>Sigma</td><td>I9516</td><td>RNA ekstraksiyonu</td></tr><tr><td>Lizis tamponu (RNA ekstraksiyonu)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>15596026</td><td>TRIzol Reaktifi</td></tr><tr><td>Lizis tamponu (sıvı numune RNA ekstraksiyonu)</td> <td>Thermo Fisher</td><td>10296028</td><td>TRIzol LS Reaktif</td></tr><tr><td>Mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>Nanoject II Otomatik Nanolitre Enjektör</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-204</td><td>Nanoject II Değişken Hacimli (2,3 ila 69 nL) Cam Kılcal Otomatik Enjektör (110V)</td></tr><tr><td>Optik Yapışkan Film</td><td>ABI</td><td>4360954</td><td>qPCR</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin, Sıvı</td><td>İnvitrojen</td><td>15140-122</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>qPCR plakası</td><td>ABI</td><td>A32811</td><td>qPCR</td></tr><tr><td>Schneider' s Insect Medium</td><td>Sigma</td><td>S9895</td><td>Hücre kültürü</td></tr><tr><td>istatistik yazılımı</td><td>GraphPad Prism 7</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TransScript Fly First-Strand cDNA Sentezi SuperMix</td><td>TransScript</td><td>AT301</td><td>RNA ekstraksiyonu</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>IKA</td><td>VORTEX 3</td><td>RNA ekstraksiyonu</td></tr></tbody></table>

viral enfeksiyon ve analiz drosophila melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Yayılan virüs salgın hastalıklar önemli bir nedenidir. Böylece, virüs ve ev sahibi arasındaki etkileşimi anlamak önleme ile ilgili bilgilerimizi ve viral enfeksiyon tedavisinde genişletmek çok önemlidir. Meyve sineği Drosophila melanogaster için antiviral etkenler ekran ve güçlü genetik araçlar ve son derece korunmuş doğuştan gelen bağışıklık nedeniyle virüs ana bilgisayar etkileşimi araştırmak için en verimli ve üretken canlılar olduğu ispatlanmıştır sinyal yollar. Burada açıklanan yordamı viral enfeksiyon kurmak ve yetişkin sinekler sistemik antiviral yanıt ikna etmek için bir nano-enjeksiyon yöntemi gösterir. Bu yöntemde viral enjeksiyon dozu hassas kontrol yüksek deneysel tekrarlanabilirlik sağlar. Bu çalışmada açıklanan iletişim kuralları sinekler ve virüs, enjeksiyon yöntemi, sağkalım oranı analizi, virüs yükü ölçüm ve bir antiviral yolu değerlendirme hazırlanması içerir. Viral enfeksiyon uçar arka plan tarafından etkisi etkileri burada bahsedildi. Bu bulaşma yönteminin gerçekleştirmek kolay ve kantitatif yinelenebilir; ana bilgisayar/viral etkenler virüs ana bilgisayar etkileşime katılan ilgili için ekran ve sinyal doğuştan gelen bağışıklık ve diğer biyolojik yollar yanıt olarak viral enfeksiyon arasında çapraz karışma incelemek için uygulanabilir.

Bu bölümde sonuçlarını D. melanogasterDCV enfeksiyon sonra elde edilir. Şekil 1 , Drosophilaiçinde viral enfeksiyon akış şeması görülmektedir. Sinekler intra thoracically enjekte edilmiş ve o zaman örnekleri viral TCID50 ve genom RNA düzeyinin (Resim 1) ölçüm için toplanır. Virüs enfeksiyonu hücre lizis tetikleyebilir ve CPE 3 gün sonrası enfeksiyon (şekil 2A) görülmektedir. CPE tahlil tarafından ölçülen virüs yükü bu paralel olarak qPCR (<st...

Bu iletişim kuralı, viral enfeksiyon vivo içinde virüs ana bilgisayar etkileşimi analiz için nano-enjeksiyon yöntemi ve temel teknikleri kullanarak Drosophila melanogaster içinde kurmak açıklar.

Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Bu yöntem etkili Drosophila melanogaster bir viral enfeksiyon kurmak hakkında virüs-host etkileşim alanında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu nanoenjeksiyon yöntemi ve virüsün enfeksiyon dozu hassas bir kontrol sağlar kolayca diğer mikrobiyal patojenler ile enfeksiyonlara uygulanabilir. Bir saat boyunca 25 santigrat derecede ek karbondioksit olmadan tam Schneider's Drosophila Orta 10 mililitre ile gevşek, yarı yapışık monolayer olarak mililitre başına yedinci canlı S2 yıldız hücreleri bir kez 10 büyüyerek başlayın.Kuluçka sırasında, taze çözülmüş Drosophila C Virüs veya DCV tam orta bir mililitre 0.01 enfeksiyon çokluğu için resuspend ve hücre kültürü yemekleri virüs çözeltisi ekleyin. Sonra plakayı 25 santigrat derece kuvöze 3-5 gün iade edin. Hücre morfolojisi bulanık göründüğünde ve kültür ortamı hücre enkazını gösteren siyah parçacıklarla dolu olduğunda virüs toplanmaya hazırdır.Eksi 80 santigrat derece de konak hücrelerin insis için 15 mililitrelik bir tüp için tüm hücre kültürü aktarmadan önce birkaç kez pipetting tarafından supernatant karıştırın. Virüs çalışma konsantrasyonları oluşturmak için, santrifüj ile hücre enkaz peletleme önce sürekli sallayarak 25 derece santigrat su banyosunda hücre süspansiyon çözültün. Daha sonra yeni bir steril 15 mililitrelik tüp içine girdap ve aliquot kadar 200 mikrolitre virüs çözeltisi tüp başına aktarın.Ortalama virüs doku kültürü enfektif dozu belirlemek için, ilk tohum bir kez 10 beş S2 yıldız hücrelerine tam orta 100 mikrolitre içinde sekiz kuyu lar sütun başına 12 satır 96 kuyu plaka. Sonra plakayı 25 santigrat derece kuluçka makinesine geri ver. Eksi 80 santigrat depolamadan rastgele beş virüs tüpü seçin.Hücreler yerleşirken, 10 steril 1,5 mililitrelik mikrosentrifüge tüpleri 450 mikrolitre steril komple orta ile doldurun ve ilk 1,5 mililitrelik tüp içeren 50 mikrolitre virüs stoku ekleyin 450 mikrolitre steril komple orta süspansiyonlar 12 kuyuya adım başına 10 kat seyreltme. Kuluçka sonunda, virüs bu tüp için her sütunda uygun kuyuya her seyreltme 50 mikrolitre ekleyin ve negatif kontrol iyi olarak sütun başına bir iyi virüs olmadan kültür ortamı 50 mikrolitre ekleyin. Sonra üç gün boyunca 25 santigrat derece kuvöz plaka yerleştirin ve 20X büyütme günlük bir Brightfield mikroskop altında her virüs stokunun sitopatik etkisini değerlendirmek.Hücrelerin bulanık göründüğü ve ortamın parçalarla dolu olduğu bir kuyuyu pozitif kuyu ve hücre morfolojisinin negatif kuyu olarak normal olduğu bir kuyu olarak sınıflandırın. Üremeden önce, tetrasiklin mililitre başına 50 mikrogram 400 mikrolitre taze standart mısır unu sinek gıda dört gram karıştırın ve etanol buharlaştırmak için bir gecede dört derece santigrat gıda yerleştirin. Ertesi sabah, oda sıcaklığına gıda sıcak ve 20 kadın ve 10 erkek yeni kapalı yetişkin 25 derece santigrat ve normal bir ışık / karanlık döngüsü altında% 60 nem üç ila dört günlük üreme kuluçka için bir üreme şişe içine sinekler gıda yerleştirin.Yeterli yumurta yumurtladığında, karbondioksit Hafif bir akış altında yeni ekaplanmış yetişkin sinekler toplamak ve tekrar iki kez daha sadece gösterildiği gibi Drosophila doğurmak. Tetrasiklin arıtma üç nesil sonra, karbondioksit bir ışık akışı altında beş sinek toplamak ve çift distile su 250 mikrolitre ve birkaç 0,5 milimetre steril seramik boncuk ile sinekhomojeize. Bir dakika sonra, eksi 80 santigrat derece numune dondurma önce girdap için örnek 250 mikrolitre 2X Tampon A ekleyin.Daha sonra, eksi 80 santigrat derecelik bir su banyosundaki numuneleri hızla eritin, ardından genomik DNA'yı çıkarmadan ve standart protokollere göre polimeraz zincir reaksiyonu ile DNA'yı yükselterek 70 derecelik bir su banyosunda 30 dakikalık bir kuluçka. Wolbachia 16 küçük RNA ve wsp her sinek jel elektroforez standart protokollere göre homojen yokluğu doğrulayın. Sonra standart mısır unu sinek gıda wolbachia ücretsiz sinek stok arka gösterildiği gibi.Viral enfeksiyon için, ilk nanoenjeksiyon için uygun çapa bir cam kılcal iğne ucu kırmak için bir stereomikroskop ve ince forseps kullanın. Enjektörü monte etmek için tavan o-halkasını ve beyaz bir boşluk, enjektörün metal pistonuna yerleştirin ve dışa bakan büyük gamzeyi yerleştirin. Mineral yağ ile cam iğne doldurmak ve yaka ile iğne yerleştirmek için 30 gauge iğne ile donatılmış bir şırınga kullanın.İğnenin künt ucundan yaklaşık bir milimetre yaka tabanıetrafında büyük O-halkayerleştirin ve enjektör un piston üzerine iğne monte. İğneyi pistonun üzerine sabitleyin ve mikroenjektörün pistini sesli bir sinyal duyulana kadar uzatmak için boş düğmeye basın. Şimdi pistonu beş milimetre geri çekmek ve iğneyi 100 plak oluşturan birim viral süspansiyona batırmak için dolguya basın.Yavaşça enjeksiyon çanak üzerine 20 Wolbachia içermeyen erkek Drosophila bir veya en az üç şişe sallayın. Çiftleme sırasında erkek uçaklar tercih edilir ve üreme dişileri etkileyebilir. Daha sonra mezopleura ve pteropleura arasında biraz daha hafif renkli bölgede virüs çözeltisi 50,6 nanolitre ile her sinek toraks enjekte ve sitopatik etki testi ve kantitatif RT PCR tarafından DCV yükünü ölçmek sadece gösterildiği gibi yer uçar.Enjeksiyondan sonra, sinekleri dikkatlice taze bir şişeye aktarın ve anesteziden kurtulurken sineklerin ortama yapışmasını önlemek için şişeyi yatay bir konuma yerleştirin. Enjeksiyon zaman alıcı ama DCV çoğaltma çok hızlı bu yüzden her şişe sinekler tüm enjekte edilmiş kez tüp üzerinde tam zaman yazmak önemlidir. Virüs enfeksiyonu hücre liksise neden olabilir ve sitopatik etkiler enfeksiyon dan sonra üç gün gözlenir.Wolbachia 16s rRNA ve wsp astarlar wolbachia ve Drosophila varlığını tespit etmek için kullanılabilir gösterildiği gibi. Wolbachia-free sinekler DCV enfeksiyonu sonrası ve doza bağımlı bir şekilde önemli ölçüde azalmış sağkalım oranı sergiler. DCV, Dicer-2 mutant sineklerinde azalmış sağkalım oranı ve artan viral yük ile kanıtlandıkça Drosophila'da antiviral enfeksiyon için kritik öneme sahip konaktaki antiviral sinyal yollarını aktive eder.Bu prosedürü çalışırken, Wolbachia genotip ile kontaminasyon Drosophila melanogaster DCV enfeksiyonu uçar duyarlılığı etkileyebilir hatırlamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, viral enfeksiyon veya antiviral yanıtlar için gerekli tanımlanmış konak genleri altında hakkında ek sorulara cevap vermek için daha büyük ölçekli genetik ekran gibi diğer yöntemler yapılabilir. Bu teknik, geliştirildikten sonra, drosophila melanogaster modelinde endemik insan viral enfeksiyonların salgınlarının altında yatan mekanizmaları araştırmak için insan viral hastalık alanında araştırmacılar için yol açtı.Virüsle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman uygun koruyucu ekipmanın takılması gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

establishment-viral-infection-analysis-host-virus-interaction

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Drosophila hemocytes gelişmekte olan embriyonun bütünlüğü içinde dağılırlar . Bu protokol, floresan etiketli hemocytes embriyoları kullanılarak bu göçler montaj ve görüntü nasıl gösteriyor.

Uygulamalarda Canlı Görüntüleme Drosophila melanogaster Embriyonik Hemocyte Göçler

Viral enfeksiyon katılan Roman konakçı faktörleri fonksiyonu RNAi tarama hücre tabanlı genom zarara tespit edilebilir.

RNAi Tarama için ilgilendim Ana Faktörler Vaccinia Virüs Enfeksiyonu Drosophila Hücre

Kaynak: Siva-Jothy, J. A. ve diğerleri. Drosophila melanogaster'de Ağız Bakteriyel Enfeksiyonu ve Dökülme. J. Vis. Deneyim. (2018)Video, Drosophila melanogaster'ın ağızdan patojenik bakterilerle enfeksiyonunu gösteriyor. Bu program, enfeksiyon şişelerinin hazırlanmasını ve aç sineklerin bakarak bakteri alımını mümkün kılmasını içerir. Bu işlem, bağırsak kolonizasyonunu yakalar, ardından yüzey sterilizasyonu ve sineklerin homojenizasyonunu içerir. Son olarak, seri seyreltme ve koloni sayımı...

Drosophila melanogaster'in Patojenik Bakterilerle Ağız Enfeksiyonu

Kaynak: Hiroyasu, A., D ve diğerleri, Drosophila melanogaster larvalarından hemositlerin çıkarılması ve mikrobiyal enfeksiyon ve analizi. J. Vis. Exp. (2018)Bu video, Drosophila larvalarında bakteriyel enfeksiyonun oluşturulması için bir mikrobakteri damlasına yerleştirilip tungsten iğneyle delinerek uygulanır. Larvalar, daha sonra oluklu, besin açısından zengin bir agar plakasında kuluçka edilip konakçı-patojen etkileşimleri incelenir.

Drosophila larvalarında bakteriyel enfeksiyonun kurulması

Bu videoda, yetişkin erkek Drosophila sineklerine pozitif anlamlı, tek sarmallı bir RNA virüsünün nano enjeksiyonunu gerçekleştirmek ve ardından enfeksiyon nedeniyle başlatılan antiviral yanıtları incelemek için bir prosedürü açıklıyoruz. Polimeraz zincir reaksiyonu analizi, enfekte sineklerde RNA interferansı ve JAK/STAT sinyali dahil olmak üzere bağışıklık yanıt yollarının aktivasyonunu gösteren spesifik genlerin yukarı regülasyonunu tanımlar.

Yetişkin Sineklerde Konak-Virüs Etkileşimlerini İncelemek için İntratorasik Viral Nano Enjeksiyon

Bu videoda, Drosophila S2* hücreleri üzerinde Drosophila C virüsünün doku kültürü enfektif viral dozunu belirlemek için sitopatik etki testini gösteriyoruz. Kültürlenmiş hücreleri enfekte etmek için bir dizi viral konsantrasyon kullanılır. Yapısal değişiklikler sergileyen hücrelerin oranı belirlenir ve bu veriler doku kültürü enfektif dozunu hesaplamak için kullanılır.

Kültürlenmiş Böcek Hücrelerinde Drosophila C Virüsünün Virüs Enfeksiyöz Dozunu Belirlemek İçin Test

Drosophila melanogaster, doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini ve enfeksiyon ve hastalığın fizyolojik sonuçlarını incelemek için olağanüstü bir model organizmadır. Bu protokol, D. melanogaster'e sağlam ve kantitatif olarak tekrarlanabilir bakteriyel enfeksiyonların nasıl sağlanacağını ve daha sonra enfeksiyon şiddetinin nasıl ölçüleceğini ve konak immün yanıtının nasıl ölçüleceğini açıklar.

Sistemik Bakteriyel Enfeksiyon ve Bağışıklık Savunma FENOTİPİ içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu yöntem, patojen işgali üç boyutlu (3D) modelleri ile böcek hücreye görselleştirmek gösterilmiştir. Hemocytes Drosophila larvaları üzerinden viral veya bakteriyel patojenler, ex vivo veya vivo içindeile bulaşmış. Virüslü hemocytes daha sonra sabit ve görüntüleme için bir confocal mikroskop ve sonraki 3D hücresel yeniden yapılanma ile lekeli.

Hemocytes mikrobiyal enfeksiyon ve çözümleme çekme--dan Drosophila melanogaster larva

Bu iletişim kuralı sözlü olarak ortaya çıkarmak ve bakteriyel patojenler ile meyve sineği Drosophila melanogaster bulaştırmak ve bağırsak enfeksiyonu takip bulaşıcı bakteri döken sayısını ölçmek için yöntemler açıklanır. Daha fazla sinek hayatta kalma sözlü bakteriyel enfeksiyonu takip bağışıklık mutantlar etkisini açıklar.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

Burada, Abdovirüs çoğaltma ve Abdovirüs çoğaltma kısıtlamak 2) ökaryotik ana faktörler teşvik 1) virüs kodlanmış immunomodulators tanımlamak için protokolleri mevcut. Floresan ve ışıldama dayalı yöntemlerin araştırmacılar hızla düşük sinyal noise oranları ile basit deneyleri Abdovirüs çoğaltma nicel veriler elde etmek için izin verir.

Araçlar Viral Immunomodulators ve ana bilgisayar Antiviral faktörler tanımlanması için eleme olarak Abdovirüs enfeksiyonlar

Bu iletişim kuralı bir hücre tanıma ve mikrobiyal enfeksiyonlar Gümrükleme ölçmek için yetişkin Drosophila melanogaster içinde vivo fagositoz tahlil açıklar.

Bir In Vivo fagositoz tahlil kullanarak Drosophila melanogaster, meyve sineği hücresel bağışıklık yanıtı değerlendirirken

Öğrenin Drosophila melanogaster'de viral enfeksiyon kurma ve virüs-konak etkileşimlerini analiz etme yöntemini. Nano-enjeksiyon tekniği, viral doz kontrolü sağlar ve viroloji araştırmaları için güvenilir bir çerçeve sunar.

Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Daha fazla video keşfet