Kritik Ekstre İskemisi Olan Anjiyoplasti Tedavisi Gören Hastalarda Lokal Dolaşımdaki Mononükleer Progenitör Hücreler Kullanılarak Amputasyonun Tahmin Edilmesi

Anjiyoplasti kritik ekstremite iskemisinde kan akışını iyileştirse de, bazı hastalar yine de ekstremite amputasyonuna ilerleyecektir. Geleneksel risk faktörlerine ve intrinsik vasküler özelliklere dayalı prognoz ile karşılaştırıldığında, lokal MPC'lerin sayısı endotel disfonksiyonu ve ekstremite amputasyonu ile ilgili klinik sonucu daha fazla öngörebilir. Lokal MPC'lerin sayısı, iskemi, kalp hastalığı ve alt ekstremite iskemisi gibi vasküler olayların prognozunun umut verici bir göstergesini temsil eder ve risk sınıflandırması ve önleme uygulamasında potansiyel uygulama sağlar.

Prosedürleri gösterecek olan Eduardo Vera-Gomez, Alejandro Hernandez-Patricio, Carolina Aranda-Rodriguez, Juan Ariel Gutierrez-Buendia, Atzin Sua Ruiz-Hernandez, Mario Antonio Tellez-Gonzalez ve Gabrielle Alexandra Dominguez-Perez olacak. Deneysel metabolizma ve doku rejenerasyonu laboratuvarlarından doktora öğrencileri de Gabrielle Hernandez-De Rubin ve Oscar Antonio Loman-Zuniga olacak. Ve bunlar damar cerrahisi bölümünden.

Anjiyoplasti öncesi ve sonrası FMD'yi belirlemek için, hastanın brakiyal arterinin çapını ölçmek için bir vasküler lineer dönüştürücü kullanın. Bir sonraki yer, önkoldaki ölçüm bölgesinin üzerindeki bir tansiyon aletinin manşetini kapatın ve manşeti söndürmeden önce beş dakika boyunca sistolik kan basıncının 50 milimetre üzerinde cıva şişirin. Söndürüldükten sonraki 60 saniye içinde brakiyal arter çapını tekrar ölçün ve FMD'yi tahmin etmek için denklemi kullanın.

Ekstremite iskemisinin klinik şiddetini değerlendirmek için, Rutherford sınıflandırmasına göre, seçilen kasık bölgesindeki kan damarına 18 gauge bir iğne yerleştirin ve iğnenin üzerine bir introdüser yerleştirin. Tanıtıcıya esnek bir kılavuz tel ilerletin ve kılavuzu altı Fransız tanıtıcı ile değiştirin. Floroskopik rehberliği kullanarak, arter yörüngesini ve tıkalı vasküler bölgeleri belirlemek için kontrast madde enjekte edin.

İki, 0.014 Fransız navigasyon kılavuz telini ve iki, 0.014 Fransız destek kılavuz telini gemiye sokun ve kılavuz telleri tıkalı bölgeye ilerletin. Daha sonra, bir beş Fransız kateteri ve ardından bir üç Fransız kateteri yerleştirin ve vasküler tıkanıklığa en yakın bölgeden 10 mililitre kan toplayın. Numuneyi buzun üzerine yerleştirin ve tekrar bir kılavuz tel ilerletin.

Kılavuz tel yerinde olduğunda, kateterin ucunda bulunan şişirilebilir bir balon içeren bir anjiyoplasti balon kateterini yerleştirin ve anjiyoplasti balon kateterini lezyon bölgesine ilerletin. Balonu vasküler duvarda bulunan bloke edici plağa karşı şişirin ve kan akışının restorasyonunu doğrulayın. Anjiyoplasti yapıldıktan 30 dakika sonra, vasküler bloğa en yakın bölgeye bir kateter ilerletin ve 10 mililitre kan toplayın.

Ardından, tüm kılavuz telleri çıkarın ve uygun ameliyat sonrası bakımı sağlayın. Anjiyoplastiden iki hafta sonra, Rutherford sınıflandırmasına göre ekstremite iskemisinin klinik şiddetini, çözülen dinlenme ağrısını, alt iskemiyi ve fonksiyonel ayak korumasını değerlendirin ve olumsuz bir sonuç nedeniyle majör amputasyon gerektiren vakaları belirleyin. Toplandıktan sonraki bir saat içinde, toplanan her kan örneğinin altı mililitresini yeni 15 mililitrelik tüplere aktarın ve örnekleri PBS'de bire bir oranında seyreltin.

Üç test tüpünün her birine iki mililitre yoğunluk gradyan ortamı ekleyin ve her tüpe dörtte üçünden fazla olmamak üzere seyreltilmiş kanın üç eşit hacimli alikotunu ekleyin. Kan hücrelerini yoğunluk gradyan santrifüjleme ile ayırın ve elde edilen katmanların arayüzünün hücrelerini toplamak için bir pipet kullanın. Hücreleri her numuneden 15 mililitrelik tek bir tüpe çekin ve her numuneyi yıkama başına iki mililitre PBS ile altı kez yıkayın.

Son yıkamadan sonra, sayım için numune başına bir mililitre PBS'de MPC içeren peletleri yeniden askıya alın ve numune başına uygun sayıda beş mililitre akış sitometri tüpüne tüp başına altı hücreye 10 kez ekleyin. Hücreleri santrifüjleme ile peletleyin ve her bir hücre örneğini, hücreleri ışıktan korunarak dört santigrat derecede 20 dakika inkübe etmeden önce, ilgilenilen antikor kokteylinin 100 mikrolitresinde 10 saniye boyunca yeniden askıya alın. İnkübasyonun sonunda, analiz için uygun ön ve yan saçılma kapılarını ayarlamak için izotip uyumlu kontrol antikorları kullanın ve NPC'leri geçmek için çok sayıda CD45 ve CD34 pozitif hücre içeren bir tüp kullanın.

Çift pozitif immün fenotipleri seçmek için yeni grafikler oluşturun ve KDR, CD133 ve CD184 pozitif, CD34 pozitif, CD45 pozitif hücreleri kapı ile tanımlayın, ardından ana MPC alt popülasyonlarını tanımlamak için geçit oluşturun. MPC'lerin sayısı daha sonra başlangıç FMD değeri ve FMD'nin anjiyoplasti sonrası deltası ve alt ekstremitenin majör amputasyonu gerektiren hastaların oranı ile ilişkilendirilebilir. Bu temsili analizde, alt ekstremite anjiyoplastisinden 30 gün sonra, CD45 pozitif, CD34 pozitif, KDR pozitif MPC'lerin başlangıç sayısı FMD ile negatif korelasyon gösterdi.

Anjiyoplasti sonrası CD45 pozitif, CD34 pozitif, CD133 pozitif, CD184 pozitif MPC'lerdeki değişim ise FMD iyileşmesi ile anlamlı olarak korelasyon gösterdi. MPC'lerin CD45 pozitif, CD34 pozitif, KDR pozitif alt popülasyonlarının başlangıç sayısında artışın yanı sıra MPC CD45 pozitif, CD34 pozitif, CD133 pozitif, CD184 pozitif hücrelerde anjiyoplasti sonrası azalma, uzuv amputasyonuna evrimleşen hastalarda da gözlendi, Vasküler yaklaşım sırasında, kanın vasküler tıkanıklığa en yakın bölgeden alındığından emin olun.