Floresan Biyosensör Dinamiğinin ve Hormon Salgı Profillerinin Senkron Değerlendirmesi için İnsan Psödoislet Sistemi
November 3rd, 2023
Bu protokol, bir siklik adenozin monofosfat (cAMP) biyosensörünün, bir cAMP fark detektörünün in situ (cADDis) ve bir mikroperifüzyon sisteminin adenoviral iletimini kullanarak hücre içi sinyal olaylarının senkron edinimi ve birlikte kaydı ve birincil insan psödoisletleri tarafından insülin ve glukagon salgılanması için bir yöntemi açıklar.
Laboratuvarımız, tip bir ve tip iki diyabette beta hücre disfonksiyonunu ve diğer göz kapağı anormalliklerini anlamak, önlemek ve tersine çevirmek için çalışıyor. Çalışmalarımız, insan pankreas ve göz kapağı biyolojisi ile sağlık ve hastalık çalışmalarını entegre ederek insan diyabetinin patogenezine odaklanmaktadır. İnsan kuşgözü 3D küresel yapılardır ve tüm kuşgözü boyunca hücrelere erişmek bazı deneysel zorluklar sunar.
Örneğin, kuşgözü hücresi sinyalini anlamak için biyosensörleri tanıtmaya çalışırken, yalancı göz kapağı protokolümüz, tek hücre durumunda genetik manipülasyonlar gerçekleştirerek ve bu dönüştürülmüş insan kuşgözü hücrelerini sonraki çalışmalar için yalancı göz kapaklarında toplayarak bu zorluğun üstesinden gelir. Yalancı göz kapağı sistemimiz, biyosensörleri sadece göz kapağı yüzeyinden ziyade tüm kuşgözü boyunca ifade etmemizi sağlar. Canlı hücre görüntüleme ve Mikroperfüzyon Sistemimiz ile birlikte, aşağı akış hormon sekresyonu ile dinamik hücre içi süreçleri hem ölçebilir hem de birlikte kaydedebiliriz.
Bu protokol, çeşitli önemli bilimsel soruları yanıtlamak için uygulanabilir. Örneğin, gen susturma stratejileri, ilgilenilen bir genin göz kapağı fonksiyonu ve ilişkili sinyal yolları üzerindeki etkisini küresel olarak veya kendine özgü bir şekilde anlamak için bu yaklaşımla birleştirilebilir.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu çalışma, senkron hücresel sinyal iletimi ve hormon salgılanması elde etmek için bir psödoislet model sistemi kullanarak diyabette beta hücre işlev bozukluğunu ve adaçık anormalliklerini ele almaktadır. Yöntem, dinamik insülin ve glukagon yanıtlarının analizini sağlamak için adenoviral cAMP biyosensörü teslimi ve bir mikroperifüzyon sistemi kullanmaktadır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Araştırma Alanı
- Tip 1 ve Tip 2 diyabet
- İnsan adaçık biyolojisi
- Hücre sinyali dinamiği
Arka Plan
- İnsan adaçıkları, deneysel zorlukları sunan küresel yapılardır.
- Psödoislet protokolü, etkili biyosensör tanıtımı için bu zorlukları çözmektedir.
- Adaçık sinyalini anlamak diyabet araştırması için kritiktir.
Kullanılan Yöntemler
- Biyosensör ekspresyonu için adenoviral teslim
- Birincil insan psödoislet modeli
- Hormon salgılanması ölçümü için mikroperifüzyon sistemi
Ana Sonuçlar
- İntrasellüler sinyalleşme ve hormon salınımının başarılı bir şekilde kaydedilmesi.
- Gen susturma etkilerinin adaçık fonksiyonu üzerindeki etkilerinin analizini sağlamak.
- Gerçek zamanlı olarak salgılanma yanıtlarının dinamik izlenmesi.
Sonuçlar
- Bu çalışma, adaçık hormon sinyalleşmesini incelemek için sağlam bir protokol sunmaktadır.
- Diyabette adaçık biyolojisinin anlaşılması için önemli etkileri vardır.
