İnce Partikül Maddeye Maruz Kalan Zebra Balığı Embriyolarında Polisiklik Aromatik Hidrokarbonların Tespiti için Modifiye Edilmiş Bir QuEChERS-HPLC Yöntemi

Bu araştırma, EOM'ye maruz kalan zebra balığı embriyolarındaki PAH'ları ölçmek için modifiye edilmiş bir QuEChERS-HPLC yöntemi geliştirmeyi ve embriyoların kütle büyüklüğü ve biyolojik matrislerinin karmaşıklığı nedeniyle iç PAH seviyelerinin ölçülmesindeki teknik zorlukların neden olduğu mevcut boşluğu ele almayı amaçlamaktadır. Güvenilir sonuçlar elde etmek, grup başına 200 embriyo gerektirir ve bu da pratik bir zorluk teşkil eder. HPLC'yi floresan dedektörü ile birleştirmek, yöntemin hassasiyetini daha da artırabilir. Diğer tekniklerle karşılaştırıldığında, bu modifiye edilmiş QuEChERS-HPLC yöntemi, numune askıda kalma süresini önemli ölçüde azaltır ve EOM'ye maruz kalan zebra balığı embriyolarında 16 PAH seviyelerini analiz etmek için hızlı ve verimli bir yaklaşım sağlar.

[Ekran Okuyucusu] Başlamak için, döllenmeden 72 saat sonra embriyoları içeren kapları inkübatörden çıkararak QuEChERS örneğini hazırlayın. Embriyoları üç kez saf su ile yıkayın. Embriyoları 1,5 mililitrelik tüplere aktarın ve fazla suyu alın. Embriyoları liyofilize etmek için tüpleri eksi 80 santigrat derece dondurucuda 30 dakika bekletin. Liyofilizasyondan sonra, embriyoları bir cam çubuk kullanarak öğütün. 25 mikrolitre 16 polisiklik aromatik hidrokarbon veya PAH ekleyin, başak geri kazanımını test etmek için standart çözeltiyi DMSO kontrol grubuna karıştırın. Ardından, bir mililitre n-heksan ekleyin ve 30 saniye boyunca girdap yapın. Karışımı 30 dakika boyunca 35 santigrat derecede ultrasonikleştirin. Şimdi, numuneyi beş dakika boyunca 7.000 g'da santrifüjleyin. Süpernatanı yeni bir tüpe aktarın. Toplanan süpernatanları 35 santigrat derece su banyosunda nitrojen akışı altında kuruyana kadar buharlaştırın. Bir mililitre asetonitril ekleyin ve 30 saniye boyunca girdap yapın. Numuneye 10 miligram birincil ikincil amin, 45 miligram magnezyum sülfat ve 15 miligram C18 ambalajı ekleyin, ardından 30 saniye boyunca girdap yapın. Beş dakika boyunca 7.000 g'da santrifüjleyin ve süpernatanı yeni bir tüpe aktarın. Süpernatanı nitrojen altında 0,5 mililitreye kadar buharlaştırın ve numuneyi 0,22 mikrometre mikro gözenekli bir zardan süzün. Asetonitril kullanarak 16 PAH karışım standardı için mililitrede bir ila 500 nanogram arasında değişen bir dizi çalışma solüsyonu hazırlayın. 20 mikrolitre numune çözeltisini bir asetonitril veya su mobil fazı kullanarak bir sıvı kromatografa enjekte edin ve ekranda gösterilen elüsyon prosedürünü izleyin. Mililitre başına beş nanogram ile mililitre başına 500 nanogram arasında bir aralığı kapsayan, x eksenindeki standart çalışma çözeltilerinin kütle konsantrasyonlarını ve y eksenindeki karşılık gelen tepe alanlarını içeren standart bir eğri çizin. Saflaştırılmış numuneyi bir floresan dedektörü veya FLD ve diyot dizi dedektörü veya DAD ile donatılmış sıvı kromatografa enjekte edin. Bekletme sürelerini karşılaştırarak PAH'ların varlığını belirleyin. Konsantrasyonu belirlemek için tepe alanlarını ölçün. Son olarak, ölçülen kütle konsantrasyonlarına göre 16 PAH'ın iç konsantrasyonlarını hesaplayın. Döllenmeden 72 saat sonra zebra balığı embriyolarında polisiklik aromatik hidrokarbonların veya PAH'ların konsantrasyonları bu tabloda verilmiştir. Ekstrakte edilebilir organik maddede veya EOM'de, maruz kalan zebra balığı embriyolarında altı PAH başarıyla tespit edildi. Buna karşılık, DSMO kontrol numunelerinde, EOM numunelerindekinden önemli ölçüde daha düşük seviyelerde sadece iki PAH tanımlanmıştır.