Name: Yaralı Zebra Balığı Larvalarında Kalıcı Pseudomonas aeruginosa Enfeksiyonunun Modellenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-06-13T13:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 4 s
Description: Keşfedin yaralı zebra balığı larvalarında Pseudomonas aeruginosa ile kalıcı enfeksiyon modellemesini. Bu yöntem, antibiyotik direnci ve kronik enfeksiyon tedavileri için ilaç tarama çalışmalarını hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmada açıklanan tüm zebra balığı deneyleri, Montpellier Üniversitesi'nde, Avrupa Birliği'nin laboratuvar hayvanlarının işlenmesine ilişkin yönergelerine göre 3R'ler -Değiştirme, Azaltma ve İyileştirme- ilkeleri izlenerek gerçekleştirilmiş ve Direction Sanitaire et Vétérinaire de l'Hérault ve Comité d'Ethique pour l'utilisation d'animaux à des fins scientifiques tarafından CEEA-LR-B4-172-37 referansı altında onaylanmıştır. Tüm enfeksiyon deneyleri, döllenmeden 5 gün sonrasına kadar embriyolar üzerinde gerçekleştirildi. AB veya Golden Lines balıklarından yetişkin zebra balığının (Danio rerio) yetiştirilmesi, AB Hayvan Koruma Direktifi 2010/63/EU tarafından belirtilen uluslararası yönergelere bağlı kalmıştır. Montpellier Üniversitesi'nin standart koşulları 12 h:12 h ışık olarak ayarlanmış: karanlık döngü, 3,5 L polikarbonat tank (tank başına maksimum 22 balık), %4 tuzluluk/400 μS iletkenlik ve 28 °C su sıcaklığına sahip bir devridaim sistemine bağlı zebra balığı tesisi. Balıklar günde 2 kez balık yemi ile beslendi.
1. Çözeltilerin hazırlanması
<ol>
	<li>Zebra balığı embriyolarını büyütmek için metilen mavisi olan veya olmayan balık suyu için 1x çalışma solüsyonu hazırlayın (bkz. Tablo 1).</li>
	<li>Tablo 1'de açıklandığı gibi 20x stok (%0,4) ve 1x çalışan Trikain anestezik solüsyonu hazırlayın. Stok çözeltisinin tekrar tekrar donmasını ve çözülmesini önlemek için, 10 mL 20x Trikain alikotu hazırlayın ve -20 ° C'de saklayın.</li>
	<li>1x Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS) içinde seyreltilmiş% 2 Triton çözeltisi hazırlayın; Tablo 1).</li>
</ol>
2. GFP'yiyapısal olarak eksprese eden floresanP. aeruginosa aşısının hazırlanması  
NOT: P. aeruginosa ile yapılan tüm çalışmalar, bir biyogüvenlik kabininde BSL-2 önlemleri ile yapılır. P. aeruginosa suşları, GFP gibi (burada kullanıldığı ve13'te açıklandığı gibi) yapısal olarak bir floresan raportörü eksprese etmek için genetik olarak değiştirilmelidir. Plazmit kodlu bir floresan raportör durumunda plazmit kaybını önlemek için kromozomal olarak kodlanmış bir floresan raportör ile suşların kullanılması şiddetle tavsiye edilir.
<ol>
	<li>Enfeksiyondan 2 gün önce, -80 ° C'den LB agar plakalarında GFP eksprese eden genetik olarak değiştirilmiş P. aeruginosa stoğunu çıkarın (Tablo 1) ve gece boyunca 37 ° C'de inkübe edin.</li>
	<li>Bir GFP + P. aeruginosa kolonisini 1 mL LB suyunda (Tablo 1) aşılamak için bir floresan mikroskobu (Büyütme 6x) kullanarak kolonilerin floresansını kontrol edin ve gece boyunca 37 ° C'de çalkalama ile (180 rpm) büyütün.</li>
	<li>Enfeksiyon gününde, yukarıdaki gece boyunca P. aeruginosa kültürünü 1:20'de 5 mL taze LB et suyuna seyreltin. Bakterileri 37 ° C'de, kültür OD600 = 0.8'e ulaşana kadar çalkalayarak (180 rpm) büyütün. Bu yaklaşık 2-3 saat sürmelidir.</li>
	<li>Bakteri kültürünü oda sıcaklığında (RT) 3584 x g'da 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve peleti metilen mavisi olmadan 4 mL balık suyunda yeniden süspanse edin.</li>
	<li>Balık suyu ile kültür hacmini 7 x 107 ila 1 x 108 CFU / mL olacak şekilde ayarlayın. Bu, yaklaşık 0,15'lik bir OD600'e karşılık gelir (her suş için uyarlanacaktır).</li>
	<li>Aşılamayı ölçmek için, bakteri süspansiyonunun seri bir seyreltmesini yapın, 10-4 seyreltmenin 20 μL'sini bir LB agar plakası üzerine yerleştirin ve gece boyunca 37 ° C'de inkübe edin.</li>
	<li>İnokulumun CFU'larını belirlemek için floresan mikroskobu altında GFP + kolonilerini sayın.</li>
</ol>
3. Zebra balığı embriyolarının toplanması ve hazırlanması
<ol>
	<li>Bakteri daldırma deneyinden 3 gün önce, zebra balığı üreme çiftleri kurun. Üreyen bir erkek ve dişiyi bir melezleme tankına yerleştirin.</li>
	<li>Ertesi sabah, ince gözenekli bir süzgeç kullanarak döllenmeden sonra yumurtaları toplayın. Toplanan yumurtaları metilen mavisi içeren balık suyu içeren bir Petri kabına koyun.</li>
	<li>Kontaminasyonu önlemek için, Petri kabına 1 damla çamaşır suyu ekleyin. 5 dakika sonra, ağartıcıyı çıkarmak için balık suyunu metilen mavisi ile değiştirin.</li>
	<li>Anormal embriyo gelişimi olan yumurtaları (döllenmemiş yumurtalar 1 hücreli yumurta aşamasına benzer) veya ölü olanları (beyaz görünüm) atın.</li>
	<li>Enfeksiyon sabahı (2 dpf'de), embriyoları stereo mikroskop altında iki çok ince forseps ile dekoryonlayın (büyütme 11x). Serbest bırakmak için embriyoyu sıkıştırmadan forseps kullanarak koryonu yırtın.</li>
	<li>Dekoryonlu embriyoları metilen mavisi içeren balık içeren bir Petri kabına yerleştirin. Bulaşıkları enfeksiyon oluşana kadar 28 °C'de inkübe edin.</li>
</ol>
4. Embriyo yaralanması
<ol>
	<li>Zebra balığı embriyolarını, bir hücre kültürü kabında (35 mm x 10 mm) yaralanmadan yaklaşık 5 dakika önce,% 0.02 Trikain içeren,% 0.02 metilen mavisi içermeyen balık suyunda uyuşturun. Embriyolar artık hareket etmez ve uyaranlara cevap vermez.</li>
	<li>İğnelerin kullanımını kolaylaştırmak için 25G iğneleri iki çubuğun üstüne yerleştirin.</li>
	<li>Stereo mikroskop altında, anormal gelişime sahip embriyoları veya ölü olanları ortadan kaldırın. Yemeğin dairesel bir hareketini kullanarak, tüm embriyoları merkezde toplayın.</li>
	<li>Dikey pozisyonda (baş aşağı - kuyruk yukarı) iki iğne kullanarak embriyoları tek tek izole edin ve düz tutmak için sol iğneyi kuyruğa yerleştirin. Notokordun kenarındaki yüzgeci doğru iğne ile kesin. Kesimi tek seferde yapın. Kesme ve bakteri çözeltisine daldırma arasında 10 dakikayı aşmayın.</li>
</ol>
5. Yaralı embriyoların enfeksiyonu
<ol>
	<li>Biyolojik güvenlik kabini tip II altında, girdap yapın ve P. aeruginosa çözeltisini yaklaşık 1 x 107 CFU / mL'de 6 oyuklu bir plakaya ekleyin.</li>
	<li>Yaralı embriyoları tek kullanımlık bir Pasteur cam pipet ile toplayın ve mikrobiyolojik güvenlik direği altındaki bakteri çözeltisine ekleyin. Plakayı 28 °C'de 1,5 saat inkübe edin. NOT: Çok sayıda enfekte larvaya ihtiyaç duyulursa, yaklaşık 50 larvadan oluşan gruplar oluşturun, yarayı açın, daldırın ve bir sonraki grup için tekrarlayın.</li>
	<li>Enfeksiyondan sonra, embriyoları aşağıda tarif edildiği gibi mikrobiyolojik güvenlik direği altında yıkayın.<ol>
		<li>Embriyoları yıkamak için bir cam pipet ile oda sıcaklığında 30 dakika boyunca mümkün olduğunca az sıvı ekleyerek metilen mavisi içermeyen 10 mL balık suyuna aktarın.</li>
		<li>Enfekte embriyoları ikinci bir yıkama için bir cam pipet kullanarak birkaç dakika boyunca metilen mavisi içermeyen 4 mL balık suyuna tekrar aktarın.</li>
		<li>Enfekte olmuş 24 embriyoyu ayrı ayrı metilen mavisi içermeyen 1 mL balık suyu içeren çok kuyulu bir plakaya aktarın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Plakaları 28 °C'de inkübatörde plastik bir kutuya yerleştirin. Buharlaşmayı sınırlamak için kutuyu nemlendirin (örneğin nemli kağıt havlularla).</li>
</ol>
6. Enfekte embriyoların hayatta kalması
<ol>
	<li>Embriyo sağkalım çalışmaları için, enfeksiyondan 18 saat, 24 saat ve 48 saat sonra (hpi) stereo mikroskop altında canlılığı kontrol edin. Kalp ve kan dolaşımı durduğunda bir embriyo ölü olarak kabul edilir.</li>
	<li>Kaplan-Meier merdiven grafik gösterimlerini (GraphPad Prism 8.3.0) kullanarak ölüm / sağkalım oranlarını temsil edin ve verileri bir log-rank veya diğer uygun istatistiksel testlerle analiz edin.</li>
</ol>
7. Enfekte embriyolarda bakteri yükünün sayılması (Şekil 1)
<ol>
	<li>Enfekte embriyolardan dört farklı zaman noktasında CFU tayini yapın: 1.5 hpi, yani enfeksiyondan hemen sonra ve her yıkamadan sonra 24, 48 ve 72 hpi'de 5 embriyo / zaman noktası. Mikrobiyolojik güvenlik direği altındaki tüm adımları gerçekleştirin.</li>
	<li>Her enfekte larva için 95 μL 1x PBS içeren 1.5 mL mikrosantrifüj tüpleri hazırlayın. Larvaların hacmi 5 μL civarındadır.</li>
	<li>Larvaları, yıkama yapmak ve planktonik bakterileri ortadan kaldırmak için metilen mavisi içermeyen 4 mL balık suyu içeren 6 oyuklu bir plakaya aktarın.</li>
	<li>Her embriyoyu PBS içeren bir mikrosantrifüj tüpüne yerleştirin ve mümkün olduğunca az sıvı ekleyin. Larvaların sıvı eklemeden mikrosantrifüj tüpüne batmasını sağlamak için PBS'nin yüzeyindeki larvaları içeren cam pipete dokunmanız yeterlidir.</li>
	<li>Mikrosantrifüj tüpünün yan tarafındaki bir havaneli kullanarak embriyoları tek tek ezin. Havaneli tüpün içinde tutun. Sağlam embriyo kalmadığında son noktayı belirleyin.</li>
	<li>Havaneli kaldırın ve havaneli kalıntı bakterilerini durulamak için 100 μL PBS-Triton %2 ekleyin (nihai konsantrasyon %1'dir). Vorteks yapın ve 10 dakika bekleyin. Aynı anda beşten fazla embriyoyu işleme koymayın.</li>
	<li>Her embriyo için LB agar plakalarına 3x, 10 μL seyreltilmemiş lizat damlatın. Çok kanallı bir pipet kullanılarak 96-10 seyreltmeye ulaşılana kadar 3 oyuklu bir plakada lizatların seri seyreltmesini yapın. LB agar plakaları üzerindeki seyreltilmemiş olanların yanına 3x, 10 μL seyreltme 10-1, 10-2 ve 10-3 damlatın ve plakaları gece boyunca 37 °C'de inkübe edin.</li>
	<li>Mikroskop altında her seyreltmenin floresan kolonilerini sayın ve enfekte olmuş embriyo başına CFU'yu hesaplayın.</li>
</ol>
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68464/68464fig1.jpg"> 
Şekil 1: Zebra balığı embriyosunda bakteriyel virülans ve kalıcılığı değerlendirmek için deneysel zaman çizelgesi. Kısaltmalar: CFU = Koloni oluşturan birimler, hpi = enfeksiyondan sonraki saatler. Çizim BioRender.com ile oluşturuldu. Şekil13'ten değiştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68464/68464fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
8. Kalıcı enfeksiyona karşı tedavinin test edilmesi (Şekil 2)
<ol>
	<li>P. aeruginosa suşu için minimum inhibitör konsantrasyonun (MIC) 40 katında antibiyotik çözeltileri hazırlayın. Deneyden önce, seçilen antibiyotik konsantrasyonunun embriyo için toksik olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>7.1 ve 7.2 adımlarını izleyin. 24 oyuklu bir tabağa 1 mL antibiyotikli balık suyu koyun ve antibiyotiksiz bir kontrol yapın.</li>
	<li>Her tedavi için yıkama adımından beş embriyoyu 24 oyuklu plakaya aktarın ve mümkün olduğunca az sıvı ekleyin.</li>
	<li>Antibiyotiklerle oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. Adım 7.3'e dönün. tedaviden sonra bakteri yükünü ölçmek için.</li>
</ol>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68464/68464fig2.jpg"> 
Şekil 2: Enfekte embriyolar üzerinde antibiyotik tedavilerinin etkinliğini değerlendirmek için kullanılan deneysel prosedür. Kısaltmalar: ATB 30' = 30 dakika boyunca antibiyotik tedavisi, CFU = Koloni oluşturan birimler, hpi = enfeksiyondan sonraki saatler. Çizim BioRender.com ile oluşturuldu. Şekil13'ten değiştirildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68464/68464fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

<ol><li>Garcia-Clemente, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Pseudomonas+aeruginosa+Infection+on+Patients+with+Chronic+Inflammatory+Airway+Diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Impact of Pseudomonas aeruginosa Infection on Patients with Chronic Inflammatory Airway Diseases.</a> J Clin Med. 9 (12), 3800(2020).</li>
<li>Serra, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+wound+infections%3A+the+role+of+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Anti-Infect%22%5BJournal%5D)">Chronic wound infections: the role of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus.</a> Expert Rev Anti-Infect. 13 (5), 605-613 (2015).</li>
<li>Tacconelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery%2C+research%2C+and+development+of+new+antibiotics%3A+the+WHO+priority+list+of+antibiotic-resistant+bacteria+and+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Discovery, research, and development of new antibiotics: the WHO priority list of antibiotic-resistant bacteria and tuberculosis.</a> Lancet Infect Dis. 18, 318-327 (2018).</li>
<li>La Rosa, R., Johansen, H. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+Bacterial+Infections%2C+Antibiotic+Treatment+Failure%2C+and+Microbial+Adaptive+Evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Persistent Bacterial Infections, Antibiotic Treatment Failure, and Microbial Adaptive Evolution.</a> Antibiotics. 11 (3), 419(2022).</li>
<li>Kember, M., Grandy, S., Raudonis, R., Cheng, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-Canonical+Host+Intracellular+Niche+Links+to+New+Antimicrobial+Resistance+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">Non-Canonical Host Intracellular Niche Links to New Antimicrobial Resistance Mechanism.</a> Pathogens. 11 (2), 220(2022).</li>
<li>Lorenz, A., Pawar, V., Häussler, S., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+host-pathogen+interactions+from+state-of-the-art+animal+models+of+respiratory+Pseudomonas+aeruginosa+infections%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Insights into host-pathogen interactions from state-of-the-art animal models of respiratory Pseudomonas aeruginosa infections.</a> FEBS Lett. 590, 3941-3959 (2016).</li>
<li>Reyne, N., McCarron, A., Cmielewski, P., Parsons, D., Donnelley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+bead+or+not+to+bead%3A+A+review+of+Pseudomonas+aeruginosa+lung+infection+models+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">To bead or not to bead: A review of Pseudomonas aeruginosa lung infection models for cystic fibrosis.</a> Front Physiol. 14, 1104856(2023).</li>
<li>Pletzer, D., Mansour, S. C., Wuerth, K., Rahanjam, N., Hancock, R. E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Mouse+Model+for+Chronic+Infections+by+Gram-Negative+Bacteria+Enabling+the+Study+of+Anti-Infective+Efficacy+and+Host-Microbe+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">New Mouse Model for Chronic Infections by Gram-Negative Bacteria Enabling the Study of Anti-Infective Efficacy and Host-Microbe Interactions.</a> mBio. 8, e00140-e00217 (2017).</li>
<li>Pont, S., Blanc-Potard, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Embryo+Infection+Model+to+Investigate+Pseudomonas+aeruginosa+Interaction+With+Innate+Immunity+and+Validate+New+Therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Embryo Infection Model to Investigate Pseudomonas aeruginosa Interaction With Innate Immunity and Validate New Therapeutics.</a> Front Cell Infect Microbiol. 11, 745851(2021).</li>
<li>Nogaret, P., El Garah, F., Blanc-Potard, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Infection+Protocol+in+Zebrafish+Embryo+to+Assess+Pseudomonas+aeruginosa+Virulence+and+Validate+Efficacy+of+a+Quorum+Sensing+Inhibitor+In+Vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Pathogens%22%5BJournal%5D)">A Novel Infection Protocol in Zebrafish Embryo to Assess Pseudomonas aeruginosa Virulence and Validate Efficacy of a Quorum Sensing Inhibitor In Vivo.</a> Pathogens. 10 (4), 401(2021).</li>
<li>Phennicie, R. T., Sullivan, M. J., Singer, J. T., Yoder, J. A., Kim, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+resistance+to+Pseudomonas+aeruginosa+infection+in+zebrafish+is+mediated+by+the+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immunity%22%5BJournal%5D)">Specific resistance to Pseudomonas aeruginosa infection in zebrafish is mediated by the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.</a> Infect Immunity. 78 (11), 4542-4550 (2010).</li>
<li>Kumar, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+Transcriptomics+of+Host-Pathogen+Interaction+of+Cystic+Fibrosis+Isolate+Pseudomonas+aeruginosa+PASS1+With+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Dual Transcriptomics of Host-Pathogen Interaction of Cystic Fibrosis Isolate Pseudomonas aeruginosa PASS1 With Zebrafish.</a> Front Cell Infect Microbiol. 8, 406(2018).</li>
<li>Pont, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Pseudomonas+aeruginosa+persist+and+evade+antibiotic+treatment+in+a+wound+infection+model%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">Intracellular Pseudomonas aeruginosa persist and evade antibiotic treatment in a wound infection model.</a> PLoS Pathogens. 21 (2), e1012922(2025).</li>
<li>Facchini, M., De Fino, I., Riva, C., Bragonzi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+Term+Chronic+Pseudomonas+aeruginosa+Airway+Infection+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice.</a> J Vis Exp. (85), e51019(2014).</li>
<li>Bianconi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+genomics+and+biological+characterization+of+sequential+Pseudomonas+aeruginosa+isolates+from+persistent+airways+infection%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genom%22%5BJournal%5D)">Comparative genomics and biological characterization of sequential Pseudomonas aeruginosa isolates from persistent airways infection.</a> BMC Genom. 16, 1105(2015).</li>
<li>Buyck, J. M., Tulkens, P. M., Van Bambeke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacodynamic+evaluation+of+the+intracellular+activity+of+antibiotics+towards+Pseudomonas+aeruginosa+PAO1+in+a+model+of+THP-1+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicro+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Pharmacodynamic evaluation of the intracellular activity of antibiotics towards Pseudomonas aeruginosa PAO1 in a model of THP-1 human monocytes.</a> Antimicro Agents Chemother. 57 (5), 2310-2318 (2013).</li>
<li>Volpe, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeability+classification+of+representative+fluoroquinolones+by+a+cell+culture+method%5BTitle%5D)+AND+%22Aaps+Pharmsci%22%5BJournal%5D)">Permeability classification of representative fluoroquinolones by a cell culture method.</a> Aaps Pharmsci. 6 (2), 1-6 (2004).</li>
<li>Pang, Z., Raudonis, R., Glick, B. R., Lin, T. J., Cheng, Z. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibiotic+resistance+in+Pseudomonas+aeruginosa%3A+mechanisms+and+alternative+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Adv%22%5BJournal%5D)">Antibiotic resistance in Pseudomonas aeruginosa: mechanisms and alternative therapeutic strategies.</a> Biotechnol Adv. 37 (1), 177-192 (2019).</li>
<li>Lamberti, Y., Surmann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intracellular+phase+of+extracellular+respiratory+tract+bacterial+pathogens+and+its+role+on+pathogen-host+interactions+during+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The intracellular phase of extracellular respiratory tract bacterial pathogens and its role on pathogen-host interactions during infection.</a> Curr Opin Infect Dis. 34 (3), 197-205 (2021).</li>
</ol>

<a href="https://app.jove.com/t/6639">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/68464">10.3791/68464</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/68464">Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae</a>. The Authors&#160;section was&#160;updated.

Erratum: Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae

<table><tbody><tr><td>Etil-3-aminobenzoat metansülfonat</td><td>Sigma</td><td>E50521</td><td></td></tr><tr><td>Pistonlu pelet</td><td>Eppendorf, Dutscher</td><td>33522</td><td></td></tr><tr><td>Deniz Tuzları</td><td>Anında Okyanus, Akvaryum sistemleri&nbsp; &nbsp;</td><td>218035</td><td></td></tr><tr><td>Triton</td><td>Euromedex</td><td>2000-B</td><td></td></tr></tbody></table>

yaralı zebra balığı larvalarında kalıcı pseudomonas aeruginosa enfeksiyonunun modellenmesi

Modeling Persistent Pseudomonas aeruginosa Infection in Wounded Zebrafish Larvae

Zebra balığı embriyosu, P. aeruginosa CF izolatları ile kalıcı bir enfeksiyonu izlemek için uygun bir modeldir Üç CF izolatının (A6520, B6513 ve C6490) virülansını in vivo değerlendirmek için yaralı embriyoların daldırma modunu kullandık9. Ayrıca, fare hava yollarında uzun süreli kolonizasyon için bilinen, iyi karakterize edilmiş bir geç KF izolatı olan RP73'ün davranışını da değerlendirdik14,15</...

Yaralı Zebra Balığı Larvalarında Kalıcı Pseudomonas aeruginosa Enfeksiyonunun Modellenmesi

Pseudomonas aeruginosa is a major human pathogen, particularly in chronic wound infections and chronic pulmonary infections (especially in patients with ...

modeling-persistent-pseudomonas-aeruginosa-infection-wounded

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Şeffaf zebrabalıkları embriyolar gibi görselleştirmek için faydalı model bilgisayarlar ve doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ve hücre içi bakteriyel patojenler arasında işlevsel çalışma etkileşimleri,...

Hücre içi bakteriyel patojenler ile Zebra balığı Embryolarının Enfeksiyon

Zebra balığı hızla gelişmesi, küçük boyutu ve şeffaflık enfeksiyon doğal immün kontrolü çalışması için çok büyük avantajları...

Zebra balığı Larva yılında Dissemine Kandidiyazis non-invaziv Görüntüleme

Bu videoda, Yetişkin Zebra Balığı'nın karın boşluğuna solüsyon iletmek için bir yöntem olan intraperitoneal enjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

İntraperitoneal Enjeksiyon: Yetişkin Bir Zebra Balığının Karın Boşluğuna Çözelti Verme Yöntemi

Kaynak: Luukinen, H. ve diğerleri. Mycobacterium marinum enfekte yetişkin zebrabalıklarda tüberkülozun modellemesi.  J. Vis. Exp. (2018).

Zebrafish modeli kullanarak mikobakteriyel enfeksiyonda konak bağışıklığının rolünün değerlendirilmesi

Kaynak: Flores, E. ve diğerleri. Zebrafish larvalarında gıda kaynaklı enfeksiyonlar için protozoan paramecium caudatum aracı olarak kullanılması. J. Vis. Exp. (2019).Bu video, zebrafish larvalarında floresan E. coli enfekte paramecia ile beslenerek gıda kaynaklı bakteriyel bağırsak enfeksiyonu modeli oluşturma yöntemini göstermektedir.

Zebrafish larvalarında Bağırsak Enfeksiyonunun Gıda Kaynaklı Bakterilerle Modellenmesi

İn vivo patojen ve immün savunmanın mukozal düzeydeki uzaysal-zamansal etkileşimleri, mevcut omurgalı konakçılarında kolayca görüntülenemez. Burada sunulan yöntem, genç zebra balığının yüzme kesesini bir enfeksiyon bölgesi olarak kullanarak canlı omurgalılarda mukozal kandidiyazisi incelemek için çok yönlü bir platformu tanımlamaktadır.

Swimbladder Enjeksiyon ile Larva Zebra balığı Mukozal Candidiazis Modelleme

Optik olarak şeffaf zebra balığı embriyoları, patojenik mikroorganizmalar ve doğuştan gelen bağışıklık hücreleri arasındaki etkileşimleri gerçek zamanlı olarak incelemek ve görselleştirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Mycobacterium abscessus'un mikro enjeksiyonu, floresan görüntüleme ile birlikte, zebra balığı embriyolarında kordon oluşumu gibi temel patojenik özellikleri incelemek için kullanılır.

Görüntüleme Patogenez ve Cording Deşifre ve<em&gt; Mycobacterium abscessus</em&gt; Zebra balığı Embriyolar

Burada, içinde bir yetişkin zebra balığı kendi doğal patojen Mycobacterium marinumkullanarak bir iletişim kuralı modeli insan tüberküloz için mevcut. Ayıklanan DNA ve RNA gelen virüslü zebra balığı iç organlarının balıklar ve ana bilgisayarın bağışıklık yanıtı qPCR ile toplam Mikobakteriyel yükler ortaya çıkarmak için kullanılabilir.

Tüberküloz Mycobacterium marinum enfekte yetişkin zebra balığı içinde modelleme

Bu da çalışmanın bir zebra balığı embriyo modeli içinde vivo görselleştirme ve enfeksiyonu floresans mikroskobu göre zaman içinde biomaterial ilgili intravital analizi için açıklar. Bu model içinde vivo biomaterial ilişkili enfeksiyonların çalışmak için fare modelleri gibi memeli hayvan modelleri tamamlayan gelecek vaat eden bir sistemdir.

Bir zebra balığı embriyo Model In Vivo görselleştirme ve Staphylococcus aureus Intravital analiz Biomaterial ilişkili enfeksiyon

İmmün yetersiz farelerde kronik yara enfeksiyonları oluşturmak için gecikmiş bir aşılama protokolünü tanımladık.

Kronik Pseudomonas aeruginosa Yara Enfeksiyonu Gecikmiş Aşılama Modeli

Bu protokol zebra balığı larvalarında bir Aspergillus enfeksiyon modelini açıklar. Aspergillus sporları larvaların arka beyinlerine mikroenjeksiyona sokuldu ve immünosupresyona neden olmak için kimyasal tedavi kullanıldı. Enfeksiyon ilerlemesi, mantar büyümesini ve immün yanıtları ve canlı sporların koloni oluşturan birim kaplama ile numaralandırılmasını izlemek için günlük görüntüleme kurulumu ile izlenir.

Konakçı-Patojen Etkileşimlerinin Analizi için Zebra Balığı Larvalarının Aspergillus Sporları ile Enfeksiyonu

Keşfedin yaralı zebra balığı larvalarında Pseudomonas aeruginosa ile kalıcı enfeksiyon modellemesini. Bu yöntem, antibiyotik direnci ve kronik enfeksiyon tedavileri için ilaç tarama çalışmalarını hızlandırır.

Yaralı Zebra Balığı Larvalarında Kalıcı Pseudomonas aeruginosa Enfeksiyonunun Modellenmesi

Daha fazla video keşfet