Name: E. coliden Elastin Benzeri Polipeptitlerin (ELP) Organik Çözücü Bazlı Ekstraksiyon ve Çökeltme Yöntemi Kullanılarak Verimli Arındırılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:05:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Keşfedin: E. coli'den elastin benzeri polipeptitlerin organik çözücü bazlı ekstraksiyon ve çökeltme yöntemiyle hızlı arındırılması. Bu yöntem, düşük endotoksin seviyeleriyle yüksek saflıkta ELP füzyon proteinleri elde eder ve fonksiyonel aktiviteyi korur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Despanie, J., Dhandhukia, J. P., Hamm-Alvarez, S. F., MacKay, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides%3A+therapeutic+applications+for+an+emerging+class+of+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides: therapeutic applications for an emerging class of nanomedicines.</a> J Control Release. 240, 93-108 (2016).</li>
<li>MacEwan, S. R., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Control+Release%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in drug delivery.</a> J Control Release. 190, 314-330 (2014).</li>
<li>Jenkins, I. C., Milligan, J. J., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetically+encoded+elastin-like+polypeptides+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Healthc+Mater%22%5BJournal%5D)">Genetically encoded elastin-like polypeptides for drug delivery.</a> Adv Healthc Mater. 10 (13), e2100209(2021).</li>
<li>Ju, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targeting+of+immunosuppressants+using+a+bifunctional+elastin-like+polypeptide%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjug+Chem%22%5BJournal%5D)">Molecular targeting of immunosuppressants using a bifunctional elastin-like polypeptide.</a> Bioconjug Chem. 30 (9), 2358-2372 (2019).</li>
<li>Nettles, D. L., Chilkoti, A., Setton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+elastin-like+polypeptides+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Drug+Deliv+Rev%22%5BJournal%5D)">Applications of elastin-like polypeptides in tissue engineering.</a> Adv Drug Deliv Rev. 62 (15), 1479-1485 (2010).</li>
<li>Meyer, D. E., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+of+recombinant+proteins+by+fusion+with+thermally+responsive+polypeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Purification of recombinant proteins by fusion with thermally responsive polypeptides.</a> Nat Biotechnol. 17 (11), 1112-1115 (1999).</li>
<li>VerHeul, R., Sweet, C., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+simple+purification+of+elastin-like+polypeptides+directly+from+whole+cells+and+cell+lysates+by+organic+solvent+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Sci%22%5BJournal%5D)">Rapid and simple purification of elastin-like polypeptides directly from whole cells and cell lysates by organic solvent extraction.</a> Biomater Sci. 6 (4), 863-876 (2018).</li>
<li>Sweet, C., Aayush, A., Readnour, L., Solomon, K. V., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+fast+organic+extraction-precipitation+method+for+improved+purification+of+elastin-like+polypeptides+that+is+independent+of+sequence+and+molecular+weight%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of a fast organic extraction-precipitation method for improved purification of elastin-like polypeptides that is independent of sequence and molecular weight.</a> Biomacromolecules. 22 (5), 1990-1998 (1990).</li>
<li>Darji, S., Aayush, A., Estes, K. M., Strock, J. D., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unravelling+the+mechanism+of+elastin-like+polypeptide-enzyme+fusion+stabilization+in+organic+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Unravelling the mechanism of elastin-like polypeptide-enzyme fusion stabilization in organic solvents.</a> Biomacromolecules. 25 (1), 272-281 (2024).</li>
<li>Urry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+chemistry+of+biological+free+energy+transduction+as+demonstrated+by+elastic+protein-based+polymers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Physical chemistry of biological free energy transduction as demonstrated by elastic protein-based polymers.</a> J Phys Chem B. 101 (51), 11007-11028 (1997).</li>
<li>Guo, Y., Liu, S., Jing, D., Liu, N., Luo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+construction+of+elastin-like+polypeptides+and+their+applications+in+drug+delivery+system+and+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">The construction of elastin-like polypeptides and their applications in drug delivery system and tissue repair.</a> J Nanobiotechnology. 21, 418(2023).</li>
<li>Yi, A., Sim, D., Lee, S. -B., Sarangthem, V., Park, R. -W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+bioengineered+elastin-like+polypeptide-based+system+for+targeted+gene+delivery+in+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomater+Biosyst%22%5BJournal%5D)">Application of bioengineered elastin-like polypeptide-based system for targeted gene delivery in tumor cells.</a> Biomater Biosyst. 6, 100050(2022).</li>
<li>Clement, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+the+recombinant+expression+and+chemical+synthesis+of+a+short+cysteine-rich+insecticidal+spider+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Venom+Anim+Toxins+Trop+Dis%22%5BJournal%5D)">Comparison between the recombinant expression and chemical synthesis of a short cysteine-rich insecticidal spider peptide.</a> J Venom Anim Toxins Trop Dis. 21, 19(2015).</li>
<li>Miranda, L. P., Alewood, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+chemical+synthesis+of+peptides+and+small+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Accelerated chemical synthesis of peptides and small proteins.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 96 (4), 1181-1186 (1999).</li>
<li>Eweje, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+protein+nanoparticles+for+cytosolic+delivery+of+nucleic+acids+and+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Self-assembling protein nanoparticles for cytosolic delivery of nucleic acids and proteins.</a> Nat Biotechnol. , (2025).</li>
<li>Hassouneh, W., Christensen, T., Chilkoti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin-like+polypeptides+as+a+purification+tag+for+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Elastin-like polypeptides as a purification tag for recombinant proteins.</a> Curr Protoc Protein Sci. 6 (11), 1-16 (2010).</li>
<li>Yakhnin, A. V., Vinokurov, L. M., Surin, A. K., Alakhov, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Green+fluorescent+protein+purification+by+organic+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr+Purif%22%5BJournal%5D)">Green fluorescent protein purification by organic extraction.</a> Protein Expr Purif. 14 (3), 382-386 (1998).</li>
<li>Aayush, A., Darji, S., Estes, K. M., Yeh, E., Thompson, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+elastin-like+polypeptide-based+nucleic+acid+delivery+system+targeted+to+EGFR%2B+bladder+cancer+cells+using+a+layer-by-layer+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Development of an elastin-like polypeptide-based nucleic acid delivery system targeted to EGFR+ bladder cancer cells using a layer-by-layer approach.</a> Biomacromolecules. 25 (9), 5729-5744 (2024).</li>
<li>Christensen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fusion+order+controls+expression+level+and+activity+of+elastin-like+polypeptide+fusion+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">Fusion order controls expression level and activity of elastin-like polypeptide fusion proteins.</a> Protein Sci. 18 (7), 1377-1387 (2009).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0710</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>%30 Akrilamid/Bis-akrilamid</td><td>TCI</td><td>A3218</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Aseton</td><td>Fisher Scientific</td><td>A949</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>Asetonitril</td><td>Fisher Scientific</td><td>A996</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>Ampicilin</td><td>Altın Biyo- Altın Biyoteknoloji</td><td>A-301-25</td><td>Antibiyotik</td></tr><tr><td>APS (Amonyum Persülfat)</td><td>Bio-Rad</td><td>1610700</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Butanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>L13171</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Biyoreagentleri</td><td>BP118-500</td><td>Liz Tamponu Bileşeni</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Labs</td><td>UN1170</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>Etil Asetat</td><td>Fisher Scientific</td><td>E195</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Research Products International</td><td>G22020-0.5</td><td>Harika Et Suyu (TB) Medya Bileşeni</td></tr><tr><td>Hidroklorik Asit</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144SI-212</td><td>Liz Tamponu Bileşeni</td></tr><tr><td>Anında Coomasie lekesi</td><td>Abcam</td><td>AB119211</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>IPTG</td><td>Altın Biyo- Altın Biyoteknoloji</td><td>12481C25</td><td>Protein İfadesi Bileşeni</td></tr><tr><td>İzopropanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A451-1</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>K2HPO4 (Potasyum Fosfat Monobazik)</td><td>Wards'ın Bilimi</td><td>470302-246</td><td>Bölüm 2 Tampon Bileşeni</td></tr><tr><td>KH2PO4 (Potazyum Fosfat Dibazik)</td><td>Wards'ın Bilimi</td><td>470302-254</td><td>Bölüm 2 Tampon Bileşeni</td></tr><tr><td>L-Proline</td><td>Research Products International</td><td>P5200-500.0</td><td>Harika Et Suyu (TB) Medya Bileşeni</td></tr><tr><td>Lizozim</td><td>Altın Biyo- Altın Biyoteknoloji</td><td>L-040-1</td><td>Liz Tamponu Bileşeni</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A452</td><td>Organik Çözücü</td></tr><tr><td>Doğal Örnek Tamponu</td><td>Bio-Rad</td><td>161-0738</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Protein Merdiveni</td><td>Altın Biyo- Altın Biyoteknoloji</td><td>P008-500</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Çözümleme Jel Tamponu</td><td>Bio-Rad</td><td>1610798</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Sodim Dodesil Sülfat (SDS)</td><td>Termo Bilimsel</td><td>J18220-36</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit</td><td>Fisher Scientific</td><td>S318-500</td><td>Liz Tamponu Bileşeni</td></tr><tr><td>Üst üste Gel Tamponu</td><td>Bio-Rad</td><td>1610799</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad</td><td>1610801</td><td>SDS-PAGE Bileşeni</td></tr><tr><td>Tris Üssü</td><td>Fisher Biyoreagentleri</td><td>BP-152</td><td>Liz Tamponu Bileşeni</td></tr><tr><td>Tripton</td><td>Research Products International</td><td>T60065-1000.0</td><td>Harika Et Suyu (TB) Medya Bileşeni</td></tr><tr><td>Maya Ekstraktı</td><td>Research Products International</td><td>Y20025-1000.0</td><td>Harika Et Suyu (TB) Medya Bileşeni</td></tr></tbody></table>

e. coli'den elastin benzeri polipeptitlerin (elp) organik Çözücü bazlı ekstraksiyon ve Çökeltme yöntemi kullanılarak verimli arındırılması

Efficient Purification of Elastin-Like Polypeptides (ELPs) from E. coli Using an Organic Solvent-based Extraction and Precipitation Method

Protokolün son aşamalarından geçtikten sonra, bir sonraki adım SDS-PAGE analizi ve Coomassie mavisi boyama ile ekstraksiyon-çökeltme sonucunun görselleştirilmesini sağlar. Organik ekstraksiyondan önce bir liz aşaması olduğunda, belirgin bir ELP bandı belirgin olmalıdır. ELP-I-Cm2 durumunda, bu bant 100 kDa'da görünür (Şekil 3A).
Farklı organik çözücü kombinasyonlarının taraması, değişken ekstraksiyon verimlilikleri göstermiştir (Şekil 3B</stro...

E. coli'den Elastin Benzeri Polipeptitlerin (ELP) Organik Çözücü Bazlı Ekstraksiyon ve Çökeltme Yöntemi Kullanılarak Verimli Arındırılması

Elastin-like polypeptides (ELP) are engineered biopolymers built from repetitive pentapeptide sequences that mimic motifs found in mammalian tropoelastin. ...

efficient-purification-elastin-like-polypeptides-elps-from-e-coli

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Biyokimya

Burada, son derece aktif Hsp104 hexameric AAA + protein mayası, protein ayrıştırılmasıyla çiftler ATP hidrolizi arıtma için bir protokol açıklar. Bu düzeni yakınlık arıtma için His6 etiketli inşa...

Hsp104 saflaştırılması, Protein Disaggregase

Bu videoda, sindirilmiş bir protein lizat karışımından peptitleri saflaştırmak için ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisini gösteriyoruz. Bu saflaştırılmış peptitler daha sonra liyofilize edilir ve sonraki uygulamalar için depolanır. Peptitlerin analizi, hücresel sinyalleşme ve kanserde yer alan mekaniğin anlaşılmasına yardımcı olabilir.

Peptit Saflaştırma: Sindirilmiş Protein Lizatlarından Peptitleri Çıkarmak için RP-HPLC Tabanlı Bir Teknik

Elastin benzeri polipeptitler, yeniden birleştirici protein arıtma için ilaç teslim çeşitli uygulamalar ile uyarıcı yanıt biyo-polimerler vardır. Bu protokol, kromatografi için basit bir alternatif olarak bunların düşük kritik çözelti, sıcaklık faz geçiş davranışları kullanılarak Escherichia coli'den elastin gibi polipeptidler ve bunların peptid veya protein füzyonlarının saflaştırılmasına ve karakterizasyonunu tarif etmektedir.

Peptidler ve proteinler ile rekombinant Elastin gibi Polipeptitlerin ve Fusions olmayan kromatografik saflaştırma<em&gt; Escherichia coli</em

Rekombinant teknolojiler, malzeme tasarımcılarının doku mühendisliği uygulamaları için özelleştirilmiş işlevlere sahip yeni yapay proteinler oluşturmasını sağlamıştır. Örneğin, yapay hücre dışı matris proteinleri, doğal ECM'lerden türetilen yapısal ve biyolojik alanları içerecek şekilde tasarlanabilir. Burada, elastin benzeri tekrarlar içeren aECM proteinlerinin yapımını ve saflaştırılmasını açıklıyoruz.

Tasarım ve Yapay Ekstrasellüler Matrix İnşaatı (aECM) Proteinler gelen<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Cilt Doku Mühendisliği

protokol aljinat gibi hücre dışı polimerler (ALE) elde etmek için aerobik granül çamur çözünür bir metodoloji sağlar.

Aerobik Granül Çamur dan Yapısal Ekstrasellüler polimerik maddelerin çıkarımı

Polimer omurga ve bu nedenle, hücre microenvironment tam ayar için izin olarak Rekombinant protein mühendislik hydrogels 3D hücre kültürü için avantajlı olan. Burada, rekombinant elastin benzeri protein arıtma süreci ve kendi uygulamasında 3D hidrojel hücre kapsülleme açıklanmaktadır.

Elastin benzeri Protein Hydrogels üretimi için saklama ve Immunostaining hücre 3D

Burada sunulan peptid tabanlı Küçük unilamellar veziküller büyüme yeteneğine oluşturulması için protokoller vardır. Membran peptid vesiculo üretiminde kolaylaştırmak için, bu veziküller bir transkripsiyon-çeviri sistemi ve peptid-kodlama Plasmid ile donatılmıştır.

Vesiculo 'da otonom vezikül büyümesi için peptid membran öncülerinin sentezini

Organik ve sulu çözücülerin arayüzünde, özel ampifilik elastin benzeri proteinler veziküller, lifler ve çevresel parametrelertarafından tetiklenen koaksivatlar gibi karmaşık supramoleküler yapılarda bir araya getirilir. Açıklanan montaj protokolleri, çeşitli kargoların kapsüllemesini sağlayan, tunable özelliklere sahip Protein Membran Tabanlı Bölmeler (PMBCs) verir.

Elastin benzeri Proteinlerin tanımlanmış Supramoleküler Yapılara Yönlendirilmiş Montajı ve Tüp Bebek Tespülasyonu

Bakteriler, biyoaktif biyolojik moleküller taşıyan nanometre boyutunda hücre dışı veziküller (EV'ler) salgılarlar. EV araştırması, biyogenezlerini, mikrop-mikrop ve konakçı-mikrop etkileşimlerindeki rollerini ve bunların potansiyel terapötik uygulamalarını anlamaya odaklanmaktadır. EV araştırmalarının standardizasyonunu kolaylaştırmak için EV'lerin çeşitli bakterilerden ölçeklenebilir izolasyonu için bir iş akışı sunulmaktadır.

Ölçeklenebilir İzolasyon ve Escherichia coli ve Diğer Bakterilerden Hücre Dışı Veziküllerin Saflaştırılması

Mevcut protokol, kütle spektrometrisinden önce proteom numunelerinin sağlam ve hızlı geri kazanımı ve saflaştırılması için kontrollü koşullar altında çözücü bazlı protein çökeltmesini açıklamaktadır.

Kütle Spektrometrisinden Önce Sağlam Proteom Saflaştırması için Organik Solvent Bazlı Protein Yağışı

Bu makale, bir C41 (DE3) ekspresyon sisteminde toksik bir nükleaz olan rekombinant Nsp15'in aşırı eksprese edilmesi için bir metodolojiyi ve ardından afinite ve boyut dışlama kromatografisi kullanılarak etiketli proteinin saflaştırılmasını açıklamaktadır. Bu protokoller diğer zorlu toksik proteinler için uyarlanabilir.

Escherichia coli'den Toksik Bir Nükleazın Aşırı İfade Edilmesi ve Saflaştırılması

Keşfedin: E. coli'den elastin benzeri polipeptitlerin organik çözücü bazlı ekstraksiyon ve çökeltme yöntemiyle hızlı arındırılması. Bu yöntem, düşük endotoksin seviyeleriyle yüksek saflıkta ELP füzyon proteinleri elde eder ve fonksiyonel aktiviteyi korur.

E. coliden Elastin Benzeri Polipeptitlerin (ELP) Organik Çözücü Bazlı Ekstraksiyon ve Çökeltme Yöntemi Kullanılarak Verimli Arındırılması (Video) | JoVE Journal

E. coli'den Elastin Benzeri Polipeptitlerin (ELP) Organik Çözücü Bazlı Ekstraksiyon ve Çökeltme Yöntemi Kullanılarak Verimli Arındırılması

Daha fazla video keşfet