Name: Tek Antikor Etiketleme Kullanarak Zar Proteinlerinin Tek Moleküllü Lokalizasyon Mikroskopisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: Öğrenin, tek antikor etiketleme yöntemiyle T hücre membranlarındaki nanoboyutlu antikor-epitop etkileşimlerini görselleştirmeyi. Bu protokol, terapötik hedefleme için hücresel ortamda doğrudan gözlem yapmayı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>anti-CD81 Alexa Fluor 488 Antikor</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MA5-44132</td><td>Görüntüleme antikoru</td></tr><tr><td>Tezgah üstü santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td>5424</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini</td><td>MilliporeSigma</td><td>A7906-100G</td><td></td></tr><tr><td>Odalı kapak camı, 8-kuyu</td><td>Cellvis</td><td>C8-1-N</td><td></td></tr><tr><td>DMEM medyası</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11960069</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfatla Tamponlu Tuzlu Sonu</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu</td><td>MilliporeSigma</td><td>F0926-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldehit %10</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>Altın kolloidler, 100 nm</td><td>Ted Pella</td><td>15711 ve eksi; 20</td><td>Fiducial işaret</td></tr><tr><td>Daldırma yağı&nbsp;</td><td>Cargille Laboratuvarları</td><td>16245</td><td></td></tr><tr><td>Ters mikroskop&nbsp; TIRF modülü ile donatılmıştır</td><td>Nikon Instruments</td><td>Tutulma Ti2-E</td><td>Mikroskop</td></tr><tr><td>Jurkat E6.1 hücre hattı</td><td>MilliporeSigma</td><td>88042803-1VL</td><td>Askı hücreleri</td></tr><tr><td>Lazer Fırlatma, 6 hat</td><td>Oxxius</td><td>L6CC-CS8-1511</td><td>Uyarılma lazeri</td></tr><tr><td>Lipofektamin 2000</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11668019</td><td>Transfeksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü, 1.5 mL&nbsp;</td><td>VWR</td><td>89000-028</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopik görüntüleme yazılımı</td><td>Nikon Instruments</td><td>NIS-Elements İleri Araştırmalar</td><td>Görüntü alma yazılımı</td></tr><tr><td>Objective, 100x/1.49 CFI APO TIRF&nbsp;</td><td>Nikon Instruments</td><td>MRD01991</td><td>Mikroskop amacı</td></tr><tr><td>Paraformaldehit %16</td><td>Elektron Mikroskopi Bilimleri</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Penisillin-Streptomisin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140-122</td><td>Antibiyotikler</td></tr><tr><td>Poli-L-Lizin çözeltisi, %0,01 & nbsp;</td><td>MilliporeSigma</td><td>P4707-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Prime 95B sCMOS Kamera</td><td>Teledyne Vision Çözümleri</td><td>01-PRIME-95B-R-M-16-C</td><td>Kamera</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medya</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875-093</td><td>Askı hücreler için ortam</td></tr><tr><td>Sodyum azid</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19038-1000</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum borohidrid</td><td>MilliporeSigma</td><td>213462-25G</td><td></td></tr><tr><td>T25 kültür şişeleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>169900</td><td></td></tr><tr><td>TetraSpeck mikrosferleri</td><td></td><td></td><td>Fiducial işaret</td></tr><tr><td>Doku kültürü kabı, 100 mm&nbsp;</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>U2OS hücre hattı</td><td>ATCC</td><td>HTB-96</td><td>Yapışkan hücreler</td></tr></tbody></table>

tek antikor etiketleme kullanarak zar proteinlerinin tek moleküllü lokalizasyon mikroskopisi

Single-Molecule Localization Microscopy of Membrane Proteins using Single-Antibody Labeling

Tek Antikor Etiketleme Kullanarak Zar Proteinlerinin Tek Moleküllü Lokalizasyon Mikroskopisi

The plasma membrane defines the cell shape and serves as the interface that governs intercellular communication. Membrane proteins constitute a major ...

single-molecule-localization-microscopy-membrane-proteins-using

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Hücreler içinde birden fazla floresan etiketli molekül türünü aynı anda görüntülemek için floresan fotoaktivasyon lokalizasyon mikroskobunun (FPALM) kullanımını gösteriyoruz. Açıklanan teknikler, tek hücreler içinde onlarca nanometrelik bir hassasiyetle binlerce ila yüz binlerce ayrı floresan etiketli proteinin lokalizasyonunu sağlar.

Floresan Fotoaktivasyon Lokalizasyon Mikroskobu ile Biyolojik Yapıların Eş Zamanlı Çok Renkli Görüntülenmesi

Bu protokol, canlı hücrelerin yüzeyindeki tek reseptörleri görselleştirmek ve izlemek ve böylece reseptör yanal hareketliliğini, reseptör komplekslerinin boyutunu analiz etmek ve ayrıca geçici reseptör-reseptör etkileşimlerini görselleştirmek için toplam iç yansıma floresan mikroskobunun nasıl kullanılacağını açıklar. Bu protokol diğer zar proteinlerine genişletilebilir.

Tek molekül Floresan Mikroskopi Reseptör Dinamiği Yüksek çözünürlüklü Spatiotemporal Analizi

Protein fonksiyonelleştirilmiş düzlemsel cam destekli lipid çift katmanlarının hazırlanması, içindeki protein hareketliliğinin belirlenmesi ve protein yoğunluklarının ölçülmesi burada gösterilmiştir. Yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe sahip tek çift katmanlı yerleşik florokromların görselleştirilmesine olanak tanıyan, gürültüsü azaltılmış bir Toplam İç Yansıma mikroskobu oluşturmak için bir yol haritası özetlenmiştir.

Planar on Tek Molekül Floresans Mikroskopi bilayers Desteklenen

Floro etiketli antikorların ardışık bağlanması ve elüsyonunu kullanarak heterojen nano yapılardaki çoklu molekülleri tek molekül doğruluğu ile görüntüleme yöntemi gösteriyoruz.

Madstorm kullanarak T hücrelerinin çok yönlü, süper çözünürlüklü görüntüsü

Burada, içinde canlı hücre organelleri tek zar proteinleri çok renkli yerelleştirme için bir iletişim kuralı mevcut. Fluorophores eklemek için kendi kendine etiketleme protein kullanılır. Aynı organel farklı membranlar bölmeleri içinde bulunan proteinler, ~ 18 hassasiyetle lokalize nm.

Çok renkli yerelleştirme mikroskobu canlı memeli hücre organelleri tek membran proteinlerin

Onlar yaşayan hücrelerden salgılanan gibi biz tek etiketlenmemiş proteinler gerçek zamanlı Optik algılama için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çeşitli farklı biyolojik sistemleri ve yapılandırmaları için uygulanabilir dalgaboyu saçılma (iSCAT) mikroskopi dayanmaktadır.

Etiket içermeyen Imaging, tek proteinler salgılanan iSCAT mikroskobu ile yaşayan hücrelerden

Burada, karmaşık protein örnek tek molekül düzeyinde her protein türler için etiketleme homojenliği değerlendirmek için bir protokol mevcut.

Proteom çapında Quantification maddelerinin homojenliği tek molekül düzeyinde etiketlenmesi

3D tek moleküllü lokalizasyon mikroskopisi, yaşayan bakteri hücrelerinde floresan olarak etiketlenmiş proteinlerin mekansal konumlarını ve hareket yörüngelerini araştırmak için kullanılır. Burada açıklanan deneysel ve veri analizi protokolü, sitosolik proteinlerin havuzhalinde ki tek moleküllü yörüngelere dayalı yaygın diffüzif davranışlarını belirler.

Tek Moleküllü İzleme Mikroskobu - Sitosolik Moleküllerin Diffüz Durumlarını Belirlemede Bir Araç

Bu protokol, moleküler kütlenin ve lipit membranlarla etkileşime giren makromoleküllerin difüzyon davranışının eşzamanlı olarak araştırılmasını sağlayan iSCAT tabanlı bir görüntü işleme ve tek parçacık izleme yaklaşımını açıklar. Numune hazırlama, kütleden kontrasta dönüştürme, film edinme ve son işleme için adım adım talimatlar, olası tuzakları önlemek için talimatlarla birlikte sağlanır.

Membranla İlişkili Makromolekül Dinamiğini Karakterize Etmek için Kütleye Duyarlı Partikül İzleme

Burada, tek moleküllü toplam iç yansıma floresan (smTIRF) mikroskobu kullanılarak yapay kalabalık lipit membranları üzerindeki tek moleküllerin bağlanma, hareketlilik ve montajını gerçekleştirmek ve analiz etmek için bir protokol sunulmaktadır.

Tek Moleküllü Difüzyon ve Polimer Kalabalık Lipid Membranlara Montaj

Bu makale, katı destekli lipid çift katmanlarında tek protein izleme için örnekler nasıl oluşturulacağına dair ayrıntılı bir açıklama sunmaktadır. Ayrıca, tek molekül hassasiyeti ve hızlı kare hızına sahip basit bir floresan mikroskobu da açıklar. Son olarak, tek protein yörüngelerinin çıkarılması prosedürünü özetliyoruz.

Lipid çift katmanlarında tek proteinlerin floresan mikroskopisi kullanılarak takibi

Öğrenin, tek antikor etiketleme yöntemiyle T hücre membranlarındaki nanoboyutlu antikor-epitop etkileşimlerini görselleştirmeyi. Bu protokol, terapötik hedefleme için hücresel ortamda doğrudan gözlem yapmayı sağlar.

Tek Antikor Etiketleme Kullanarak Zar Proteinlerinin Tek Moleküllü Lokalizasyon Mikroskopisi

Daha fazla video keşfet