Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Environmental Microbiology

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

養殖および土壌試料からの細菌を列挙します。
 

養殖および土壌試料からの細菌を列挙します。

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

環境微生物の正確な数を決定するは、土壌生態系の健全性を評価することが重要です。これは、適切な希釈で細菌のコロニーを培養によって実現できます。

土壌細菌は、分解、窒素固定、養分循環役割を果たして健全な土壌生態系の重要な部分です。表層土壌の有機基板、空気または水で満たす、無機粒子が毛穴を取り巻く複雑なマトリックスを形成します。これらの条件は通常上向きに 1 グラムあたり 100 万の細菌を含む表層土壌の細菌のための理想的な生態系を作成します。

細菌のこの高濃度、希釈は成長媒体上にめっきする前に必要です。シリアルの希薄は初期の土壌サンプル中の細菌数の計算を可能にするメディア版で成長する単一コロニーのために十分に低いレベルに元の土壌サンプルの濃度を減らすことができます。

このビデオは、土壌サンプルのシリアル希薄を準備する方法、プレートにこれらの細菌のサンプル方法、土壌細菌希釈プレートからカウントを計算する方法を説明します。

細菌は、種や生態系の面で非常に多様の単純な原核生物です。放線菌は、彼らが一緒にフォーム菌糸に神経質成長頻繁の糸状の構造のためのユニークなグループである細菌のサブセットです。

通常、放線菌は土壌中総細菌の人口の 10% を占めます。細菌や放線菌は、地球上のほぼすべての環境で豊かなが、比類のない多様性と土壌の豊かさがあります。

列挙は土壌細菌と培養し、希釈めっきによって識別される可能性があります。ここでは、土壌サンプルは順次水で希釈し、寒天成長板に分散します。結果として得られるコロニーはカウントされます。希釈倍率とともに、この値を使用して、土壌中の細菌の初期濃度を明らかにします。

希釈メッキは一般的な安価な簡便な細菌の列挙が、それはいくつかの欠点に苦しみます。希釈は、偏った成長につながる可能性がありますに解決するため、土はできません。いくつか土壌細菌がない文化のプレート、または遅い成長観察します。また、このメソッドでは、コロニーは単一の細菌から形成されるが、彼らは複数の細胞の塊から発生する可能性を前提としています。

特定の細菌種は異なった成長媒体でよりよく育ちます。広い範囲のバクテリアを培養する一般的な基板は寒天ペプトン酵母鋼板です。放線菌は優先的にこれらの糸状性細菌の成長に合わせて、グリセロール-カゼイン基板で育ちます。

細菌列挙体の背後にある概念を理解する研究室では、このプロセスを実行する方法を見てみましょう。

手順を開始するには、土壌サンプルの 10 g を量り、95 mL の脱イオン水を加えます。よく、懸濁液を振るし、"A"としてラベルを付けます。土が落ち着く前に滅菌ピペットで懸濁液の 1 mL を削除し、9 mL の脱イオン水にそれを転送します。渦徹底的と"B"とラベル。

この希釈手順 3 回、毎回前の懸濁液の 1 mL、9 mL の脱イオン水。C、D、および E をチューブ、順番にこれらをラベルします。10-1 10-5グラムの 1 mL あたり土 ~ のシリアル希薄でこの結果します。

細菌のコロニーを成長するには、3 事前に用意されたペプトン酵母寒天を取ると対応するサンプルの C、D、および e. 渦としてそれらをラベルし、各プレート上に 0.1 mL をピペットします。1 mL あたり CFUs が報告されているのでさらに 0.1 mL を使用して 10 倍希釈を増加します。

次に、ガラス スプレッダーをエタノールに浸し。数秒を発火させ、エタノールを燃焼火炎の拡散機を配置します。これは、スプレッダーを滅菌します。

炎が消滅するまでは、最初のプレートの上散布を保持します。蓋を閉じるを保持しているプレートを簡単に開けます。クールに、接種から寒天にスプレッダーをタッチし、自由液体の痕跡が消えるまで、接種材料表面の周りのドロップを広めます。プレート蓋を取り付けます。

再炎の拡散機と次のプレートは、迅速に作業を繰り返してプレート浮遊生物を汚染しないようにします。水分低下、寒天の上に落下を防ぐために板を反転させるし、1 週間室温でプレートを孵化させなさい。

放線菌の成長、3 つの事前に用意されたグリセロール-カゼイン プレートを取ると前述のテクニックとして B、C、および D. を使用してそれらのラベル、拡散板 B、C、および D. 懸濁液から 0.1 mL放線菌は、通常 1 としているため、低い希釈/細菌の人口の第 10 回。

最後に、これらのプレートを反転、2 週間常温で保存します。

インキュベーション後、慎重に、すべての細菌の版を調べるし、コロニーのサイズと形状の違いに注意してください。寒天上に成長した、細菌は無色透明からピンクや黄色、明るいオレンジ色に至るまでぬるぬるしたコロニーを生成します。対照的に、放線菌のコロニーは、しっかりした、革のようなされて、他の細菌のコロニーが中傷する圧力の下で入ります。これにより滅菌ループとの接触によって区別される植民地です。

カウントし、放線菌を含む細菌のコロニーの数を記録します。プレート プレートごと 30 200 コロニーとカウントされます。

特定の個々 の細菌の文化を育てる、プレート、近隣のコロニーからはよく分かれているコロニーを選択のいずれかから離散コロニーを選択します。拡散ループを滅菌し、プレートを開き、空いている場所を冷却するためにループをタッチします。次に、ループに関心のコロニーの小さい量を選択します。

連勝数センチを作る新鮮なペプトン酵母プレートを取って 1 つの側面に長い。消毒し、再度、クールな最初のパスでのみ初期の連勝を越える連勝をします。同様にさらに 2 回繰り返します。この光線「希釈」は、互いから分離されているループのセルに結果します。2 週間室温でインキュベートする暗い部分にプレートを配置します。

細菌や放線菌のコロニー数から土壌 1 g コロニー形成単位を決定できます。土のグラムあたりのコロニー数コロニー メッキ希釈の逆数によって乗算プレートのカウント数と同じです。たとえば、10-5 0.1 mL 接種剤で希釈のプレートに、46 のコロニーがカウントされる場合土のグラム当たり CFU は 46、または土のグラム当たり 4600 万 CFUs 10-6と同じで。

細菌数および文化は、多くの科学的な調査またはプロトコルの重要な第一歩です。

健康な土が 10 間含まれています6と 1 グラム当たり 10 の8細菌。10 未満のカウントと関心の土壌の状態を判断する土壌細菌の列挙を使用できます6と 1 グラム当たり 10 の8細菌不健全なまたは悪い土を示します。不足栄養素や有機物、極端な pH や土壌汚染のための非生物的ストレスがある可能性があります。

今日の医学で使用される抗生物質の多くの種類は、土住居の細菌や真菌から識別された最初。土の文化からの純粋な系統を分離することができます潜在的科学者のヘルプのヘルプ新しい抗生物質化合物を特定します。ここでは、細菌をテストまたは関心の分離の化合物は、細菌の芝生の成長板に追加できると芝生の成長に及ぼす影響を記録しました。明確なパッチ テスト細菌や化合物の成長が抑制された細菌の芝生では、抗菌活性を可能性があります。

エンドウ豆および豆を含むマメ科植物は窒素固定共生関係に依存して細菌。これらの細菌は土壌や根系における結節内で自由に生きるし、工場で使用されている窒素化合物を作る。貧しい土壌では土壌から窒素固定菌の培養とマメ科の作物を補う成長と植物の健康が向上します。これは大きい作物の収量を得られる大きく、丈夫植物につながります。

ちょうど細菌列挙体にゼウスの導入を見た。今、プレートのコロニーを数えるとコロニーの分離の方法、土壌試料の希釈液を実行する方法および土壌試料中の細菌の数を計算する方法を理解する必要があります。見てくれてありがとう!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter