Overview
출처: 제프 살라컵 연구소 - 매사추세츠 대학교 애머스트
유기 용매 추출의 제품, 총 지질 추출물 (TLE), 종종 수백의 복잡 한 혼합물, 하지 않을 경우 수천, 다른 화합물의. 연구원은 종종 화합물의 소수에 만 관심이 또는, 많은에 관심이 있는 경우, 원치 않는 성분을 제거 해야 할 수 있습니다"방법으로" 또는 동례. 예를 들어, 샘플내의 개별 화합물의 농도는 종종 불꽃 이온화 검출기(GC-FID)와 결합된 가스 크로마토그래프상에 결정되는데, 이는 FID 반응(pA)과 샘플내 화합물의양(예를 들어,ng/μL)의 관계가 선형및 민감하기 때문이다. 계측기의 GC 부분은 비등점, 화학 구조 및 응용 프로그램에 따라 변경할 수 있는 고체 상과 친화성에 기초한 샘플내의 상이 다른 화합물을 분리합니다. 그 결과 크로마토그램(도1)은 상이한 화학 성분의 분리뿐만 아니라 상대적 농도(곡선 아래 영역으로 계산됨)를 나타낸다. 그러나, 때로는 한 번에 하나의 화합물 엘루트(도1). 이 경우 화합물을 자신있게 정량화하기 전에 시료 정화가 필요합니다.
그림 1. 시간이 지남에 따라 다른 화학 성분의 분리와 상대 농도 (곡선 아래 영역)의 분리를 보여주는 크로마토그램. 동례 및 분리 된 피크가 표시됩니다.
Principles
FAMEEs (지방산 메틸 에스테르)는 육상 및 해양 미생물의 중요한 성분이며 종종 유전 기술과 함께 현대 및 고대 시스템에서 생태계 미생물 다양성을 설명하는 데 사용됩니다. 그러나 샘플에 FAM의 존재가 항상 도움이되는 것은 아닙니다. 그들의 유사한 크기와 화학으로 인해, FAMEs라는 알케나테스는 일반적으로 알케논(그림 2)이라고긴 체인 알킬 케톤과 공동 엘ute. 샘플에서 알케논의 분포는 시료를 채취한 시및/또는 장소에서 해표면 온도에 대한 정보를 관련시키고, 따라서 정확하고 정확한 특성화가 중요하다.
사포화는 FAM을 지방산으로 변환하는 데 사용되는 일반적인 정제 기법으로, 따라서 알케논(도 3)과의용해에서 제거하기에 충분한 화학 적 특성을 변화시킨다. 사포화는 가수 분해의 한 형태입니다. 가수 분해에서 물은 분자를 분할하는 데 사용됩니다. 사포화는 수산화칼륨(KOH)과 같은 염기의 존재속에서 가속되는 가수분해이다. KOH는 K+ 및 OH로 용해- 물에. 수산화 음이온 (OH-,음전하 이온)은 FAME의 중심에 약간, 양전하 삼차 탄소 원자에 추가(그림 3,상단). 그러나, 이러한 화학적 구성은 불안정하며(탄소는 너무 많은 다른 원자에 결합되어있음) 및 알칸화물(ROH-)이 추방된다. 그러나 공주염의 H는 이 추방 형태가 빠르게 알산화물로 이동하여 알코올 메탄올과 지방산 칼륨염을 형성한다(도3,중간). 이 시점에서, 불쾌한 명성 (alkenoate)은 더 이상 그와 함께 엘루트하지 않는 화학 물질로 변환되었습니다. 그러나, 명예 화학을 분석하고자 하는 경우 pH가 ~2에 도달할 때까지 용액에 산(HCl)을 첨가하여 회수할 수 있다. 이 pH에서, 지방산 칼륨 염은 카복실산 및 이온염을 형성하기 위해 분할된다(KCl; 그림 3,하단).
그림 2. 37개의 탄소 원자와 2개의 이중 결합(상단)과 그 관련 알케노아테 FAME(아래)를 가진 알케론의 화학 구조물.
그림 3. 수산화칼륨(KOH)을 사용하여 팔미티산의 색각화의 회로도가 가수분해(http://www.mpbio.com/)의 속도를 증가시다.
Saponification은 일반적으로 복잡한 유기 혼합물에서 지방산 메틸 에스테르를 제거하는 데 사용되는 기술이다.
복잡한 유기 샘플은 종종 개별 성분의 상대적 농도를 결정하는 데 사용되는 가스 크로마토그래피에 의해 분석됩니다.
그러나, 크기와 구조가 유사한 화합물은 계기에 의해 구별될 수 없으며, 결과를 왜곡한다. 따라서 정확한 결과를 얻으려면 중복 신호를 생성하는 원치 않는 화합물을 제거해야 합니다.
이 비디오는 고생물학을 위한 알케논을 정화하기 위해 묘면화를 사용하는 것을 다룹니다. 복잡한 바이오마커 샘플의 정제를 상세히 설명하는 계열 중 최초입니다. 그것은 절차뿐만 아니라 기술의 다른 용도를 다룰 것입니다.
알케네네스라고 불리는 고도 불포화 긴 사슬 알킬 케톤은 과거 해표면 온도에 대한 유용한 정보를 제공하는 것으로 나타났습니다.
그러나, 알케닌을 생성 하는 유기 체는 종종 크기와 화학 구조에서 유사한 지방산 메틸 에스테르를 만들, 알케노아테라고. 이러한 유사성 때문에 정확한 분석을 얻기 전에 알케노아이를 제거해야 합니다.
사포화는 이러한 분자의 동용을 방지하는 데 사용되는 일반적인 기술입니다. 사포화는 에스테르의 분자 결합을 분할하기 위해 물을 활용합니다. 베이스는 알케노아테의 중심에 있는 탄소에 부착됩니다. 이 추가 반응은 불안정한 중간체를 생성하고, 알크옥화물은 추방된다.
새로 형성된 산으로부터의 수소는 추방된 알크옥사이드로 이동하고, 그 결과 카박스실레이트 이온은 기지에서 양이온과 이온 결합을 형성한다. 그 결과 알코올과 지방산 염이 생성됩니다. 강한 산을 추가하면 카복실산을 다시 생성합니다. 이 시점에서, 불쾌한 알케노아트는 더 이상 관심의 알케네와 공동 elutes하지 않는 형태로 변환되었습니다.
이제 묘비화가 유기 혼합물을 정화하는 데 어떻게 사용될 수 있는지 이해되었으므로 절차를 시작할 준비가되었습니다.
먼저, 용매 추출 방법을 사용하여 수득된 건조된 총 지질 추출물(또는 TLE)을 획득하였다. 다음으로 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 새격화 솔루션을 준비합니다. 모든 구성 요소가 순수하고 탄화수소가 없는지 확인하십시오. 용액이 준비되면 말린 TLE를 60mL 의 보로실리케이트 유리 바이알에 추가합니다. 정상 수산화 칼륨 2mL2mL를 추가하고 바이알을 밀봉합니다. 다음으로, 바이알을 60°C로 가열하여 2.5h로 가열하여 에스테르 결합을 갈라냅니다. 이 완료되면 샘플을 실온으로 냉각시키십시오. 시료가 냉각되면 바이알에 염화 나트륨 용액 5%의 2mL를 추가합니다. 바이알을 캡하고 짧게 흔들어 줍니다. pH 용지를 사용하여 테스트할 때까지 6N 염산 드롭와이즈를 2p에 도달할 때까지 넣습니다. 이 산의 첨가는 카박스실레이트 애니메이션을 프로토로 하여 최종 생성물인 안정적인 카복실산을 형성합니다.
이제 산성화 용액이 에스테르가 없는 지금, 헥산 5 mL를 추가하십시오. 물에서 유기 화합물을 추출하기 위해 5 초 동안 격렬하게 흔들어. 유기 및 수성 상이 완전히 분리될 때까지 용액을 쉬게 하십시오. 염, 이온 및 반응되지 않은 염산은 수성 상에 남아 있으며 유기 화합물은 헥산으로 분리됩니다. 위상이 완전히 분리되면 파이펫을 사용하여 헥산의 약 75%를 제거하고 다른 40mL 바이알로 분배합니다. 이 추출 프로세스를 두 번 추가하여 매번 5mL의 헥산을 추가합니다. 이 작업이 완료되면 남은 수중 용액을 적절한 폐기물 용기에 버리십시오. 갓 수액화된 유기상을 포함하는 바이알에 라벨을 부착합니다. 생성된 카복실산은 추가 정화 없이는 알케네 분석에 일반적으로 사용되는 계측기에 주입할 수 없다. 가스 크로마토그래프에 주입된 카복실산은 유입구, 입구 라이너 및 기둥의 프런트 엔드를 빠르게 축적하고 파괴합니다. 이러한 산을 제거하기 위해, 샘플은 먼저 또 다른 정화 기술을 받아야합니다 : 열 크로마토그래피를 통해 분리.
Saponification은 유기 분자의 추출 및 정제에 여러 가지 응용 프로그램이 있습니다.
사포화는 바이오마커를 분리할 뿐만 아니라 상용 제품에 사용하기 위한 개별 성분을 추출하는 데사용할 수 있습니다. 이 예에서, 담배 나무에서 화합물 - 니코티아나 글루카 - 절연 및 연료, 열, 화학 화합물의 배열과 같은 바이오 기반 제품의 다양한 공급 원료로 자신의 잠재력을 조사하기 위해 분석되었다.
잎은 관심있는 분자를 집중하기 위해 먼저 균질화 된 다음 원심 분리되었습니다. 농축 된 식물 재료는 그 때 삽화되었다. 추출된 물질은 액체 크로마토그래피 질량 분석법으로 분석되었으며, 토코페롤의 농도를 결정하기 위해 - 식물에서 일반적으로 발견되는 비타민 E 화합물의 가족.
추출된 물질은 또한 원래 의 구성에 시험관 내에서 재구성 될 수있다. 이 예에서, 삽화는 시금치 식물에서 카로티노이드를 추출하는 데 사용되었고, 나중에 시험관내에서재구성되었다. 시금치는 안료 분자를 수확하기 위해 먼저 균질화 된 다음 원심 분리되었습니다. 이 분자는 그 때 분리 깔때기에서 수산화 칼륨의 용액에서 중단되었다, 묘충화를 시작. 수피 카로티노이드는 에테르 층으로 분리되어 수집및 건조되었습니다. 일련의 용액 버퍼를 사용하여 카로티노이드 및 기타 색소 침착 분자는 나중에 시험관에서재구성되었습니다. 이 정제는 유사하게 구조화된 유기 화합물의 간섭 없이 이 안료의 분석을 허용했습니다.
에스테르를 가수분해하는 능력 때문에, 수aponification은 그렇지 않으면 거대 분자에 바인딩되는 화합물을 "무료"에 사용할 수 있습니다. 이 예에서, 무수성 수압화 단계는 칼륨4-플루오로벤조이트칼륨4-플루오로벤조에이트의 카복실산 염으로 에틸 4-플루오로벤조아테를 변환하는 데 사용된다. saponification을 통한 이러한 보호는 원유 SFB의 생산을 가능하게 합니다 - 분자가 "붙어"남아 있었다면 불가능할 반응.
당신은 방금 Saponification을 통해 Uk'37 샘플의 정화에 대한 JoVE의 소개를 보았습니다. 이제 새포니화가 어떻게 작동하는지, 그리고 총 지질 추출물에서 알케논을 정화하는 방법을 이해해야 합니다. 후속 비디오에서 추가 정화 프로세스가 시연될 예정입니다.
시청해 주셔서 감사합니다!
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Procedure
1. 재료의 설정 및 준비
- 용매 추출 방법(초음파 처리, 삭스슬렛 또는 가속 용매 추출(ASE)을 사용하여 총 지질 추출물(TLE)을 획득한다.
- 메탄올에서 5% H2O로 2N KOH의 용액을 준비합니다.
- KOH와 메탄올은 화학 소매 업체에서 구입할 수 있습니다. 이러한 화학 물질은 순수하고 탄화수소가 없어야합니다.
- KOH의 어금니 질량은 ~56 개의 무뮤가 OH의 1mol을 산출합니다 - KOH의 각 몰당. 따라서, 2N 농도를 달성하기 위해, 순수한 물 0.95 L및 메탄올의 0.05 L에 KOH 112 g을 용해시킨다.
- 물에 KOH의 용해는 외형이며 많은 양의 열을 생성합니다. 격렬한 반응을 피하기 위해 천천히 물에 KOH 펠릿을 추가하십시오.
- 자동 교반판에 0.95 L의 순수한 물에 KOH 펠릿 112 g를 녹입니다.
- 모든 KOH가 용해되면 0.05 L의 메탄올을 첨가하여 유기 바이오마커를 수성 용액으로 용해하는 데 도움을 주게 된다.
- KOH와 메탄올은 화학 소매 업체에서 구입할 수 있습니다. 이러한 화학 물질은 순수하고 탄화수소가 없어야합니다.
- H2O에서 6N 염산(HCl)의 용액을 준비한다.
- HCl은 화학 소매 업체에서 구입할 수 있습니다. 이 화학 물질은 순수하고 탄화수소가 없어야합니다.
- HCl은 일반적으로 13 N으로 농축됩니다. 따라서, HCl과 순수물의 1:1 혼합물은 HCl의 6.5 N 혼합물을 생성하며, 이는 이 실험의 목적을 위해 6N에 충분히 가깝다.
- 농축 된 HCl에 물을 추가하는 것은 exothermic이며 열을 생성하기 때문에 물에 HCl을 추가하는 것이 아니라 주변에 있는 다른 방법이 아닌 물에 추가해야합니다. 이로 인해 HCl이 튀어 나올 수 있습니다.
- 100mL 순수물을 함유한 비커에 100mL HCl을 부드럽게 천천히 붓고 HCl을 첨가하는 사이에 혼합물을 소용돌이치게 한다.
- H2O로 5% NaCl(테이블 소금)의 용액을 준비합니다.
- NaCl은 화학 소매 업체에서 구입할 수 있습니다. 이 화학 물질은 순수하고 탄화수소가 없어야합니다.
- 5% 용액의 ~1 L을 만드는 데 필요한 소금 덩어리를 계산하고 계량합니다(w/w). 물 무게 1 L ~1 kg 또는 1,000 g. 따라서, 950mL로 용해된 NaCl 50g은 5% 용액(50g+ 950g = 1,000g, 50g/1,000g = 0.05 또는 5%)을 준다.
- 자동 교반 판에 순수한 물에 NaCl 50 g을 부드럽게 넣고 용해될 때까지 기다립니다.
- 다음 재료 획득: 2 청정 및 연소 (550 °C 6 h) 40 mL 보로실리케이트 유리 바이알 PTFE 줄 지어 모자; 온난화 오븐 또는 난방 블록; 연소 (6 h에 대한 550 ° C) 보로실리케이트 유리 파이펫 및 전구; pH 테이프 (산성 범위); 헥산 (헥산은 화학 소매 업체에서 구입할 수 있습니다. 이 화학 물질은 옵티마 등급 또는 동등한이어야한다).
2. 방법
- 40mL 보로실리케이트 유리 바이알 중 하나에서 말린 TLE(에스테르 함유)로 시작합니다.
- TLE 및 캡에 2N KOH의 약 10mL를 추가합니다.
- 오븐이나 가열 블록에서 2.5h의 가열 블록에서 열을 때 에스테르본드(도 3)를갈라뜨기 위해 가열한다.
- 열에서 샘플을 제거하고 실온으로 냉각 할 수 있습니다.
- TLE(도3)에5% NaCl 용액의 약 10mL를 추가합니다. 이렇게 하면 수성 상과 유기 상 사이의 인터페이스가 발포에서 벗어나지 못하게 합니다( 추가). 뚜껑을 덮고 짧게 흔들어 주세요.
- pH 2가O를 프로토네이트하기 위해 도달할 때까지 소금에 절인 TLE에 6 N HCl을 추가하고 최종 제품, 안정적인 카복실산을 형성합니다(그림3;pH 용지를 사용하여 테스트하십시오). TLE가 착색된 경우 pH 2와 일치하는 색상이 변경될 수 있습니다.
- 현재 에스테르가 없는 산성화된 용액에 약 20mL의 헥산을 추가합니다. 물에서 유기 화합물을 추출하기 위해 5 s에 대해 적극적으로 흔들어.
- 수성 및 유기 단계가 완전히 분리될 때까지 설정합니다. 염, 이온, 물 및 반응되지 않은 HCl은 수성 상에 남아 있습니다. 유기 화합물은 이제 헥산에 있습니다.
- 피펫을 사용하여 상퍼 헥산의 약 75%를 제거하고 다른 40mL 보로실리케이트 유리 바이알에 분배합니다.
- 매번 약 10mL의 헥산을 추가하여 2.7 - 2.9두 번 반복하십시오.
- 적절한 폐기물 용기에 남은 수성 혼합물을 폐기하십시오.
- 헥산과 에스테르가 없는 유기물 "TLE- 수표가 함유된 바이알에 라벨을 붙입니다.
Saponification은 일반적으로 복잡한 유기 혼합물에서 지방산 메틸 에스테르를 제거하는 데 사용되는 기술이다.
복잡한 유기 샘플은 종종 개별 성분의 상대적 농도를 결정하는 데 사용되는 가스 크로마토그래피에 의해 분석됩니다.
그러나, 크기와 구조가 유사한 화합물은 계기에 의해 구별될 수 없으며, 결과를 왜곡한다. 따라서 정확한 결과를 얻으려면 중복 신호를 생성하는 원치 않는 화합물을 제거해야 합니다.
이 비디오는 고생물학을 위한 알케논을 정화하기 위해 묘면화를 사용하는 것을 다룹니다. 복잡한 바이오마커 샘플의 정제를 상세히 설명하는 계열 중 최초입니다. 그것은 절차뿐만 아니라 기술의 다른 용도를 다룰 것입니다.
알케네네스라고 불리는 고도 불포화 긴 사슬 알킬 케톤은 과거 해표면 온도에 대한 유용한 정보를 제공하는 것으로 나타났습니다.
그러나, 알케닌을 생성 하는 유기 체는 종종 크기와 화학 구조에서 유사한 지방산 메틸 에스테르를 만들, 알케노아테라고. 이러한 유사성 때문에 정확한 분석을 얻기 전에 알케노아이를 제거해야 합니다.
사포화는 이러한 분자의 동용을 방지하는 데 사용되는 일반적인 기술입니다. 사포화는 에스테르의 분자 결합을 분할하기 위해 물을 활용합니다. 베이스는 알케노아테의 중심에 있는 탄소에 부착됩니다. 이 추가 반응은 불안정한 중간체를 생성하고, 알크옥화물은 추방된다.
새로 형성된 산으로부터의 수소는 추방된 알크옥사이드로 이동하고, 그 결과 카박스실레이트 이온은 기지에서 양이온과 이온 결합을 형성한다. 그 결과 알코올과 지방산 염이 생성됩니다. 강한 산을 추가하면 카복실산을 다시 생성합니다. 이 시점에서, 불쾌한 알케노아트는 더 이상 관심의 알케네와 공동 elutes하지 않는 형태로 변환되었습니다.
이제 묘비화가 유기 혼합물을 정화하는 데 어떻게 사용될 수 있는지 이해되었으므로 절차를 시작할 준비가되었습니다.
먼저, 용매 추출 방법을 사용하여 수득된 건조된 총 지질 추출물(또는 TLE)을 획득하였다. 다음으로 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 새격화 솔루션을 준비합니다. 모든 구성 요소가 순수하고 탄화수소가 없는지 확인하십시오. 용액이 준비되면 말린 TLE를 60mL 의 보로실리케이트 유리 바이알에 추가합니다. 정상 수산화 칼륨 2mL2mL를 추가하고 바이알을 밀봉합니다. 다음으로, 바이알을 60°C로 가열하여 2.5h로 가열하여 에스테르 결합을 갈라냅니다. 이 완료되면 샘플을 실온으로 냉각시키십시오. 시료가 냉각되면 바이알에 염화 나트륨 용액 5%의 2mL를 추가합니다. 바이알을 캡하고 짧게 흔들어 줍니다. pH 용지를 사용하여 테스트할 때까지 6N 염산 드롭와이즈를 2p에 도달할 때까지 넣습니다. 이 산의 첨가는 카박스실레이트 애니메이션을 프로토로 하여 최종 생성물인 안정적인 카복실산을 형성합니다.
이제 산성화 용액이 에스테르가 없는 지금, 헥산 5 mL를 추가하십시오. 물에서 유기 화합물을 추출하기 위해 5 초 동안 격렬하게 흔들어. 유기 및 수성 상이 완전히 분리될 때까지 용액을 쉬게 하십시오. 염, 이온 및 반응되지 않은 염산은 수성 상에 남아 있으며 유기 화합물은 헥산으로 분리됩니다. 위상이 완전히 분리되면 파이펫을 사용하여 헥산의 약 75%를 제거하고 다른 40mL 바이알로 분배합니다. 이 추출 프로세스를 두 번 추가하여 매번 5mL의 헥산을 추가합니다. 이 작업이 완료되면 남은 수중 용액을 적절한 폐기물 용기에 버리십시오. 갓 수액화된 유기상을 포함하는 바이알에 라벨을 부착합니다. 생성된 카복실산은 추가 정화 없이는 알케네 분석에 일반적으로 사용되는 계측기에 주입할 수 없다. 가스 크로마토그래프에 주입된 카복실산은 유입구, 입구 라이너 및 기둥의 프런트 엔드를 빠르게 축적하고 파괴합니다. 이러한 산을 제거하기 위해, 샘플은 먼저 또 다른 정화 기술을 받아야합니다 : 열 크로마토그래피를 통해 분리.
Saponification은 유기 분자의 추출 및 정제에 여러 가지 응용 프로그램이 있습니다.
사포화는 바이오마커를 분리할 뿐만 아니라 상용 제품에 사용하기 위한 개별 성분을 추출하는 데사용할 수 있습니다. 이 예에서, 담배 나무에서 화합물 - 니코티아나 글루카 - 절연 및 연료, 열, 화학 화합물의 배열과 같은 바이오 기반 제품의 다양한 공급 원료로 자신의 잠재력을 조사하기 위해 분석되었다.
잎은 관심있는 분자를 집중하기 위해 먼저 균질화 된 다음 원심 분리되었습니다. 농축 된 식물 재료는 그 때 삽화되었다. 추출된 물질은 액체 크로마토그래피 질량 분석법으로 분석되었으며, 토코페롤의 농도를 결정하기 위해 - 식물에서 일반적으로 발견되는 비타민 E 화합물의 가족.
추출된 물질은 또한 원래 의 구성에 시험관 내에서 재구성 될 수있다. 이 예에서, 삽화는 시금치 식물에서 카로티노이드를 추출하는 데 사용되었고, 나중에 시험관내에서재구성되었다. 시금치는 안료 분자를 수확하기 위해 먼저 균질화 된 다음 원심 분리되었습니다. 이 분자는 그 때 분리 깔때기에서 수산화 칼륨의 용액에서 중단되었다, 묘충화를 시작. 수피 카로티노이드는 에테르 층으로 분리되어 수집및 건조되었습니다. 일련의 용액 버퍼를 사용하여 카로티노이드 및 기타 색소 침착 분자는 나중에 시험관에서재구성되었습니다. 이 정제는 유사하게 구조화된 유기 화합물의 간섭 없이 이 안료의 분석을 허용했습니다.
에스테르를 가수분해하는 능력 때문에, 수aponification은 그렇지 않으면 거대 분자에 바인딩되는 화합물을 "무료"에 사용할 수 있습니다. 이 예에서, 무수성 수압화 단계는 칼륨4-플루오로벤조이트칼륨4-플루오로벤조에이트의 카복실산 염으로 에틸 4-플루오로벤조아테를 변환하는 데 사용된다. saponification을 통한 이러한 보호는 원유 SFB의 생산을 가능하게 합니다 - 분자가 "붙어"남아 있었다면 불가능할 반응.
당신은 방금 Saponification을 통해 Uk'37 샘플의 정화에 대한 JoVE의 소개를 보았습니다. 이제 새포니화가 어떻게 작동하는지, 그리고 총 지질 추출물에서 알케논을 정화하는 방법을 이해해야 합니다. 후속 비디오에서 추가 정화 프로세스가 시연될 예정입니다.
시청해 주셔서 감사합니다!
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Results
이 정제는 알케네네스와 동례 할 수있는 에스테르가없는 TLE를 생성합니다. 그러나, 정제생성 된 카복실산은 일반적으로 낮은 변동성으로 인해 알케논 농도에 대한 샘플을 분석하는 데 사용되는 계측기에 주입 할 수 없습니다. 예를 들어, 6탄소 탄화수소인 헥산의 비등점은 68°C이지만, 그 산(헥사노산)의 비등점은 205°C이다. 대부분의 GC amenable 바이오 마커는 20 ~ 35 탄소 원자 (비등점은 일반적으로 원자의 증가에 따라 증가), 대부분의 GC 온도 프로그램은 약 300 ° C 를 중지합니다. GC에 주입 된 카복실산은 신속하게 축적되고 입구, 입구 라이너 및 기둥의 프런트 엔드를 파괴합니다. 이러한 산을 제거하기 위해, 샘플은 먼저 열 크로마토그래피를 통해 또 다른 정화 기술 분리를 받아야한다.
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Applications and Summary
앞서 언급했듯이, 사포화는 유기 지질화학 실험실에서 일반적으로 사용되며, 알케논의 지방산 메틸 에스테르(FAMEEs)를 제거하며, 이는 가스 크로마토그래프에 알케논과 공동 엘루트(alkenoates)라고 불린다(도1). 사포화는 또한 퇴적물 또는 거대 분자에 "바운드"지방산을 "자유"하는 데 사용됩니다. 퇴적물에서 유기물질 및 바이오마커의 분해 및 보존은 기능성 그룹(N, O 및 S)의 제거와 개별 바이오마커의 최종 중합을 거대분자로 제거및/또는 광물 표면에 바이오마커 및 거대분자의 흡착을 포함한다. 설정의 모든 바이오마커가 결합되는 것은 아니며, 바운드-투-프리 바이오마커의 비율은 아직 완전히 설명되지 않은 이유로 설정 및 퇴적세에 의해 변경될 수 있습니다. 사포화는 때때로 여기에서 논의된 것보다 높은 온도에서 (>200°C), 그들의 근원 및 그들의 결합된 본질을 책임지는 기계장치를 설명하기 위한 노력의 일환으로 이 바운드 된 바이오 마커를 풀어주는 데 사용됩니다.
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