Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 
Click here for the English version

נהלי טיפול בסיסיים

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

עכברים וחולדות מהווים יותר מ-90% מבעלי החיים המשמשים למחקר ביו-רפואי. הטיפול הנכון בחיות מחקר אלה הוא קריטי לתוצאות הניסויים. ישנם נהלים כלליים החלים על רוב העכברים והחולדות האלה, אבל חלק מבעלי החיים, כגון אלה immunocompromised, דורשים צעדים נוספים לנקוט כדי לקיים אותם לניסויים.

עכברים אימונוקוםיים נפוצים כוללים את אלה שהתרחשו באופן טבעי בעכברים מלידה ואלה שנוצרו באמצעות הנדסה גנטית. העכברים האימונוקום הראשונים ששימשו במחקר היו עכברים "עירומים". עכבר BALB/c עירום (nu) התגלה בשנת 1966, בתוך מושבה BALB /c כי היה לייצר עכברים חסרים שיער ותימין. לעכברים האתימיים האלה יש מערכת חיסונית מעוכבת נטולת תאי T. ערכו של בעל חיים זה התגלה עד מהרה לשימוש במחקרים של זיהומים מיקרוביאליים, ליקויים במערכת החיסון, וחיסון עצמי. אמנם לא נפוץ כמו עכבר עירום, יש גם חולדה בעירום. החולדה העירומה לקויה בתאי T ומציגה אוכלוסיות תאים מרוקנות באזורים תלויי תימוס של איברי לימפה היקפיים. עכבר נוסף המחסור במערכת החיסון הוא עכבר הכשל החיסוני המשולב החמור (SCID). לעכברים אלה יש פגם הפוגע בייצור של תאי B ו- T פונקציונליים. עם חוסר היכולת להרכיב תגובה חיסונית נאותה, עכברים אלה יכולים לשמש כמקבלי פונדקאי להשתלות של תאים אנושיים. מספר זני עכבר מהונדסים גנטית עם ליקויים במערכת החיסון זמינים מסחרית. 1 חומרת המחסור משתנה עם השינוי הגנטי; עם זאת, כל העכברים והחולדות האימונו-קומונו-תימודים מטופלים באופן דומה.

כתב יד זה יתאר את הטיפול בבעלי חיים חיסוניים ואימונו-קום כאחד. הדיור, הדיאטה, הדרישות הסביבתיות והטיפול יידונו עבור שתי קבוצות בעלי החיים.

Principles

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

דיור/הזדקנות

עכברים וחולדות שוכנים בעיקר בסימון מסוג קופסת נעליים עם תחתית מוצקה המכילה חומר מצעים. כלוב העכברים הטיפוסי של קופסת הנעליים מספק 75 אינצ'ים רבועים של שטח רצפה, אשר מתאים לכל היותר חמישה עכברים בוגרים. עם זאת, העיצוב הניסיוני עשוי לקרוא לקבוצות של ארבעה עכברים. במקרה זה, העכברים צריכים להיות שוכנים עם קבלת בקבוצות של ארבעה, כדי למנוע את ההפרעה של קבוצות חברתיות כאשר הניסוי מתחיל. באופן כללי, ציות עכברושים מאפשר מקסימום של שני בעלי חיים בוגרים בוגרים. אם החולדות ישכנו לטווח ארוך, הם צריכים להיות הוקמו בדיור זוג.

הכלובים יכולים להיות סטטיים או מאווררים בנפרד (IVC). כלובים סטטיים מכוסים במכסה מוט תיל או מיושבים על מתלה מתחת למדף שהוא אז החלק העליון של הכלוב. חומר המסנן נוסף מעל החלק העליון של הכלוב כמצנפת מעל מכסה מוט התיל, או כגיליון נייר סינון מעל מדפי המדף. IVCs מוגדרים ככלוב, מכסה מוט תיל ומצנפת המונחים על מתלה המספק זרימת אוויר לכלוב. השימוש IVCs מבטל את הצורך לשנות את הכלוב לעתים קרובות כמו כלובים סטטיים משתנים.

מערכות כלוב סטנדרטיות מספקות מקור מים ואזור לחלוקת מזון. מים יכולים להיות מסופקים באמצעות בקבוק מים להציב על החלק העליון של הכלוב או באמצעות צינור לגימה כי הוא מרכיב מובנה של כלוב בעלי חיים. כאשר הכלוב עוסק על מתלה, מים מועברים לתוך צינור הלגימה עבור מערכת השקיה אוטומטית שנועדה לענות על הצרכים של החיה ברחבי מתקן בעלי החיים. הזדקנות חייבת להיות מוכנה כראוי כדי לספק טיפול נאות לבעלי החיים. ישנם גם מאכילים להציב בתוך כלוב בעלי חיים, או קטע של מכסה מוט תיל משמש לאחסון מזון. מזון חייב להיות ממוקם כך שהוא לא מלוכלך על ידי בעלי החיים.

המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה2 ("המדריך") קובע כי יש לחטא את כל כלי ההשמדה לפחות כל שבועיים. כמה כלובים ואביזרים ייתכן שיהיה צורך לשנות לעתים קרובות יותר כפי שהוכתב על ידי רמת הריח והאמוניה במתחם. באופן כללי, IVCs מתוכננים להשתנות כל שבועיים אלא אם כן יש ארבעה זכרים או יותר או נקבה עם המלטה; מארזים אלה עשויים לדרוש שינוי שבועי. כמו שינוי כלוב היא הזדמנות עבור העכברים להיחשף פתוגנים, שינוי של caging עבור עכברים לקויים במערכת החיסון צריך להיעשות לעתים רחוקות ככל האפשר.

דיאטה

ישנם קומפוזיציות רבות של דיאטות זמין עם וריאציות חלבון, פחמימות, ורמות השומן. בדרך כלל, הזנות צריך להיות מורכב 15-19% חלבון, 44% פחמימות, ו 4-9% שומן. מזון עם תכולת שומן מוגברת משמש לעתים קרובות עבור רבייה מושבות כדי לשפר את הרבייה. כמו המזון יכול להיות מקור של זיהום עבור עכברים immunocompromised, זה חייב להיות גם מעוקר קיטור או מוקרן. מזון הכפוף לתהליך השעבוד האוטומטי חייב להיות מנוסח במיוחד כדי לעמוד בתהליך. עם זאת, תהליך ההקרנה אינו משנה את תכולת המזון.

מים הם מקור פוטנציאלי נוסף לזיהום עבור בעלי החיים המחסור במערכת החיסון. מים צריכים להיות מעובדים באמצעות סינון אוטומטי או סינון הכולל את המים העוברים דרך מסנן UV. כדי לחטא מים באוטוקלבה, בקבוקי מים בודדים מכוסים בנייר אלומיניום. מכסי בקבוק עם צינורות לגימה מעוקרים בנפרד בשקית אוטומטית. החמצת המים ל- pH של 2.5-3 מסייעת לשלוט באורגניזמים חיידקיים הצמיחה בבקבוקי המים. מים חומציים על ידי הוספת שתי טיפות של 12 מול (M) חומצה הידרוכלורית (HCl) לשמונה ליטרים של אוסמולליות הפוכה (RO). ניתן להשתמש במערכות השקיה אוטומטיות עם סדרה של סינון בכל המערכת הכוללת מסנני חלקיקים ומסנן אור אולטרה סגול.

סביבה

יש לשלוט היטב בתנאים הסביבתיים בתוך מתקן לטיפול בבעלי חיים. תקנות והנחיות פדרליות קבעו את הסטנדרטים לטיפול וטיפול בבעלי חיים נפוצים. תאורה, טמפרטורת הסביבה, לחות וזרימת אוויר מסופקים כדי לענות על הצרכים הפיזיולוגיים של בעלי החיים. למעט הצורך בטמפרטורת חדר מעט מוגברת, הפרמטרים עבור בעלי החיים האימונו-תימוצריים זהים לאלה של בעלי חיים קונבנציונליים. חיות העירום האתימיות דורשות גם מצעים נוספים וחומרי קינון מסוג נייר גרוסים בכלובים שלהם כדי לסייע בתרמו-ספיגה.

יש לשמור על חדרי בעלי חיים בטמפרטורה שבין 68-72 מעלות פרנהייט עם רמת לחות של 40-60%. 2 רמות לחות מתחת ל -40% יכולות לגרום לזנב הטבעת של עכברים וחולדות, מצב שגורם לעור הזנב להתייבש עד כדי כך שהוא מכווץ סביב הזנב, מה שעלול להוביל לזנב מתנודד. מחזורי תאורה יש להגדיר כדי למנוע לחצים לבעלי החיים הנגרמים על ידי photoperiods לא הולם או עוצמת אור. בדרך כלל, הצילומים הם 12 שעות ו-12 שעות חופש. עוצמת התאורה צריכה להשתנות בהתאם לפעילות בחדר. כאשר טכנאים עובדים בחדר החיות, ניתן להשתמש ברמות תאורה גבוהות יותר. עם זאת, יש להוריד את התאורה לכ-325 לוקס לאחר סיום כל הפעילות. 2 האורות צריכים להיות על שעון הים והמחזורים מאומתים באמצעות מערכות ניטור. על פי הוראות המדריך, חדרי בעלי חיים חייבים לכוון לפחות 10-15 שינויי אוויר של 100% אוויר צח לשעה. 2 שינויי אוויר מפחיתים חיידקים וריחות בחדר החיות. בחדרי בעלי חיים צפופי אוכלוסין, ייתכן שיהיה צורך להגדיל את מספר שינויי האוויר לשעה.

גורמים סביבתיים ברמת הכלוב כוללים את סוג ההחלפה, המצע המשמש בתוך הכלוב, מערכת אספקת המים והתזונה. דיור חברתי הוא חובה אלא אם כן מוצדק מבחינה מדעית, או בעל חיים אינו עולה בקנה אחד עם כל האחרים. הוראות העשרה סביבתית, כגון בקתות נייר וחומרי קינון, מאפשרות לבעלי החיים להפגין התנהגויות ספציפיות למינים, אשר בתורן מקטין את רמת הלחץ ומגביר את הרווחה הכללית של בעלי החיים. חומרי קינון מספקים גם אזור שינה רווי בפרומונים מרגיעים המסייעים בדיור של עכברים זכרים מרובים באותו כלוב. אזור הקינון מועבר לכלוב הנקי עם שינוי הכלוב כדי לסייע במניעת תוקפנות אצל הזכרים כשהם נכנסים לסביבה חדשה. 3

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Procedure

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. טיפול בעכברים חיסוניים (קונבנציונליים)

הוכח כי הפרעות חיסוניות של עכברים דומות מאוד לאלה בבני אדם. 2 מכיוון שלבעלי חיים אלה יכולות אימונולוגיות מוגבלות, נהלים בטיפול ובטיפול בבעלי חיים אלה נועדו למזער את הסיכון למחלות זיהומיות באמצעות בקרות הנדסיות, ציוד מגן אישי לצוות הטיפול בבעלי חיים, והליכי הפעלה סטנדרטיים; אלה מפחיתים את הזיהום של הזדקנות וציוד אחר שבו בעלי החיים נמצאים במגע.

  1. הוצאה ממכולות: קבלת בעלי חיים ממוסדות אחרים או מוכרי בעלי חיים מהווה סיכון לבעלי החיים שכבר שוכנו במתקן בעלי החיים. במהלך המעבר, תיבות הובלת בעלי החיים יכולות לבוא במגע עם סוכנים פתוגניים. לכן, יש לבצע הליך תקין בעת פרקת המכולות.
    1. דרישות ציוד מגן אישי מינימלי (PPE) הן כפפות, חלוק מעבדה נקי או סקראבס, מסכת חלקיקים ומשקפי בטיחות בעת הטיפול בבעלי החיים.
    2. בחר את הכלוב המתאים, כולל מכסה מוט התיל ואת החלק העליון של המחסום. הכלוב צריך להיות מרוהט עם מצעים מתאימים וחומרי קינון. יש להכין את כל ההסתה ולהניח אותה באזור המקבל לפני הגעת בעלי החיים.
    3. עם ההגעה, תיבות התחבורה ממוקמות בחדר מאובטח ומבוקר בטמפרטורה. לאחר מכן, בדוק את המיכל לנזק.
    4. לחטא את המשטחים החיצוניים של מיכל המשלוח עם מוצר כולין דו חמצני להרוס כל פתוגנים מזיקים. ודא כי חומר החיטוי נמצא במגע עם התיבה בהתאם להמלצות היצרנים, בדרך כלל 15-30 דקות.
    5. מניחים את המיכל בתחנת העברת בעלי חיים (ATS). ה- ATS מספק זרימת אוויר מסוננת HEPA בתוך מכסה המנוע המספקת הגנה מפני אלרגנים על ידי יצירת מחסום אוויר ואקום בין המשתמש לאזור העבודה. זה מבטיח חשיפה מינימלית לשיער /קשקשים של בעלי חיים וחומר מצעים בכלוב. האוויר החד-כיווני מגן גם על בעלי החיים מפני אוויר החדר שמסביב, וממזער את הסיכוי לזיהום.
    6. לאחר פתיחת המכולה, להעריך את הבריאות הכללית של בעלי החיים. תרשמו שימו לב לכל החיות הפצועות או החולות.
    7. מניחים את החיות בכלובים שהורכבו בגדלים הקבוצתיים הנכונים. התקבצות צריכה להיות בהתאם לתקנות החלל, והפרוטוקול הניסיוני שאליו יוקצו.
    8. כסו את הכלוב עם מכסה מוט התיל. אבטחו את המחולק על מכסה התיל כדי ליצור שני אזורים במכסה.
    9. בחר את האוכל המתאים והניח את האוכל בצד אחד של מכסה מוט התיל. השאר את הצד השני פתוח כדי לאפשר זרימת אוויר טובה יותר.
    10. מים יסופקו באמצעות בקבוקי מים או מערכת השקיה אוטומטית. בקבוקי מים משמשים לעכברים שננגמו לאחרונה כדי להבטיח שהם יוכלו לשמור על רמות ההידרציה שלהם. עבור IVC caging עם השקיה אוטומטית, לטעון את צינור השקיה לפני הנחת אותו על המדף.
    11. הנח את הכלוב על מתלה. אם אתם משתמשים בהפריה 40, בדקו שהכלוב מעורב באופן מלא על המדף, ושצינור הלגימה מאובטח למערכת השקיה.
  2. כלוב שינוי עכברים קונבנציונליים
    1. כלובי בעלי חיים מוחלפים ב-ATS. ATS מחוטא בסוף כל מפגש.
    2. ניתן לפתוח רק כלוב אחד בכל פעם.
    3. החלפה מוכנה עם המצעים המתאימים וחומרי הקינון מובאת לחדר החיות. מספר קטן של כלובים ממוקמים ב- ATS.
    4. כלובי IVC עם צינורות לגימה פנימיים חייבים להיות מחויבים כדי לכפות מים לתוך הלגימה כדי להסיר את החלל המת של האוויר בצינור הלגימה. אם לא טעון כראוי, העכברים לא יוכלו לספק מספיק לחץ על צינור הלגימה כדי להסיר את האוויר ממנו.
    5. דרישות ציוד מגן אישי מינימלי (PPE) הן כפפות, חלוק מעבדה נקי או סקראבס, מסכת חלקיקים ומשקפי בטיחות בעת הטיפול בבעלי החיים.
    6. כלוב של בעלי חיים שיש לשנות ממוקם בכלוב חדש, ולאחר מכן ב- ATS.
    7. בעלי חיים מועברים ביד או באמצעות מלקחיים מרופדים. כפפות משתנות בין כלובים או בין קבוצות של עכברים. כפפות יכולות גם להיות מחוטאות עם כימיקל לא רעיל בין כלובים.
    8. הוכח כי העברת אזור הקינון של העכברים לכלוב נקי מסייעת במעבר לכלוב הנקי, במיוחד עבור זכרים ששוכנים בקבוצה. פריטי העשרה אחרים מועברים גם הם לכלוב החדש.
    9. לאחר החלק העליון של הכלוב או המאכיל ממוקם בכלוב החדש, מזון מתווסף.
    10. החלק העליון של המחסום ממוקם על הכלוב החדש וכלוב מוחזר למדף.
    11. כלובי IVC חייבים להיות מעוגנים כראוי לתוך המדף כדי להבטיח כי שסתומי האוויר והמים עוסקים.

2. טיפול בעכברים אימונו-קום-מובטחים

  1. פרק ממכולות משלוח
    1. יש לפרוק בעלי חיים אימונוקום בתנאים סטריליים. כל האנשים המטפלים בעכברים לקויי מערכת החיסון חייבים ללבוש שמלת אדים מעוקרת, מסכה, מצנפת שיער וכפפות סטריליות. טכניקה אספטית יש להשתמש בכל עת בעת מסירת בעלי חיים אלה.
    2. כל הציוד וההערכה היו צריכים להיות מעוקרים על ידי קיטור, קרינת UV, או מעוקר כימית עם טבילה ב 70% אתנול במשך 30 דקות לפחות יש שתי אפשרויות לעריקור סטרילי: החלפה סטנדרטית כי כבר עטוף קיטור מעוקר, או החלפה כי הוא מעוקר - בדרך כלל באמצעות הקרנה - על ידי הספק. הכלובים האלה הם שימוש אחד, יחידות חד פעמיות.
    3. לפני מניפולציה עכברים מתחת מכסה המנוע זרימה למינאר, מכסה המנוע מרוסס עם 70% אתנול עם המפוח פועל. מפוח מכסה המנוע צריך להישאר על כל עת כדי לשמור על הסביבה סטרילית. לאחר כל שימוש, מכסה המנוע מרוסס בחומר חיטוי וננגב מכל הפסולת ושוב מרוסס ב-70% אתנול.
    4. באופן אופטימלי, שני אנשים נדרשים לקבלתם התקינה של העכברים האימונוקוםיים: אחד לטיפול בבעלי החיים בטכניקות אספטיות (הטכנאי הסטרילי), ואחד שיטפל בפריטים מזוהמים (הטכנאי הלא סטרילי). האדם הלא סטרילי עדיין צריך ללבוש שמלה נקייה עם שרוולים ארוכים; חלוק מעבדה או חלוק; מסכה; מצנפת; וכפפות סטריליות כדי למנוע זיהום של הפנים סטרילי אם הם צריכים להגיע לתוך מכסה המנוע.
    5. הכן מכסה מנוע זרימה למינאר כפי שתואר בעבר. עדיף שיהיה ברדס המוקדש לבעלי חיים אימונוקומוניים. מומלץ כי מכסה המנוע להיות מצויד באורות עיקור אולטרה סגולים (UV) שניתן להשתמש בהם כדי לחטא את פנים מכסה המנוע בין שימושים. שעון הים מנוצל כדי להבטיח כי פני השטח של מכסה המנוע יש חשיפה נאותה לקרני UV.
    6. החלק החיצוני של כל האספקה המונחת במכסה המנוע מרוסס ב-70% אלכוהול, כולל האריזה החיצונית של מזון, מים והזדקנות.
    7. מכולות מרוססות בתמיסת כלור דו-חמצני לפני שהן ממוקמות במכסה המנוע. לאחר שהונחו במכסה המנוע, הם יישארו פתוחים במשך 15-30 דקות.
    8. המטפל המיועד לבעלי חיים פותח את המזון והמים הסטריליים מתחת למכסה המנוע.
    9. הטכנאי הלא סטרילי פותח את תיבת המשלוח מתחת למכסה המנוע. יש להקפיד על ידי הטכנאי הלא סטרילי כדי להימנע ממגע עם המשטחים הפנימיים של מכסה המנוע ובפנים של תיבת המשלוח.
    10. המטפל בבעלי החיים פותח את הכלוב הסטרילי, ומכין את הכלוב על ידי הנחת מזון ומים על ראש הכלוב. העכברים מוסרים מקופסת המשלוח ומונחים בכלוב הסטרילי.
    11. מצב בעלי החיים הוא ציין על ידי המטפל בבעלי חיים סטריליים. כל בעלי חיים שנראים חולים או שיש להם פציעות ברורות יופרדו. כל הכלובים המסומנים בבעלי חיים הזקוקים לתשומת לב וטרינרית יוצבו לטיפול, שינוי כלוב או מניפולציה ניסיונית אחרונה, כדי להפחית את הזיהום הפוטנציאלי של בעלי חיים אחרים.
    12. האדם הלא סטרילי יסיר את הכלוב המאוכלס מהשכונה. ניתן להניח כלובים על מתלה סטנדרטי ככלובים סטטיים, או על מתלה מאוורר כמו IVCs. בעירוי, העכברים צריכים להיות מסופקים עם חומרי קינון נוספים כדי לסייע בוויסות תרמי.
    13. המטפל בבעלי חיים צריך להחליף כפפות לאחר כל מכולה כדי למנוע זיהום צולב אפשרי של קבוצות של בעלי חיים. מספר המכולה של המשלוח נרשם בכרטיס הכלוב כדי לעקוב אחר מקור בעלי החיים במקרה של מחלה.
    14. ניתן לשמור חומרים מתכלים שאינם בשימוש לשימוש עתידי בתנאי שניתן יהיה לאטום מחדש את הגורם המכיל המקורי. מזון שאינו בשימוש מוסר מהחדר.
    15. עכברים צריכים לעבור תקופת התאקלות של שבוע לפחות לפני השימוש הניסיוני.
  2. החלפת כלוב לעכברים אימונוקום
    1. כלובי העכבר משתנים לפחות פעם בשבוע, או לעתים קרובות יותר אם יש צורך בכך.
    2. צעדים להכנת מכסה המנוע, הכנת כלוב, PPE כוח אדם זהים עבור פרקת בעלי החיים.
    3. בעלי חיים מועברים ביד או באמצעות מלקחיים מרופדים. המטפל המיועד בבעלי חיים צריך reglove לאחר כל 5-10 כלובים, אם הכפפות קרועות או מזוהמות, או אם בעל חיים נראה חולה.
    4. כל כלובים עם בעלי חיים שנראים חולים יוצבו בסוף הסדר המשתנה של הכלוב, כדי למנוע חשיפה אפשרית של בעלי חיים בריאים לפתוגנים או מזהמים.
    5. אם יש להוסיף מזון ו/או מים לכלוב לפני שינוי הכלוב המתוכנן הבא, יש לעשות זאת באופן טפיטי מתחת למכסה המנוע המוכן.

מאחר שעכברים וחולדות מהווים יותר מתשעים אחוז מבעלי החיים המשמשים למחקר ביו-רפואי, טיפול נכון באורגניזמים אלה הוא קריטי לתוצאות הניסויים. נהלי טיפול אלה מתחילים כבר בהתחלה עם פרקת בעלי החיים ממכולות משלוח, לשינוי כלוב, לשמירה על תנאי דיור נאותים, מתן תזונה מתאימה והבטחת סביבה מתאימה. אמנם, ישנם נהלים כלליים החלים על רוב העכברים והחולדות במעבדה, כמה בעלי חיים, כגון אלה שאינם immunocompromised, דורשים הקשבה נוספת על מנת לקיים אותם למטרות ניסיוניות.

וידאו זה יתאר את הסטנדרטים ואת הליכי הטיפול החיוניים הן לבעלי חיים חיסוניים והן לבעלי חיים אימונו-קוםיים. ולבסוף, נמחיש כמה ניסויים לדוגמה המראים כיצד מדענים משתמשים בידע זה למטרות מחקר שונות.

קבלת בעלי חיים ממוסדות אחרים מהווה סיכון לבעלי החיים שכבר שוכנו בתוך המתקן, שכן במהלך המעבר, תיבות ההובלה יכולות לבוא במגע עם סוכנים פתוגניים. לכן, יש להפעיל הליך תקין בעת פרקת המכולות.

לפני הטיפול בבעלי חיים, חשוב ללבוש את ציוד המגן האישי המתאים, או PPE. ה- PPE המינימלי ללבוש הוא חלוק מעבדה, כפפות, משקפי בטיחות ומסכה מסוג כירורגי שיפחית את החשיפה לאבק ואלרגנים. השלב הבא הוא לבחור כלובים מתאימים לבעלי חיים נכנסים. לאחר מכן, לרהט את הכלוב עם מצעים מתאימים וחומרי קינון. ולקחת את הכלובים המוכנים לחדר הקבלה מבוקר הטמפרטורה, כך שהם מוכנים להעברה לפני הגעתם של בעלי החיים.

עם הגעת המשלוח, הניחו את תיבות ההובלה במקום מאובטח בחדר המקבל. בדוק את המיכל לכל נזק ולחטא את המשטחים החיצוניים כדי להרוס כל פתוגנים מזיקים. ודא כי חומר החיטוי נמצא במגע עם התיבה לפחות 15-30 דקות, בהתאם להמלצות היצרן. לאחר מכן, מניחים את המיכל בתחנת העברת בעלי החיים, או ATS. תחנה זו מציעה אוויר חלקיקי יעילות גבוהה, או HEPA, זרימת אוויר חד כיוונית מסוננת בתוך מכסה המנוע. HEPA מגן על המשתמש מפני אלרגנים ומגן על בעלי החיים מפני אוויר החדר שמסביב, וממזער את הסיכוי לזיהום. לאחר מכן, לפתוח את המכולה ולהעריך את הבריאות הכללית של מכרסמים. תרשמו כל חיה שנראית פצועה או חולה. לאחר מכן, מניחים אותם בכלוב שכבר הורכב בגדלים הקבוצתיים הנכונים, מכסים את הכלוב במכסה מוט התיל ומאבטחים את המחולק כדי ליצור שני אזורים. בחר את האוכל המתאים והניח אותו בצד אחד ולהשאיר את הצד השני פתוח כדי לאפשר זרימת אוויר טובה יותר. לבסוף, אם בעלי החיים אינם ממוקמים על מתלה עם השקיה אוטומטית, הוסף בקבוק מים כדי להבטיח אספקת מים נאותה. זכור, יש לחטא את ה-ATS בסוף כל מפגש, והמפוח חייב להיות כבוי בעת חיטוי.

להחלפת כלוב, הניחו את שני הכלובים - כלוב טרי עם חומר המצעים המתאים ואת הכלוב המשומש עם בעלי החיים - ב- ATS. אפשר להעביר את החיות מהכלוב הישן לכלוב החדש ביד או באמצעות מלקחיים מרופדים. שתי שיטות אלה נדונו בסרטון אחר של אוסף זה. זכור רק כלוב אחד של בעלי חיים יכול להיפתח בכל פעם. עבור עכברים זכרים או נקבות עם המלטה, הוכח כי העברת אזור הקינון של העכברים לכלוב הנקי מסייעת לבעלי החיים במעבר. לאחר החלק העליון של הכלוב ממוקם על הכלוב החדש, להעביר מזון מן כלוב הישן העליון לחלק העליון החדש ולהוסיף מזון נוסף במידת הצורך. לאחר מכן, הניחו את המחסום העליון, והחזירו את הכלוב למדף. זה תרגול טוב להחליף כפפות בין כלובים או בין קבוצות.

הליך פרקת בעלי חיים אימונוקום הוא קצת שונה, כמו דברים צריכים להיות סטריליים. מומלץ כי המפוח בתוך מכסה המנוע להיות על לפחות 24 שעות לפני השימוש. כמו עבור בעלי חיים חיסוניים, עם הגעת המשלוח לרסס את המיכל עם פתרון חיטוי בחדר הקבלה ולהשאיר אותו פתוח במשך 15-30 דקות. ב- ATS המיועד לעכברים אימונוקום, לרסס את מכסה המנוע זרימה למינאר עם 70% אתנול 30 דקות לפני מניפולציה בעלי חיים. זה אידיאלי ששני אנשים ישתתפו בפעילות ההפרה הזו - אדם אחד יהיה הטכנאי הסטרילי שלובש את שמלת העיקור של הקיטור וזוג כפול של כפפות סטריליות כדי להתמודד עם בעלי החיים בטכניקות אספטיות והשני יהיה הטכנאי הלא סטרילי שלובש שמלת בידוד נקייה וזוג כפפות לטיפול בפריטים מזוהמים. שניהם צריכים ללבוש מסכה, מצנפת שיער ומשקפי בטיחות.

לפני פתיחת המכולה בתוך מכסה המנוע, מניחים את כל האספקה ומכניסים לתוכם ומרססים את החלק החיצוני שלהם באלכוהול. ועם הגעת המשלוח, הניחו את קופסת החיות שהתקבלה בשכונה ומרססים אותה גם ב-70% אתנול. ישנן שתי אפשרויות להזדקנות סטרילית, או החלפה סטנדרטית שעטפה ועקרה קיטור, או יחידות חד פעמיות שעוקרו באמצעות הקרנה על ידי הספק.

התחל את הליך ההפרה על ידי פתיחת המזון הסטרילי, ואחריו פתיחת תיבת התחבורה. בשלב זה, המטפל צריך להשליך את הזוג הראשון של כפפות סטריליות. לאחר מכן, האדם הלא סטרילי פורק את הכלוב הסטרילי ומעביר אותו באופן הפוך למפעיל החייתי שמסיר את מכסה מכסה מוט התיל, ומניח אותם במהופך במכסה המנוע. לאחר מכן, צינור הלגימה על הכלוב מלא במים בתחנה הממוקמת בשכונה. לבסוף, המטפל בבעלי החיים מכניס את החיה לכלוב, מאבטח אותה עם מכסה מוט התיל, מוסיף מזון ומניח את המצנפת במקומה. שים לב כי מפוח מכסה המנוע צריך להישאר על כל עת כדי לשמור על הסביבה סטרילית. בסוף, האדם הלא סטרילי מסיר את הכלוב המאוכלס מהמכסה המנוע ומניח אותו על מתלה מתאים. כדי למנוע זיהום צולב אפשרי בין קבוצות, המטפל בבעלי חיים צריך להחליף כפפות לאחר כל מכולה.

עבור החלפת כלוב של בעלי חיים אימונו-קומונו-מובטחים, הכנת מכסה המנוע וכלובים ו- PPE זהים לפירירת בעלי חיים אלה. וטכניקת ההעברה זהה לבעלי החיים האימונו-מוכשרים, אך בתנאים סטריליים.

עכשיו בואו נדון בתנאי הדיור המתאימים לבעלי החיים, וזה היבט חשוב נוסף של מתן טיפול חיוני. עכברים וחולדות שוכנים בעיקר בסוג קופסת נעליים עם תחתית מוצקה המכילה חומר מצעים. כלוב העכברים הטיפוסי מספק 75 אינצ'ים רבועים של שטח רצפה, אשר מתאים למקסימום של 5 עכברים בוגרים. מצד שני, כלוב חולדות יש את השטח של 142 סנטימטרים רבועים והוא מתאים עבור 2 חולדות מבוגרות. כלובים סטטיים מכוסים בדרך כלל במכסה מוט תיל וחומר המסנן נוסף מעל ראש הכלוב כמצנפת. כלובים מאווררים בנפרד, או IVCs, כוללים גם מכסה מוט תיל ומצנפת, אך הם ממוקמים על מתלה המספק זרימת אוויר לכלוב. זה מבטל את הצורך לשנות את הכלוב לעתים קרובות כמו כלובים סטטיים, אשר עשוי להיות מועיל עבור בעלי חיים immunocompromised.

לכל מערכות ההסתה יש אספקה לאספקת מזון ומים. ישנם גם מאכילים להציב בתוך כלוב בעלי חיים או קטע של מכסה מוט התיל משמש לאחסון מזון. מזון חייב להיות ממוקם כך שהוא לא מלוכלך על ידי בעלי החיים. מים מסופקים בדרך כלל באמצעות בקבוק מים המונח על החלק העליון של הכלוב, או באמצעות שסתום שתייה השקיה אוטומטי כי הוא מרכיב מובנה של כלוב בעלי החיים. עבור אפשרות שסתום שתייה, כאשר הכלוב עוסק על מתלה, מים מועברים לתוך הצינור עבור מערכת השקיה אוטומטית שנועדה לענות על הצרכים של החיה ברחבי מתקן בעלי החיים.

המדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה קובע כי יש לחטא את כל כלי ההשמדה לפחות כל שבועיים. כמה כלובים ואביזרים ייתכן שיהיה צורך לשנות לעתים קרובות יותר כפי שהוכתב על ידי רמת הריח והאמוניה במתחם.

עכשיו בואו נדבר על אספקת מזון ומים מתאימה לבעלי חיים חיסוניים ואימונו-קומונו-תומיים. ישנם הזנות רבות הזמינות מסחרית עם חלבונים משתנים, פחמימות, הרכבי שומן. באופן אידיאלי, הזנות צריכות לכלול 15-19% חלבון, 44% פחמימות, ו 4-9% שומן. עבור בעלי חיים אימונוקום, ודא כי ההזנה כבר מעוקר.

מי ברז, או אוסמוזה הפוכה שהיא מי RO, יכולים לשמש לבעלי חיים אימונו-מוכשרים, אך עבור בעלי חיים חיסוניים, מים יכולים להיות מקור לזיהום, ולכן יש לעקר. סטריליות במים נשמרת על ידי הוספת 2 טיפות של 12 חומצה הידרוכלורית 12 טחון ל 8 ליטרים של מי RO, אשר יהיה חומצי את המים ל- pH של 2.5-3 ולהגביל את הצמיחה החיידקית. לאחר מכן יוצקים את המים בבקבוקים בודדים ומכסים אותם בנייר אלומיניום. מניחים את מכסי הבקבוק עם צינורות לגימה בנפרד בשקית autoclave, ולשים הכל autoclave עבור עיקור קיטור.

עכשיו בואו נדון בתנאים הסביבתיים הסטנדרטיים החיוניים לטיפול בבעלי חיים.

ברמת הכלוב, דיור חברתי הוא חובה אלא אם כן מוצדק מדעית או אם בעל חיים אינו עולה בקנה אחד עם כל האחרים. העשרת הסביבה בבקתות נייר וחומרי קינון מאפשרת לבעלי החיים להפגין התנהגויות ספציפיות למינים כמו בניית קן וחפירה, אשר בתורו מקטין את רמת הלחץ ומגביר את הרווחה הכללית של בעלי החיים. חומרי קינון מספקים גם אזור שינה רווי בפרומונים מרגיעים המסייעים בדיור של עכברים זכרים מרובים באותו כלוב. כאמור, העברת אזור הקינון לכלוב הנקי עם שינוי הכלוב מסייעת במניעת תוקפנות, במיוחד אצל זכרים, שכן בעלי החיים נכנסים לסביבה חדשה. עבור חיות עירום אתימיות, יש לשקול לספק מצעים נוספים וחומרי קינון מסוג נייר גרוסים בכלובים שלהם כדי לסייע בתרמורגציה.

ברמת החדר, הטמפרטורה עבור עכברים וחולדות צריך להיות בין 68 ל 79 מעלות פרנהייט. רמת הלחות בחדר צריכה להיות 30-70%, שכן רמות נמוכות יותר יכולות לגרום למצב המכונה ringtail. פרמטר החדר השלישי הוא תאורה. זה כולל עוצמת אור ומחזורים. בדרך כלל, חדר החיות מוגדר למחזור אור/12 שעות של 12 שעות. עוצמת התאורה צריכה להשתנות בהתאם לפעילות בחדר. כאשר טכנאים עובדים, ניתן להשתמש ברמות תאורה גבוהות יותר. עם זאת, יש להוריד אותו לכ 325 לוקס לאחר כל הפעילות מסתיימת. לבסוף, זרימת האוויר בתוך החדר צריך גם להיות נשלט בקפידה. מינימום של 10-15 שינויי אוויר של 100% אוויר צח צריך להתרחש כל שעה. זה מקטין חיידקים וריחות בחדר החיות.

לבסוף, בואו נראה כיצד חוקרים משתמשים בידע זה על דיור חיות מעבדה, דיאטה והעדפות סביבה בניסויים שלהם.

כפי שנדון קודם לכן, חיות מעבדה בדרך כלל להפגין התנהגות בניית קן, אשר מפחית מתח, וחוקרים השתמשו בזה כאינדיקטור לרווחת בעלי החיים. בניסוי מסוים זה, מדענים פיתחו מערכת לא משוחדת כדי להבקיע את הקן שנבנה ולאחר מכן השתמשו בו לחקור את ההשפעה של טמפרטורת הסביבה על התנהגות בניית הקן. כפי שניתן לראות, עלייה בטמפרטורה גרמה לירידה משמעותית בציון, והדגישה את תפקיד הטמפרטורה הסובבת את רווחת בעלי החיים.

בהתחשב בכך שעכברים וחולדות אוהבים פחמימות, החוקרים השתמשו במזון של צורות שונות כדי לבחון את התפקוד המוטורי של בעלי החיים. זה כולל ניתוח מיומנות במהלך סוגים שונים של משימות טיפול במזון, ובחינת הגעה להתנהגות בעקבות התערבויות כירורגיות או פרמקולוגיות.

לבסוף, ידוע כי עכברים וחולדות הם ליליים והם לא מעדיפים אזורים מוארים. מדענים משתמשים בידע זה כדי לבנות סביבה כדי לחקור חרדה במינים אלה. לדוגמה, כאן המחקרים הכניסו בעלי חיים לשדה פתוח פשוט וחקרו את הזמן שהושקע על ידי סוג הפרא ועכברי נוקאאוט באזורים הפנימיים והחיצוניים, כדי לנתח את ההשפעה של נוקאאוט גנטי על התנהגות דמוית חרדה.

הרגע צפית בהקדמה של JoVE להליכי טיפול חיוניים לעכברים וחולדות. עכשיו אתה צריך להבין טוב יותר את האמצעים שיש לנקוט כדי להבטיח כי הסביבה והטיפול בבעלי חיים אלה לא לגרום כל נזק לבריאות בעלי החיים ואתה צריך גם לדעת איך חוקרים יכולים לשנות פרמטרים אלה כדי להשיג מטרות מדעיות שונות. כמו תמיד, תודה שצפית!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Applications and Summary

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הטיפול והטיפול הנכון בבעלי חיים המשמשים במחקר ביו-רפואי חיוניים לתוצאות הניסויים. תקנות והנחיות שנקבעו מכתיבות רבות מהפרקטיקות שבהן נעשה שימוש. עם זאת, נדרשים אמצעים נוספים לעכברים וחולדות שיש להם ליקויים במערכת החיסון כדי למתן חשיפה מקרית לפתוגנים אופורטוניסטיים. כאשר פרקטיקות לדבוק נהלים שנקבעו, הבריאות והרווחה של בעלי החיים הניסיוניים משופרת, וכתוצאה מכך ניסיוני טוב יותר מושגים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Belizário J.E. 2009. Immunodeficient Mouse Models: An Overview. The Open Immunology Journal. 2. 79-85.
  2. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.
  3. Van Loo, P. 2001. Modulation of aggression in male mice: influence of cage cleaning regime and scent marks. In Male Management: Coping with Aggression Problems in Male Laboratory Mice. Surrey: UK.

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter