Autopsie et prélèvement des tissus

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Diagnostic Necropsy and Tissue Harvest

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18:52 min
April 30, 2023

Overview

source : Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR ; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Université de Notre Dame, IN

nombreuses expérimentations animales dépendent de données finales collection moments qui sont recueillies à partir de la récolte et les essais d’organes et de tissus. L’utilisation de méthodes appropriées pour la collecte d’organes et de tissus peut influer sur la qualité des échantillons et l’analyse des données qui sont acquise pour les essais des tissus. La méthode d’euthanasie de l’animal peut également concerner la qualité des échantillons. Ce manuscrit donnera un aperçu de techniques d’autopsie appropriée pour les rats.

Principles

la méthode d’euthanasie plus couramment utilisés pour les souris et les rats est une surdose de dioxyde de carbone (CO 2). Selon l’American Veterinary Medical Association (AVMA), l’utilisation de CO 2 est acceptable avec des conditions qui réduisent au minimum l’aversion et la détresse. 1 les animaux restent dans leur cage maison, qui est placé dans une chambre. CO 2 est progressivement introduit dans la chambre à une vitesse de déplacement de 10 % à 30 % du volume chambre/min, ce qui provoque les animaux perdu conscience avant la perception de la douleur associée à activation des nocicepteurs par l’acide carbonique. Le flux est ensuite maintenu dans la chambre une fois un arrêt respiratoire a eu lieu pour s’assurer que l’animal est mort. Une surdose d’un inhalant anesthésie est également acceptable, en particulier pour les projets qui nécessitent l’utilisation du tissu pulmonaire, comme le CO 2 endommage le tissu pulmonaire. Exsanguination de l’animal peut également être nécessaire pour certaines expériences afin de réduire le volume de sang dans les tissus.

un enregistrement précis de toutes les conclusions est essentiel pendant une autopsie. Un formulaire doit être instauré qui enregistre un historique complet de l’animal, y compris l’identification des animaux, sexe, conditions de logement, date de naissance, date de décès, numéro de numéro/protocole d’étude et le nom de l’enquêteur de principe. Un examen interne brut est effectué comme les cavités du corps sont exposées pour révéler les organes internes. A noter une anomalie évidente. 2

autopsie et tissus de récolte doit être lancé immédiatement après l’euthanasie de l’animal, comme une fuite bactérienne du tractus intestinal peut confondre certains tests. Les organes internes doivent être observées à partir de la cavité abdominale et de passer à la cavité thoracique. Avant d’enlever les échantillons de tissus, il est important d’observer les organes in situ. 2 récolte organes et de tissus pour examen histologique exigent que les tissus sont bien préparés. Des échantillons de tissus pour histologie doivent être de 0,5 à 1 cm d’épaisseur pour permettre une pénétration suffisante de la solution de fixation. Fixation préserve les tissus biologiques, prévenir la carie, autolyse et putréfaction. Aussi, il s’arrête de réactions biochimiques en cours et peut-être augmenter la résistance mécanique ou la stabilité des tissus traités. L’objectif général de la fixation du tissu est de préserver les cellules et tissus des composants pour permettre la préparation des fines, coupes colorées. Sauf indication contraire, le fixateur le plus couramment utilisé est de 10 % de formol tamponné neutre. Prêt-à-utiliser 10 % formol tamponné neutre est commercialisé auprès des principaux fournisseurs. 3

Figure 1
figure 1. Organes abdominaux et thoraciques d’un rat femelle.

Figure 2
figure 2. Organes abdominaux et thoraciques d’un rat mâle.

Procedure

1. examen extérieur

un brut examen externe du corps, qui comprend une inspection visuelle de l’organe de lésions et de masses, doit être exécuté dans l’étape initiale à une autopsie. Le pelage doit être examiné pour les zones de perte de cheveux. Les dents et les ongles sont évalués pour une croissance excessive ou d’usure. Convient de noter une coloration de la fourrure dans le bouche, les narines, les yeux, anal et ouvertures génitales. Tests de bande, grattage de la peau et fourrure examens devraient être effectuées pour détecter les parasites externes (voir procédure ci-dessous).

  1. Essai au ruban adhésif
    1. équipement requis pour un test de bande comprend les gants, une bande de ruban de cellophane clair, une lame de microscope de verre et ciseaux.
    2. Sont toujours porter des gants lors de manipulation de la bande, comme la colle soulèvera les huiles et les doigts, les cellules de la peau obscurcissant les conclusions ou créer une confusion lors de l’évaluation de la diapositive.
    3. Couper un morceau de ruban qui est légèrement plus étroite que la largeur et plus courte que la longueur de la lame de microscope.
    4. Enfoncez doucement le côté collant de la bande à l’anus et la région environnante et de supprimer rapidement les it.
    5. À l’aide de l’extrémité opposée de la cassette, appuyez dessus entre les omoplates et supprimer rapidement les it.
    6. Appliquer le ruban sur la lame de microscope.
    7. Le test de la bande est prêt pour l’examen microscopique. Œufs de parasites sont visibles à un grossissement de 4 X mais devraient ensuite être examinées à un grossissement de 10 X pour identifier correctement l’espèce.
    8. Il est important de ne pas toucher le côté adhésif du ruban. La bande va soulever les débris des mains gantées et rendre la lecture de la diapositive difficile.
  2. Raclage de la peau
    1. l’essai de raclage de la peau est effectué sur des zones d’alopécie, lésions cutanées ou excoriation.
    2. L’équipement requis pour le raclage de la peau est une lame de microscope de verre propre, huile minérale et d’une lame de métal spatule ou scalpel.
    3. Verser quelques gouttes d’huile minérale sur la lame de microscope.
    4. Pincer la peau dans un pli sur le bord de la lésion ou domaine d’intérêt.
    5. Placer une petite quantité d’huile minérale sur la peau.
    6. Placer le bord de la lame de la spatule ou le scalpel sur la peau et frottent contre la direction de la croissance des cheveux.
    7. Continuer à gratter jusqu’à ce qu’un peu de rougeur est visible sur la peau.
    8. Placer les cheveux et le tissu gratté de la surface de la peau dans l’huile sur la lame de microscope. Le cas échéant, diffuser le matériel afin qu’il soit distribué uniformément dans l’huile.
    9. La diapositive est maintenant prête à être examiné au microscope. Si vous le souhaitez, un lamelle couvre-objet peut être appliqué à la goutte d’huile sur la lame. Examiner la lame à 4 X et un grossissement de 10 X.
  3. Examen pelt
    1. l’examen de la peau est le dernier examen externe effectué ; cependant, il est fait après l’examen interne est terminé.
    2. L’animal est placé dans un verre ou de plastique Pétri après que tous les échantillons d’organes internes ont été collectés.
    3. Le plat est placé dans un réfrigérateur pendant 15 minutes.
    4. Après 15 minutes, le plat est placé sous un microscope à dissection et la peau est examinée pour les parasites externes. La plupart des acariens fourrure se déplacera vers les extrémités des poils et on observe facilement.

2. Examen brut intérieur de la cavité abdominale

  1. exciser la peau
    1. une petite incision est faite juste en avant du bassin chez les femelles et surtout le prépuce chez les hommes.
    2. La coupe de la peau s’étend à la Chin.
    3. Par dissection par clivage est utilisé pour détacher la peau de l’aponévrose et le muscle.
    4. Coupes transversales sont faites avant les membres postérieurs et postérieur aux membres avant. Il faut ne pas de rompre les vaisseaux sanguins dans la région axillaire.
    5. Utilisation dissection par clivage pour exposer la zone cervicale et thoracique. Redoublez de prudence devrait être exercé pour eviter une rupture de la jugulaire et carotide vaisseaux du cou.
  2. Glandes mammaires
    1. chez les femelles, examiner le tissu mammaire à chercher des masses, décoloration ou anomalies.
    2. Les femelles allaitantes ou enceintes passera volume de tissu mammaire, et lait peut-être être présent.
    3. Tissu mammaire se trouve de la partie supérieure du sternum à la manubrium à l’ouverture génitale sur la face ventrale et s’étend latéralement sur les deux côtés presque toucher sur la surface dorsale sur les hanches et les épaules.
    4. L’excision des glandes mammaires nécessite agrippant le bord de la glande avec une pince pouce et par dissection pour desserrer des pièces jointes à la peau. Une fois que la glande a été séparée de la peau, ciseaux iris peut être utilisé pour couper toutes les pièces jointes restantes avant de mettre le gland dans une solution de fixation.
  3. Glandes sous-cutanées
    1. glandes préputiales sont jumelés et situés juste en avant du prépuce chez le rat mâle. Elles apparaissent en grands et sont d’un gris de couleur jaunâtre avec un aspect spumeux.
    2. Glandes salivaires
    3. Submandibular sont jumelés, situé à la mandibule et s’étendent le long de l’encolure au sternum manubrium. Ils ont un revêtement dur et sont fermement adhérés aux muscles.
    4. Retrait de ces glandes nécessite une dissection émoussée et Redoublez de prudence lorsque vous travaillez dans la région cervicale pour éviter une rupture des vaisseaux sanguins. Par dissection par clivage est une technique de dissection anatomique dans les tissus sont séparés et les structures sous-jacentes exposés sans couper.
    5. Pour une dissection émoussée, les ciseaux sont utilisés pour répandre les tissus apart, plutôt que de les couper dehors. Les embouts fermés sont poussés dans les tissus et ensuite ouvert pour fractionner le tissu le long des plans naturels. Ce processus nécessite patience et une touche délicate, comme l’étirement du tissu peut causer des dommages aux organes adjacents et les vaisseaux sanguins.
    6. Les glandes, une fois libérés des muscles sous-jacents, sont levées et les pièces jointes résiduels sont rompus.
    7. Les glandes exigent au moins une coupe pour permettre la pénétration de la fixateur.
    8. Graisse sous-cutanée est évaluée pour la quantité et de dépôts. Un animal obèse peut avoir une grande quantité de graisse avec la peau épaissie. Les animaux qui sont déshydratés aura réduit l’élasticité de la peau, et il se sentira plus mince.
  4. Muscle
    1. observer les muscles abdominaux, intercostaux et exposés du cou et des membres. Notez tout épaississement anormal, masses ou décoloration.
    2. Si le muscle est nécessaire pour l’analyse, sélectionner et couper l’échantillon avant de prendre les organes abdominaux pour réduire la contamination sanguine.
  5. Ouverture de la cavité du corps
    1. une petite coupe transversale en fait la plus caudale point du muscle abdominal exposé.
    2. Lifting du muscle loin des organes, découper le long de la linea alba à la xiphoïde.
    3. Couper les muscles abdominaux de la ligne médiane latéralement, juste au-dessus des membres postérieurs sur les deux côtés.
    4. Couper le muscle abdominal le long de la courbe des côtes des deux côtés.
  6. Graisse abdominale
    1. évaluer la quantité et l’accumulation de graisse corporelle. Un animal sain aura coussinets adipeux abdominales et certaines matières grasses le long de la surface dorsale de la cavité abdominale. Un animal trop mince, ou un très jeune animal, n’aura pas une quantité appréciable de graisse qui entoure les reins.
    2. Observer la couleur de la graisse corporelle et noter toutes les anomalies.

3. Organes abdominaux

  1. foie
    1. normalement, la couleur du foie doit être un rouge foncé. Les marges doivent être lisse et ont un bord croquant. Un foie anormaux auront une bordure épaisse et peut avoir des encoches ou bords festonnés.
    2. Il faut lors de manipulation du foie, telle qu’elle est un tissu mou. Toute perturbation de l’intégrité de l’orgue se traduira dans le sang une fuite dans la cavité du corps et de masquer les organes.
    3. Doucement reflètent le foie loin du diaphragme et faire une coupe à travers les vaisseaux sanguins antérieur du foie.
    4. Reflètent le foie vers le diaphragme et saisir le nœud fibreux qui relie tous les lobes du foie au centre. Soulevez le foie tout en coupant toutes les pièces jointes à l’intestin et l’estomac.
    5. Enlever le foie en une seule pièce et tache de sang excédentaire de la surface de l’organe. Il peut être placé dans un bain de solution saline, ou rincé dans une solution saline stérile, avant le découpage en sections plus minces pour permettre la pénétration des solutions fixateur.
  2. Vésicule biliaire
    1. la vésicule biliaire est un petit sac transparent qui apparaît souvent en jaune due à l’accumulation de bile. Il est présent chez la souris, mais pas chez les rats.
    2. De la vésicule biliaire est située entre les lobes plus haut de la page du foie le long de la ligne médiane. Il est généralement relié à la membrane par un frein mince qui peut accidentellement être déchiré, causant de la vésicule biliaire à se rompre.
    3. La vésicule biliaire peut être enlevée avec le foie et séparée par la suite à l’examen.
  3. Rate
    1. la rate est rouge foncé et situé le long de la courbure inférieure de l’estomac. Il doit être régulier dans la forme, avec une surface légèrement mate.
    2. Il est généralement plus grande chez les mâles que les femelles. Animaux avec les parasitoses internes, les infections bactériennes ou maladies du sang peut-être ont agrandi spleens.
    3. Comme les filtres rate endommagé des globules rouges de la circulation, il est rempli de sang. Lors du retrait de la rate, éviter toute perforation à l’orgue.
    4. Pour l’enlever, la rate est levée et les pièces jointes couper entre l’estomac et la rate.
  4. Tractus intestinal
    1. post mortem évolue rapidement et comprennent l’accumulation de sang dans les tissus, ce qui entraîne l’apparition d’ecchymoses et le gonflement des intestins avec gaz, souvent produites par la prolifération bactérienne. Le tractus intestinal est soigneusement inspecté après il a été éliminé de l’organisme.
  5. Estomac
    1. l’estomac se trouve à l’extrémité distale de le œsophage. Il semble être deux tons, différencier les parties musculaires et glandulaires.
    2. L’estomac doit être évaluée pour la présence de nourriture par la convivialité. Les rongeurs mangent généralement constamment en raison d’un métabolisme élevé. Un estomac vide est à noter qu’il peut être révélateur de la maladie.
    3. Ne pas couper l’estomac, comme le contenu finira par contaminer les organes de la cavité abdominale.
    4. Pour retirer le tractus intestinal, le œsophage de l’estomac est sectionné juste en avant de l’estomac. Si l’estomac doit être placé dans un conteneur commun de fixateur, un morceau de suture peut être attaché autour de le œsophage pour éviter toute fuite du contenu de l’estomac avant découpe.
  6. Intestin grêle
    1. l’intestin grêle est composé de trois parties : le duodénum, le jéjunum et l’iléon. Il ne contiendra pas de boulettes fécales.
    2. Le duodénum est une section plus courte du sphincter de l’estomac postérieure au début du jéjunum. Le canal cholédoque pénètre dans l’intestin grêle dans le duodénum et le tissu pancréatique est plus fermement attaché à cette partie de l’intestin grêle.
    3. Le jéjunum est la partie centrale de l’intestin grêle.
    4. Peyer ' s Patches-composée de tissu lymphoïde dans petit ovale patches-sont présents sur la surface nonmesenteric du jéjunum et iléon chez le rat. 3 Ceux-ci font partie du système immunitaire et peut être utiles dans le diagnostic des troubles du système immunitaire.
    5. L’iléon est la partie distale de l’intestin grêle et est la plus longue partie, se terminant à caecum.
  7. Caecum
    1. du caecum est une couleur verdâtre et très doux.
    2. Il est situé à la jonction du petit et du gros intestin.
    3. Fermentation se produit dans le caecum, donc la ponction de l’orgue se traduira par une odeur nauséabonde et la contamination des organes par des bactéries.
  8. Gros intestin
    1. le gros intestin commence au caecum et se poursuit à l’anus. Il est facilement identifiable, comme les boulettes fécales peuvent être visualisées dans la lumière de l’intestin.
    2. Il ne faut pas des zones d’hémorragie ou de décoloration immédiatement après euthanasie.
  9. Mésentère
    1. les petits et les grands intestins sont ancrés au corps par le mésentère, une membrane contenant les vaisseaux sanguins, matières grasses et les ganglions lymphatiques.
    2. Il convient de rechercher des ganglions lymphatiques et les masses avant d’ôter le tractus intestinal.
  10. Pancréas
    1. le pancréas est un organe diffus situé au-dessous de l’estomac et entre les premiers plis du duodénum. C’est un bronzage lumineux de couleur grise et composé de plusieurs petits lobes avec des bords irréguliers.
    2. Il n’est pas possible d’enlever le pancréas en un seul morceau.
    3. Si le tissu pancréatique doit être récolté, il doit être effectuée avant l’enlèvement du tractus intestinal.
    4. Tissu identifié comme pancréatique doit être soigneusement taquiné loin le tissu mésentérique entourant it.
  11. Enlever le tractus intestinal
    1. tractus intestinal est supprimé comme une seule pièce, commençant par l’estomac et s’étendant jusqu’à l’anus.
    2. Une coupe faite dans le gros intestin, juste en avant de l’anus. Le tractus intestinal entière peut être attaches de levé et tout membraneuses rompus. Le tractus intestinal peut alors être retiré le mésentère coupé en sections et fixe.
    3. Lorsque vous placez les sections de l’intestin dans les pots contenant les autres organes, il est impératif que les extrémités soit lié pour prévenir la contamination des tissus avec des bactéries intestinales.
    4. Tract
    5. la lumière de l’intestin peut être exposé en réduisant sa longueur à l’aide de ciseaux petit et pointu. L’intérieur peut être rincé après avoir exposé le lumen.
    6. Certaines études mAY exigent qu’une partie de l’intestin être enlevée et vidée plutôt que couper. En obtenant une aiguille émoussée à une extrémité du tissu excisé, une solution saline ou fixateur peut être forcée dans l’intestin pour vider le contenu.
  12. Rein
    1. les reins sont des organes pairs situés contre les muscles du dos. Le rein droit est plus élevé que la gauche. Les reins chez les animaux plus âgés peuvent être entourés par des dépôts de graisse, ce qui les rend difficiles à visualiser.
    2. C’est environ la taille et la couleur d’un haricot noir ainsi que sa surface doit être lisse.
    3. Immédiatement antérieur du rein est la glande surrénale, apparaissant comme un nodule de petit, rose clair.
    4. Pour enlever le rein, l’isoler à l’aide d’une pince et couper entre le rein et l’uretère.
    5. Les reins ont une capsule externe difficile qui peut être décollée de mieux visualiser les surfaces. Couper un rein en deux le long de l’axe le plus long et l’autre rein transversalement. Remarque tout grit dans le rein pourrait indiquer la présence de cristaux ou de dépôts minéraux.
  13. Système reproducteur femelle
    1. l’utérus est une structure en forme de Y. Le corps de l’utérus est court avec des cornes appariés à gauche et à droite. Les cornes se terminent aux trompes de Fallope et les ovaires. Chez une patiente non gravides, les cornes seront rose pâle et mince. Chez un animal enceinte, les cornes apparaîtront plus sombres et sont prononcées les vaisseaux sanguins en cours d’exécution adjacentes aux cornes utérines. À mesure que progresse de gestation, les cornes utérines aura un " collier de perles " apparence. Les embryons en développement créera une zone pâle dans la corne et qu’ils développent, l’utérus s’étire et le tissu va devenir plus mince, permettant la visualisation.
    2. Les ovaires sera situé juste en dessous des reins. Ils auront une surface rugueuse due à des stades différents de la maturation des follicules. Ovaires kystiques aura des vésicules remplies de liquide. Ce liquide peut varier de paille coloré aux sanguineous.
    3. Pour enlever les ovaires, coupés les pièces jointes artériels vers l’avant et la trompe de Fallope vers l’arrière. Si vous le souhaitez, les ovaires peuvent être souscrite attachés à l’utérus.
    4. D’enlever l’utérus, il doit être saisi délicatement et traction appliquée pour pouvoir couper au-dessous du col de l’utérus. Après la coupe, soulever le corps et les cornes de l’utérus, brisant toutes les pièces jointes dans la cavité coelomique.
  14. Système reproducteur masculin
    1. les vésicules séminales sont blanches, ram ' s en forme de corne, jumelé à des structures situées vers l’avant de la vessie et fixée sur la ligne médiane à la glande prostatique. La taille varie, mais ils peuvent être aussi grands que le caecum.
    2. La glande prostatique est située autour de la vessie à la base. Ce tissu est généralement un bronzage léger. Chez les animaux plus âgés, il peut présenter une hyperplasie. Les animaux plus âgés en général ont plus graisse corporelle qui peut compliquer la visualisation de la prostate.
    3. Testicules sont jumelés et situés dans le sac scrotal. La surface doit être lisse et fine vascularisation évidente sur la surface. Souris et les rats n’ont pas un anneau inguinal ou le sphincter, ce qui permet à l’animal de retirer les testicules dans la cavité abdominale. Pour visualiser ces, saisir les coussinets adipeux abdominales situés dans le bas ventre et les tirer vers l’avant. Cela va tirer les testicules du scrotum pour permettre l’examen. L’épididyme est le long de la marge inférieure du testicule et s’effile vers le haut. Le canal déférent est fixé à l’extrémité de l’épididyme et nous ramène à la prostate.
    4. Enlèvement des testicules peut être accompli en coupant l’attachement au scrotum et en sectionnant le canal déférent.
    5. Suppression de la prostate et les vésicules séminales nécessite un saisissant la base de la vessie et de levage, tout en coupant les pièces jointes sous la prostate.

4. Cavité thoracique

poumons
    1. les poumons sont normalement une couleur rose vif et spongieux de texture avec une surface lisse. Cependant, l’euthanasie en CO 2 peut causer des hémorragies pulmonaires, résultant en des taches rouges foncés qui peuvent couvrir la surface du poumon entier.
  1. Heart
    1. coeur est rouge foncé avec quatre chambres. Les ventricules sont musclés et fermes au toucher. Les oreillettes sont de couleur rouge plus foncée et s’asseoir au sommet des ventricules. Ils sont beaucoup moins musclés et apparaissent flasques.
    2. Le péricarde est une membrane mince et translucide qui entoure le cœur.
  2. Thymus
    1. le thymus est situé vers l’avant pour le coeur et s’assoit sur la trachée. Il doit être lisse en texture.
    2. Chez les jeunes animaux, il semble que tan avec une texture grasse.
    3. Les animaux plus âgés auront l’infiltration du tissu adipeux dans le thymus, agrandissant et en donnant le thymus une couleur blanche.
  3. Trachée
    1. la trachée s’étend de l’épiglotte à la bifurcation des bronches. C’est un tube cartilagineux côtelée souple.
    2. , Il devrait être clair et pas n’importe quel liquide fluide ou spumeux dans la lumière. Euthanasie en CO 2 peut causer des fluides (serosanguinous et/ou moussants) accumulation dans les poumons et la trachée en raison de l’hémorragie.
  4. Oesophage
    1. le œsophage s’étend de la cavité buccale à l’estomac. C’est un tube très mince qui se trouve directement derrière la trachée et le cœur, puis passe à travers le diaphragme à l’estomac.
    2. Le œsophage est difficile à enlever, car il se déchire facilement même si le tissu est extensible. Suppression de le œsophage se faite plus facilement en disséquant il loin de la trachée après l’ablation du cœur et des poumons.
  5. Enlever les organes thoraciques
    1. le coeur et les poumons sont plus faciles à enlever ensemble.
    2. Placer la pince perpendiculairement à la trachée et saisir la trachée fermement, juste au-dessus du thymus.
    3. à l’aide des ciseaux, faire une coupe perpendiculaire à la trachée juste en avant de la pince. Cette réduction devrait rompre la trachée et le œsophage.
    4. Sans desserrer l’emprise sur la trachée, soulevez la trachée direction caudale, et découper toutes les pièces jointes des poumons à la surface de la colonne vertébrale dans la cage thoracique.
    5. Le œsophage peut doivent être coupés pour être capable de soulever le cœur et poumons gratuitement la cavité thoracique.
    6. Après que le cœur est éliminé de l’organisme, il peut rincer avec du sérum physiologique pour enlever les résidus de sang et de caillots, ou il peut être rempli avec le fixateur par l’intermédiaire de l’aorte.
    7. Une fois les poumons est excisés, ils sont gonflés avec fixateur. Une ligature est placée lâchement autour de la trachée. Une aiguille reliée à une seringue contenant le fixateur de choix est enfilée dans la lumière de la trachée. La ligature est resserrée autour de l’aiguille, et le fixateur est injecté jusqu’à ce que les poumons sont gonflés. Lors du retrait de l’aiguille, la ligature est serrée pour éviter les fuites.
  6. Cavité buccale
    1. langue
      1. la langue des rongeurs est lisse.
      2. Examiner la surface des lésions, y compris le dessous.
      3. La langue est rarement récoltée à l’exception des enquêtes spécialisées telles que les études de cancer de la bouche.
      4. Pour supprimer la langue, couper à travers les surfaces buccales de chaque côté de la cavité buccale à l’articulation mandibulaire-temporelle.
      5. Disloquer la mâchoire inférieure et reflètent le maxillaire pour révéler l’épiglotte et la base de la langue.
      6. Avec des pinces afin d’étendre la langue, couper les fixations sous direction caudale à la base de la langue.
      7. Entretien traction, couper horizontalement à la base de la langue à fREE de la cavité buccale.
    2. Dents
      1. denture Rat se compose de trois molaires et une incisive dans chaque quadrant qui est séparée par un diastème édenté. Ils sont couverts par émail que sur la face labiale ; sur la surface intérieure de la dent est dentine.
      2. Rat dents sont normalement de couleur jaune/orange. Cette couleur est le plus prononcée sur l’émail incisive et est due à la présence d’un pigment contenant du fer. La couleur commence à environ 21 jours après la naissance et s’aggrave avec l’âge.
      3. Examiner les dents pour la prolifération ou malocclusion.

5. Tête

yeux
    1. les yeux devraient être égaux en taille et claire d’exsudat. La conjonctive doit être lisse.
    2. Pour enlever les yeux, faire pression sur la peau qui entoure le œil vers l’arrière et vers le bas pour dépasser le œil de l’orbite. À l’aide d’une pince embout incurvé, isoler le globe et couper les pièces jointes tenant dans la douille.
  1. Oreilles
    1. observer les oreilles pour l’identification. Demande de certains enquêteurs étiquettes aux oreilles soient incluses dans les échantillons d’organes pour confirmation d’identité animale.
    2. Les conduits auditifs sont examinés des lésions, des masses, ou exsudat.
  2. Nez
    1. on observe le nez liquide ou exsudat.
    2. Les narines doivent être claire et symétriques.

autopsie-sens de l’autopsie des organes- et récolte de tissus font partie intégrante de nombreuses expériences en laboratoire, qui s’appuient sur le temps de collecte de données finales tirés des points le analyses des organes récoltées. Par conséquent, il est important d’apprendre la nécropsie diagnostic correct et tissus technique, la récolte que la procédure peut influer significativement la qualité des échantillons recueillis. Cette présentation examinera la méthode de dissection et l’extraction des organes thoraciques, abdominales et reproduction des animaux de laboratoire.

avant de commencer la procédure, un formulaire doit être instauré qui comprend un historique complet de l’animal : sexe numéro, identification des animaux, conditions, date de naissance, date de son décès, étude du logement / Numéro de protocole et le nom de l’enquêteur principe.

Ensuite, préparer la zone de dissection. Prévoir un revêtement de banc, plateau de dissection, instruments désignés pour l’autopsie, qui comprend les ciseaux, pinces, lames de bistouri stériles, OS coupeurs, sonde émoussé, petite spatule et matériel de suture non résorbable. Récolte d’organes et de tissus pour examen histologique exigent que les tissus soient préservés dans une solution de fixation. Sauf indication contraire, le fixateur le plus couramment utilisé est de 10 % de formol tamponné neutre. Notez que les échantillons de tissus devraient être de 0,5 à 1 cm d’épaisseur pour permettre une pénétration suffisante de la solution de fixation. Fixation empêche la carie, autolyse et la putréfaction ; arrête de réactions biochimiques en cours ; et peut augmenter la résistance mécanique et la stabilité des tissus traités.

La méthode d’euthanasie de l’animal peut également une incidence sur la qualité des échantillons. La méthode d’euthanasie plus couramment utilisés pour les souris et les rats est une overdose de gaz carbonique. Les animaux sont laissés dans leur cage maison, qui est placé, dans une chambre, et le CO2 est progressivement introduit dans la chambre à une vitesse de déplacement de 10 à 30 % du volume chambre/min. Ce qui provoque les animaux perdu conscience avant la perception de la douleur qui est associée avec l’activation des nocicepteurs par l’acide carbonique. Le flux est ensuite maintenu dans la chambre jusqu’à l’arrêt respiratoire s’est produite et l’animal est mort.

suite à l’euthanasie, tout d’abord effectuer un premier examen externe en inspectant visuellement la carcasse pour les lésions et masses, croissance excessive de dent ou une coloration de la fourrure à la bouche, les narines, les oreilles, les yeux et les ouvertures anales et génitales. Si cela se justifie, effectuer un test de la bande, grattage de la peau et dépouille les examens pour détecter les parasites externes. Une fois achevé l’examen externe, il est temps de commencer la nécropsie, commençant par la cavité abdominale. Notez que, avant d’enlever n’importe quel tissu, échantillons, il est important d’observer l’orgue en situ.

D’abord exciser la peau, place une petite coupure juste en avant du bassin chez les femelles et surtout le prépuce chez les hommes. Puis, en utilisant la technique de dissection émoussée, desserrer la peau de l’aponévrose et le muscle. Par dissection par clivage est une technique de dissection anatomique dans les tissus sont séparés et les structures sous-jacentes exposés sans couper. Dans cette technique, les ciseaux sont utilisés pour répandre les tissus apart plutôt que de les couper dehors. Les embouts fermés sont poussés dans les tissus et ensuite ouvert pour fractionner le tissu le long des plans naturels. Ce processus nécessite patience et une touche délicate, comme l’étirement du tissu peut causer des dommages aux organes adjacents et les vaisseaux sanguins. Puis étendez la coupure au menton. Ensuite faites, coupes transversales avant les membres postérieurs et postérieur pour les membres antérieurs et utiliser par dissection par clivage pour exposer la zone cervicale et thoracique. Extra il fallait être prudent pour éviter une rupture de la jugulaire et carotide vaisseaux du cou.

Chez les femelles, avec la peau excisée, observer le tissu mammaire du haut du sternum à la manubrium à l’appareil génital, ouverture sur la surface ventrale ; s’étendant latéralement sur les deux côtés. Les femelles allaitantes ou enceintes passera volume de tissu mammaire et lait peut-être être présent. Exciser les glandes mammaires, saisir le bord du tissu avec une pince et utiliser par dissection par clivage pour desserrer des pièces jointes à la peau. Une fois que la glande a été séparée, il peut être placé dans une solution de fixation pour une analyse histologique ultérieure.

à ce stade, vous pouvez observer des glandes salivaires sous-maxillaires, qui sont jumelés et situés à la mandibule–s’étendant le long du cou au sternum manubrium. Suppression de ces glandes nécessite une dissection émoussée et Redoublez de prudence lorsque vous travaillez dans la région cervicale pour éviter une rupture des vaisseaux sanguins. Une fois libéré des muscles sous-jacents, soulevez les glandes et de rompre toutes les pièces jointes résiduelles. Les glandes exigent au moins une coupe pour permettre la pénétration de la fixateur.

En outre, vous pouvez voir la trachée, qui s’étend de l’épiglotte à la bifurcation des bronches. C’est un tube cartilagineux côtelée souple. Alors que normalement clair, euthanasie avec CO2 peut causer une accumulation de liquide dans les poumons et la trachée qui ressemble à un liquide clair mousseux. Graisse sous-cutanée sera également présente dans ce domaine. L’évaluer pour la quantité et de dépôts. Un animal obèse peut avoir une grande quantité de graisse avec la peau épaissie.

Avant l’ouverture de la cavité du corps, observer les muscles abdominaux, intercostaux et exposés du cou et des membres pour tout épaississement, de masses ou de décoloration. Pour ouvrir la cavité du corps, tout d’abord faire un petit transversale coupe point la plus caudale du muscle abdominal exposé. Puis soulevez le muscle loin des organes et couper le long de la linea alba à la xiphoïde. Ensuite, disséquer les muscles latéralement de la ligne médiane juste au-dessus des membres postérieurs des deux côtés. Enfin, couper le long de la courbe des côtes des deux côtés. Une fois que la cavité a été ouvert, évaluer la quantité et l’accumulation de graisse abdominale. Un animal sain aura coussinets adipeux abdominales et certaines matières grasses le long de la surface dorsale de la cavité. Observer la couleur de ce tissu et noter toutes les anomalies.

nous sommes maintenant prêts à commencer la récolte des organes abdominaux. Commencez par localiser la rate, qui est rouge foncé et situé le long de la courbure inférieure de l’estomac. Il doit être régulier en forme et avec une surface légèrement mate. Pour supprimer le spleen, soulevez l’orgue et découper les pièces jointes à l’estomac.

L’estomac se trouve à l’extrémité distale de le œsophage. Il semble être deux tons, différencier les parties musculaires et glandulaires. Sentir la présence de nourriture. Un estomac vide est à noter qu’il peut être révélateur de la maladie. Faire pas couper l’estomac, comme le contenu finira par contaminer les organes de la cavité abdominale.

L’intestin grêle sont connectés dans la partie distale et inférieure de l’estomac. Il y a trois sections distinctes de l’intestin grêle. Le premier est le duodénum – une section plus courte du sphincter de l’estomac postérieure au début du jéjunum. Le canal cholédoque entre ici et le tissu pancréatique est plus fermement attaché à cette partie de l’intestin grêle. Le jéjunum est la partie centrale. Peyer ' s Patches, qui sont de petites zones ovales composées de tissu lymphoïde, peuvent être observées à la surface le jéjunum et l’iléon. L’iléon est la plus longue portion de l’intestin grêle qui se termine au caecum – situé à la jonction du petit et du gros intestin. Le caecum apparaît de couleur verdâtre et est très doux.

Le gros intestin se poursuit du caecum à l’anus. Il est facilement identifiable comme boulettes fécales peuvent être visualisées dans la lumière de cette structure. Les petits et les grands intestins sont ancrés au corps par le mésentère, une membrane contenant les vaisseaux sanguins, matières grasses et les ganglions lymphatiques. Cela devrait être examiné pour les ganglions lymphatiques et les masses avant d’ôter le tractus intestinal. Le pancréas est un postérieur diffuse de l’organe situé à l’estomac. C’est un bronzage lumineux de couleur grise et composé de plusieurs petits lobes avec des bords irréguliers. Pour récolter le pancréas, saisir l’organe et doucement taquiner des tissus environnants mésentérique. Cela doit être fait avant le retrait du tractus intestinal.

Pour supprimer l’ensemble du tractus qu’un seul morceau en commençant par l’estomac et s’étendant jusqu’à l’anus, placez d’abord une ligature au rectum et puis faire une incision dans le gros intestin juste en avant de l’anus. Ensuite, placez une ligature à la jonction de le œsophage et l’estomac, après qui le tractus intestinal entière peut être soulevé et toutes les pièces jointes membraneuses rompus. Tout cela alors peut être séparé du mésentère, coupée en sections et fixe.

Les reins sont des organes pairs situés contre les muscles du dos. Ils devraient avoir la taille et la couleur d’un haricot noir et avoir une surface lisse. Immédiatement avant le rein est la glande surrénale, apparaissant comme un petit nodule rose lumière.

Pour enlever un rein, l’isoler à l’aide d’une pince et couper entre l’organe et l’uretère. La couche externe dure peut ensuite être décollée pour examiner la surface. Couper un rein en deux le long de l’axe le plus long et l’autre transversalement. Tout grain au sein peut-être indiquer la présence de cristaux ou de dépôts de minéraux. Enfin, retirer le foie, qui est une couleur rouge foncé et ses marges devraient être lisses avec un bord croquant. Être prudent lors de manipulation du foie, telle qu’elle est un tissu mou. Toute perturbation de l’intégrité de l’organe provoquera une fuite dans la cavité du corps de sang et obscurcir les autres organes.

Pour enlever le foie, d’abord doucement reflètent les lobes de la membrane et faire une coupe à travers les vaisseaux sanguins antérieur à la structure. Ensuite, tenir compte du foie vers le diaphragme et saisir le nœud fibreux qui relie tous les lobes au centre. Enfin, soulever l’orgue tout en coupant toutes les pièces jointes à l’intestin et l’estomac.

le système reproducteur féminin est constitué sur l’utérus et les ovaires. L’utérus est une structure en forme de Y courte avec des cornes qui s’étend dans les deux sens. Les cornes se terminent aux trompes de Fallope et les ovaires–situées juste en dessous des reins. Les ovaires auront une surface rugueuse due à des stades différents de la maturation des follicules.

Pour enlever les ovaires, coupés les pièces jointes artériels vers l’avant et la trompe de Fallope vers l’arrière. Pour enlever l’utérus, doucement de saisir et de couper au-dessous du col de l’utérus. Après la coupe, soulever le corps et les cornes de l’utérus, brisant toutes les pièces jointes dans la cavité coelomique.

Chez les mâles, vous pouvez également observer les glandes préputiales situés juste en avant du prépuce. Elles apparaissent grandes et sont d’un gris de couleur jaunâtre avec un aspect spumeux. Retrait et fixation de ces glandes est semblable à glandes sous-maxillaires. En outre, le système reproducteur masculin se compose des vésicules séminales, la glande de la prostate et des testicules. Les vésicules séminales sont blanches, " ram ' corne s en forme de " structures situé devant la vessie et fixée sur la ligne médiane à la glande prostatique.

La prostate–généralement léger tan en couleur–est située autour de la vessie à la base. Pour visualiser les testicules, saisir les coussinets adipeux abdominales situés dans le bas ventre et les tirer vers l’avant. Cela va tirer les testicules du scrotum pour permettre l’examen. La surface doit être lisse et fine vascularisation évidente sur la surface.

L’épididyme est le long de la marge inférieure du testicule et s’effile vers le haut. Le canal déférent est fixé à l’extrémité de l’épididyme et nous ramène à la prostate. Pour enlever les testicules, couper la pièce jointe dans le scrotum et couper le canal déférent. Pour enlever la prostate et les vésicules séminales, saisir la base de la vessie et l’ascenseur tandis que séparer les pièces jointes sous la prostate.

animées sur les organes au sein de la cavité thoracique. Pour exposer les structures vitales, retirer le diaphragme de l’attachement aux côtes. Ensuite, couper à travers la cage thoracique latéralement sur les deux côtés jusqu’au dessus du sternum manubrium et puis reflètent les os parotidien afin de visualiser les organes thoraciques.

Les poumons sont normalement une couleur rose vif, spongieuse dans texture avec une surface lisse. Cependant l’euthanasie avec le CO2 peut causer des hémorragies pulmonaires entraînant des taches rouges foncés qui peuvent recouvrir les surfaces de l’ensemble du poumon.

Coeur est rouge foncé et les ventricules sont musclées, qui se sentent ferme au toucher. Les oreillettes sont de couleur rouge plus foncée et s’asseoir au sommet des ventricules. Ils sont beaucoup moins musclés et flasques. Une fine membrane translucide appelée le péricarde entoure le cœur.

Le thymus est situé devant le cœur et se trouve sur la trachée. Il doit être lisse de texture. Vous pouvez voir la trachée, comme décrit précédemment, et l’oesophage est un tube très mince qui se trouve directement derrière la trachée et le cœur et traverse la membrane de l’estomac.

Pour enlever les organes dans la cavité thoracique, commencez par saisir la trachée juste au-dessus du thymus et pratiquer une coupe perpendiculaire juste en avant de la pince. Tout en conservant l’emprise, soulevez la trachée direction caudale et découper toutes les pièces jointes des poumons à la surface de la colonne vertébrale dans la cage thoracique. L’oesophage peut doivent être coupés pour être capable de soulever le cœur et poumons gratuitement la cavité thoracique

après que le cœur est prélevé pour le corps, rincer avec du sérum physiologique pour enlever les résidus de sang et de caillots, ou remplir avec le fixateur par l’intermédiaire de l’aorte. Une fois que les poumons sont excisés, placé une ligature lâche autour de la trachée. Ensuite, enfiler une aiguille attachée à une seringue contenant le fixateur dans la lumière de la trachée et serrez la ligature. Puis injecter le fixateur jusqu’à ce que les poumons sont gonflés. Enfin, retirer l’aiguille et serrer la ligature davantage pour éviter les fuites.

avec ce souffle de connaissance relativement à la récolte de nécropsie et tissus rongeur, laissez ' s oeil à quelques-uns des thexpériences en laboratoire actuel e impliquant ces procédures.

Diagnostiques autopsie est un critère d’évaluation commun dans les expériences de métastases du cancer. Dans cet exemple, les enquêteurs ont injecté les cellules cancéreuses dans le rongeur ' rate s puis, trente à soixante jours plus tard, ils ont effectué l’autopsie, qui a révélé des métastases hépatiques significatifs.

Tissu extraction est souvent suivie d’une analyse histologique, ce qui contribue à l’étude de l’anatomie microscopique de l’échantillon. En suivant le protocole de la fixation, enrobage, coupes et coloration des tissus, les chercheurs sont en mesure d’étudier les structures microscopiques dans ces organes et de découvrir l’effet des interventions génétiques ou pharmacologiques au niveau atomique.

Chercheurs

parfois enlever les tissus afin d’étudier les processus physiologiques, comme l’angiogenèse. Ici, les expérimentateurs extériorisée un rat ' tissu mésentérique s pour stimuler la croissance vasculaire. Ensuite, ils ont récolté quelques mèches et traités avec les marqueurs qui tachent les cellules d’un vaisseau sanguin, pour étudier la dynamique cellulaire impliqués dans la croissance du réseau vasculaire.

vous ' ve juste regardé JoVE ' s vidéo détaillant les étapes de diagnostic récolte nécropsie et tissus chez les animaux de laboratoire. Il est important d’utiliser les techniques appropriées pour le prélèvement d’organes et de la préservation, afin que la procédure d’extraction n’a aucun effet sur l’interprétation des données recueillies. Comme toujours, Merci de regarder !

Applications and Summary

l’étape finale dans de nombreux projets de recherche est l’autopsie des animaux expérimentaux. Une observation détaillée des structures externes et internes, suivie de la collection de tissus pour analyse complémentaire fournit une grande quantité de données de recherche. Les techniques appropriées pour l’élimination de tissu et préservation avec les solutions de fixateur appropriées sont essentiels pour la bonne interprétation des résultats.

References

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  3. Fiette, L. and Slaoui, M. 2011. Necropsy and Sampling Procedures in Rodents. Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols, 39-67.
  4. Youngson, R.M. 2005. Collins dictionary of Medicine fourth edition.

Transcript

Necropsy-meaning postmortem examination of organs-and tissue harvest are integral components of many lab experiments, which rely on the final data collection time points gathered from the analyses of the harvested organs. Therefore, it is important to learn the correct diagnostic necropsy and tissue harvesting technique, as the procedure can significantly impact the quality of the samples collected. This presentation will review the method of dissection and extraction of abdominal, reproductive, and thoracic organs from lab animals.

Before starting with the procedure, a form should be initiated that includes a complete history of the animal: animal identification number, gender, housing conditions, date of birth, date of death, study/protocol number, and the name of the Principle Investigator.

Next, prepare the dissection area. Lay down a bench covering, dissection tray, instruments designated for necropsy, which includes scissors, forceps, sterile scalpel blade, bone cutters, blunt probe, small spatula and non-absorbable suture material. Organ and tissue harvest for histological examination require that the tissues be preserved in a fixative solution. Unless otherwise specified, the fixative most commonly used is 10% neutral buffered formalin. Note that the tissue samples should be 0.5-1 cm in thickness to allow sufficient penetration of the fixative solution. Fixation prevents decay, autolysis, and putrefaction; stops any ongoing biochemical reactions; and may increase the mechanical strength and stability of the treated tissues.

The method of euthanasia of the animal can also impact the quality of the samples. The most commonly used euthanasia method for mice and rats is an overdose of carbon dioxide gas. The animals are left in their home cage, which is placed, into a chamber, and CO2 is gradually introduced into the chamber at a displacement rate of 10-30% of the chamber volume/min. This causes the animals to lose consciousness prior to the perception of pain that is associated with nociceptor activation by carbonic acid. The flow is then maintained in the chamber till respiratory arrest has occurred and the animal is dead.

Following euthanasia, first perform an initial external examination by visually inspecting the carcass for lesions and masses, excessive tooth growth, or any staining of the fur at the mouth, nares, ears, eyes and the anal and genital openings. If warranted, perform a tape test, skin scraping, and pelt exams to detect external parasites. Once the external exam has been completed, it is time to start the necropsy, beginning with the abdominal cavity. Note that before removing any tissue samples it is important to observe the organ in situ.

To begin excising the skin, place a small cut just anterior to the pelvis in females and above the prepuce in males. Then, using the blunt dissection technique, loosen the skin from the fascia and muscle. Blunt dissection is a technique in anatomical dissection in which tissues are separated and underlying structures exposed without cutting. In this technique, the scissors are used to spread tissues apart rather than to cut them apart. The closed tips are pushed into tissue and then opened to split tissue along natural planes. This process requires patience and a delicate touch, as the stretching of the tissue can result in damage to adjacent organs and blood vessels. Then extend the cut to the chin. Next make, transverse cuts anterior to the hind limbs and posterior to the forelimbs, and use blunt dissection to expose the cervical area and chest. Extra care should be exercised to avoid rupturing the jugular and carotid vessels in the neck.

In females, with the skin excised, observe the mammary tissue from the top of the sternum at the manubrium to the genital opening on the ventral surface; extending laterally on both sides. Lactating or pregnant females will have increased mammary tissue volume and milk may be present. To excise the mammary glands, grasp the tissue edge with forceps and use blunt dissection to loosen attachments to the skin. Once the gland has been separated, it can be placed in a fixative solution for subsequent histological analysis.

At this stage, you can observe submandibular salivary glands, which are paired and located at the mandible — extending along the neck to the manubrium sternum. Removal of these glands requires blunt dissection and extra care when working in the cervical region to prevent rupture of blood vessels. Once freed from the underlying muscles, lift up the glands and sever any residual attachments. The glands require at least one cut to allow penetration of the fixative.

In addition, you can see the trachea, which extends from the epiglottis to the bifurcation of the bronchi. It is a ridged, cartilaginous tube that is flexible. While normally clear, euthanasia with CO2 can cause fluid accumulation in the lungs and trachea that looks like a frothy clear fluid. Subcutaneous fat will also be present in this area. Evaluate it for quantity and deposition. An obese animal may have a large amount of fat with the skin feeling thickened.

Prior to opening the body cavity, observe the abdominal, intercostal, and exposed neck muscles, and limbs for any thickening, masses or discoloration. To open the body cavity, first make a small transverse cut at the most caudal point of the exposed abdominal muscle. Then lift the muscle away from the organs, and cut along the linea alba to the xiphoid. Next, dissect the muscles laterally from the midline to just above the hind limbs on both sides. Lastly, cut along the curve of the ribs on both sides. Once the body cavity has been opened, evaluate the quantity and accumulation of abdominal fat. A healthy animal will have abdominal fat pads and some fat along the dorsal surface in the cavity. Observe the color of this tissue and note any abnormalities.

Now we are ready to begin the harvest of abdominal organs. Begin by locating the spleen, which is dark red and located along the lower curvature of the stomach. It should be regular in shape and with a slightly matte surface. To remove the spleen, lift the organ and snip the attachments to the stomach.

The stomach is located at the distal end of the esophagus. It appears to be two-toned, differentiating the muscular and glandular portions. Feel it for presence of food. An empty stomach should be noted, as it can be indicative of illness. Do not cut the stomach, as the contents will contaminate the organs in the abdominal cavity.

The small intestines are connected distally and inferior to the stomach. There are three distinct sections of the small intestine. First is the duodenum – a shorter section from the posterior stomach sphincter to the start of the jejunum. The bile duct enters here and the pancreatic tissue is more firmly attached to this portion of the small intestine. The jejunum is the center portion. Peyer’s Patches, which are small oval areas composed of lymphoid tissue, can be observed on the surface of the jejunum and ileum. The ileum is the longest portion of the small intestine that terminates at the cecum – located at the junction of the small and large intestines. The cecum appears greenish in color and is very soft.

The large intestine continues from the cecum to the anus. It is readily identifiable as fecal pellets can be visualized within the lumen of this structure. The small and large intestines are anchored to the body by the mesentery, a membrane containing blood vessels, fat and lymph nodes. This should be examined for enlarged lymph nodes and any masses prior to removal of the intestinal tract. The pancreas is a diffuse organ located posterior to the stomach. It is a light tan to gray color and composed of multiple small lobes with irregular edges. To harvest pancreas, grasp the organ and gently tease it from the surrounding mesenteric tissue. This must be done prior to the removal of the intestinal tract.

To remove the entire tract as one piece beginning with the stomach and extending to the anus, first place a ligature at the rectum and then make a cut through the large intestine just anterior to the anus. Next, place a ligature at the junction of the esophagus and stomach, following which the entire intestinal tract can be lifted and any membranous attachments severed. The whole thing can then be separated from the mesentery, cut into sections and fixed.

The kidneys are paired organs located against the muscles of the back. They should be the size and color of a dark kidney bean and have a smooth surface. Immediately anterior to the kidney is the adrenal gland appearing as a small light pink nodule.

To remove a kidney, isolate it using a forceps and cut between the organ and the ureter. The tough outer layer can then be peeled off to examine the surface. Cut one kidney in half along the long axis and the other transversely. Any grit within may indicate the presence of crystals or mineral deposits. Lastly, remove the liver, which is a dark red in color and its margins should be smooth with a crisp edge. Care should be taken when handling the liver, as it is a friable tissue. Any disruption to the integrity of the organ will result in blood leaking into the body cavity and obscure other organs.

To remove the liver, first gently reflect the lobes away from the diaphragm and make a cut through the blood vessels anterior to the structure. Next, reflect the liver back toward the diaphragm and grasp the fibrous node that connects all the lobes centrally. Lastly, lift the organ while severing all attachments to the intestinal tract and stomach.

The female reproductive system consists on the uterus and the ovaries. The uterus is a short Y-shaped structure with horns extending in both directions. The horns terminate at the fallopian tubes and the ovaries — located just below the kidneys. The ovaries will have a rough surface due to different maturation stages of the follicles.

To remove the ovaries, cut the arterial attachments anteriorly and the fallopian tube posteriorly. To remove the uterus, gently grasp and cut below the cervix. After the cut, lift the body and horns of the uterus breaking any attachments in the body cavity.

In males, you can also observe the preputial glands located just anterior to the prepuce. They appear large and are a gray to yellowish color with a foamy appearance. Removal and fixing of these glands is similar to submandibular glands. In addition, the male reproductive system consists of seminal vesicles, the prostate gland and testes. The seminal vesicles are white, “ram’s horn shaped” structures located anterior to the urinary bladder and attached on the midline at the prostate gland.

The prostate gland — generally light tan in color — is located surrounding the urinary bladder at the base. To visualize the testes, grasp the abdominal fat pads located in the lower abdomen and pull them anteriorly. This will pull the testes from the scrotum to allow examination. The surface should be smooth with fine vascularization evident on the surface.

The epididymis is along the lower margin of the testis and tapers toward the top. The vas deferens is attached to the end of the epididymis and leads back to the prostate. To remove the testes, cut the attachment at the scrotum and cut the vas deferens. To remove the prostate and seminal vesicles, grasp the base of the urinary bladder and lift while severing the attachments beneath the prostate.

Moving on to the organs within the thoracic cavity. To expose the vital structures, remove the diaphragm from the attachment to the ribs. Next, cut through the rib cage laterally on both sides up to the top of the manubrium sternum, and then reflect the bones cranially to visualize the thoracic organs.

The lungs are normally a bright pink color, spongy in texture with a smooth surface. However euthanasia with CO2 can cause pulmonary hemorrhages resulting in dark red splotches that can cover the entire lung surfaces.

The heart is dark red and the ventricles are muscular, which feel firm to the touch. The atria are darker red in color and sit at the top of the ventricles. They are much less muscular and appear flaccid. A thin translucent membrane called the pericardial sac surrounds the heart.

The thymus is located anterior to the heart and sits over the trachea. It should be smooth in texture. You can see the trachea as described before, and the esophagus is a very thin tube that lies directly behind the trachea and behind the heart and passes through the diaphragm to the stomach.

To remove the organs in the thoracic cavity, begin by grasping the trachea just above the thymus and make a perpendicular cut just anterior to the forceps. While maintaining the grasp, lift the trachea up caudally and snip any attachments of the lungs to the spinal surface in the rib cage. The esophagus may need to be cut to be able to lift the heart and lungs free of the chest cavity

After the heart is removed for the body, flush it with saline to remove residual blood and clots, or fill it with the fixative through the aorta. Once the lungs are excised, placed a loose ligature around the trachea. Next, thread a needle attached to a syringe containing the fixative into the lumen of the trachea, and tighten the ligature. Then inject the fixative until the lungs are inflated. Lastly, remove the needle and tighten the ligature further to prevent leakage.

With this breath of knowledge regarding the rodent necropsy and tissue harvest, let’s look at some of the current lab experiments involving these procedures.

Diagnostic necropsy is a common endpoint in cancer metastasis experiments. In this example, the investigators injected cancer cells into the rodent’s spleen Then, thirty to sixty days later, they conducted necropsy, which revealed significant liver metastases.

Tissue extraction is often followed by histological analysis, which helps in the study of microscopic anatomy of the sample. By following the protocol of fixation, embedding, sectioning and staining of tissues, researchers are able to study the microscopic structures in these organs, and uncover the effect of genetic or pharmacological interventions at atomic level.

At times researchers remove tissues to study physiological processes, like angiogenesis. Here, the experimenters exteriorized a rat’s mesenteric tissue to stimulate vascular growth. Then, they harvested a few sections, and treated them with the markers that stain the cells of any blood vessel, to study the cellular dynamics involved in vascular network growth.

You’ve just watched JoVE’s video detailing the steps of diagnostic necropsy and tissue harvest in lab animals. It is important to use proper techniques for organ removal and preservation, so that the extraction procedure has no effect on the interpretation of the data collected. As always, thanks for watching!