剖検診断と組織の収穫
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Overview
ソース: ケイ ・ スチュワート、RVT、RLATG、CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学
収穫と、臓器や組織のテストから収集された最終的なデータ収集時間ポイントに依存して多くの動物実験。臓器や組織のコレクションのための適切な方法の使用は、サンプルの品質と組織のテストのための収集、データの解析に影響します。動物の安楽死の方法も、サンプルの品質に影響を与えます。この原稿は、ラットの適切な剖検手技を概説します
。Principles
マウスおよびラットの最も一般的に使用される安楽死方法は二酸化炭素 (CO 2) ガスの過剰摂取。基づき、アメリカ獣医医学連合 (AVMA)、CO 2 の使用が許容される嫌悪感や苦痛を最小限に抑えるための条件。1 動物室に置かれた彼らのホームのおりに残されます。CO 2 は、徐々 に商工会議所ボリューム/分、痛覚痛覚線維の活性化に伴う炭素酸の前に意識を失う動物を原因の 30% に 10% から変位速度で商工会議所に導入されました。流れ呼吸停止が発生する、動物が死んだことを確認する商工会議所に維持されます。吸入麻酔の過剰摂取も可能、特に CO 2 肺ティッシュへの損傷の原因として肺ティッシュの使用を必要とするプロジェクトです。動物のデスメタルは組織中の血液の量を減らすいくつかの実験に必要なもあります
。のすべての結果の正確な記録は、剖検時に不可欠です。動物の識別、性別、住宅事情、生年月日、死、研究番号/プロトコル番号、および原則として調査官の名前の日付を含んでいる動物の完全な履歴を記録するフォームを開始する必要があります。総内部審査は、体腔臓器の内部を明らかにする公開されています。明らかな異常を注意してください。2
、腸管からの細菌の漏洩がある試金を混同することができます動物の安楽死直後に死体解剖や組織の収穫は開始する必要があります。腹腔内で始まり、胸腔内への移動には、内臓を守らなければなりません。任意の組織のサンプルを削除する前にその場で臓器を観察することが重要です。2 組織学的検査のための器官およびティッシュの収穫は、組織が適切に準備されている必要があります。組織学のための組織サンプルは、0.5-1 をする必要があります固定液の十分な浸透を許可する厚さ cm。固定は崩壊、自己消化、および腐敗を防止する生体組織を保持します。また、任意継続的な生化学的反応を停止し、機械的強度や処理の組織の安定性を高める可能性があります。ティッシュの固定の広範な目的は、セクションを染色細胞と薄いの準備のため可能にする組織のコンポーネントを保つことです。指定しない場合、最もよく使用される定着剤は 10% 中性緩衝ホルマリンです。すぐに使用できる 10% 中性緩衝ホルマリンは主要なサプライヤーから市販されています。3
図 1。雌ラットの腹部や胸部の器官。
図 2。雄ラットの腹部や胸部の器官。
Procedure
1 です。 外部審査
病変と大衆のために体の検査が含まれています、体の総外部検査、剖検の最初のステップとして実行してください。脱毛の分野のための髪のコートを検討すべき。過剰な成長または摩耗歯と爪が評価されます。口、鼻孔、目、肛門、生殖器の開口部で毛皮の任意の染色は注意してください。テープのテスト、削り、皮膚、毛皮の試験を実行し、(以下の手順を参照してください)、外部の寄生虫が検出します
。- テープ テスト
- 手袋、はさみ、セロハン テープのストリップ ガラス顕微鏡スライド、テープのテストが含まれて必要な機器.
- 手袋が常に着用オイルを持ち上げ、皮膚、指から細胞が接着剤として、テープの処理結果を隠蔽またはスライドを評価するときに、混乱を引き起こしています 。
- が若干幅よりも狭く、長さより短いテープの部分をカットの顕微鏡スライドです 。
- 肛門と周辺にテープの粘着面を慎重に押して、それをすぐに削除
- テープの反対側の端を使用して肩甲骨の間それを押すし、すぐにそれを削除
- テープを顕微鏡スライドに適用します 。
- テープ テストは顕微鏡検査のための準備です。寄生虫卵は 4 倍の倍率で表示されますが、きちんと種を識別するために 10 倍の倍率で、検討すべきです 。
- テープの粘着面に触れないようにすることが重要です。テープ、手袋をはめた手からの残骸を持ち上げ、困難のスライドを読んで行う 。
- 肌をこする
- 脱毛症、皮膚病変や擦過傷の任意の領域で肌をこするテストを実行します 。
- きれいなガラス顕微鏡スライド、鉱物油、金属ヘラやメスの刃は、肌をこするに必要な装置 。
- 顕微鏡スライド上に鉱物油の数滴を配置します 。
- 病変のエッジまたは関心のある分野で皮膚のひだをピンチします 。
- 皮膚に少量の鉱物油を配置します 。
- 皮膚にヘラやメスの刃の端を置き、髪の成長の方向に対してこすり 。
- 削り少量の発赤が皮膚に表示されるまで続行します 。
- は、髪とティッシュは顕微鏡のスライドにオイルに皮膚表面から盗用を配置します。それは油で均等に分散されるように必要な場合、材料を普及します 。
- スライドは顕微鏡の下で検査されるべき準備が整いました。必要な場合観察はスライドの油滴に適用可能性があります。4 倍と 10 倍の倍率でスライドを調べる 。
- ペルト試験
- ペルト試験は最後の外部検査がなされますただし、実際に内部の検査が完了した後です。 。
- 内部の臓器のすべてのサンプルが収集された後、ガラスまたはプラスチック シャーレに動物を配置します 。
- 料理は冷蔵庫に 15 分間配置されます 。
- 後 15 分、料理は解剖顕微鏡の下で配置され、外部寄生虫のペルトが検査します。ほとんどの毛皮のダニ、毛の両端に移動し、容易に観察 。
2。腹部キャビティの内部の総検査
- 皮膚を切除
- 骨盤女性と男性の包皮の上にちょうど前方小さいカットをしている 。
- 皮膚の切り取りは、チンに拡張
- 鈍的切離が皮膚から筋膜と筋肉を緩めるためです 。
- 横カットは後肢と後方前方前部の手足に作られています。腋窩領域の血管を断つことは注意が必要です 。
- 頸部と胸部を公開する鈍的切離を使用。内頸静脈と首の頸動脈の血管の破裂を避けるために細心の注意を行使しなければならない 。
- 乳腺
- 女性、大衆、変色や異常を探す乳腺組織を調べます 。
- 授乳中、または妊娠中の女性は、乳腺組織のボリュームを増加しているでしょうし、ミルクがあります 。
- 乳腺組織は、胸骨柄、胸骨の上から腹側表面に生殖器の開口部に発見され、ほぼ腰と肩に背側表面に触れて両方の側面を横方向に拡張します 。
- 乳腺の切除では、親指の鉗子で腺の端をつかみ、皮膚に添付ファイルを緩めるに鈍的切離を使用してを必要があります。アイリスはさみを固定液で腺を配置する前にすべての残りの添付ファイルをカットする使用ことができます腺は、皮膚から分離されている、一度します 。
- 皮下腺
- 包皮腺のペアリング、雄ラットで包皮にちょうど前方に位置します。彼らは大きく表示される、泡沫状の外観と黄色がかった色にグレーします 。
- Submandibular 唾液腺は、下顎骨に位置し、ペアになっているし、首が胸骨柄・胸骨に沿って延びる。彼らは丈夫なカバーがあるし、筋肉がしっかりと守られています 。
- これらの腺の除去は、鈍的切離を必要とし、血管の破裂を防ぐために頚部で作業するときは余分な気します。鈍的切離がどの組織を分離し、基になる構造を切断せずに、公開で解剖のテクニック 。
- 鈍的切離をはさみは離れてそれらをカットするのではなく、離れて組織を広めるために使用されます。閉じたヒントはティッシュにプッシュされ自然平面に沿って組織を分割するのには、開かれました。隣接臓器や血管に損傷の結果することができます組織のストレッチ、このプロセスには忍耐力と繊細なタッチが必要です 。
- 腺は、基になる筋肉から解放が解除され、任意の残留添付ファイルを切断します 。
- 腺、固定液の浸透を許可するように、少なくとも 1 つのカットが必要です 。
- 皮下脂肪量と堆積が評価されます。肥満動物感じ肥厚した皮膚と脂肪の大量があります。脱水している動物が減少、皮膚の弾力性とそれを薄く感じる 。
- 筋
- 首や手足の腹部、肋間と露出の筋肉を観察。異常肥厚や大衆、変色に注意してください 。
- を選択し、血液汚染を減らすために腹部の臓器を撮影する前にサンプルを切り取る筋は、分析のために必要がある場合 。
- 体腔を開く
- 小さな横カットが露出した腹部筋肉の最も尾側のポイントをしている 。
- に沿ってカットからの臓器、筋肉を持ち上げる、リネア アルバ、剣にします 。
- カット正中線から腹筋横方向に, 両方の後肢のすぐ上側面します 。
- 両側の肋骨の曲線に沿って腹部の筋肉をカットします 。
- 腹部の脂肪
- 量と体脂肪の蓄積を評価します。健康な動物には、腹腔内で腹部脂肪パッドと背側表面に沿っていくつかの脂肪があります。過度に薄い動物、または非常に若い動物は腎臓を周囲の脂肪のかなりの量を必要はありません 。
- 体脂肪の色を観察し、異常に注意してください 。
3。腹部臓器
- 肝臓
- 通常、肝臓の色は、濃い赤をする必要があります。余白は滑らかで、鮮明なエッジがあります。異常な肝臓肥厚したエッジを持っているが、ノッチまたはスカラップのエッジを持つことができます 。
- もろい組織である肝臓は、それを処理するときは、注意をすべき。器官の整合性に支障は血体腔に漏れていると臓器を不明瞭になります 。
- 優しく、横隔膜から肝臓を反映し、肝臓の前方の血管をカットをする 。
- は、横隔膜に向かって肝臓を反映し、一元的に肝臓のすべての葉を接続線維性ノードを把握します。腸と胃にすべての添付ファイルを切断しながら肝臓を持ち上げています 。
- はワンピースで肝臓を取り外して器官の表面から余分な血のしみ。生理食塩水のお風呂に設置または、固定液の浸透を許可する薄いセクションに切断する前に、滅菌生理食塩水で洗浄があります 。
- 胆嚢
- 胆嚢炎は多くの場合は胆汁の蓄積のため黄色に見えます小さな透明な嚢。マウスではなくラットがある 。
- 胆嚢は正中線に沿って肝臓のトップのほとんどの葉の間に位置します。一般的に、胆嚢破裂を引き起こしている破れた誤って細い陰核小帯によってダイアフラムに接続されています 。
- 胆嚢を肝臓で除去、受験後で分離することができます 。
- 脾臓
- 脾臓は、暗い赤と胃の下の湾曲に沿って位置しています。それは若干マット表面の形で定期的にする必要があります 。
- 一般的に男性は女性よりも大きくです。内部寄生虫感染、細菌感染症や血液疾患を持つ動物は、脾臓を拡大した可能性が 。
- 脾臓フィルターに循環から赤血球が破損している、それは血でいっぱいです。とき脾臓を摘出、刺さない器官 。
- 脾臓を持ち上げ、それを削除して、添付ファイルは胃と脾臓の間カットします 。
- 腸管
- 細菌の増殖によって生成されるガス頻繁に腸のバルーニングと死後変化急速に発生してあざの外観で、結果、組織の血液のプールがあります。それはボディから取り外された後、腸管を徹底的に検討します 。
- 胃
- 胃食道の遠位端に位置しています。ツートン カラー、筋肉や腺の部分を区別するように見えます 。
- 胃は食物の存在の感じで評価されるべき。齧歯動物は一般的に高い新陳代謝率のため常に食べる。空の胃はそれは病気の可能性がありますので注意が必要です 。
- 内容が腹腔内の臓器を汚染すると、胃をカットしないでください 。 腸管、食道から胃を削除する
- は胃にちょうど前方切断されます。カットする前に胃の内容物の漏出を防ぐために食道周辺胃が定着剤の一般的なコンテナーに配置する場合は、縫合の部分を結びつけることができます 。
- 小腸
- 小腸は 3 つのセクションで構成される: 十二指腸、空腸、回腸。糞は含まれません 。
- 十二指腸は、空腸のスタートを後方胃括約筋から短いセクションです。胆管、十二指腸、小腸に入るし、膵組織はよりしっかりと小腸のこの部分に添付します 。
- 空腸は小腸の中央部です 。
- パイエル板 ' s で小さな楕円形のパッチはリンパ組織のパッチで構成されるラットの空腸および回腸の nonmesenteric 表面に存在。3これらは免疫システムの一部を免疫疾患の診断に役立つことができます 。
- 小腸の遠位部分の回腸で、最長の部分では、盲腸で終了します 。
- 盲腸
- 盲腸は緑がかった色でとても柔らかい 。
- 中小企業のジャンクションと大腸に位置しています 。
- 従って臓器の穿刺は、悪臭や細菌を持った臓器の汚染で起因する、盲腸で発酵が発生します 。
- 大腸
- 大腸は、盲腸から始まり、肛門に続きます。糞は腸の内腔で視覚化できること、容易に識別可能です 。
- 出血の直後に安楽死変色領域はあってはならない 。
- 腸間膜
- 小腸・大腸は、腸間膜、血管、脂肪を含む膜とリンパ節によって身体に固定されます 。
- リンパ節と腸管の除去の前に任意の塊を調べる必要があります 。
- 膵臓
- 膵臓は胃の下と十二指腸の最初のひだの間に位置するびまん性臓器。グレー色に淡褐色で、不規則なエッジを持つ複数の小さな葉から成る 。
- ワンピースで膵臓を削除することができない場合があります 。
- 膵組織を収穫する場合は、それが腸管の削除する前に行う必要があります 。
- 組織膵臓として識別する必要がありますそれを取り巻く腸間膜組織から慎重にからかわれる
- 腸管を削除
- 胃に始まり、肛門を拡張する 1 つの作品として腸管を削除します 。 大腸、肛門にちょうど前方
- A カットが行われます。全体の腸管は、切断解除と、膜様部の添付ファイルをすることができます。腸管が腸間膜から削除、分割、カットし、固定します 。
- 他の臓器を格納した jar 腸のセクションを配置するとき、両端が腸内細菌を持つ組織の汚染を防ぐために縛られることが不可欠だ 。
- 腸の内腔の管は、先の細い小さなはさみを使用してその長さを切断することによって公開できます。内腔を公開した後、内部を洗うことができる 。
- いくつかの研究 mあぁ、腸の一部が削除しフラッシュではなくカットが必要です。摘出組織の一方の端に鈍針を確保、生理食塩水または定着性ソリューションが内容をフラッシュする小腸に強制できます 。
- 腎臓
- 腎臓は背中の筋肉に対してにある一対の臓器です。右腎は左よりも高くなっています。古い動物の腎臓は、困難に視覚化する脂肪に囲まれた可能性があります 。
- 約サイズだし、暗いインゲンマメおよびその表面の色を滑らかにする必要があります 。
- すぐに腎臓の前方は、薄ピンクの小さな結節として現れる副腎 。
- 腎臓を削除する、鉗子を使用してそれを分離し、腎臓と尿管の間カットします 。
- 腎臓表面を視覚化より剥がす可能性があります厳しい外側のカプセルがあります。横長い軸や他の腎臓に沿って半分に 1 つの腎臓をカットします。腎臓内の任意の粒が水晶や鉱物の存在を示すメモします 。
- 女性の生殖システム
- 子宮は Y 字構造。子宮の体は左と右に一対の角を持つ短いです。角は、卵管と卵巣で終了します。妊娠女性における角淡いピンク、薄い。妊娠中の動物の角は暗く表示され、子宮角に隣接する実行している血管を発音しています。妊娠が進むにつれて、子宮角がある、" の真珠の文字列 " 外観。発展途上の胚は、ホーン内の薄い領域を作成して、開発する子宮、ストレッチ、組織が薄く、可視化を可能になる 。
- 卵巣、腎臓のすぐ下にあります。彼らは卵胞の異なる成熟段階による粗面があります。嚢胞性卵巣でお越しの際にも液体で満たされた小胞。藁色の血液にからこの流体の範囲できます 。 後方前方動脈添付ファイルをカット、卵巣と卵管を削除するには、
- 。必要な場合卵巣取り出すことができる子宮に添付します 。 子宮を削除する
- それは把握する優しくし、トラクションが子宮頸部の下にカットすることができますに適用します。カット後を持ち上げて体、体腔内に任意の添付ファイルを壊す、子宮の角 。
- 男性の生殖システム
- 精嚢が白、ram ' 角状 s ペア構造膀胱に前方に位置し、前立腺で正中線に接続されています。サイズは異なりますが、彼らは盲腸と同じ大きさにすることができます 。
- 前立腺は基地で膀胱を周辺に位置します。この組織は一般に淡黄褐色であります。古い動物の過形成を示すことがあります。古い動物一般的に前立腺の可視化を困難にすることができるより多くの体脂肪があります 。
- 精巣はペアになって、陰嚢の嚢であります。表面は細かい血管表面に明らかに滑らかなべきであります。マウスおよびラット鼠径輪または腹腔内に精巣を撤回する動物を可能にする括約筋を欠いています。これらを可視化、下腹部にある腹部の脂肪パッドをつかみ、前方引き出します。これは、検査できるように陰嚢から精巣を引っ張ってくる。精巣上体は精巣の下縁に沿って、上に向けて先細る。精管精巣上体の末尾に付けられ前立腺に戻ってつながる 。
- 陰嚢で添付ファイルを切断、精管を切断して精巣の除去を行うことができます 。
- 膀胱のベースを把握し、持ち上げ、前立腺の下にある添付ファイルを切断しながら前立腺と精嚢を削除必要があります 。
4。胸腔内
- 肺肺は明るいピンク色で、通常、表面が滑らかなテクスチャーで海綿状。ただし、CO 2 と安楽死は、全体の肺表面をカバーすることができます暗いの赤い斑点で、その結果、肺の出血を引き起こす可能性が 。
- 心
- 心臓は 4 つの部屋の暗い赤。心室は筋肉であり、触るとしっかりした感じ。心房は色の濃い赤であり、心室の上部に座っています。彼らははるかに少ない筋と弛緩が表示されます 。
- 心膜嚢は心臓を囲む薄い半透明の膜 。
- 胸腺
- 胸腺中心に前方あるし、気管の上に座っています。それは滑らかな食にする必要があります 。
- の若い動物は脂肪質の日焼け表示されます 。
- より古い動物の胸腺、それを拡大し、胸腺、白色脂肪組織の浸潤があります 。
- 気管
- 気管は気管支の分岐と喉頭蓋から伸びる。それは柔軟な隆起、軟骨チューブ 。
- それはする必要がありますオフ、内腔で任意の液体または泡状の液体がありません。CO 2 の安楽死は、流体を引き起こす可能性が (serosanguinous および/または泡沫) 肺と気管の蓄積出血による 。
- 食道
- 食道口腔から胃まで。気管の後ろに直接、心臓の後ろに位置し、横隔膜を通過して胃に非常に細い管です 。
- が簡単に破れて組織が伸縮性があるにもかかわらず、食道は、削除することは困難です。食道の除去は最も簡単に心臓と肺を除去した後, 気管から離れてそれを解剖しています 。
- 胸部臓器を削除
- 心臓と肺は最も簡単に一緒に削除します 。
- 鉗子を気管に垂直に配置し、胸腺の上しっかりと、ちょうど気管を把握します 。
- 気管鉗子にちょうど前方に垂直カットを作る、はさみを使用しています。このカットは、気管と食道を断つ必要があります 。
- 気管のグリップをゆるめることがなく気管を尾側に持ち上げて胸郭肺の脊髄の表面に添付ファイルをチョキンします 。
- 食道心を持ち上げるようにするカットする必要があります、胸腔内の肺無料します 。
- 中心部は本体から削除したら、残留血液と凝固、削除する生理食塩水でフラッシュすることができますそれは大動脈を介して定着剤と記入することができます 。
- 一度肺を切除、固定剤と膨張しています。気管周囲、合字は緩く配置します。好みの定着剤を含む注射器に接続されている針は、気管の内腔にスレッドです。合字は針、周りの強化し、肺が膨張するまで固定液を注入します。漏れを防ぐために針を除去した時に合字に締め付けける 。
- 口腔内
- 舌
- 齧歯動物の舌は滑らかな 。
- 下側を含む病変の表面を調べます 。
- 舌が口腔癌研究など専門的な調査を除いて収穫めった 。
- 、舌を削除するカット頬面を口腔内の各側に側頭下顎関節にします 。
- 下顎骨脱臼し、喉頭蓋と舌のベースを明らかにするため, 上顎を反映します 。
- 舌の尾側をベースの下に添付ファイルをカット、舌を拡張する鉗子を使用しています 。
- 維持トラクションは f に舌の基部に水平にカット希土類元素、口腔から 。
- 歯
- ラット dentation は歯間離開で区切られた各象限儀の 1 つ切歯と臼歯 3 で構成されています。唇側のみ; エナメル質で覆われています。歯の内部の表面は象牙質です 。
- ラットの歯は、通常黄色/オレンジ色です。この色、切歯エナメル質に最も顕著、鉄を含む顔料の存在のためです。色は出生後約 21 日で始まり、年齢とともに深まる 。
- 増殖または不正咬合の歯を調べます 。
- 舌
5。頭
のサイズと滲出液を明確に- 目
- 目をする必要があります。結膜は滑らかにする必要があります 。 目を削除する
- は、後方や下方軌道から目を突出する目の周囲の皮膚に圧力をかけます。湾曲した先端の鉗子を使用して、世界中を分離し、ソケットにそれを保持添付ファイルをカットします 。
- 耳
- 識別のための耳を観察。耳のタグいくつか捜査官要求される動物のアイデンティティの確認のためのオルガン サンプル 。
- 外耳道病変や大衆、滲出液を検討します 。
- 鼻
- 液や滲出液の鼻を観察 。
- 鼻孔が左右対称で明確にする必要があります 。
剖検意味剖検臓器の-組織収穫ポイント収集から最終データ収集時間に依存して多くのラボ実験の不可欠なコンポーネントであると、収穫された臓器の分析。したがって、プロシージャ大幅サンプル収集の品質に影響を与える、正しい診断剖検と収穫技術、組織を学ぶことが重要です。このプレゼンテーションは、郭清の方法、実験動物からの腹部、生殖器、および胸部の臓器抽出見直し
。の手順を開始する前にフォームを開始する動物の完全な履歴が含まれている: 動物の個体識別番号、性別、住宅状況、生年月日、没年月日、研究/プロトコル番号、および原則として調査官の名前
。は次に、郭清範囲を準備します。ベンチのカバー、郭清トレイ、剖検は、ハサミ、鉗子、滅菌メス刃、骨カッター、鈍プローブ、小さなヘラと非吸収性縫合糸の指定された商品を置きます。病理組織学的検査のための器官およびティッシュの収穫は、組織を固定液に保持することを必要とします。指定しない場合、最もよく使用される定着剤は 10% 中性緩衝ホルマリンです。組織サンプルは 0.5-1 をする必要がありますに注意してください固定液の十分な浸透を許可する厚さ cm。固定により崩壊、自己消化、および腐敗;任意継続的な生化学的反応を停止します。機械的強度と扱われた組織の安定性を高める可能性があります
。動物の安楽死法もサンプルの品質に影響を与えます。マウスおよびラットの最も一般的に使用される安楽死方法は、炭酸ガスの過剰摂取です。動物は、商工会議所に、置かれる彼らのホームおり残っているし、商工会議所商工会議所のボリューム/分の 10-30% の変位速度で CO2 が取り入れられつつ。これは炭酸水による痛覚線維の活性化に関連付けられている痛みの知覚の前に意識を失うに動物が発生します。呼吸停止が発生し、動物は死んでいるまで商工会議所で、その流れを維持します
。以下の安楽死、最初病変と大衆、過剰歯の成長、または任意の口、鼻孔、耳、毛皮の染色の枝肉を視覚的に調べることによって最初の外部検査を実行目と肛門と生殖器の開口部。条件を満たして場合テープ テストを実行を削り、皮膚、外部寄生虫を検出する試験を浴びせかけます。外部の試験を完了すると、腹腔内で始まる、死体解剖を開始する時間です。任意の組織を削除する前にそれをサンプルするメモは その場で 臓器を観察することが重要です
。を開始するは、女性と男性の包皮の上骨盤にちょうど前方の小さなカットを配置、皮膚を切除します。その後、鈍的切離を用いた、皮膚から筋膜と筋肉を緩めます。鈍的切離は、組織を分離し、基になる構造を切断せずに、公開で解剖の手法です。この手法は、離れてそれらをカットするのではなく、離れて組織を広めるためにはさみを使用します。閉じたヒントはティッシュにプッシュされ自然平面に沿って組織を分割するのには、開かれました。このプロセスでは、隣接臓器や血管に損傷の発生する組織のストレッチ忍耐力と繊細なタッチが必要です。あごにカットを拡張します。次にするには、後肢、前肢、後方前方横カットし、頸部と胸部を公開する鈍的切離を使用します。頸静脈と首の頸動脈の血管の破裂を避けるために細心の注意を行使しなければならない
。女性で摘出、皮膚と腹面に開く; 両側に及ぶ横に性器に、胸骨柄、胸骨の上から乳腺組織を観察します。授乳中、または妊娠中の女性は、乳腺組織のボリュームを増加しているでしょうし、ミルクがあります。乳腺を切除鉗子で組織のエッジをつかみ、鈍的切離を使用して皮膚に添付ファイルを緩めます。一度腺が分離されて、その後の組織学的解析のための固定液でもかまいません
。この段階でペアになって、首が胸骨柄・胸骨に沿って延びる ― 下顎骨にある顎下腺の唾液腺を確認できます。これらの腺の除去は、鈍的切離を必要とし、血管の破裂を防ぐために頚部で作業するときは余分な気します。基になる筋肉から解放されて、一度は、腺を持ち上げて、残留添付ファイルを断ちます。腺は、固定液の浸透を許可するように、少なくとも 1 つのカットを必要とする
。喉頭蓋から気管支の分岐部に伸びる気管を見ることができますさらに。それは、柔軟な隆起、軟骨管です。通常明確な CO2 と安楽死を引き起こす可能性が流体蓄積肺および気管泡状の透明な液体のよう。皮下脂肪はこの地域でもあります。数量と沈着を評価します。肥満動物は肥厚した肌と脂肪量が多い可能性があります
。前、体腔を開くには、腹部、肋間、および露出した首の筋肉、および肥厚、大衆、または変色手足を観察します。体腔を開くには、前に小さな横露出した腹部筋肉の最も尾側のポイントをカットします。リフトからの臓器、筋肉に沿ってカットし、リネア アルバ、剣に。次に、両側の後肢の真上に正中線から横方向に筋肉を解剖します。最後に、左右両方の肋骨の曲線に沿ってカットします。体腔が開かれると、数量と腹部の脂肪の蓄積を評価します。健康な動物には、空洞の腹部の脂肪パッドと背側表面に沿っていくつかの脂肪があります。この組織の色を観察し、異常に注意してください
。今、腹部の器官の収穫を開始する準備が整いました。濃い赤は、胃の下部の曲率に沿って位置する、脾臓を配置することによって開始します。それは少しマットな表面と形で正規はずです。Splee を削除するにはn、臓器を持ち上げるし、胃に添付ファイルをチョキンします
。胃食道の遠位端に位置しています。ツートン カラー、筋肉や腺の部分を区別するようであります。食品の存在を感じる。空の胃は、それは病気の可能性がありますので、注意してください。か ない 内容は、腹腔内の臓器を汚染すると、胃をカットします
。小腸が遠位に接続され、胃に劣るです。小腸の 3 つのセクションがあります。まずは十二指腸・空腸のスタートを後方胃括約筋から短いセクションです。胆管はここに入るし、膵組織は小腸のこの部分をもっとしっかりと接続されています。空腸は、センター部分です。パイエル板 ' s パッチ、リンパ組織から成る小さな楕円形の領域は、空腸と回腸の表面上で観察できます。回腸、小腸の小さな接合部、大腸にある – 盲腸で終了する最長の部分です。盲腸は色が緑色に表示されます、非常に柔らかい
。の大腸は、盲腸から肛門まで続きます。この構造体の内腔で糞を視覚化できること容易に識別可能です。小腸・大腸は、腸間膜、血管、脂肪を含む膜とリンパ節によって身体に固定されます。これはリンパ節と腸管を取り外す前にすべての大衆のために検討すべき。膵臓は、胃のびまん性の臓器にある後部です。グレー色に淡褐色で、不規則なエッジを持つ複数の小さな葉から成る。膵臓を収穫するには、器官を持ち、優しく周囲の腸間膜組織からいじめます。これは腸管の削除する前に行う必要があります
。胃に始まり、肛門を拡張する 1 つの作品として全体の管を削除するまず直腸で合字を配置し、大腸肛門にちょうど前方をカット。次に、食道と胃の接合部で合字を配置、切断全体の腸管を解除することができますおよび膜の添付ファイルに続きます。全部する腸間膜から分離、分割カットし、固定します
。腎臓は背中の筋肉に対してにある一対の臓器です。彼らはサイズと暗いインゲンマメの色と滑らかな面を持っています。すぐに腎臓の前方、小光ピンクの結節として現れる副腎
。腎臓を削除し、鉗子を使用してそれを隔離、オルガンと尿管の間をカットします。厳しいの外側の層は、表面を調べるためを剥がすことができます。横長い軸等に沿って半分に 1 つの腎臓をカットします。内の任意の粒は、結晶や鉱物の存在を示す可能性があります。最後に、色の濃い赤は、肝臓を削除し、余白を鮮明なエッジを滑らかにする必要があります。もろい組織である肝臓は、それを処理するときに注意が必要があります。器官の整合性に支障が体内に逆流する血液の結果し、他の臓器をあいまいな
。肝臓を取り出すにはまず優しく横隔膜から葉を反映し、血管構造の前方をカットします。次に、横隔膜の後ろ側へレバーを反映し、一元的にすべての葉を接続線維性ノードを把握します。最後に、腸と胃にすべての添付ファイルを切断しながら臓器を持ち上げる
。女性の生殖器系、子宮と卵巣で構成されています。子宮は、両方の方向に伸びる角を持つ短い Y 字構造です。角を終了、卵管と卵巣、腎臓のすぐ下に位置します。卵巣は卵胞の異なる成熟段階による粗面を持っている
。後方前方動脈添付ファイルをカット、卵巣と卵管を削除します。子宮を削除を優しくつかみ、子宮頸部の下にカットします。カット後を持ち上げて体、体腔内にすべての添付ファイルを壊す子宮の角
。男性包皮にちょうど前方に位置する包皮腺が観察できます。彼らは大きく表示される、泡沫状の外観を持つ黄色の色がグレーです。除去、これらの腺の固定は、顎下腺に似ています。さらに、男性の生殖システムは、精嚢、前立腺、精巣ので構成されます。精嚢が白、" ram ' s 角型 " 構造による膀胱の前方に位置して前立腺で正中線に接続されている
。前立腺 – 色で一般に淡褐色 – は基地で膀胱を周辺に位置します。精巣を可視化、下腹部にある腹部の脂肪パッドをつかみ、前方引き出します。これは、検査できるように陰嚢から精巣を引っ張ってくる。表面は細かい血管表面に明らかに滑らかでなければならない
。精巣上体は精巣の下縁に沿って、上部に向けて先細る。精管は精巣上体の末尾に付けられ前立腺に戻る 。削除する精巣陰嚢で添付ファイルをカットし、精管をカットします。膀胱と前立腺の下にある添付ファイルを切断しながらリフトのベースを把握、前立腺と精嚢を削除する
。移動胸腔内の臓器に。重要な構造を公開するには、するには、肋骨への愛着から横隔膜を削除します。次に、胸骨柄胸骨の上部まで両側横肋骨を切って、頭側胸部の臓器を視覚化する骨が反映されます
。肺は明るいピンク色で、表面が滑らかなテクスチャーに海綿状で、通常。しかし CO2 と安楽死は、全体の肺の表面を覆うことができる暗い赤色の斑点の結果肺の出血を引き起こす可能性が
。中心部は暗赤色、心室筋、触れること会社を感じる。心房は色の濃い赤であり、心室の上部に座っています。彼らははるかに少ない筋肉と弛緩が表示されます。心膜嚢と呼ばれる薄い半透明の膜が心臓を囲む
。胸腺中心部の前方に位置し、気管の上に座っています。それは滑らかな食にする必要があります。さきに述べたように、気管を見ることができます、食道、気管の後ろに直接、心臓の後ろに位置し、横隔膜を通過して胃に非常に細い管
。胸腔内の臓器を削除し、気管、胸腺のすぐ上をつかんで開始鉗子にちょうど前方垂直カットをします。把握を維持しながら気管尾を持ち上げて胸郭肺の脊髄の表面に添付ファイルを切り取る。食道は中心部を持ち上げるようにするカットする必要があり、肺が胸腔の無料
後、体の中心部を削除すると、残留血液と凝固、削除する生理食塩水でフラッシュまたは大動脈を介して定着剤でそれを埋めます。肺を摘出すると、気管の周り緩い合字を配置しました。次に、気管の内腔に定着剤を含む注射器の針を糸、合字を締めます。肺が膨張するまで固定液を注入します。最後に、針を除去し、漏洩を防ぐためにさらに合字を締めます
。齧歯動物の死体解剖や組織の収穫に関する知識のこの呼吸してみましょう ' th のいくつかを見てe 現在のラボ実験手順を含むします
。診断剖検は、がん転移実験の一般的なエンドポイントです。この例では、調査官は、齧歯動物にがん細胞を注入 ' s 脾臓、30 から 60 日後、彼らを行い、重要な肝転移を明らかに剖検
。組織抽出が多い試料の顕微解剖学の研究に役立つ組織学的分析が続いています。埋め込み、固定のプロトコルに従うことによって断面組織の染色研究者、これらの器官の微細構造を研究し、原子レベルでの遺伝的または薬理学的介入の効果を明らかにすることができる
。時研究者では、血管新生のような生理学的なプロセスを研究する組織を削除します。ここでは、実験者は体外ラット ' s 腸間膜組織血管成長を刺激します。彼らはいくつかのセクションを収穫し、血管ネットワークの成長に関与する細胞のダイナミクスを調べるため、血管の細胞を染色マーカーでそれらを治療します
。あなた ' ve を見たゼウス ' 実験動物における診断の死体解剖や組織の収穫の手順を詳述した s ビデオ。抽出プロシージャは収集したデータの解釈に影響を与えませんので、臓器の取り外し、保全に適切なテクニックを使用することが重要です。いつも、見てくれてありがとうとして!
Applications and Summary
多くの研究プロジェクトの最後のステップは、実験動物の剖検。さらに分析のためのティッシュのコレクションに続いて外部と内部構造の詳細な観察は、膨大な研究データを提供します。結果の正しい解釈に組織の除去と適切な固定液と保存の適切な技術が欠かせない
。References
- Leary, S., Underwood, W., Anthony, R., Cartner, S., Corey, D., Grandin, T., et al. 2013. AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2013 edition.
- Parkinson, C.M., O'Brien, A., Albers, T.M., Simon, M.A., Clifford, C.B. and Pritchett-Corning, K.R. 2011. Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice. 54. e2966. 1-7.
- Fiette, L. and Slaoui, M. 2011. Necropsy and Sampling Procedures in Rodents. Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols, 39-67.
- Youngson, R.M. 2005. Collins dictionary of Medicine fourth edition.
Transcript
Necropsy-meaning postmortem examination of organs-and tissue harvest are integral components of many lab experiments, which rely on the final data collection time points gathered from the analyses of the harvested organs. Therefore, it is important to learn the correct diagnostic necropsy and tissue harvesting technique, as the procedure can significantly impact the quality of the samples collected. This presentation will review the method of dissection and extraction of abdominal, reproductive, and thoracic organs from lab animals.
Before starting with the procedure, a form should be initiated that includes a complete history of the animal: animal identification number, gender, housing conditions, date of birth, date of death, study/protocol number, and the name of the Principle Investigator.
Next, prepare the dissection area. Lay down a bench covering, dissection tray, instruments designated for necropsy, which includes scissors, forceps, sterile scalpel blade, bone cutters, blunt probe, small spatula and non-absorbable suture material. Organ and tissue harvest for histological examination require that the tissues be preserved in a fixative solution. Unless otherwise specified, the fixative most commonly used is 10% neutral buffered formalin. Note that the tissue samples should be 0.5-1 cm in thickness to allow sufficient penetration of the fixative solution. Fixation prevents decay, autolysis, and putrefaction; stops any ongoing biochemical reactions; and may increase the mechanical strength and stability of the treated tissues.
The method of euthanasia of the animal can also impact the quality of the samples. The most commonly used euthanasia method for mice and rats is an overdose of carbon dioxide gas. The animals are left in their home cage, which is placed, into a chamber, and CO2 is gradually introduced into the chamber at a displacement rate of 10-30% of the chamber volume/min. This causes the animals to lose consciousness prior to the perception of pain that is associated with nociceptor activation by carbonic acid. The flow is then maintained in the chamber till respiratory arrest has occurred and the animal is dead.
Following euthanasia, first perform an initial external examination by visually inspecting the carcass for lesions and masses, excessive tooth growth, or any staining of the fur at the mouth, nares, ears, eyes and the anal and genital openings. If warranted, perform a tape test, skin scraping, and pelt exams to detect external parasites. Once the external exam has been completed, it is time to start the necropsy, beginning with the abdominal cavity. Note that before removing any tissue samples it is important to observe the organ in situ.
To begin excising the skin, place a small cut just anterior to the pelvis in females and above the prepuce in males. Then, using the blunt dissection technique, loosen the skin from the fascia and muscle. Blunt dissection is a technique in anatomical dissection in which tissues are separated and underlying structures exposed without cutting. In this technique, the scissors are used to spread tissues apart rather than to cut them apart. The closed tips are pushed into tissue and then opened to split tissue along natural planes. This process requires patience and a delicate touch, as the stretching of the tissue can result in damage to adjacent organs and blood vessels. Then extend the cut to the chin. Next make, transverse cuts anterior to the hind limbs and posterior to the forelimbs, and use blunt dissection to expose the cervical area and chest. Extra care should be exercised to avoid rupturing the jugular and carotid vessels in the neck.
In females, with the skin excised, observe the mammary tissue from the top of the sternum at the manubrium to the genital opening on the ventral surface; extending laterally on both sides. Lactating or pregnant females will have increased mammary tissue volume and milk may be present. To excise the mammary glands, grasp the tissue edge with forceps and use blunt dissection to loosen attachments to the skin. Once the gland has been separated, it can be placed in a fixative solution for subsequent histological analysis.
At this stage, you can observe submandibular salivary glands, which are paired and located at the mandible — extending along the neck to the manubrium sternum. Removal of these glands requires blunt dissection and extra care when working in the cervical region to prevent rupture of blood vessels. Once freed from the underlying muscles, lift up the glands and sever any residual attachments. The glands require at least one cut to allow penetration of the fixative.
In addition, you can see the trachea, which extends from the epiglottis to the bifurcation of the bronchi. It is a ridged, cartilaginous tube that is flexible. While normally clear, euthanasia with CO2 can cause fluid accumulation in the lungs and trachea that looks like a frothy clear fluid. Subcutaneous fat will also be present in this area. Evaluate it for quantity and deposition. An obese animal may have a large amount of fat with the skin feeling thickened.
Prior to opening the body cavity, observe the abdominal, intercostal, and exposed neck muscles, and limbs for any thickening, masses or discoloration. To open the body cavity, first make a small transverse cut at the most caudal point of the exposed abdominal muscle. Then lift the muscle away from the organs, and cut along the linea alba to the xiphoid. Next, dissect the muscles laterally from the midline to just above the hind limbs on both sides. Lastly, cut along the curve of the ribs on both sides. Once the body cavity has been opened, evaluate the quantity and accumulation of abdominal fat. A healthy animal will have abdominal fat pads and some fat along the dorsal surface in the cavity. Observe the color of this tissue and note any abnormalities.
Now we are ready to begin the harvest of abdominal organs. Begin by locating the spleen, which is dark red and located along the lower curvature of the stomach. It should be regular in shape and with a slightly matte surface. To remove the spleen, lift the organ and snip the attachments to the stomach.
The stomach is located at the distal end of the esophagus. It appears to be two-toned, differentiating the muscular and glandular portions. Feel it for presence of food. An empty stomach should be noted, as it can be indicative of illness. Do not cut the stomach, as the contents will contaminate the organs in the abdominal cavity.
The small intestines are connected distally and inferior to the stomach. There are three distinct sections of the small intestine. First is the duodenum – a shorter section from the posterior stomach sphincter to the start of the jejunum. The bile duct enters here and the pancreatic tissue is more firmly attached to this portion of the small intestine. The jejunum is the center portion. Peyer’s Patches, which are small oval areas composed of lymphoid tissue, can be observed on the surface of the jejunum and ileum. The ileum is the longest portion of the small intestine that terminates at the cecum – located at the junction of the small and large intestines. The cecum appears greenish in color and is very soft.
The large intestine continues from the cecum to the anus. It is readily identifiable as fecal pellets can be visualized within the lumen of this structure. The small and large intestines are anchored to the body by the mesentery, a membrane containing blood vessels, fat and lymph nodes. This should be examined for enlarged lymph nodes and any masses prior to removal of the intestinal tract. The pancreas is a diffuse organ located posterior to the stomach. It is a light tan to gray color and composed of multiple small lobes with irregular edges. To harvest pancreas, grasp the organ and gently tease it from the surrounding mesenteric tissue. This must be done prior to the removal of the intestinal tract.
To remove the entire tract as one piece beginning with the stomach and extending to the anus, first place a ligature at the rectum and then make a cut through the large intestine just anterior to the anus. Next, place a ligature at the junction of the esophagus and stomach, following which the entire intestinal tract can be lifted and any membranous attachments severed. The whole thing can then be separated from the mesentery, cut into sections and fixed.
The kidneys are paired organs located against the muscles of the back. They should be the size and color of a dark kidney bean and have a smooth surface. Immediately anterior to the kidney is the adrenal gland appearing as a small light pink nodule.
To remove a kidney, isolate it using a forceps and cut between the organ and the ureter. The tough outer layer can then be peeled off to examine the surface. Cut one kidney in half along the long axis and the other transversely. Any grit within may indicate the presence of crystals or mineral deposits. Lastly, remove the liver, which is a dark red in color and its margins should be smooth with a crisp edge. Care should be taken when handling the liver, as it is a friable tissue. Any disruption to the integrity of the organ will result in blood leaking into the body cavity and obscure other organs.
To remove the liver, first gently reflect the lobes away from the diaphragm and make a cut through the blood vessels anterior to the structure. Next, reflect the liver back toward the diaphragm and grasp the fibrous node that connects all the lobes centrally. Lastly, lift the organ while severing all attachments to the intestinal tract and stomach.
The female reproductive system consists on the uterus and the ovaries. The uterus is a short Y-shaped structure with horns extending in both directions. The horns terminate at the fallopian tubes and the ovaries — located just below the kidneys. The ovaries will have a rough surface due to different maturation stages of the follicles.
To remove the ovaries, cut the arterial attachments anteriorly and the fallopian tube posteriorly. To remove the uterus, gently grasp and cut below the cervix. After the cut, lift the body and horns of the uterus breaking any attachments in the body cavity.
In males, you can also observe the preputial glands located just anterior to the prepuce. They appear large and are a gray to yellowish color with a foamy appearance. Removal and fixing of these glands is similar to submandibular glands. In addition, the male reproductive system consists of seminal vesicles, the prostate gland and testes. The seminal vesicles are white, “ram’s horn shaped” structures located anterior to the urinary bladder and attached on the midline at the prostate gland.
The prostate gland — generally light tan in color — is located surrounding the urinary bladder at the base. To visualize the testes, grasp the abdominal fat pads located in the lower abdomen and pull them anteriorly. This will pull the testes from the scrotum to allow examination. The surface should be smooth with fine vascularization evident on the surface.
The epididymis is along the lower margin of the testis and tapers toward the top. The vas deferens is attached to the end of the epididymis and leads back to the prostate. To remove the testes, cut the attachment at the scrotum and cut the vas deferens. To remove the prostate and seminal vesicles, grasp the base of the urinary bladder and lift while severing the attachments beneath the prostate.
Moving on to the organs within the thoracic cavity. To expose the vital structures, remove the diaphragm from the attachment to the ribs. Next, cut through the rib cage laterally on both sides up to the top of the manubrium sternum, and then reflect the bones cranially to visualize the thoracic organs.
The lungs are normally a bright pink color, spongy in texture with a smooth surface. However euthanasia with CO2 can cause pulmonary hemorrhages resulting in dark red splotches that can cover the entire lung surfaces.
The heart is dark red and the ventricles are muscular, which feel firm to the touch. The atria are darker red in color and sit at the top of the ventricles. They are much less muscular and appear flaccid. A thin translucent membrane called the pericardial sac surrounds the heart.
The thymus is located anterior to the heart and sits over the trachea. It should be smooth in texture. You can see the trachea as described before, and the esophagus is a very thin tube that lies directly behind the trachea and behind the heart and passes through the diaphragm to the stomach.
To remove the organs in the thoracic cavity, begin by grasping the trachea just above the thymus and make a perpendicular cut just anterior to the forceps. While maintaining the grasp, lift the trachea up caudally and snip any attachments of the lungs to the spinal surface in the rib cage. The esophagus may need to be cut to be able to lift the heart and lungs free of the chest cavity
After the heart is removed for the body, flush it with saline to remove residual blood and clots, or fill it with the fixative through the aorta. Once the lungs are excised, placed a loose ligature around the trachea. Next, thread a needle attached to a syringe containing the fixative into the lumen of the trachea, and tighten the ligature. Then inject the fixative until the lungs are inflated. Lastly, remove the needle and tighten the ligature further to prevent leakage.
With this breath of knowledge regarding the rodent necropsy and tissue harvest, let’s look at some of the current lab experiments involving these procedures.
Diagnostic necropsy is a common endpoint in cancer metastasis experiments. In this example, the investigators injected cancer cells into the rodent’s spleen Then, thirty to sixty days later, they conducted necropsy, which revealed significant liver metastases.
Tissue extraction is often followed by histological analysis, which helps in the study of microscopic anatomy of the sample. By following the protocol of fixation, embedding, sectioning and staining of tissues, researchers are able to study the microscopic structures in these organs, and uncover the effect of genetic or pharmacological interventions at atomic level.
At times researchers remove tissues to study physiological processes, like angiogenesis. Here, the experimenters exteriorized a rat’s mesenteric tissue to stimulate vascular growth. Then, they harvested a few sections, and treated them with the markers that stain the cells of any blood vessel, to study the cellular dynamics involved in vascular network growth.
You’ve just watched JoVE’s video detailing the steps of diagnostic necropsy and tissue harvest in lab animals. It is important to use proper techniques for organ removal and preservation, so that the extraction procedure has no effect on the interpretation of the data collected. As always, thanks for watching!