Lustro gebruiken voor geautomatiseerde optogenetische karakterisering van gist met hoge doorvoer

Begin met het inrichten van het automatiseringswerkstation. Integreer een microplaatverlichtingsapparaat, zoals een optoPlate, dat gemakkelijke toegang tot de grijparm van de robot mogelijk maakt. Verwerk vervolgens een spreadsheet met het beschikbare MATLAB-script om de optoPlate te programmeren.

Voer het lichtstimulatieprogramma uit door op de optoPlate te knipperen. Om de robot te programmeren, moet u eventuele fouten oplossen om de goede werking van de carrier- en LabWare-definities te garanderen. Haal een lege plaat meerdere keren door de scriptlus om te controleren of de robotgrijperarm in staat is om de plaat nauwkeurig op te pakken en te plaatsen.

Selecteer vervolgens kolonies van de platen om de monsterplaat in te stellen. Inoculeer ze vervolgens in drie milliliter synthetische complete media in glazen kweekbuizen. Incubeer deze culturen ‘s nachts bij 30 graden Celsius op een roltrommel in het donker.

Verdun in cuvet 200 microliter van de cultuur in één milliliter synthetisch compleet medium. Registreer de optische dichtheid met behulp van een spectrofotometer. Verdun vervolgens elke nachtelijke cultuur tot een optische dichtheid van 0,1 in glazen kweekbuizen.

Pipeteer de verdunde culturen tot een plaat met 96 putjes. Voeg putjes met blanco media en niet-fluorescerende cellen toe als negatieve controles. Incubeer de monsterplaat gedurende vijf uur in een schudincubator bij 30 graden Celsius.

Plaats nu de monsterplaat op de verwarmingsschudder. Start het automatiseringsscript door op Uitvoeren te klikken. Zodra de eerste meting op de plaatlezer is geregistreerd, start u het lichtstimulatieprogramma door de stekkerdoos van het verlichtingsapparaat in te schakelen.

De fluorescentiewaarden in de loop van de tijd voor een optogenetische stam toonden aan dat het totale fluorescentieniveau evenredig was met de inschakelduur van de lichtstimulatie. De overeenkomstige optische dichtheidswaarden waren consistent, wat suggereert dat de groei niet werd beïnvloed door wisselende lichtomstandigheden. Verschillende optogenetische stammen gebruikten verschillende reacties op variaties in lichtpulsintensiteit, periode en inschakelduur.