99 Views
•
02:29 min
•
August 04, 2023
DOI:
Transcript
Automatically generated
התחל בהגדרת תחנת העבודה האוטומצית. שלבו מכשיר הארה microplate, כגון optoPlate, המאפשר גישה נוחה לזרוע אחיזת הרובוט. לאחר מכן, עבד גיליון אלקטרוני עם סקריפט MATLAB הזמין כדי לתכנת את optoPlate.
הפעל את תוכנית גירוי האור על ידי הבהוב על optoPlate. כדי לתכנת את הרובוט, פתור שגיאות פוטנציאליות כדי להבטיח תפקוד תקין של הספק והגדרות LabWare. הפעל צלחת ריקה דרך לולאת הסקריפט מספר פעמים כדי לאמת את יכולתה של זרוע אחיזת הרובוט להרים ולמקם את הצלחת במדויק.
לאחר מכן, בחרו מושבות מהלוחות כדי להגדיר את לוח הדגימה. לאחר מכן לחסן אותם לשלושה מיליליטר של מדיה סינתטית שלמה בצינורות תרבית זכוכית. לדגור על תרבויות אלה במשך הלילה ב 30 מעלות צלזיוס על תוף רולר בחושך.
ב cuvette, לדלל 200 מיקרוליטר של התרבות במיליליטר אחד של מדיום סינתטי שלם. רשום את צפיפותו האופטית באמצעות ספקטרופוטומטר. לאחר מכן, לדלל כל תרבית לילה לצפיפות אופטית של 0.1 בצינורות תרבית זכוכית.
פיפטה את התרביות המדוללות לצלחת של 96 בארות. כלול בארות עם מדיה ריקה ותאים שאינם פלואורסצנטיים כבקרות שליליות. לדגור על צלחת הדגימה באינקובטור שייקר בטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס למשך חמש שעות.
כעת, הניחו את צלחת הדגימה על שייקר התנור. הפעל את סקריפט האוטומציה על ידי לחיצה על הפעל. לאחר שהמדידה הראשונית נרשמה בקורא הלוחות, הפעל את תוכנית גירוי האור על ידי הפעלת מפצל החשמל של התקן התאורה.
ערכי הפלואורסצנטיות לאורך זמן עבור זן אופטוגנטי הראו כי רמת הפלואורסצנטיות הכוללת הייתה פרופורציונלית למחזור העבודה של גירוי האור. ערכי הצפיפות האופטית המתאימים היו עקביים, מה שמרמז על כך שהצמיחה לא הושפעה מתנאי אור משתנים. זנים אופטוגנטיים שונים השתמשו בתגובות שונות לשינויים בעוצמת פולס האור, בתקופה ובמחזור העבודה.
Read Article
Cite this Article
Harmer, Z. P., McClean, M. N. Using Lustro for Automated High-Throughput Optogenetic Characterization of Yeast. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e200456, doi:10.3791/200456 (2023).
Copy