Rimozione del puparium di insetti: un metodo per l'indagine sulle pupe

-Per accedere alla pupa in via di sviluppo, rimuovere il puparium dopo che l'epitelio pupale si è separato dalla cuticola o dopo lo stadio pupale P5. Per iniziare, posizionare la pupa intatta con il lato ventrale rivolto verso di te. Utilizzare le pina per tenere il puparium nello spazio vuoto tra l'estremità anteriore dell'involucro e la testa della pupa. Quindi, rompere delicatamente e rimuovere il pezzo anteriore del puparium per esporre la testa.

Pur mantenendo l'orientamento ventrale, utilizzare le forcep per creare piccole rotture lungo l'asse anteriore-posteriore del puparium e assicurarsi che si formi uno spazio continuo nel processo. Fare attenzione a non danneggiare nessuno dei tessuti di pupa direttamente sotto. Quindi continuare a rompere il puparium dallo spazio verso l'esterno, una porzione alla volta, e stendere l'involucro strappato nel processo. Utilizzando un pennello bagnato fine, raccogliere la pupa esposta per ulteriori indagini. Nel protocollo di esempio, vedremo come rimuovere il puparium di Drosophila guttifera e preparare la pupa per l'imaging.

-Per iniziare la rimozione del puparium, apporre un pezzo di nastro biadito su un pezzo di carta assorbente. Posizionare la pupa sul nastro a doppia mano, lato ventrale verso l'alto. Individuare lo spazio tra il lato anteriore del puparium e la pupa interna. Afferrare e rimuovere il pupario intorno a questo spazio usando le forcep ed esporre il lato anteriore della testa della pupa.

Inserire la punta di una flessa spostandola parallelamente all'asse anteriore-posteriore. Sollevare la punta delle forcep per rompere localmente il puparium. Ripetere questa azione fino a quando la rottura non raggiunge la parte posteriore del puparium. Assicurarsi che si formi uno spazio tra il puparium e le zampe pupali e rompere il lato ventrale del puparium riducendo al minimo i danni alle pupe interne. Dopo aver rotto il puparium il più possibile, eserti la pupa usando un pennello fine. Posizionare la pupa su un pezzo di carta velina che è stato inumidito con ddH2O e posto in una piastra di Petri di plastica. Scatta immediatamente fotografie poiché la pupa esposta è vulnerabile e si asciuga facilmente.