Eletrocardiografia de zebrafish (ECG): Um ensaio minimamente invasivo para avaliar a função cardíaca

- Para começar, coloque um lado ventral de peixe anestesiado em uma fenda em uma esponja molhada. Insira o eletrodo positivo na linha média do peixe ao nível da arteriose bulbosa. Em seguida, insira o eletrodo negativo abaixo do ventrículo e de 0,5 a 1 milímetro à esquerda da linha média para criar um chumbo bipolar através do qual as diferenças no potencial elétrico podem ser medidas.

Comece a gravar e, após um curto período de tempo, revise o traço para garantir que quatro critérios sejam atendidos. Todas as formas de onda devem ser visíveis e distintas umas das outras. A onda P, que representa a despolarização atrial, deve ser positiva. A soma líquida das ondas Q, R e S, que representa a despolarização ventricular, deve ser positiva.

Após a gravação, acorde o peixe submergindo-o em água oxigenada e esguichando água sobre as brânquias até que as brânquias ou os peixes comecem a se mover regularmente. No exemplo, realizaremos eletrocardiografia superficial em um zebrafish adulto.

- No dia do experimento, transporte o zebrafish do aquário para o laboratório. Para configurar o sistema de gravação in vivo ECG, conecte os equipamentos essenciais e insira os três eletrodos de aço inoxidável codificados por cores do chumbo ECG nos três portais de acesso coloridos do amplificador. Para indução da anestesia nível 4, mergulhe um zebrafish adulto em um prato contendo uma solução de anestésicos nas menores concentrações pré-determinadas aprovadas pelo Comitê De Cuidados e Uso Animal Institucional.

Uma vez que o zebrafish tenha mantido o nível para anestesia por três segundos, use um par de fórceps contundentes para transferir imediatamente o peixe para uma esponja úmida com uma superfície ventral cortada para colocação dos três eletrodos ECG. Insira suavemente o eletrodo positivo na linha média ventral ao nível da arteriose bulbosa de 1 a 2 milímetros acima de uma linha imaginária ligando as duas bordas inferiores dos operculumos.

Posicione o eletrodo negativo caudally e 0,5 a 1 milímetro deixado lateralmente para o eletrodo positivo a uma distância maior do que o comprimento apical-basal máximo do ventrículo de zebrafish adulto. Em seguida, posicione o eletrodo de referência caudalmente perto da região anal. Para gravação de ECG, inicie o sistema e abra o programa de aquisição de dados ECG. Selecione a configuração desejada dos menus suspensos para intervalo, passe baixo e passe alto.

Pressione Comece a iniciar a gravação contínua de ECG sem lacunas a uma taxa de amostragem de 1 quilohertz. Para otimizar o posicionamento do lead para a relação sinal máximo para ruído, pressione parar para parar a gravação e revisar o traço logo após a primeira tentativa de gravação para cada coração. Se o ECG for esperado ser normal, confirme que todas as formas de onda ECG são distintas e facilmente visíveis e que a onda P, o complexo QRS líquido e a onda T são todos positivos.

- O passo mais crítico é o posicionamento de chumbo para maximizar a relação sinal/ruído. Aplique todos os quatro critérios de validação após a primeira tentativa de gravação do ECG para cada peixe obter feedback correto.

- Se for esperado um ECG normal, reposicione os eletrodos conforme necessário até que todos esses quatro critérios de validação sejam satisfeitos. Se uma onda T normal for esperada, mas a onda T for muito pequena, reposicione os eletrodos para maximizar a amplitude da onda T. Retome o registro do ECG depois de otimizar o posicionamento de chumbo salvando as varreduras do ECG para análise posterior.

No final da sessão de gravação do ECG, remova cuidadosamente os eletrodos sem ferir o peixe. Em estudos de sobrevivência, transfira o peixe para água de peixe fresca e oxigenada livre de tricaine. Por favor, note que neste vídeo para facilitar a visualização dos leitores da recuperação dos peixes da anestesia, a oxigenação é interrompida.

Para facilitar a recuperação da anestesia em estudos de sobrevivência, use uma pipeta Pasteur para esguichar vigorosamente água sobre as brânquias até que o peixe retome o movimento regular da brânquia ou natação. Em seguida, monitore o peixe para recuperação total da anestesia antes de devolver o peixe ao aquário.