Мальпигский трубчатый рассечение от взрослой мухи: Изоляция осморегуляции и выделительного органа

- Начните с анестезированой взрослой мухи в рассечении блюдо. Держите муху грудной клеткой с типсами и откройте задний конец живота с помощью второй пары типсов. Так как взрослые мухи имеют две пары мальпигских труб или MTs, которые сходятся на кишечнике через общие мочеточники, буксир задней кишки из мухи, чтобы освободить MTs. Задняя пара MTs будут освобождены сначала, как они окружают за кишечником. Продолжить дергая кишки, чтобы освободить передние MTs, а затем ущипнуть их на мочеточник, чтобы отделить их от мухи.

Чтобы смонтировать трубочки, сдвиньте стеклянный стержень под мочеточником и перенесите МТ на поли-L-лизин-покрытие слайда. Прикрепить расчлененные органы, нажав мочеточник вниз, а затем тщательно подметать стержень над MTs. Поли-L-лизин на слайде будет способствовать вложению за счет увеличения числа положительно заряженных сайтов, доступных для отрицательно заряженных клеток трубочки связывать. В следующем протоколе, мы будем вскрывать MTs от взрослой самки мухи и смонтировать их для ex vivo живой визуализации в системе перфузии.

- Чтобы начать эту процедуру, распоить два набора припоя, помогая рукам зажимы на стадии изображения микроскопа с одним зажимом с каждой стороны. Далее, вставьте соответствующие изогнутые стеклянные капилляры в линию притока и вакуумной линии оттока. Затем смонтировать их в руках помощи. Затем выровнять их с этапом изображения микроскопа.

Распространение вакуумной смазки на потолочной ленте и нажмите клей перфузии хорошо делит на ленту, чтобы покрыть дно с жиром. Пил от клея перфузии хорошо разделитель и поместите его смазки сторону вниз на верхней части поли-L-лизин покрытием слайд. После этого, удалить перфузии хорошо разделитель оставить отдельные образцы скважин прослеживается в гидрофобной смазки. После этого, место 200 микролитров комнатной температуры iPBS или насекомых фосфатов буфера солевого раствора в смазке окружен хорошо на поли-L-лизин покрытием слайд. Затем поместите слайд под стереоскоп, залить ледяной холодной Шнайдера среды в рассечение, и передать одну анестезировалую самку летать к нему.

Держите муху грудной клеткой с набором типсов и использовать другие мягко сцепление задней части живота. Вытяните открыть задний конец мухи в короткие, преднамеренные движения. Как только задняя кишка видна, сцепление дистального конца и освободить кишечник и MTs от основных трахеи, потянув заднюю кишку от тела через повторяющиеся, краткие буксиры.

Затем ущипните внутренние MTs на мочеточник с тонкой щипцы раз второй набор MTs свободен от живота. Подберите свободные передние MTs с вытащил стекла стержня, сдвинув стержень под мочеточником, так что трубочки падают в обе стороны. После этого, поднимите MTs прямо из раствора. После этого, поверните стеклянный стержень таким образом, что MTs и ureter придерживаются

Опустите мочеточник прямо на горку. Затем прикрепите порядок и печать дистальной линзы MTs путем дальнейшего нажатия мочеточника на стеклянный слайд. Используйте тонкий конец стеклянного стержня, чтобы аккуратно подметать каждую трубочку по поверхности слайда.

- Успех этого метода полностью зависит от точной идентификации и тщательной обработки передних мальпигских трубок.

- Далее поместите клей перфузии хорошо делится обратно на слайде, чтобы сформировать небольшой жидкости заполнены хорошо над установленной трубоубий. После этого, поместите образец на стадии микроскопа. Положение притока и оттока капилляров над вантой и выход открытия перфузии хорошо, соответственно.