Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans treten in zwei Geschlechtern auf: Hermaphroditen, die zwei X-Chromosomen haben, und Männchen, die nur ein X-Chromosom haben, das als XO oder X null bezeichnet wird.
Hermaphrodite produzieren sowohl Eizellen als auch Spermien und können sich durch Selbstbefruchtung vermehren. Fast alle ihre Gameten tragen ein X-Chromosom, so dass Nachkommen, die aus der Selbstbefruchtung resultieren, meist Hermaphrodite sind.
Selten geht das X-Chromosom während der Gametogenese verloren, was dazu führt, dass männliche Nachkommen nur etwa 0,1 bis 0,2% der Zeit haben. Dies ist kein praktischer Weg, um genügend Männchen für jedes Experiment oder genetische steilen Kreuz zu sammeln, für das wir sie brauchen.
Stattdessen können wir ein Hermaphrodit mit einem Männchen machen, was dazu führt, dass etwa die Hälfte der Nachkommen männlich sind. Achten Sie bei der Durchführung dieses genetischen Kreuzes darauf, mehr Männchen als Hermaphrodite einzubeziehen, um eine effiziente Paarung zu gewährleisten. Im folgenden Beispiel werden wir eine Paarungsplatte einrichten und männliche Würmer isolieren, um Spermaatien in vitro zu sammeln und zu studieren.
- Zuerst erhalten Sie eine große Anzahl von Männchen durch Kreuzung fünf Wildtyp Männchen und ein Hermaphrodit auf einem kleinen Rasen von E. coli OP50 Bakterien in der Mitte eines Nematoden Wachstumsmedium oder NGM Platte gesät.
Um L4-Bühnenmännchen zu sammeln, untersuchen Sie Entwicklungsstadium und Schwanzmorphologie unter einem Sezieren mikroskop. Ein L4-Bühnenwurm wird basierend auf Schwanzmorphologie ausgewählt. Ein männlicher Wurm hat einen abgerundeten Schwanz, während ein Hermaphrodit einen spitzen Schwanz hat.
Mit einem Platindraht, pflücken Sie 7 bis 10 L4 Stufe Männchen pro Experiment und übertragen Sie sie auf NGM Platte mit OP50 gesät und lassen Sie sie für ein oder zwei Tage wachsen. Wachsende zölibatäre Männchen in Abwesenheit von Hermaphroditen verhindert den Verlust von Spermien und damit wird eine große Anzahl von Spermien während des experimentellen Verfahrens zur Verfügung stehen.
