Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- C. elegans forekommer i to kjønn: hermafroditter, som har to X-kromosomer, og menn, som bare har ett X-kromosom referert til som XO eller X null.
Hermafroditter produserer både oocytter og sædceller og kan reprodusere ved selvbefruktning. Nesten alle deres gameter bærer et X-kromosom, så avkom som følge av selvbefruktning er for det meste hermafroditter.
Sjelden går X-kromosomet tapt under gametogenesis, noe som resulterer i mannlige avkom bare ca 0,1 til 0,2% av tiden. Dette er ikke en praktisk måte å samle nok menn til noe eksperiment eller genetisk kryss som vi trenger dem til.
I stedet kan vi lage en hermafroditt med en mann som resulterer i at omtrent halvparten av avkomene er mannlige. Når du utfører dette genetiske korset, må du huske å inkludere flere menn enn hermafroditter for å sikre effektiv parring. I følgende eksempel vil vi sette opp en parringsplate og isolere mannlige ormer som forberedelse til å samle og studere spermatider i vitro.
- Først, få et stort antall menn ved å krysse fem wildtype menn og en hermafroditt på en liten plen av E. coli OP50 bakterier frøet i sentrum av en nematode vekst medium eller NGM plate. Omtrent 50% av neste generasjon vil være wildtype menn.
For å samle L4-stadium menn, undersøk utviklingsstadium og halemorfologi under et dissekerende mikroskop. En L4-stadium orm er plukket basert på halemorfologi. En mannlig orm har en avrundet hale, mens en hermafroditt har en spiss hale.
Ved hjelp av en platinatråd velger du 7 til 10 L4-trinns menn per eksperiment og overfører dem til NGM-platefrø med OP50 og lar dem vokse i en dag eller to. Voksende sølibathanner i fravær av hermafroditter forhindrer tap av sæd og dermed vil et stort antall spermatider være tilgjengelige under eksperimentell prosedyre.
