Touch Habituation Assay: En metode for å studere ikke-assosiativ læring i C. elegans

- C. elegans beveger seg på sin side ved å generere sinusformede bølger langs kroppen. Dyret beveger seg i fremoverretning når bølgene forplantes fra hodet til halen. Omvendt, når de sinusformede bølgene forplantes fra halen til hodet, beveger ormen seg bakover.

Bakover-bevegelse, kjent som reverseringer, er kort og oppstår enten spontant eller utløses av en sensorisk stimulus, for eksempel en mild berøring til ormens fremre. For å utføre den fremre berøringsanalysen, isoler tidligere synkroniserte ormer av ønsket utviklingsstadium på usette NGM-plater.

Bruk et sterilisert fint hår, utfør en mild berøring til den fremre delen av kroppen. Dette vil fremkalle en rømningsrespons der ormen utfører en reversering. Tillat et 10-sekunders interstimulusintervall for ormen å gjenopprette og gjenta berøringen. For å vurdere habituation, som er en form for ikke-assosiativ læring, registrer antall berøringer til en reversering ikke lenger er observert.

I eksempelprotokollen vil vi se en demonstrasjon av den fremre berøringsanalysen.

- Bruk først brannsterke 30-gauge platinatrådplukk for å overføre ca. 10 synkroniserte unge voksne ormer til nye usendte NGM-plater. La ormene være uforstyrret i fem minutter for å gi dem tid til å akklimatisere seg til den nye platen. Deretter steriliserer du et øyenbrynshår festet til enden av en trespyd eller tannpirker ved å dyppe i 70% etanol.

Tørk med et rent, lofritt vev og vent i ett minutt til etanolen fordampes. Berør forsiktig ormen på hodet ved hjelp av øyenbrynshåret. Gjenta berøringene slik at det er 10 sekunder mellom berøringene slik at ormen kan gjenopprettes.

Fortsett å berøre slik at 10-sekunders interstimulusintervaller til ormen ikke lenger beveger seg bakover.

- Det er viktig å tillate et 10-sekunders intervall mellom berøringer, da dette gir dyret restitusjonstid og bidrar til å oppnå konsistente habituation behavior-analyser.