Test di elettrotassi: un metodo per osservare la locomozione in C. elegans

- Senza stimoli sensoriali, il movimento di C. elegans è generalmente in avanti ed è interrotto da inversioni e curve, manovre di riorientamento casuale che si traducono in un cambio di direzione. C. gli elegani sono elettrorecettivi. Cioè, possono percepire campi elettrici. Quando esposti a una leggera corrente continua o DC, i vermi si muovono in un percorso rettilineo ininterrotto nella direzione dell'elettrodo o del catodo negativo, un comportamento icottato elettrotassi.

Per osservare più accuratamente la locomozione del verme, Posizionare l'animale in un dispositivo microfluidico e applicare un campo elettrico CC. Invertire la direzione del campo, e il verme gira nella direzione opposta, verso la direzione del catodo. Applicare una corrente alternata, aria condizionata e il verme si fermerà. Il cambiamento alternato nella direzione del campo travolge i sistemi neuromotori del verme, con conseguente immobilizzazione del verme. Riapplicare il campo CC e il verme riprenderà il movimento in avanti verso il catodo.

Nel seguente protocollo di esempio, vedremo una configurazione che dimostra un saggio di elettrotassi in un dispositivo microfluidico.

- Iniziare questo passaggio posizionando il microcanale appena assemblato su uno stadio mobile xy di un microscopio con una telecamera montata collegata a un monitor. Collegare l'alimentazione agli elettrodi del microcanale.

Dopo aver confermato che la resistenza del microcanale è di circa 0,6 mega-ohm, collegare il tubo di uscita del microcanale a una siringa monouso. Quindi immergere la bocca del tubo di ingresso in una soluzione di nematodi sospesi nel tampone fisiologico M9. Applicare la pressione negativa all'interno della siringa per aspirare il liquido nel canale.

Quando i tubi di ingresso e di uscita sono entrambi riempiti, scollegare la siringa e manipolare idrostaticamente il flusso regolando l'altezza relativa del tubo per posizionare un verme al centro del canale. Quindi posare entrambi i tubi piatti alla stessa elevazione. Per mantenere il flusso zero all'interno del microcanale quando si commutano campioni di verme durante un esperimento di elettrotassi, dopo aver livellato entrambi i tubi di ingresso alla stessa elevazione, se c'è ancora flusso, apportare piccole regolazioni all'altezza del tubo rispetto all'altro.

- Se non siamo mai sicuri che il flusso sia davvero zero, possiamo indurre un'inversione nel movimento del verme cambiando la polarità del campo elettrico e quindi valutando la velocità lineare del verme mentre si gira.

- Ora, impostate l'alimentazione sulla tensione appropriata. Attivate il segnale elettrico e consentite un minuto di pre-esposizione affinché il verme si acclimati al campo, durante il quale il verme dovrebbe iniziare a muoversi verso il catodo. Quando il minuto è passato, iniziare la registrazione.

Al termine dell'esperimento, rimuovere tutto il liquido e i vermi dal canale. Sciacquare la camera con acqua deionizzata e lasciare asciugare il dispositivo su una piastra calda a 125 gradi Celsius.