Elektrotaksi Testi: C. elegans'ta Locomotion Gözlemleme Yöntemi

- Duyusal uyaranlar olmadan, C. elegans hareketi genellikle ileriye doğrudur ve ters çevirmeler ve dönüşlerle kesintiye uğrar-- yön değişikliğine neden olan rastgele yeniden yönlendirme manevraları. C. eleganlar elektroreceptiftir. Yani, elektrik alanlarını hissedebilirler. Hafif bir doğru akıma veya DC'ye maruz kaldıklarında, solucanlar negatif elektrot veya katot yönünde düz kesintisiz bir yolda hareket ederler, davranışsal elektrotaksiler.

Solucanın locomotion'ını daha doğru bir şekilde gözlemlemek için, hayvanı mikroakışkan bir cihaza yerleştirin ve bir DC elektrik alanı uygulayın. Alanın yönünü tersine çevirir ve solucan ters yöne döner-- katot yönüne doğru. Alternatif bir akım uygulayın, AC, ve solucan durur. Alanın yönündeki alternatif değişim solucanın nöromotor sistemlerini bastırır, solucanın hareketsizleşmesine neden olur. DC alanını yeniden uygulayın ve solucan katota doğru ileri harekete devam eder.

Aşağıdaki örnek protokolde, mikroakışkan bir cihazda elektrotaksi testini gösteren bir kurulum göreceğiz.

- Yeni monte edilmiş mikro kanalı, monitöre bağlı monte edilmiş bir kamera ile mikroskobun xy hareketli bir aşamasına yerleştirerek bu adıma başlayın.

Mikro kanalın direncinin 0,6 mega-ohm civarında olduğunu doğruladıktan sonra, mikro kanalın çıkış tüpünü tek kullanımlık bir şırıngaya takın. Sonra giriş tüpünün ağzını M9 fizyolojik tamponda asılı bir nematod çözeltisine batırın. Kanala sıvı emiş etmek için şırınganın içine negatif basınç uygulayın.

Giriş ve çıkış tüplerinin her ikisi de dolduğunda, şırınnayı çıkarın ve kanalın ortasına bir solucan yerleştirmek için tüpün göreli yüksekliğini ayarlayarak akışı hidro-statik olarak manipüle edin. Daha sonra her iki tüpü de aynı yükseklikte düz bir şekilde döşeyin. Elektrotaksi deneyi sırasında solucan örneklerini değiştirirken mikro kanalın içinde sıfır akış sağlamak için, her iki giriş tüpünü de aynı yüksekliğe tesviye ettikten sonra, hala akış varsa, tüpün yüksekliğinde birbirine göre küçük ayarlamalar yapın.

- Akışın gerçekten sıfır olup olmadığından emin olmazsak, elektrik alanının polaritesini değiştirerek ve daha sonra solucanın dönerken doğrusal hızını değerlendirerek solucanın hareketinde bir geri dönüşe neden olabiliriz.

- Şimdi, güç kaynağını uygun voltaja ayarlayın. Elektrik sinyalini etkinleştirin ve solucanın alana iklimlendirmesi için bir dakikalık ön maruziyete izin verin, bu süre zarfında solucan katot doğru hareket etmeye başlamalıdır.

Deney bittiğinde, tüm sıvı ve solucanları kanaldan çıkarın. Odayı iyonize edilmiş suyla durulayın ve cihazı kurumak için 125 santigrat derecede sıcak bir tabağa bırakın.