Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Ohne sensorische Reize ist die Bewegung von C. elegans in der Regel vorwärts und wird durch Umkehrungen und Wendungen unterbrochen -- zufällige Umorientierungsmanöver, die zu einem Richtungswechsel führen. C. elegans sind elektroempfänglich. Das heißt, sie können elektrische Felder spüren.
Um die Fortbewegung des Wurms genauer zu beobachten, legen Sie das Tier in ein mikrofluidisches Gerät und wenden Sie ein elektrisches DC-Feld an. Umgekehrt die Richtung des Feldes, und der Wurm wird den entgegengesetzten Weg drehen -- in Richtung der Kathode. Wenden Sie einen Wechselstrom, AC, und der Wurm wird aufhören. Die abwechselnde Änderung in der Feldrichtung überwältigt die neuromotorischen Systeme des Wurms, was zur Immobilisierung des Wurms. Wenden Sie das DC-Feld wieder an, und der Wurm wird vorwärts Bewegung in Richtung der Kathode wieder aufnehmen.
Im folgenden Beispielprotokoll wird ein Setup gezeigt, das einen Elektrotaxis-Assay in einem mikrofluidischen Gerät demonstriert.
- Beginnen Sie diesen Schritt, indem Sie den gerade montierten Mikrokanal auf eine xy-bewegliche Stufe eines Mikroskops stellen, wobei eine an einen Monitor angeschlossene Kamera angeschlossen ist. Schließen Sie das Netzteil an die Elektroden des Mikrokanals an.
Nach der Bestätigung, dass der Widerstand des Mikrokanals etwa 0,6 Mega-Ohm beträgt, befestigen Sie das Ausgangsrohr des Mikrokanals an einer Einwegspritze. Tauchen Sie dann den Mund des Einlassrohrs in eine Lösung von Nematoden ein, die im M9-physiologischen Puffer ausgesetzt sind. Tragen Sie den Unterdruck in der Spritze auf, um Flüssigkeit in den Kanal zu saugen.
Wenn die Ein- und Auslassrohre gefüllt sind, trennen Sie die Spritze und manipulieren Sie hydrostatisch den Durchfluss, indem Sie die relative Höhe des Rohres anpassen, um einen Wurm in der Mitte des Kanals zu platzieren. Legen Sie dann beide Rohre flach in der gleichen Höhe. Um den Nullstrom innerhalb des Mikrokanals zu halten, wenn Sie Wurmproben während eines Elektrotaxis-Experiments wechseln, nachdem sie beide Einlaufrohre auf die gleiche Höhe nivelliert haben, wenn es noch Strömung gibt, stellen Sie kleine Anpassungen an die relative Höhe des Rohres vor.
- Wenn wir uns jemals nicht sicher sind, ob der Fluss wirklich Null ist, können wir eine Umkehrung der Bewegung des Wurms induzieren, indem wir die Polarität des elektrischen Feldes ändern und dann die lineare Geschwindigkeit des Wurms bewerten, während er sich dreht.
- Stellen Sie nun die Stromversorgung auf die entsprechende Spannung. Aktivieren Sie das elektrische Signal, und lassen Sie eine Minute Der Vorbelichtung für den Wurm an das Feld zu akklimatisieren, während der zeit der Wurm sollte beginnen, in Richtung der Kathode zu bewegen. Wenn die Minute vergangen ist, beginnen Sie mit der Aufnahme.
Wenn das Experiment abgeschlossen ist, entfernen Sie alle Flüssigkeiten und Würmer aus dem Kanal. Spülen Sie die Kammer mit entionisiertem Wasser und lassen Sie das Gerät auf einer Kochplatte bei 125 Grad Celsius trocknen.
