Mesures de la zone musculaire de C. elegans : une méthode normalisée pour quantifier la morphologie musculaire striée

- C. elegans ont deux types de muscles. Le sarcomere unique ou les muscles non striés incluent ceux du pharynx et de la vulve. Les muscles sarcomere multiples ou obliquement striés sont des muscles muraux en forme de rhomboïde nommés d’après le modèle strié régulier de leurs fibres de myosine.

Ils sont disposés en paires décalées sous forme de quatre faisceaux orientés longituditinement dans les quatre quadrants du corps du ver vus en coupe transversale. Chaque cellule a de nombreux points d’attachement également espacés à l’hypoderme et à la cuticule. Cet arrangement aide à traduire les ondes de contractions musculaires en locomotion lisse.

Pour visualiser ces muscles, imagez les vers immobilisés avec transgéniquement GFP- étiqueté myosin par microscopie confoccale fluorescente. Utiliser un logiciel d’analyse pour mesurer la zone d’une cellule musculaire striée et les lacunes dans le modèle de fibres de cette cellule. Les lacunes dans l’organisation des fibres musculaires pourraient indiquer une perturbation par dégradation des fibres ou l’accumulation de débris cellulaires. Calculer le rapport entre la zone d’écart et la zone totale pour définir la quantité de perturbation. Dans le protocole de l’exemple, nous évaluerons quantitativement la morphologie musculaire des paroi corporelle à l’aide des Fidji.

- Pour mesurer la zone des cellules musculaires, ouvrez l’image dans le logiciel Fidji et utilisez Polygon Selection pour tracer soigneusement autour d’une seule cellule musculaire oblique. Ajustez la ligne du polygone à la fin en faisant glisser le point d’ancrage pour améliorer le traçage. Naviguez vers l’onglet Analyser en haut du logiciel et cliquez sur Mesurer pour calculer la zone sélectionnée.

Pour les cellules musculaires dont la région est dégénérée ou manquante, tracez la zone manquante avec l’outil de sélection du polygone et cliquez à nouveau sur Mesurer. S’il y a plusieurs lacunes, tracez chacune séparément. Calculez le rapport entre la zone d’écart et la zone de l’ensemble de la cellule. Un rapport élevé indique une plus grande étendue de dégénérescence musculaire, et s’il n’y a pas de régions manquantes, le rapport est calculé comme zéro.