Eye Lens Dissektion: En teknik til at observere Zebrafish Lens Morfologi

- En zebrafisk øje består hornhinden, sclera, linse, og nethinden. Hornhinden er et gennemsigtigt væv, der tillader lys at komme ind i øjet. Sclera er en uigennemsigtig væv, der er kontinuerlig med hornhinden, danner en ydre beskyttende lag. Linsen er en sfærisk struktur, der fokuserer lys på nethinden, som er et lysfølsomt lag af væv, der omdanner lys til et neuralt signal.

At dissekere øjet, fylde en petriskål med silikone og lad det sæt. Nu skal du placere en bedøvet fisk i fadet og punktafgifter øjnene ved hjælp af en mikro-saks. Overfør øjnene til en plade fyldt med PBS for at opretholde en konstant pH i vævet og orientere øjet med den bageste side vender op. Hold øjet med pincet og omhyggeligt foretage tre radiale nedskæringer gennem sclera og nethinden.

Dernæst fold vævet ud for at afsløre linsen. Nu skal du placere øjet med den forreste side vendt op og fjerne sclera og nethinden. Scoop ud linsen fra dissekeret øje og fjerne eventuelle resterende væv omkring det. I den følgende protokol, vil vi udføre larve og voksne zebrafisk linse dissektioner til at analysere linse morfologi.

Efter Bekræftelse Af Tilstrækkelig Sedation Med tricaine, Bruge mikrodissection Saks Til Straks Punktafgifter Både Øjne Fra Enten En Voksen Eller larve Zebrafisk Og Sted Både Øjne I A 35 millimeter Skræddersyede Petri Parabol Med A Silikone Dissektion Skimmel Fyldt Med Pbs. Til Høst Linse Fra En Voksen Zebrafisk Sted Øje Bageste side Op Og Indsætte Pincet På A Mindre End 45 Grad Vinkel Gennem Optiske Disk. Bruge Dissektion Saks Til Gøre To Eller Tre Radial Indsnit Gennem Nethinden Og Sclera Fra Optiske Disk Til Ciliaere Zone I Immobiliseret Øje Og Skræl Tilbage Nethinden Og Sclera Indkvartering Blomst Kronblade. Invertere Øje Hornhinden side Op Og Bruge Fladskærms side Af Saks Til Immobilisere Linse Indirekte Via Manipulation Af Sclera Og Hornhinden Mens Bruge Pincet Til Trække Væk Nethinden Og Knyttet Væv. Derefter Omhyggeligt Trim Væk Nogen Overskydende Væv Fra Linse.

For larve zebrafisk linse høst, spiller en larve øje posterior side op på den flade del af en silikone parabol af PBS. Og bruge en skærpet wolfram nål til at gøre radio nedskæringer gennem nethinden og sclera mens immobilisere øjet med en anden nål eller pincet. Derefter forsigtigt scoop linsen fra det dissociated øjet med stump side af en skræddersyet wolfram wire nål og forsigtigt trække væk vedlagte væv.