Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- İlk olarak, sırt tarafı önceden ıslanmış bir süngere bakacak şekilde uyuşturulmuş bir balık yerleştirin. Elektroporasyondan önce, genetik materyali hedef dokuya enjekte edin, bu durumda, ön beyinden teleensefalon adı verilen bir kısmı. Sonra, kafaya az miktarda ultrason jeli koyun. Ayrıca, verimli çalışmayı kolaylaştırmak için jeli elektrotların ucuna uygulayın. Pozitif elektrot başlığın ventral tarafına ve negatif elektrot dorsal tarafa yerleştirin.
Şimdi, elektrotları kafaya hafifçe bastırın ve birkaç elektrik akımı darbesi verin. Akım, elektroporlu hücrelerin plazma zarında geçici gözenekler oluşturur ve onları geçirgen hale getirir. Akım ayrıca, çevrede bulunan DNA ekspresyon plazmidleri veya RNAi oligonükleotidleri gibi negatif yüklü parçacıkların hücrelere hareketini kolaylaştırır. Aşağıdaki örnekte, yeni nöronların üretilmesinden sorumlu kök hücreler olan ependymoglial hücrelerine bir rekombinant plazmid tanıtmak için elektroporasyon kullanacağız.
- Balık teleensefalonunu az miktarda ultrason jeli ile örtün. Plazmid enjekte edilen hayvanın elektroporasyon için süngeri fırlatma kurulumundan çıkarın ve elektrot uçlarının iç tarafını ultrason jeli içine daldırın. Balık kafasını elektrotlar arasında, başın ventral tarafındaki pozitif elektrot ve sırt tarafındaki negatif elektrot ile yerleştirin. Daha sonra, balığın vücudunu süngerde tutarken, elektrotları teleensefalona hafifçe ve hassas bir şekilde bastırın ve beş darbeye kadar elektrotları yerinde tutarak ayak pedalı ile akımı bastırın. bitti.
