Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Ein Xenograft ist ein Organ oder Gewebe, das einer Art entnommen und in eine andere transplantiert wurde. Ein vom Patienten abgeleitetes Xenograft, oder PDX, ist ein Krebsmodell, bei dem Gewebe aus dem Tumor eines Patienten in ein immundefiziöses Tier implantiert wird, wie eine Zebrafischlarve, deren Immunsystem noch nicht vollständig entwickelt ist, um die Tumorprogression oder die Wirksamkeit des Arzneimittels zu untersuchen.
Als nächstes laden Sie die Suspension der Patiententransplantatzellen und übertragen sie in eine Mikrokapillarnadel. Unter einem Mikroskop injizieren Sie die Zellen mit einer Mikrokapillarnadel in den Eigelbsack der Larve. Jetzt kulturieren Sie die injizierten Larven in der E3-Lösung, die Glukose und L-Glutamin enthält, was den hohen Energiebedarf der Xenograft-Zellen unterstützt.
Für die medikamentöse Behandlung übertragen Sie die xenografted Larven auf eine Brunnenplatte, teilen Sie die Brunnen in Gruppen basierend auf der Anzahl und Dosen der Verbindungen, die getestet werden müssen, und fügen Sie die Verbindungen. Fügen Sie eine Kontrollgruppe. Inkubieren Sie die behandelten Larven bei 32 Grad Celsius vor der Beobachtung der Behandlungsergebnisse.
Im folgenden Protokoll werden wir die Medikamente Gemcitabin und Navitoclax in einem zPDX-Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs untersuchen.
- Nach der Anästhesisierung der Zebrafischlarven in die Injektionsplatte, die mit modifiziertem E3 gefüllt ist, übertragen. Nehmen Sie 25 Mikroliter der gemischten Zellsuspension in die Mikrokapillarnadel auf und setzen Sie die Nadel in den Mikroinjektionsmanipulator ein. Stellen Sie den Injektionsdruck und die Injektionszeit ein und injizieren Sie 50 bis 80 Zellen in den Eigelbsack von 48 Stunden nach der Befruchtung.
Übertragen Sie die postxenografted Zebrafischlarven in 40 Milliliter Mischlösung bei 32 Grad Celsius. Legen Sie 10 xenografierte Larven in jeden Brunnen einer 12-Well-Platte. Als nächstes teilen Sie die Larven in vier Gruppen.
Behandeln Sie die Kontrollgruppe mit E3, das 0,1% DMSO enthält, und behandeln Sie die anderen Gruppen mit Gemcitabin und/oder Navitoclax. Bebrüten Sie alle Larven zwei Tage lang bei 32 Grad Celsius. Nach der Anästhesisierung der xenografierten Larven nach der Behandlung, legen Sie sie in 3% Methylcellulose.
Verwenden Sie ein Fluoreszenz- oder Konfokalmikroskop, um die Larven aus der Seitenansicht abzubilden. Verwenden Sie dann die Software Image J und Graph Pad, um die Intensität roter und grüner Fluoreszenzsignale zu quantifizieren.
