Dissection du cerveau du poisson zèbre : une technique de neurobiologie du poisson

- Placer un poisson euthanasié sur un lit de dissection et utiliser une lame chirurgicale pour décapiter le poisson au niveau des branchies. Maintenez la tête avec le côté ventral face vers le haut et retirez les tissus mous jusqu’à ce que vous voyiez le chiasm optique, une structure faite de nerfs optiques qui relie le cerveau aux yeux.

Couper les nerfs optiques et enlever les yeux. Maintenant, orientez le poisson avec le côté dorsal face vers le haut et enlevez les parties du crâne pour isoler le cerveau. Transférez le cerveau dans une boîte de Petri contenant un milieu de dissection pour maintenir un pH constant du tissu. Observez les parties du cerveau.

Les bulbes olfactifs sont une paire de structures à l’extrémité antérieure reliées aux organes olfactifs qui détectent les signaux d’odeur. Le télencéphale comprend des zones liées à la mémoire. La habenula transmet l’information du télencéphale à d’autres parties du cerveau.

Le tectum optique est un centre sensoriel de traitement de l’information. Le cervelet joue un rôle dans la fonction motrice somatique et l’équilibre. Et la médulle transmet l’information de la moelle épinière au cerveau. Dans le protocole suivant, nous isolerons le cerveau d’un poisson zèbre adulte pour recueillir des cellules souches neurales de différentes régions.

Pour commencer, préparer un lit de dissection en remplissant une boîte de Pétri avec des paquets de gel. Ensuite, couvrez le plat de son couvercle correspondant et incubez-le à moins 20 degrés Celsius. Une fois le gel congelé, retirez le plat du congélateur et placez un carré propre de papier filtre sur le dessus de son couvercle. Procéder à envelopper à la fois le papier et le plat avec du film plastique.

Ensuite, traitez tous les instruments de microdissection avec 70 % d’éthanol. Placez ces outils stérilisés à côté d’un microscope dissectionnel et placez le lit de dissection complété sous le microscope avec l’éclairage de fibre optique. Placez immédiatement un spécimen de tête préalablement préparé sur le dessus du lit de dissection et orientez-le de sorte que son côté dorsal soit orienté vers le bas.

Ensuite, utilisez des ciseaux pour faire une coupe longitudinale à travers le tissu mou de l’arrière de la tête à la bouche. Ensuite, exposer la base du crâne avec des forceps et enlever tout le tissu adjacent. Ensuite, couper l’une des parois latérales du crâne à partir de l’arrière de la tête et se déplacer vers la région tectum du cerveau. Répétez ce processus pour le côté contralatéral. Procéder à couper le nerf optique. Et puis enlever les deux côtés latéraux la plupart du crâne au niveau du tectum

Enfin, tournez le côté ventral de la tête vers le haut. Et avec des forceps, décoller la partie la plus apical du crâne pour exposer le cerveau. Ensuite, transférez le cerveau et les parties restantes du crâne à un plat contenant un milieu de dissection composé de DMM F12 complété par de la streptomycine de pénicilline. Avec la poignée en plastique d’un microknife au microscope, nettoyez le tissu cérébral, en prenant soin de ne pas endommager les structures neurales. Utilisez jusqu’à deux cerveaux de poisson zèbre pour générer des neurosphères entières dérivées du cerveau.