Dissezione cerebrale zebrafish: una tecnica di neurobiologia del pesce

- Posizionare un pesce eutanasiato su un letto di dissezione e utilizzare una lama chirurgica per decapitare il pesce a livello delle branchie. Tenere la testa con il lato ventrale rivolto verso l'alto e rimuovere i tessuti molli fino a quando non si vede il chiasmo ottico, una struttura fatta di nervi ottici che collega il cervello agli occhi.

Tagliare i nervi ottici e rimuovere gli occhi. Ora, orientate il pesce con il lato dorsale rivolto verso l'alto e rimuovete le parti del cranio per isolare il cervello. Trasferire il cervello in una piastra di Petri contenente un mezzo di dissezione per mantenere un pH costante del tessuto. Osservate le parti del cervello.

I bulbi olfattivi sono una coppia di strutture all'estremità anteriore collegate agli organi olfattivi che rilevano segnali di odore. Il telencefalo comprende aree relative alla memoria. La habenula trasmette informazioni dal telencefalo ad altre parti del cervello.

Lo tectum ottico è un centro di elaborazione delle informazioni sensoriali. Il cervelletto svolge un ruolo nella funzione motoria somatica e nell'equilibrio. E il midollo trasmette informazioni dal midollo spinale al cervello. Nel seguente protocollo, isolamo il cervello da un pesce zebra adulto per raccogliere cellule staminali neurali da diverse regioni.

Per iniziare, preparare un letto di dissezione riempiendo una piastra di Petri con confezioni di gel. Quindi coprire il piatto con il coperchio corrispondente e incubarlo a meno 20 gradi Celsius. Una volta congelato il gel, rimuovere il piatto dal congelatore e posizionare un quadrato pulito di carta da filtro sopra il coperchio. Procedere a avvolgere sia la carta che la piastra con pellicola di plastica.

Successivamente, trattare tutti gli strumenti di microsezione con 70% di etanolo. Posizionare questi strumenti sterilizzati accanto a un microscopio sezionato e posizionare il letto di dissezione completato al microscopio con illuminazione in fibra ottica. Posizionare immediatamente un campione di testa precedentemente preparato sopra il letto di dissezione e orientarlo in modo che il suo lato dorsale sia rivolto verso il basso.

Quindi usa le forbici per fare un taglio longitudinale attraverso il tessuto molle dalla parte posteriore della testa alla bocca. Successivamente, esporre la base del cranio con le forcelle e rimuovere tutto il tessuto adiacente. Successivamente, tagliare una delle pareti laterali del cranio partendo dalla parte posteriore della testa e spostandosi verso la regione di tectum del cervello. Ripetere questo processo per il lato conlaterale. Procedere a tagliare il nervo ottico. E quindi rimuovere i due lati laterali del cranio a livello dello tectum

Infine, ruotare il lato ventrale della testa verso l'alto. E con le flesse, staccate la parte più apicale del cranio per esporre il cervello. Successivamente, trasferire il cervello e tutte le restanti parti del cranio in un piatto contenente mezzo di dissezione composto da DMM F12 integrato con streptomicina di penicillina. Con il manico di plastica di un microknife al microscopio, pulire il tessuto cerebrale, facendo attenzione a non danneggiare alcuna struttura neurale. Utilizzare fino a due cervelli zebrafish per generare neurosfere derivate dal cervello intero.